顺铂抑制SKOV3细胞转移的动态监测及相关机制探讨

目的:在细胞水平实时动态监测顺铂抑制SKOV3细胞黏附和转移特性,探讨其相关机制.方法:CCK8法检测顺铂对SKOV3细胞增殖的抑制;采用RTCA监测仪24h实时动态观察顺铂对SKOV3细胞的黏附、迁移和侵袭的抑制作用;细胞组化法检测顺铂作用SKOV3细胞24h后细胞表面CD44v6的表达情况.结果:(1)顺铂对SKOV3细胞增殖的抑制作用呈浓度和时间依赖性,24、48h的IC50分别为24.065±1.031、5.083±0.128μg/ml;(2)在第50min时点,25 μg/ml顺铂组与对照组对SKOV3细胞黏附力的抑制作用差异最显著(P＜0.05).第2h时点,12.5、25 μg/ml顺铂组对SKOV3细胞迁移的抑制作用显著高于对照组(P＜0.05).第10h 15min时点,25μg/ml顺铂组对SKOV3细胞侵袭的抑制作用显著高于对照组(P＜0.05).(3)与对照组比较,25 μg/ml顺铂组细胞表面表达CD44v6明显减少(P＜0.05),而5μg/ml顺铂组减少不明显.结论:顺铂抑制SKOV3细胞转移特性首先表现为抑制细胞的黏附和迁移,这与顺铂减少细胞表面CD44v6蛋白的表达密切相关.CD44v6将成为上皮性卵巢癌治疗的新靶点.     

胰岛素对子宫内膜间质细胞分泌IGF-1和IGFBP-1的影响

目的 :了解胰岛素对子宫内膜间质细胞分泌胰岛素样生长因子 1(IGF 1)和胰岛素样生长因子结合蛋白 1(IGFBP 1)的影响。方法 :用含不同浓度雌二醇和胰岛素的培养液培养增生晚期人子宫内膜间质细胞 2 4h后 ,留取培养液测定IGF 1。用含不同浓度孕酮和胰岛素的培养液培养分泌晚期人子宫内膜间质细胞 2 4h后 ,留取培养液测定IGFBP 1。结果 :1.增生晚期间质细胞培养液中IGF 1的浓度 :2 0 μU ml胰岛素组为 1.39±0 .33μg L ,低于 10 0 μU ml胰岛素组 (2 .0 3± 0 .5 3μg L) (P <0 .0 1) ;10 0ng L雌二醇 + 2 0 μU ml胰岛素组为 2 .18± 0 .36 μg L ,低于 10 0g L雌二醇 + 10 0 μU ml胰岛素组 (3.4 2± 0 .75 μg L) (P<0 .0 1)。 2 .分泌晚期间质细胞液中IGFBP 1浓度 :2 0 μU ml胰岛素组为 0 .16± 0 .5 8μg L ,低于对照组 (P <0 .0 1) ,高于 10 0 μU ml胰岛素组 (0 .10± 0 .4 8μg L) (P <0 .0 1) ;10 μg L孕酮 + 2 0 μU ml胰岛素组为 2 .10± 1.17μg L ,低于 10 μg L孕酮组 (P <0 .0 1) ,高于 10 μg L孕酮 + 10 0 μU ml胰岛素组 (0 .5 0± 0 .2 8μg L) (P <0 .0 1)。 结论 :1.胰岛素促进增生期子宫内膜间质细胞分泌IGF 1;2 .胰岛素抑制分泌晚期子宫内膜间质细胞分泌IGFBP 1。     

高效液相色谱法对大鼠应用米非司酮的药物动力学研究

用高效液相色谱法测定大鼠ig（灌胃）和阴道给药米非司酮（均为16mg／kg）后0.5、1、2、4、8、24、48h的血清浓度，根据各鼠血药浓度-时间数据拟会曲线，ig呈二室动力学模型，阴道给药呈一空动力学模型，其Tmax分别为2.43h、4.50h；Cmax分别为320．60μg／ml、129．64μg／ml；Ka分别为0．84／h、0．67／h；T1／2分别为（1）0．88h、0．98h；（2）1．65h、15．07h；Auc分别为5153．1μg·h／ml，3155．99μg·h／ml；K10分别为0．12／h，1．06／h。结果显示米非司酮ig血药浓度较阴道给药血药浓度为高。     

左炔诺孕酮口崩片的人体药代动力学及相对生物利用度研究

目的:比较左炔诺孕酮口崩片和市售口服片的人体药代动力学及相对生物利用度。方法:20名健康女性志愿者随机双交叉单剂量服用左炔诺孕酮口崩片和市售口服片,剂量均为0.75 mg,分别于服药前和服药后72 h内不同时间点抽取静脉血,清洗期为2周,以放射免疫分析(radioimmuno-assay,RIA)法测定血清中左炔诺孕酮的浓度,并利用SAS软件计算口崩片与市售口服片的药代动力学和相对生物利用度。结果:采用RIA测定左炔诺孕酮的最低检测限为10 pg/ml,低、中、高(300 pg/ml、2 000 pg/ml、6 000 pg/ml)3种浓度左炔诺孕酮标准质控血清的日内精密度分别为12.4%、9.3%、3.1%(n=5),日间精密度分别为4.3%、11.7%、5.7%(n=5)。口崩片和市售口服片的主要药代动力学参数分别为:tmax1.6±0.2 h、tmax1.7±0.3 h;Cmax6.2±0.8 ng/ml、Cmax6.5±1.0 ng/ml;AUC0～72 h 85.5±24.4 h.ng/ml、AUC0～72 h 90.8±27.1 h.ng/ml;AUC0-inf96.8±27.9 h.ng/ml、AUC0-inf 101.2±30.8 h.ng/ml;t1/2 25.3±3.5 h、t1/224.2±3.1 h。口崩片的AUC0～72 h、AUC0-inf和Cmax的90%置信区间分别为市售口服片相应参数的87.72%～101.87%、89.01%～103.73%和89.80%～101.75%。口崩片tmax与市售口服片相比无显著差异(P>0.05)。口崩片的相对生物利用度为96.1±18.3%。结论:建立的分析方法准确灵敏,可用于左炔诺孕酮血药浓度的测定;左炔诺孕酮口崩片与市售口服片的生物利用度无显著性差异,2种制剂具有生物等效性。     

Pharmacokinetics of intraperitoneal chemotherapy with continuous washing methods for patients with ovarian cancer

<正> Objective: To compare the pharmacokinetics of the routine intraperitoneal chemotherapy (RIP) and continuous washing intraperitoneal chemotherapy (CWIP) of cisplatin (CDDP) in 38 patients with ovarian cancer.Methods:The patients had a performance status of II -IV on the FIGO scale.38 patients were randomized into CWIP group (16 patients) and RIP group (22 patients). CDDP was used as intraperitoneal chemotherapy (IP) with 70mg/m2. In 72h, the samples from serum, ascites and urine were collected respectively and their platinum density were determined with electrochemistry polarographic analysis. On the third day and one month after IP, liver and kidney function and blood routine were examined. Results: The maximum concentration (Omax) of plasma in CWIP and RIP groups were 3.84μg/ml and 1.27μg/ml respectively; the Cmax of ascites were 7.04μg/ml and 4.43μg/ml respectively in the two groups.The area under the plasma concentration-time curve(AUC) in CWIP and RIP groups were 1067.77μg/ml and 191. 72μg.h/m     

初孕人工流产术前不同剂量米索前列醇阴道内置入的随机对照研究

目的探讨人工流产术前米索前列醇阴道内置入的最佳有效剂量.方法将99例早孕(停经≤70天)要求负压吸宫术终止妊娠的初孕妇女,按阴道内置药剂量的不同,随机分为3组200 μg组35例,400μg组32例及600 μg组32例,分另于施术前3 h阴道后穹窿置米索前列醇200 μg、400μg及600 μg,观察各组有效宫颈扩张度(≥7.0 mm)比率、术中出血情况及用药后副反应发生率.结果三组有效宫颈扩张度比率,以400μg组93.75%(30/32)及600μg组96.88%(31/32)显著高于200μg组34.29%(12/35)(P＜0.005),其中400 μg与600 μg组相比,差异无显著性(P＞0.05),三组中术中出血量200μg组18.67±3.24 ml,400μg组16.38±3.52 ml及600 μg组17.60±2.73 ml,各组间差异均无显著性(P＞0.05),用药后副反应发生率,以600μg组15.63%(5/32)显著高于400μg组3.15%(1/32).结论400 μg米索前列醇阴道内置入可作为人工流产术前扩张宫颈的最佳有效剂量和理想的给药途径.     

黄体酮阴道环在家兔的药代动力学研究

目的:提供研制可供哺乳期妇女避孕的黄体酮阴道环的药理学依据。方法:将18只去卵巢后2周的新西兰雌兔随机分为3组:阴道环低剂量组(175mg,A组)、高剂量组(350mg,B组)及肌注组(C组),分别在放置阴道环及肌注黄体酮前后不同时点取静脉血,用磁性分离酶联免疫法测定兔血清中黄体酮的浓度,用PK-Graph程序计算药代动力学参数。结果:黄体酮阴道环和黄体酮注射剂在兔体内的药代动力学符合二室开放模型。主要药代动力学参数分别是A组:Tmax:2.23±1.3h,Cmax:47.64±23.58ng/ml,T1/2:818.08±511.77h,AUC:16115.11±8398.88ng·ml·h-1;B组:Tmax:2.03±1.33h,Cmax:74.04±24.57ng/ml,T1/2:730.31±306.49h,AUC:28751.95±7151.95ml·h-1;C组:Tmax:1.54±0.77h,Cmax:138.88±60.96ng/ml,T1/2:2.55±0.89h。其中A组的AUC(56d)明显低于B组,二者有显著性差异(P<0.05);A组和B组的Cmax均低于C组,差异显著(P<0.05);A组和B组的T1/2均明显高于C组(P<0.01),但A、B组间无差异。结论:与传统的黄体酮注射剂相比,黄体酮阴道环的药代动力学参数呈现明显的长效缓释特征。应可成为安全长效且使用方便的哺乳期避孕药具。     

羊水中明胶酶、白细胞介素8与胎膜早破关系的研究

目的　探讨明胶酶、白细胞介素 8(interleukin 8,IL 8)与胎膜早破 (PrematureRuptureofMembrane,PROM)发生的关系。　方法　PROM者 30例为观察组 ,正常孕妇 30例为对照组。于剖宫产时抽取羊水 3ml备存。羊水消化生物素标记明胶 ,用ELISA法测定剩余明胶的含量 ,换算出酶的活性。参照文献进行明胶电泳 ,酶经电泳分离后 ,将该处的明胶消化 ,染色后形成不着色的透明带 ;IL 8含量的测定 :用双抗体夹心ELISA法。　结果　 ( 1)在未临产、潜伏期和活跃期 ,观察组和对照组羊水总明胶酶的活性分别为 :( 85± 10 ) μg/L·12h、( 91± 7) μg/L·12h、( 10 4± 2 3) μg/L·12h和( 4 9± 15 ) μg/L·12h、( 5 8± 15 ) μg/L·12h、( 10 2± 2 9) μg/L·12h ,两组中活跃期显著高于未临产 (P <0 .0 1)。 ( 2 )在未临产期和潜伏期 ,观察组羊水中总明胶酶的活性均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。 ( 3)羊水中较明确的明胶酶带有 4条 ,分子量分别为 92、83、72和 6 6kd。观察组在未临产时羊水中各明胶酶消化的明胶带较对照组宽。 ( 4 )在未临产、潜伏期和活跃期 ,观察组和对照组羊水IL 8的含量分别为 :( 0 .195± 0 .110 ) μg/L、( 0 .2 76± 0 .12 8) μg/L、( 0 .333± 0 .134) μg/L和 ( 0 .10 2± 0 .0 5 6 ) μg/     

米非司酮对卵巢上皮性癌耐药细胞DNA修复基因表达和顺铂敏感性的影响

目的 研究米非司酮对卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞DNA修复基因表达的调控,及对顺铂的增敏作用.方法 应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮作用后卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的顺铂半数抑制浓度(IC50);用RT-PCR技术、流式细胞仪检测米非司酮联合顺铂作用后COC1/DDP细胞ERCC1、BRCA1、hMLH1 mRNA的表达水平及细胞周期和凋亡率的变化;建立COC1/DDP细胞裸鼠皮下移植瘤模型,分为顺铂组、米非司酮组、联合组和对照组,观察米非司酮在裸鼠体内对顺铂的增敏作用.结果 2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮分别使COC1/DDP细胞对顺铂的IC50下降为(3.18±0.46)、(1.95±0.14)和(0.64±0.18)μg/ml,2.5 μmol/L米非司酮联合顺铂作用后的IC50与单用顺铂者[(3.71±0.38)μg/ml]比较,差异无统计学意义(P=0.076),其他浓度之间两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).米非司酮下调ERCC1、BRCA1、hMLH1 mRNA表达水平,3种基因mRNA的相对表达量随米非司酮浓度的升高均呈下降趋势.2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮联合顺铂对COC1/DDP细胞作用后,G0/G1,期细胞比例升高(分别为51.68%、53.74%、55.08%).2.5、5.0、10.0 μmol/L米非司酮与10 μg/ml顺铂联合作用使细胞凋亡率分别增加为5.11%、9.13%和12.24%.米非司酮联合顺铂治疗裸鼠皮下移植瘤的生长抑制率为70.1%,与顺铂组、米非司酮组(分别为22.5%、6.5%)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 米非司酮通过下调ERCC1、BRCA1、hMLH1基因的表达及阻滞G0/G1期细胞、增加细胞凋亡率来增强顺铂对卵巢癌细胞的抗肿瘤敏感性.     

轴突导向因子netrin-1在滋养层细胞侵袭中的作用

目的 探讨轴突导向因子netrin-1在滋养层细胞侵袭中的作用及其机制.方法 采用RT-PCR技术检测绒毛膜外滋养细胞株TEV-1中netrin-1的6种受体(UNCSA、UNCSB、UNCSC、UNCSD、DCC和neogenin)mRNA的表达.将培养的细胞按照加入netfin-1蛋白浓度的不同分为10μg/L组、50μg/L组、100 μg/L组、500 μg/L组、1000μg/L组、5000μg/L组和阴性对照组(netrin-1的浓度为0 μg/L)共7组,分别用细胞计数试剂盒8检测各组细胞的增殖能力[以吸光度(A)值表示],体外侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力.结果 (1)RT-PCR技术检测结果显示,netrin-1的6种受体中,仅检测到neogenin和UNC5B mRNA的表达.(2)培养72 h后,10μg/L组、50μg/L组、100μg/L组、500μg/L组、1000μg/L组和5000 μg/L组细胞的A值分别为1.55±0.29、1.72±0. 31、2. 15±0.35、1.42±0.25、1.50 ±0.27和1.38±0.23,分别与阴性对照组(1.00±0.16)比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)培养6 h后,10μg/L组、50μg/L组、100μg/L组、500μg/L组、1000μg/L组和5000 μg/L组细胞的穿膜细胞数分别为(41±4)、(47±5)、(55±6)、(44 ±5)、(43±5)和(42±5)个,分别与阴性对照组[(30±4)个]比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(4)neogenin mRNA的表达水平,10μg/L组、50μg/L组、100μg/L组、500μg/L组、1000μg/L组和5000 μg/L组分别为1.50±0.16、1.83±0.19、2.24±0.25、2.12±0.24、2.12±0.23和2.13±0.23,分别与阴性对照组(1.00±0.11)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);10 μg/L组与50μg/L组比较,50μg/L组与100μg/L组比较,差异也均有统计学意义(P<0.05);100 μg/L组与500 μg/L组、1000 μg/L组和5000μg/L组之间两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(5)UNCSB mRNA的表达水平,10μg/L组、50μg/L组、100 μg/L组、500 μg/L组、1000 μg/L组和5000 μg/L组分别为1.09±0.11、1.47±0.14、1.61±0.16、1.85±0.19、2.21±0.21和2.42±0.23,分别与阴性对照组(1.00 ±0.07)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);各组之间分别比较,差异也均有统计学意义(P<0.05).结论 netrin-1能促进入绒毛膜外滋养细胞的增殖和侵袭能力,这种促进作用受到其受体neogenin及UNCSB的调控.     

青春期大鼠受己烯雌酚持续作用对成年后睾丸结构与功能的影响

目的：探讨青春期大鼠受己烯雌酚(DES)持继作用后的睾丸损伤,损伤后在成年期的睾丸结构及生精功能能否恢复。方法：青春期雄性SD大鼠48只,随机均分成：A_1、B_1、C_1和D_1组；A_2、B_2、C_2和D_2组。分别隔日腹腔注射含DES0μg·kg~(-1)·d~(-1)(A_1,A_2,为对照组)、2μg·kg~(-1)·d~(-1)(B_1,B_2)、10μg·kg~(-1)·d~(-1)(C_1,C_2)和50μg·kg~(-1)·d~(-1)(D_1,D_2)的玉米油0.3 ml,28 d后处死A_1-D_1组动物采集标本。A_2-D_2组则继续正常饲养60 d(恢复期),然后处死动物取材。检测大鼠体重(BW)、睾丸重量(TW)、附睾重量(EW)、睾丸每日精子生成量(DSP)以及附睾尾精子数(ESC)等5项参数的变化,应用光镜观察睾丸生精上皮的组织学变化。结果：B_1组的TW、DSP和ESC显著低于A_1组(P＜0．01),C_1组和 D_1组的5项参数均显著低于A_1组(P＜0．05)。与A_2组相比较,B_2组的5项参数均没有显著性差异(P＞0．05),C_2组DSP和ESC显著减少(P＜0．05),D_2组则TW、EW、DSP和ESC显著降低(P＜0．01)。DES染毒各组的睾丸曲细精管出现了不同程度的萎缩,且随剂量增加病理改变程度加重。恢复期后,睾丸曲细精管组织结构B_2组显示正常,C_2组有明显恢复,D_2组未得到恢复。结论：青春期大鼠受DES持续作用可导致睾丸生精上皮损伤,生精能力下降。损伤较轻组在成年后,睾丸组织结构和生精功能得到不同程度的恢复,但损伤程度重者未见恢复。     

LIF及其抗体对小鼠胚胎着床影响的体外研究

目的 :研究外源性白血病抑制因子 (LIF)及其抗体对小鼠胚胎着床的影响。方法 :将妊娠 4d的小鼠胚胎种植于已建立的子宫内膜体外模型上 ,观察不同浓度的LIF及其抗体对小鼠胚胎的粘附、植入及扩展情况。并用RT PCR法测定子宫内膜上皮细胞整合素β3的变化。结果 :不同浓度的LIF促进了胚胎的粘附 (P <0 .0 5 ) ,胚胎的扩展率降低。加入LIF抗体 (5 ,1 0 μg/ml)降低了胚胎的粘附率 (P <0 .0 5 ) ,同时LIF对整合素β3的表达有明显的促进作用 (P <0 .0 1 ) ,加入抗体后整合素β3的表达降低。结论 :LIF可能通过上调整合素β3的表达促进胚胎的粘附和植入     

rHGF interacts with rIGF-1 to activate the satellite cells in the striated urethral sphincter in rats: a promising treatment for urinary incontinence?

Purpose

There are multitudes of factors contributing to urinary incontinence (UI). Dysfunction of the urethral sphincter is one of the common variables. Fortunately, satellite cells, which have the characteristics of stem cells, exist in the striated urethral sphincter. The purpose of the study was to seek whether rHGF combined with rIGF-1 owns the ability to promote the activation, proliferation, and differentiation of satellite cells to potentially improve urinary incontinence.

Methods

The SD rats were randomly divided into four groups and injected with 10 μl rIGF-1, the concentration of which was 50 μg/ml into the urethral wall of the urethral sphincter. Meanwhile, three groups were additionally treated with 10 μl rHGF, the concentration of which was 20, 50, 100 μg/ml. The group injected only with rIGF-1 was used as a control. 30 days later, the urethral tissues were harvested and serially sectioned. Immunofluorescent staining and HE staining were used to detect the activation, proliferation, and differentiation condition of satellite cells. The real-time RT-PCR analysis was applied to explore the potential signaling pathways.

Result

Anti-c-Met antibody-positive cells were discovered in the striated urethral sphincter. Positive expression of c-Met was relatively higher with the treatment of 100 μg/ml rHGF compared to other concentration of rHGF. A similar result was found in additional immunofluorescent staining. The number of newborn myofibers with central nuclei increased as the concentration of rHGF becoming higher. The mRNA expression of ERK1, ERK2 and AKT was comparatively higher with the injection of 50 μg/ml rHGF.

Conclusion

There is supposed to be a synergistic effect between rHGF and rIGF-1 to promote satellite cell to activate, proliferate and differentiate into muscle cells. The urethral sphincter may be induced to renew by the injection of rHGF and rIGF-1 into the urethral wall. It can be used to develop a new therapy for UI.

     

我国正常生育力男子精浆的微量元素研究

本文报告测试了68例正常生育力成年男子精浆中的锌、铜,铁等微量元素和镁,测试结果如下:锌130±5.64μg/ml,铜1.84±0.158μg/ml,铁0.801±0.104μg/ml,镁103.86±10.01μg/ml。所测得的数值均在正常范围内。在正常范围内的精液,精浆中的锌、镁含量与精液质量(精子密度和活动力)之间无显著差异。但铜的含量与精子活动度关系密切,含量高则活动度差,反之则活动度好。铁的含量与精子密度关系也十分密切,含量高时精子密度也高。     

复方炔雌醚对育龄妇女血浆皮质醇浓度的影响

60例育龄妇女服复方炔雌醚(简称复雌片)4～13年,血浆皮质醇水平明显升高(27.72±1.05μg/100ml)与正常对照组(15.63±0.60μg/100ml)及曾短期服用短效避孕药组(19.76±0.86μg/100ml)相比,差异均具有非常显著意义。复雌片组口服葡萄糖耐量试验(OGTT)各时相的血糖值与正常对照组近似。本文结果提示复雌片避孕药对肾上腺皮质功能的影响,可能是通过负反馈机制引起垂体前叶ACTH分泌减少,因而皮质醇水平升高。较低剂量的复雌片对糖代谢无明显影响。     

放置VCu200 IUD不同年限宫颈粘液含铜量

本文用无火焰原子吸收分光光度仪ＨＩＴＡＣＨＩ－１８０测试置ＶＣｕ２００ＩＵＤ妇女宫颈粘液含铜量２６７例。其结果为自第１年平均含铜量２．６６±０．５８μｇ／ｇ粘液湿重至第１５年降为０．９１±０．６μｇ／ｇ粘液湿重，显示宫颈粘液含铜量随放置时间延长而渐减少。金属圆环组２１４例，各不同年限宫颈粘液含铜量平均为０．３５±０．０８～０．５６±０．１４μｇ／ｇ粘液湿重。未带器组２１例宫颈粘液平均含铜量为０．４７±０．１１μｇ／ｇ粘液湿重，ＶＣｕ２００组与金属圆环组各年限相比均有显著差异（Ｐ＜０．０５～０．００１）。与未带器组比各年ｆＫ亦皆有显著差异（Ｐ＜０．０５～０．００１）。文献报道铜离子浓度达１．０μｇ／ｍｌ有杀死或抑制精子活动的作用，浓度为０．７μｇ／ｍｌ能使孕卵胚泡中毒。本文置ＶＣｕ１２００ＩＵＤ者第１０年时铜离子含量为１．１１μｇ／ｇ粘液湿重，第１５年为０．９１±０．１μｇ／ｇ粘液湿重，依此推测ＶＣｕ２００ＩＵＤ至少可放置１０年以上。