深红酵母菌苯丙氨酸解氨酶的诱导及纯化

经Ｌ－苯丙氨酸诱导在深红酵母产生高于非诱导培养时６倍的苯丙氨酸解氨酶（ＰＡＬ）活性，并加以分离纯化，纯化９２．９倍，产率８．９８％。纯化过程中采用不同的亲和洗脱方式，结果表明：在Ｌ－苯丙氨酸－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ进行ＰＡＬ的亲和层析时，用５０ｍｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ８．８Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液平衡上柱后以Ｄ－苯丙氨酸洗脱为好。     

人肝肿瘤细胞HepG2最佳培养条件探讨

人肝肿瘤细胞株HepG2可应用于体外遗传毒理学试验等多种研究.但其培养难度较大,通过对HepG2细胞在不同培养条件下生长状态的对比,探讨了HepG2细胞培养增殖的最佳条件.结果表明在下列情况下细胞能顺利传代生长复苏时,需20%胎牛血清,接种密度为1×104/cm2,需在含5%CO2环境下;培养时,需10%胎牛血清,可在无5%CO2环境下.     

人α2a干扰素酵母工程菌高产培养条件的研究

研究了摇瓶培养条件对人α2 a干扰素酵母工程菌生长及表达的影响 ,结果表明 ,当基础料中腺嘌呤含量为 2 0 μg/m L,在发酵进行至 1 2 h时再加入 2 0 μg/m L腺嘌呤时 ,IFN- α2 a生物活性及比活分别达到 7.3× 1 0 6IU/m L及 6.77× 1 0 7IU/mg。发酵过程中后期补入适量萄萄糖 ,且维持低糖水平 ,有利表达。维持总碳源含量不变 ,使培养基中葡萄糖与蔗糖的比例为 1∶ 0 .1 ,结果 IFN-α2 a生物活性及比活分别比对照增加了一倍以上。在发酵进行至 1 2 h时 ,加入 2 g/L谷氨酸 ,IFN-α2 a生物活性及比活分别比对照提高了 1 .76倍及 1 .94倍 ,而添加 0 .2 5～ 1 .0 g/L赖氨酸也能显著提高表达水平。培养基初始 p H对产物表达有较大影响 ,初始 p H为 6.5时 ,对表达最有利。利用上述摇瓶培养优化条件 ,在 2 .6L生物反应器中进行补料分批培养 ,人 α2 a干扰素生物活性达到 1 .3×1 0 7IU/m L ,为原工艺的 3倍。     

随机扩增多态性DNA鉴定酵母菌的初步探讨

目的 :应用随机扩增多态性 DNA( RAPD)技术对临床上常见的酵母菌进行分析 ,以选择合适的引物和实验条件对酵母菌进行鉴定。方法 :选用四条长度为 10个碱基的随机引物分别对酵母菌、丝状真菌及细菌进行扩增 ,并对扩增结果进行相似性分析。结果 :所选三条引物可在种的水平上将所试菌株有效地区分开来 ,但同一引物对不同菌种的扩增结果存在明显的差异。在扩增同种内不同菌株时 ,各菌株间也存在着一定的差异。采用不同引物进行扩增时种内变异的程度有所不同。除个别菌株外 ,扩增所得指纹图型的种类差异远远小于不同的菌种间的差异 ,因而可将不同种的酵母菌有效地区分开来。结论 :RAPD技术可用于酵母菌的种间鉴定。其中引物及实验条件的选择尤为重要 ,同时 ,将多条引物扩增结果共同用于结果分析将有助于提高鉴定的可靠性     

珍珠丸1号2号水提液对红细胞氧化溶血及血红蛋白的影响

珍珠丸１号和珍珠丸２号在红细胞自氧化过程可抑制Ｏ２对血红蛋白的氧化作用。降低Ｈ２Ｏ对红细胞膜的损伤。在抗坏血酸体系中，ｚｈｅｎ１和ｚｈｅｎ２显著抑制ＯＨ对血红蛋白的氧化作用，并呈剂量依赖性。     

口腔上皮细胞感染白假丝酵母菌后HBD-2蛋白的表达

目的检测人β防御素2(Human beta defensin-2,HBD-2)在口腔上皮细胞中的表达以及白假丝酵母菌对其表达的影响。方法分别以孢子相、菌丝相以及灭活的白假丝酵母菌与KB细胞共同培养6、12、24h后,采用ELISA技术检测各组KB细胞培养液中HBD-2蛋白的表达情况,与对照组进行比较。结果 KB细胞有HBD-2蛋白的基础表达,感染6h后,各实验组与对照组之间表达差异无统计学意义(P>0.05);感染12h后,孢子组(93.974±6.426)、菌丝组(72.287±2.839)显著高于对照组(37.380±5.663),P<0.01;感染24h后,各实验组表达均高于对照组(P<0.05),但和12h时的表达相比,孢子组(80.851±7.860)、菌丝组(63.932±8.070)出现了下降趋势(P<0.05)。结论 HBD-2在口腔上皮细胞中有基础表达,白假丝酵母菌能诱导其表达上调;白假丝酵母菌对HBD-2的诱导表达只发生在感染的特定时期内,当菌丝进一步侵袭后,HBD-2的表达会逐渐减弱。     

抗癌剂2号对小鼠的急性毒性作用

抗癌剂２号（ＡｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｏｎＡ３）是从人尿中分离提取的一种含肽类的氧化物。小鼠ｉｐ抗癌剂２号的ＬＤ５０为２．０１±０．２６ｇ·ｋｇ－１，当ｉｐＬＤ５０或大于ＬＤ５０（２．５ｇ·ｋｇ－１）的抗癌剂２号时，可见小鼠对机械刺激的反应降低，自主活动明显减少，小鼠肌张力及协调平衡活动呈明显障碍，提示抗癌剂２号的急性毒性主要表现在神经系统。     

头痛2号方治疗偏头痛48例

<正>笔者从 1995年 2月～ 2 0 0 4年 2月采用头痛 2号方治疗偏头痛 4 8例 ,取得了良好疗效 ,现报道如下。1　临床资料一般资料 :6 8例偏头痛病人均符合 1988年发表于Ｃｅｐｈａｌａｌｇ,Ｖ8,Ｓｕｐｐ7的国际头痛学会头面部疼痛分类诊断标准[1] 。有反复发作性头痛 ,痛如刀劈 ,     

早熟2号治疗性早熟的临床观察

目的 探索中医药治疗干预措施的有效性,为制定小儿性早熟的中医诊疗规范奠定基础。 方法 结合文献报道及我科多年专科临床经验总结,本次研究拟定肝郁化火为主要证型,回顾性总结2010年至2012年经临床研究纳入的性早熟病例520例,分成3组,即中枢性性早熟组245例、外周性性早熟组154例、不完全性中枢性性早熟组121例,各组按中医辨证分别为肝郁化火型,治疗上予我科自拟方早熟2号,疗程6个月,观察各组的临床疗效、症状、体征方面的改善情况,以及性激素（FSH、LH、E2）、子宫、卵巢容积和骨龄等的变化。 结果 本研究治疗组经中药治疗后FSH、LH略有下降,差异无统计学意义,但E2下降明显,差异有统计学意义（P<0.05）,且外周性和中枢性性早熟组总体疗效有显著差异（P<0.05）,外周性性早熟组总体疗效优于中枢性性早熟组,说明中药能抑制外周雌激素的分泌,从而延缓患儿的第二性征发育及骨骺的融合,但对下丘脑-垂体-性腺轴的抑制功能较弱。     

药用乳糖酶酵母菌发酵条件研究

依据微生物中普遍存在的葡萄糖效应原理,结合正交试验法优化设计确定了乳糖酶高产酵母菌Y34440的发酵培养基组分为乳糖（2％）,葡萄糖（2％）,玉米浆（2％）,酵母汁（0.5％）,尿素（1.5％）,并优化了其发酵工艺。该培养基价格低廉,产酶活高,适宜作为工业发酵用培养基。20L发酵罐（装液量16L）发酵试验结果表明,发酵液最高产酶量达9.18ONPG单位／ml。     

息化饮2号对高血压模型大鼠的降压实验及活血化瘀作用研究

目的　探讨息化饮 2号对高血压病的降压及活血化瘀作用。方法　观察息化饮 2号对二肾一夹型肾血管性高血压大鼠 (2K1C RHR)模型的血压及对凝血、纤溶系统及心肌病理等方面的影响。结果　活血化瘀中药具有降低血压 ,减慢心率 ,改善血液流变学及微循环障碍 ,提高纤溶活性及红细胞变形能力 ,增强抗凝能力 ,防止机体血栓形成 ,延缓心室肥厚的发生等方面的重要作用。结论　证明了活血化瘀法治疗高血压病确实可提高疗效 ,减轻并发症的发生。     

纳豆激酶基因重组质粒在大肠杆菌与毕赤酵母中的稳定性

利用PCR方法以纳豆杆菌染色体DNA为模板扩增纳豆激酶基因片段,分别克隆到原核表达载体pBV220与真核表达截体pPICZaA上,转化大肠杆菌HB101与毕赤酵母GS115,筛选重组子,通过限制性内切酶,PCR分析及序列测定,测定该重组子所携外源基因为纳豆激酶基因,对重组大肠杆菌与毕赤酵母中外源基因的稳定性进行研究比较,结果表明外源基因的插入对宿主菌的生长没有太大影响,重组质粒在E.coli HB101中具有良好的分离稳定性,而结构稳定性较差,而外源基因在毕赤酵母（GS115中很稳定。     

间羟基苯甲醛在酵母细胞中的代谢初探

报道间羟基苯甲醛在酵母中的代谢情况。前者经酵母转化后,从发酵液中分离得三个化合物,经ＩＲ,￣１ＨＮＭＲ,ＭＳ分析,分别确定为间羟基苯基乙酰基甲醇（收率：３７．４％）;间羟基苯甲醇（收率：４１．１％）;１－间羟基苯基－１,２－丙二醇（收率３６．３％）。此外还证实１－间羟基苯基－１,２－丙二醇是由间羟基苯基乙酰基甲醇进一步转化的产物。     

大鼠肺血栓模型的制备及考察

采用~（１２５）Ｉ－纤维蛋白的血栓注入大鼠肺动脉制成肺血栓模型,以给药后血液放射强度增加率评价药物的溶栓作用。结果表明：此血栓模型稳定性较好,能明显显示精制蝮蛇抗栓酶（０．０８ｕ／ｋｇ）和尿激酶（１００００ｕ／ｋｇ）的溶栓作用,剂量－效应关系反应灵敏,并具经济、废物处理方便等特点。     

国产丙烯酸Ⅱ号树脂假胶乳的制备及有关性质的研究

研究了国产丙烯酸Ⅱ号树脂acrylic resin No.2假胶乳的制备,并测定了其粒径大小及分布、粘度、pH值等物理参数,考察了温度、离心等加速试验对其稳定性的影响,并推测贮存有效期暂定为一年。根据红外及差热分析法推断丙烯酸Ⅰ号树脂在制备假胶乳的工艺过程中所发生的只是物理形态上的改变,并未发生化学变化。     

环境温度和接骨Ⅱ号对小鼠尾椎实验性骨折修复的影响

本实验以手术方法造成146只未成年的LACA小鼠第十二尾椎实验性骨折,以组织学改变的情况评价了不同环境温度和"接骨Ⅱ号"对骨折修复的影响以及肥大细胞与骨痂形成的关系.结果表明:选择小鼠尾椎为骨折部位建立动物模型有许多优点,环境温度为33℃时骨折愈合明显比8～14.5℃时快,但"接骨Ⅱ号"无明显的加快骨折愈合的作用,肥大细胞参于了骨痂的形成.     

过敏康Ⅱ号胶囊对NIH雄性小鼠血清抗精子抗体的影响

目的　对过敏康Ⅱ号胶囊治疗男性免疫性不育进行了研究 ,并对其作用机制进行了初步探讨。方法　对NIH雄鼠采用主动免疫法建立血清抗精子抗体 (AsAb)阳性动物模型 ,分别选用醋酸泼尼松以及具有益气固表、凉血消风作用的过敏康Ⅱ号胶囊 ,于建模的同时灌胃给药 ,观察药物对NIH雄鼠血清AsAb的影响。结果　过敏康Ⅱ号 3个剂量组血清AsAb吸光值均明显低于模型组 (P<0 0 1)。结论　过敏康Ⅱ号胶囊确有抑制AsAb产生的作用 ,为临床治疗AsAb阳性免疫性不育患者提供了实验依据     

产气肠杆菌突变株EAM-Z1的培养和核苷磷酸化酶活力的研究

目的：大规模培养具有高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌突变株(E．aerogenes EAM-Z1),利用静息细胞酶法合成抗肿瘤核苷药物中间体5—氟尿苷(FUR)。方法：补料分批培养产气肠杆菌,发酵过程流加葡萄糖、控制发酵液的pH和pO2,摇瓶培养基中加入底物胞苷诱导核苷磷酸化酶,通过酶法合成FUR时菌体对底物尿苷的转化率来研究菌体的核苷磷酸化酶活力。结果：葡萄糖既可满足产气肠杆菌碳源的需要,又能维持培养液的pH,培养24h发酵液菌体温重为19．1g／L,以尿苷(UR)和5—氟尿嘧啶(FU)为底物,产气肠杆菌游离湿菌体对UR的酶转化率为56．7％;摇瓶培养基中加入3．0g/L胞苷诱导核苷磷酸化酶,静息细胞的酶转化率提高了10．2％;酶反应间隙流加底物UR浓度达30mmol/L时,产物FUR的浓度最高,进一步增加底物浓度则抑制产物的合成。结论：通过大规模培养可获得产高活力核苷磷酸化酶的产气肠杆菌,其静息细胞可用于抗肿瘤核苷药物中间体FUR的制备。