肾综合征出血热病毒单克隆抗体的研究与应用

作者概要地报道我室近年来对肾综合征出血热病毒单克隆抗体(McAb)的研究与应用,包括:①肾综合征出血热病毒及其血凝素抗原McAb杂交瘤细胞系的建之与鉴定,②选择其中高效优质的McAb进行病毒的抗原性分析;③以McAb亲和层析纯化病毒结构蛋白及其分析鉴定,④纯化HFRS-McAb及其应用;⑤以Mcab-IFAT检验HFRS患者外周血白细胞中的病毒抗原;⑥建立了McAb-ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原、检测不同疫区人和动物血清中特异性抗体(IgM和IgG)、患者血清中血凝抑制抗体等。并已应用于研究HFRS病毒结构及其特征、纯化病毒抗原组份及保护性抗原,对本病的早期快速检验诊断、流行病学调查、研究疫苗及免疫治疗等都有重要意义。     

单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病人血清IgM和IgG抗体的研究

肾综合征出血热(HFRS)早期临床症状不典型,因此在病人血清中检出特异性抗体,特别是IgM抗体,对辅助临床早期诊断和流行病学监测均有重要意义。间接免疫荧光法(IFAT )和免疫酶染色法,虽已被广泛用于上述目的,但尚存在需用荧光显微镜或判定结果有一定主观性等不足之处。血凝抑制试验测出的则主要是IgG抗体。本文采用抗HFRS病毒单克隆抗体(McAb)和粗纯抗原建立了一种ELISA间接夹心法,以检测HFRS病人血清中IgM和lgG抗体,并与IFAT进行了比较。     

McAb-ELISA间接夹心法检测HFRS患者血清中血凝抑制抗体的研究

作者采用抗HFHS病毒血凝素McAb和粗制血凝素抗原的ELISA间接夹心法,检测63份临床诊断为HFRS患者血清中血凝抑制抗体,同时使用血凝抑制试验进行比较。两者的阳性率均为74.6％,而ELISA的抗体滴度明显高于血凝抑制试验(P<0.01)。本法在临床诊断和流行病学监测中,有实用价值,并可能取代血凝抑制试验。     

检测肾综合征出血热血清IgM的ELISA捕捉一步法的建立及初步应用

目的 :建立一种快速、简便、敏感 ,适合医院和基层门诊应用的检测肾综合征出血热血清特异性IgM的方法。 方法 :以羊抗人 μ链为包被抗体 ,以辣根过氧化物酶 (HRP)标记的抗 -HFRS病毒特异性单克隆抗体 (McAb)与HFRS病毒抗原(Ag)结合成复合物为指示标记物 ,建立了检测HFRS血清特异性IgM的ELISA反向捕捉一步法。 结果 :整个试验过程仅需1h ,操作简便。用该法与山东省淄博市生产的ELISA二步法试剂盒对比检测HFRS血清 6 0份 ,两法均为阳性 5 4份 ,均为阴性 3份 ,总符合率 95 %。结论 :ELISA捕捉一步法快速、简便、敏感 ,适合医院和基层门诊应用 ,可用于HFRS的早期诊断及流行病学研究     

肾病综合征出血热病毒分离的研究

用环状沉淀试验、ELISA及其阻断试验从2例典型脑型肾病综合征出血热(HFRS)病人脑脊液(CSF)中查到HFRS病毒相关抗原(HFRSV—AA),并用Vero—E6细胞从1例中分离到一株可稳定传代的病毒,用各种HFRS病毒免疫血清和单克隆抗体(McAb)对感染传代细胞中的HFRSV—AA进行IFA、ELISA、SPA协同凝集试验(Co—SPA)和反向间接胶乳     

肾病综合征病毒McAb的获得及其在病原学及流行病学的应用

目前我国用于肾病综合征(HFRS)病原及流行病学调查的标准血清主要是病人恢复期血清。由于个体差异及血清的复杂性,必然影响检查结果的可靠性。我们用杂交瘤技术在国内首先获得高滴度(≥1/81920)高特异性的HFRS的25-1 McAb。用间接免疫荧光法能识别从不同地区、动物和人血清分离到的轻型和经典型出血热,但不能识别其它一些虫媒病毒、小儿麻痹病毒和呼肠弧病毒;鼠肺抗原检查证明,25-1 McAb的敏感性和人恢复期血清一     

用单克隆抗独特型抗体检测肾综合征出血热患者外周血淋巴细胞表面特异抗原受体

用抗独特型抗体(Ab_2)检测细胞表面抗原受体是将Ab_2作为探针用于免疫学检测而出现的新方法。作者在制备了肾综合征出血热(HFRS)病毒Ab_2的基础上,应用单克隆抗独特型抗体(1B1)作间接免疫荧光试验,检测了HFRS患者外周血淋巴细胞表面特异抗原受体(SAR)。     

应用ELISA法检测人体血清中HFRS抗体的研究

目的：通过检测人体血液中抗肾综合出血热（HFRS）病毒抗体产生情况，分析人体体液免疫效果。方法：以HFRS病毒灭活纯化抗原为包被Ag以HRP-兔抗人IgG结合物为标记抗体，应用间接EUSA法检测随机抽取的20组HFRS双价纯化疫苗接种者免疫前、后血清抗体的产生情况，并采用蚀斑减少中和试验（PRNT）法进行中和抗体的检测。结果：第1针免疫后14天与免疫前比较，90％以上的血清抗体滴度有4倍以上升高；第2针免疫后14天与第1针免疫后14天比较，100％的血清抗体滴度有4倍以上升高；第2针免疫后14天中和抗体阳转率则达90％以上。结论：应用间接ELISA法检测人体血清中HFRS抗体产生情况可以用于分析疫苗免疫前后人体体液免疫效果。     

小鼠、家兔自然感染肾综合征出血热(HFRS)病毒的调查(简讯)

1983年4月～8月,山西医学院发生了一起由实验室大鼠作为传染源的HFRS爆发流行。为了解HFRS病毒在小鼠、家兔中的感染状况,我们用间接荧光免疫方法(IFAT)检查了42只小鼠各种脏器中的病毒抗原和血清抗体及18只家兔的HFRS血清抗体。结果,在42只小鼠血标本中,41只HFRS血清抗体阴性,1只未查。其中有15只小鼠查了心、肝、脾、肺、肾,27只查了肺,均未查到HFRS病毒抗原。在采集的18只家兔血标本中,其中日本大耳白4只、青紫蓝3只,黑优种3只,品种不详有8只,在品种不详     

山东省家猪感染肾综合征出血热病毒流行病学调查和实验研究

目的了解家猪在肾综合征出血热(HFRS)疫区的流行病学意义,探讨家猪与HFRS发病的关系。方法以HFRS病毒(HFRSV)抗原和抗体为指标,采用反向间接血凝法(RPHA),血凝抑制法(RPHI),酶标葡萄球菌A蛋白(HPR-SPA),间接免疫荧光法(IFA)和PCR反应对山东部分地区家猪自然感染HFRSV的情况进行检测。结果家猪心、肝、脾、肺、肾等脏器及血、尿、粪和猪圈内污物检出HFRSV抗原与抗体,脏器抗原阳性率为3.33%~5.00%。而血、尿、粪和圈内的污染物抗原阳性率分别为3.67%、7.04%、2.51%和5.56%,血清抗体阳性率为1.96%,并从HFRSV抗原阳性的多种标本分离出病毒。人工感染后病毒可随血液波及多个脏器,二次感染乳鼠脑可检出HFRSV抗原。二次组织病理学检查发现肺、肝、肾等脏器有一过性病理改变;HFRSV可在猪体内增殖,并经多途经排出体外。结论家猪可能是HFRSV的扩散宿主动物。     

Detections of HFRS Virus Antigen and Antibody by a McAb ELISA Indirect Sandwich Method

An ELISA indirect sandwich method using monoclonal antibodies(McAb)against hem-orrhagic fever with renal syndrome(HFRS)virus has been developed fordetections of HFRS virus antigen and specific antibody.Dynamic changes of HFRS virusantigens in the cells infected and their culture supernatants were observed by indirectfluorescence-antibody technique(IFAT)and ELISA separately.It was shown that HFRSvirus antigens in the cells and in the supernatants peaked separately 8 days and 14 daysafter infection.A hundred and seventy-nine brain and lung specimens of suckling miceinfected were examined by ELISA and IFAT.The positive rates were 72.1% and 68.2%,respectively.Furthermore,the IgM antibodies of 121 sera from HFRS patients wereexamined by ELISA and IFAT.The positive rates were 90.1% and 83.5% respectively.The IgG antibodies of 178 sera from HFRS patients were also examined by the twomethods,and both of the positive rates were 89.3%.The antibody titer measured byELISA was higher than the titer by IFAT.The above results suggest that the ELISA is aspecific and sensitive method and can be used for early diagnosis,epidemiologicalsurveillance and etiological study of HFRS.     

McAb-ELISA间接夹心法检测家鼠型HFRS疫区人和动物血清中特异性抗体

用McAb-ELISA间接夹心注和IFAT或酶标SPA染色法平行检测山西地区(家鼠型HFRS疫区)的人及动物血清中HFRS病毒特异性IgM和/或IgG抗体。结果ELISA检测174份HFRS患者血清的阳性率及抗体滴度均明显高于IFAT。检测295份无明确HFRS病史的健康人血清,ELISA的阳性率也高于IFAT。检测215份鼠类血清、102份兔血清及108份猪血清,ELISA的阳性检出率与IFAT或酶标SPA染色法基本相同。用阻断试验等证明本ELISA检出的抗体确为HFRS病毒特异性抗体。     

免疫滴金技术检测肾综合征出血热特异性抗体458例

目的为探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热(HFRS)抗体的检测方法。方法 458例HFRS病人血清同时采用免疫滴金法(CGIDA)与酶联免疫吸附法(ELLISA)对比检测特异性免疫球蛋M抗体(抗HV-IgM)、免疫荧光法(IFAT)对比检测特异性免疫球蛋G抗体(抗HV-IgG)并以20例发热待查、48例病毒性肝炎血清作对照。结果 458例HFRS病人血清,以CGIDA法检测抗HV-IgM,阳性358例,与ELLISA法作结果评价时,CGIDA灵敏度80％,特异度100％;以CGIDA法检测抗HV-IgG,阳性386例,与IFAT法作结果评价时,CGIDA灵敏度91％,特异度100％。结论 CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELLISA法及IFAT法对照,均有简便、快速、特异、灵敏之优点,检测抗HV-IgM,CGIDA法敏感性差于ELLISA法,但是无假阳性;检测抗HV-IgM,CGIDA法的灵敏度高于IFAT法。     

肾综合征出血热病毒在体外培养的血管内皮细胞中增殖的研究

目的 研究肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒在血管内皮细胞（ＨＥＣ）内的增殖。方法 采用微量免疫酶斑法检测ＦＲＳ病毒（Ａ９、ＰＵＶ株）感染后ＨＥＣ的病毒繁殖动态，亲与病毒在Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞繁殖动态相互对比。结果 ＨＦＲＳ病毒感染ＨＥＣ后第一天即可检验到病毒释放，Ａ９株第３在达增殖高峰，ＰＵＶ株第７天达增殖高峰。结论 ＨＦＲＳ病毒可在原妈靶细胞ＨＥＣ内增殖但不同的病毒株繁殖速度不同，这种差异可能与其致     

肾综合征出血热特异性抗体的检测与中西医结合治疗的研究

目的探索一种更为简便、快速、特异、灵敏的肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)抗体的检测方法及更为有效的中西医结合治疗手段.方法559例HFRS患者血清同时采用免疫滴金法(colloidal gold immuno-dot assay,CGIDA)与酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对比检测特异性免疫球蛋白M抗体(抗HFRS-IgM),间接免疫荧光法(indirect fluorescent antibody test,IFAT)对比检测特异性免疫球蛋白G抗体(抗HFRS-IgG).101例HFRS患者分组进行中西医结合治疗,治疗组50例用苦黄注射液、参麦注射液联合黄芪口服液,对照组51例用利巴韦林注射液联合甘利欣注射液,针对老年患者的临床特点,及早采用综合性防治措施.结果559例HFRS患者血清,以CGIDA法检测抗HFRS-IgM,阳性396例(70.8%);以CGIDA法检测抗HFRS-IgG,阳性489例(87.5%).治疗组与对照组用药后退热天数、主要症状和体征缓解天数相似(P＞0.05);肾功能恢复天数,对照组优于治疗组(P<0.01);在越期方面,治疗组越休克期数明显高于对照组(P<0.01). 结论CGIDA法检测HFRS特异性抗体分别与ELISA法及IFAT法对照,均有简便、快速、特异、灵敏之优点,检测抗HFRS-IgM,CGIDA法敏感性差于ELISA法,但是无假阳性;检测抗HFRS-IgG,CGIDA法的灵敏度高于IFAT法.苦黄注射液、参麦注射液联合黄芪口服液与利巴韦林注射液联合甘利欣注射液相比较,疗效无明显差别,但前者优于改善休克情况,后者强于改善肾功能.     

ELISA捕捉法与间接夹心法检测肾综合征出血热患者血清IgM抗体的比较

作者用ELISA捕捉法和间接夹心法平行检测106份第7病日内的肾综合征出血热患者血清IgM抗体,其阳性检出率分别为92.5％和87.7％,其中40份第4病日内的血清阳性率分别为90.0％和85.5％,差异均无显著性意义,但前法检出的抗体滴度(平均1:102 400)明显高于后者(1:3200)     

间接免疫荧光法检测麻疹抗原在麻疹早期诊断中的临床应用

目的:探讨间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence Assay,IEA)检测麻疹病毒抗原对儿童麻疹病毒(measles virus,MV)感染的早期诊断价值.方法:观察86例临床诊断麻疹的患儿,在发病的不同阶段IFA检测痰液MV抗原和酶联免疫吸附试验(engymelinked imgmunosorbent assay,ELISA)检测血清中MV特异性LgM抗体,采集30份上呼吸道感染患者痰液进行IFA麻疹病毒抗原检测,比较分析检测结果.结果:86例中发病7 d内IFA测抗原ELISA测抗体两种方法的阳性率为分别为97.1%和16.2%;7 d后为33.3%和88.9%,P均＜0.01.IFA测抗原阳性率与检测时间的相关系数为-0.91,P=0.02;ELISA测抗体阳性率与检测时间的相关系数为0.97,P=0.04.30份对照组的标本MV抗原检测均为阴性,IFA测抗原的特异性与敏感性分别是100%和97.1%.结论:IFA测抗原在疾病早期检出阳性率高,阳性检出率与检测时间成负相关,IFA测抗原痰液麻疹病毒抗原是一种早期快速、特异敏感的实验室检测方法.     

重组核衣壳蛋白免疫滴金检测肾综合征出血热抗体差异的研究

目的比较重组核蛋白抗原制备的胶体金免疫试剂盒与病毒悬液抗原制备的胶体金免疫试剂盒在检测肾综合征出血热特异性抗体的差异。方法以汉坦76—118病毒M14626株s片段为模板，克隆334bp片段，重组表达核衣壳蛋白，以此蛋白作为抗原，制备胶体金试剂盒，与以病毒悬液为抗原的胶体金试剂盒进行平行检测300例肾综合征出血热血清IgM和IgG抗体。并与酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接免疫荧光法（IFA）对比检测。结果成功构建了重组核蛋白原核表达载体pGEX-4T-1-S，获得高纯度的抗原，分子量约12kD，以此蛋白为抗原制备胶体金试剂盒。检测300例HFRS病人血清抗HFRSigM，rNPCGIDA阳性检出率为90．7％，后者高于前者，差异有显著性（X^2=32．9，P〈0．05）。用rNP与天然NP平行检测蛋白表达法HFRSIgM76.3％，HFRSIgG84．2％；细胞培养法HFRSIgM86．8％，HFRSIgG92．1％。HFRSIgM符合率达89．7％，HFRSIgG符合率达92．3％；CGIDA法检测HFRS IgM的敏感性为75.0％，特异性为100％；CGIDA法检测HFRSIgG的敏感性为83．1％，特异性为100％。结论该重组核蛋白的CGIDA对HFRS的早期诊断具有较好的应用价值。但是敏感性及特异性均低于细胞培养法的CGIDA。