硫化氢对糖尿病大鼠心肌纤维化及NF-κB p65和TNF-α表达的影响

目的探讨气体信号分子硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌纤维化以及TNF-α和NF-κB p65表达的影响。方法将30只雄性成年SD大鼠分为3组:对照组(Control组)、糖尿病大鼠组(STZ组)、硫化氢干预糖尿病大鼠组(STZ+H2S组),每组10只。用腹腔注射链脲佐菌素(STZ,40 mg/kg)建立糖尿病模型;Control组每天腹腔注射生理盐水;STZ+H2S组每天腹腔注射硫氢化钠(H2S供体)溶液(100μmol/kg),8周后处死大鼠,HE染色观察心肌组织病理学变化;Western blot检测Ⅳ型胶原蛋白和NF-κB p65和TNF-α的表达。结果与STZ组相比,H2S干预后的心肌细胞间质纤维化明显改善,而与Control组相比,STZ组的Ⅳ型胶原及TNF-α和NF-κB p65蛋白的表达明显增加(P<0.05);与STZ组相比,STZ+H2S组Ⅳ型胶原及TNF-α和NF-κB p65蛋白的表达则明显减少(P<0.05)。结论 H2S改善糖尿病大鼠心肌纤维化,抑制NF-κB/TNF-α的信号通路是其可能机制之一。     

坎地沙坦对糖尿病心肌纤维化及氧化应激、NF-κB的抑制作用

目的:研究坎地沙坦(Candesartan)对糖尿病大鼠心肌纤维化及氧化应激、NF-κB表达的影响。方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和坎地沙坦干预组(Cand组)。腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,Cand组于造模成功后给予坎地沙坦8mg/(kg·d)灌胃。12周末取血及心脏标本,测定血糖、心脏质量指数(HMI)及左心室质量指数(LVMI);Masson染色观察心肌形态及测算心肌间质胶原容积分数(CVF)(%),测定血清和左心室心肌组织中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及还原型谷光甘肽(GSH)含量变化;Western法及免疫组织化学方法检测左心室心肌NF-κB p65及TNF-α蛋白表达水平。结果:与NC组比较,DM组HMI、LVMI显著增加(P<0.01),血清及心肌MDA含量显著增高,GSH含量及SOD活性均显著降低(P<0.05);心肌NF-κB p65及TNF-α表达明显升高;心肌细胞排列紊乱,胶原纤维增多,CVF明显升高(P<0.01)。与DM组比较,Cand组HMI、LVMI降低(P<0.05),血清及心肌MDA含量降低,SOD及GSH明显增高(P<0.05);Cand组心肌NF-κB p65及TNF-α表达明显减少(P<0.01);心肌间质纤维减少,CVF下降(P<0.01)。结论:坎地沙坦可通过抑制氧化应激及NF-κB活化、下调TNF-α表达,抑制糖尿病心肌纤维化。     

重症急性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活和益活清胰汤的干预作用

目的:研究重症急性胰腺炎(SAP)心肌功能损害时心肌NF-κB的活化及益活清胰汤的干预作用。方法:63只SD大鼠随机分为假手术组(n=9)、对照组(n=27)、益活清胰汤治疗组(n=27),SAP模型采用5%的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。ELISA法测定6 h、12 h、24 h各时点血TNF-α、IL-6含量,RT-PCR检测心肌NF-κB mRNA的表达,免疫组化法检测心肌NF-κB蛋白的表达,HE染色光镜下观察胰腺及心肌组织的病理变化。结果:术后6 h大鼠心肌NF-κBmRNA及NF-κB蛋白表达异常增高,TNF-α、IL-6呈进行性升高,治疗组用药后心肌NF-κBmRNA及蛋白表达下调,与对照组相比(P0.05),血TNF-α、IL-6明显下降,与对照组相比(P0.05),治疗组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。结论:SAP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-κB活化有关,益活清胰汤对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。     

三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB/IκB表达的影响

目的 观察三七时酒精性大鼠肝组织的防治及时NF-κB/IκB表达的影响.方法 SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组、三七高、低剂量组和硫普罗宁组,连续14周建立酒精性肝病模型.在模型制备同时,每天下午分别灌服给药,连续14周.ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α).常规HE及Masson染色,光镜观察肝组织的脂肪变、炎症及纤维化程度;免疫组化法检测肝组织中NF-κBp65/IκBα蛋白的表达.结果 酒精性肝病模型组大鼠肝组织脂肪变及炎症程度计分、血清TNF-α水平明显增高(P＜0.01).三七高、低剂量组,硫普罗宁组大鼠肝组织脂肪变及炎症程度、血清TNF-α水平较模型组明显减轻(P＜0.01,P＜0.05).酒精性肝病模型组大鼠肝组织NF-κBp65和IκBα均较正常组明显升高(P＜0.01);三七高、低剂量组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα表达较模型组明显降低(P＜0.01,P＜0.05).相关分析显示,肝组织NF-κBp65表达与肝组织炎症程度计分呈正相关(r=0.63,P＜0.01),与血清TNF-α水平呈正相关(r=0.43,P＜0.01);肝组织IκBα表达与肝组织炎症程度计分呈正相关(r=0.36,P＜0.05),与血清TNF-α水平呈正相关(r=0.44,P＜0.01);血清TNF-α水平与与肝组织炎症程度计分呈正相关(r=0.60,P＜0.01).结论 用白酒-玉米油-吡唑混合液灌服大鼠14周可成功制作ALD模型.三七可明显减轻酒精性肝病大鼠肝组织脂肪变和炎症程度.三七能显著抑制肝组织中NF-κBp65/IκBα的过度表达,降低血清TNF-α水平,这可能是其有效防治酒精性肝病的发生发展的重要机制之一.     

TAK1/NF-κB在小鼠心肌肥厚中的变化及意义

目的 研究转化生长因子活化激酶1/核因子-κB(TAK1/NF-κB)与炎性反应在心肌肥厚中的作用,探索心肌肥厚的分子机制并寻找潜在的防治靶点。方法 使用野生型C57BL/6J小鼠,以主动脉缩窄术(AB)建立压力负荷诱导的心肌肥厚模型,假手术(Sham)组作为对照组。AB术后8周超声心动图评估小鼠心室结构与功能,处死小鼠称量心脏质量。HE与PSR进行心肌组织病理学与纤维化。CD68免疫荧光检测单核-吞噬细胞浸润,实时定量RT-PCR检测炎性反应标志物的表达,Western blot法检测TAK1/NF-κB通路蛋白质磷酸化水平。结果 与Sham组比较,AB组小鼠的室壁厚度、室腔大小及心脏质量/体质量明显增加(P<0.05),心功能下降(P<0.05),心肌细胞横截面积与胶原沉积量显著增大(P<0.05)。此外,AB组心肌组织中CD68阳性细胞数明显增多(P<0.05),TNF-α与IL-1β等炎性反应标志物的mRNA表达水平明显升高(P<0.05);AB组TAK1、κB抑制蛋白激酶β与κB抑制蛋白α(IκBα)的磷酸化水平较对照组明显上调,IκBα总蛋白水平降低,NF-κB p65磷酸化水平增加。结论 压力负荷诱导的心肌肥厚伴有TAK1/NF-κB通路激活与心肌组织炎性浸润,提示TAK1/NF-κB参与了心肌肥厚的发生、发展。     

miR-199a在LPS诱导的大鼠原代心肌细胞中通过激活NF-κB信号通路加重心肌细胞损伤

目的探究miR-199a在LPS诱导的大鼠原代心肌细胞中的作用。方法将大鼠原代心肌细胞分为对照组(NC)、LPS组、LPS+miR-199a mimic组、LPS+miR-199a inhibitor组。本实验采取CCK8方法探究miR-199a对于大鼠原代心肌的细胞活力影响。随后运用ELISA法检测miR-199a对于LPS诱导大鼠原代心肌细胞的炎症因子如TNF-α及IL-1β的释放情况。通过流式细胞仪检测miR-199a对于LPS诱导大鼠原代心肌细胞的凋亡蛋白变化。运用Western blot实验研究miR-199a模拟物或抑制剂的miR-199a表达情况以及研究miR-199a对于LPS诱导大鼠原代心肌细胞的p-p65、p65和p-iκBa、iκBa及凋亡蛋白表达情况。结果 CCK8法发现与NC组相比,LPS抑制了大鼠原代心肌细胞的活力(P0.01),然而经模拟物处理后,经LPS诱导的大鼠原代心肌活力受抑制更加严重(P0.05)。同时,与模拟物组相比,miR-199a抑制剂组大鼠原代心肌细胞活力受抑制降低(P0.01)。ELISA结果表明,与NC组相比,LPS诱导了TNF-α及IL-1β的释放(P0.05)。与LPS组相比,miR-199a模拟物组加重了TNF-α(P0.01)及IL-1β(P0.05)的释放,而miR-199a抑制剂组TNF-α(P0.01)及IL-1β(P0.05)的释放减少。流式凋亡、Western blot结果表明,50 nmol/L的miR-199a模拟物可通过上调caspase3、bax表达和下调bcl2表达而加剧LPS引起的大鼠原代心肌细胞的凋亡(P0.05)。进一步检测NF-κΒ通路发现LPS可通过p-iκBa与p-p65表达的上调诱激活大鼠原代心肌细胞NF-κΒ通路,但与LPS组相比,在模拟物处理后,p-p65和p-iκBa上调更加明显。与此同时,阻断miR-199a后,与模拟物组相比,p-p65和p-iκBa表达下调。这些发现表明用模拟物处理可以加重体内LPS诱导的心肌炎中NF-κB信号传导途径的激活。进一步使用NF-κB通路抑制剂发现,miR-199a模拟物并不能加剧LPS对于大鼠原代心肌细胞的活力抑制,这进一步提示miR-199a可能通过NF-κB通路加剧心肌细胞的损伤。结论 miR-199a可加重心肌细胞的损伤,这种损伤主要通过NF-κB信号通路来实现的。     

脂多糖预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨脂多糖（LPS）预处理对大鼠心肌缺血再灌注（I/R）损伤的保护作用及机制。方法建立大鼠在体心肌I/R模型,24只SD大鼠随机分为3组：假手术组（Sham组）,缺血再灌注组（I/R组）,LPS预处理组（ET组）。HE染色观察各组心肌形态学改变,RT-PCR法检测心肌组织中白细胞介素-1受体相关激酶-4（IRAK-4）mR-NA水平,Western-Blot法检测心肌组织IRAK-4蛋白水平,免疫组化方法检测心肌组织中NF-κB的表达,ELISA法检测血清TNF-α含量。结果 HE染色提示ET组心肌细胞损伤较I/R组明显减轻。ET组及I/R组心肌组织IRAK-4mRNA水平及蛋白水平、NF-κB及血清TNF-α含量明显高于Sham组（均P〈0.01）,并且ET组的表达水平又明显低于I/R组（P〈0.01）。结论抑制IRAK-4表达进而抑制NF-κB及TNF-α的表达,可能是LPS预处理减轻心肌I/R的重要机制之一。     

基于miR-34a-5p/Notch1信号通路探讨蒙药四味土木香散对压力超负荷心肌肥厚大鼠的保护机制

【摘要】目的 探讨四味土木香散（STP）对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的保护作用及机制。方法 第一部分：Wistar大鼠随机分为假手术（sham）组、模型（Mod）组、Mod+STP高、中、低剂量（STP-H、STP-M、STP-L）组、Mod+阳性药卡托普利（CAP）组,检测血压、超声心动图、HE及Masson染色。第二部分：Wistar大鼠随机分为sham组、Mod组、Mod+STP-H组、Mod+STP-H+miR-34a-5p激动剂（agomir）组、Mod+STP-H+Notch1抑制剂（DAPT）组,观察HE及Masson染色,RT-qPCR检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、核因子κB（NF-κB）、miR-34a-5p表达量,Western Blot检测Notch1、NICD1、hes1蛋白表达量。结果 第一部分：STP各剂量组均对压力超负荷心肌肥厚具有改善作用,其中高剂量治疗效果最佳。与Mod组比,STP-H组在8、10周时血压降低,心功能提高,细胞短轴直径及心肌纤维化降低,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。第二部分：与Mod组比,STP-H组 TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平降低,Notch1、NICDI、hes1表达量升高,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。与STP-H组相比,agomir组、DAPT组细胞短轴直径及心肌纤维化增加,TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平升高,Notch1、NICDI、hes1表达降低,差异均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。结论 STP可通过抑制miR-34a-5p的表达,同时靶向激活Notch1通路而改善压力超负荷性心肌肥厚,发挥心肌保护作用。     

基于β2AR2/βarrestin2/NFκB通路的地佐辛对心肌缺血再灌注损伤大鼠的作用及机制

目的 探讨地佐辛对心肌缺血再灌注损伤大鼠β2肾上腺素受体(β2AR)/β抑制蛋白2(β-arrestin2)/核转录因子-κB(NF-κB)通路及心肌凋亡的影响。方法 60只大鼠随机分为假手术组（Sham组）,心肌缺血再灌注模型组（MIRI组）,地佐辛高、中、低剂量组（20、10、5 mg/kg）,每组12只。地佐辛各剂量组在造模前30 min经股静脉注射相应剂量的地佐辛,Sham组和MIRI组给予等量生理盐水,采用手术结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法复制大鼠MIRI模型。再灌注2 h后,检测各组大鼠心率（HR）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末（LVEDP）,评价心脏功能;并检测血清中肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶MB（CKMB）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;HE染色观察左心室组织学变化;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况,计算凋亡指数;免疫组织化学法检测心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达;Western blot检测心肌组织β2AR、β-arrestin2、IκBα、NF-κB p65蛋白表达。结果 心肌组织病理学可见,Sham组心肌纤维完整、排列整齐,MIRI组心肌严重受损,局部肌纤维横纹消失,大量炎性细胞浸润;与Sham组相比,各治疗组明显好转。与Sham组相比,MIRI组大鼠HR、LVSP、Bcl-2/Bax比值、心肌组织β2AR、β-arrestin2、IκBα蛋白表达显著降低,各治疗组较MIRI组明显升高（均P＜0.05）;与Sham组相比,MIRI组LVEDP、血清CK、CK-MB、TNF-α、IL-6水平、心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达、心肌细胞凋亡率显著升高,各治疗组较MIRI组明显降低（均P＜0.05）。结论 地佐辛可抑制炎症反应,减少心肌细胞凋亡,对MIRI大鼠具有保护作用;其作用机制可能与上调β2AR、β-arrestin2、IκBα的表达,降低NF-κB p65表达有关。     

NF-κB抑制剂对脂多糖刺激的退变人椎间盘髓核细胞炎症因子表达的影响

目的 观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激退变人椎间盘髓核细胞前后,核因子kappB(NF-κB)与炎症因子表达及相互关系.方法 体外培养退变的人椎间盘髓核细胞,设立对照组、LPS (500 μg/mL)刺激组、NF-κB抑制剂(BAY11-7082)+LPS(500 μg/mL)刺激组.ELISA方法检测各组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β的含量,免疫荧光法检测各组髓核细胞内p65的表达及定位,Western blot检测TNF-α、IL-1β、NF-κB结合蛋白p65以及磷酸化p-p65的表达,Real-time PCR检测TNF-α及IL-1β的表达.结果 LPS刺激髓核细胞后,p65入核增多,p-p65表达明显增加,ELISA实验结果表明LPS刺激组细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平升高(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显上升(P＜0.05);而与LPS刺激组相比,NF-κB抑制剂+LPS刺激组p65入核减少,p-p65表达明显降低,细胞培养液中炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平降低(P＜0.05),Western blot及Real-time PCR检测结果也表明其髓核细胞内炎症因子TNF-α及IL-1β表达水平明显下降(P＜0.05).结论 LPS能够通过激活人退变髓核细胞NF-κB信号通路,促进炎性因子TNF-α及IL-1β表达增多,抑制NF-κB信号通路后可明显减轻炎性因子的表达.     

局灶性脑缺血对大鼠胃黏膜屏障功能的影响

目的 研究局灶性脑缺血对大鼠胃酸分泌、胃蛋白酶活性的影响,以及胃黏膜组织TNF-α和NF-κB p65的表达变化,以探讨胃黏膜屏障功能受损与局灶性脑缺血的关系.方法 Wistar雄性大鼠随机分为4组:假手术组、脑缺血2h组、4h组、24 h组,每组8只.线栓法制备局灶性脑缺血模型,观察模型组胃酸分泌及胃蛋白酶活性的变化,HE染色观察胃黏膜病理变化,免疫组织化学法对TNF-α及NF-κB p65在大鼠的胃黏膜的分布及表达进行半定量分析.结果 与假手术组相比,脑缺血4h后胃液pH明显增大(P＜0.05);胃蛋白酶活性明显降低(P＜0.05).HE染色结果显示,假手术组的胃黏膜组织结构完整;脑缺血2h组胃黏膜层内有少量中性粒细胞浸润;脑缺血4h组有大量中性粒细胞浸润,且部分有黏膜腺体肿胀,黏膜上皮局部坏死脱落现象出现;免疫组织化学结果显示,模型组较假手术组胃黏膜组织中TNF-α和NF-κB p65表达水平均明显增高(P＜0.01).结论 大鼠局灶性脑缺血所引起的胃黏膜屏障功能受损可能与胃黏膜中TNF-α和NF-κB p65的异常表达有关.     

基于NF-κB信号通路探讨参麦注射液联合大黄治疗尿毒症心肌病的研究

目的 通过核因子кB（nuclear factor-кB，NF-кB）信号通路分析参麦注射液联合大黄治疗尿毒症心肌病的效果。方法 选取健康成年SPF大鼠72只，造模成功后随机将其分为正常组、假手术组、模型组、益气组（皮下注射参麦注射液）、降浊组（生大黄煎液灌胃）和益气降浊组（皮下注射参麦注射液+生大黄煎液灌胃），每组各12只，干预后处死大鼠，对心肌组织进行Masson染色、苏木精-伊红染色（hematoxylin and eosin staining，HE染色），并比较各组大鼠的左心室重量指数、心脏重量指数、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、NF-κB p65蛋白表达水平。结果 益气降浊组大鼠的左心室重量指数、心脏重量指数、TNF-α、IL-6及NF-κB p65蛋白表达水平均显著低于模型组、益气组、降浊组、假手术组（P<0.05）。益气降浊组大鼠的心肌纤维走行相同，且心肌组织的分布均匀性、细胞排列整齐度均优于益气组和降浊组。益气降浊组大鼠的心肌胶原沉积均明显减少，心肌纤维整齐，变化最为明显。结论 尿毒症可通过NF-кB信号通路过度激活而诱发心肌损伤，参麦注射液联合大黄能抑制该信号通路过度激活，缓解炎症反应，保护心肌细胞，预防尿毒症心肌病。     

过氧化体增殖物激活型受体-γ对肥厚心肌炎症反应调控作用的初步研究

目的探讨压力负荷性心肌肥厚过程中过氧化体增殖物激活型受体-γ(PPAR-γ)配体-罗格列酮钠对肥厚心肌中炎性反应的影响.方法采用腹主动脉缩窄法复制压力超负荷大鼠心肌肥厚模型. 分组:对照组(C组)、假手术-生理盐水组(S-组)、假手术-罗格列酮组(S 组)、心肌肥厚-生理盐水组(H-组)、心肌肥厚-罗格列酮组(H 组).罗格列酮组:于术后4周用罗格列酮钠生理盐水溶液(4 ml·kg-1·d-1)腹腔注射1周;生理盐水组:于术后4周用生理盐水腹腔注射1周(1 ml*kg-1*d-1).术后5周测定心肌肥厚指数及血液动力学指标;放免法检测左心室肌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血小板活化因子(PAF),以及髓过氧化物酶(MPD)含量;逆转录聚合酶链反应法检测心肌中过氧化体增殖物激活型受体(PPAR-γ)mRNA的表达;EMSA法检测核因子-κB(NF-κB)活性.结果术后5周手术组左心室心肌明显肥厚;心肌中TNF-α、PAF、MPD含量增高(P<0.01);罗格列酮干预能显著降低肥厚心肌中TNF-α、PAF、MPD的含量(P<0.01) ,但仍高于对照组水平(P<0.01).罗格列酮组PPAR-γmRNA的表达明显增高(P<0.01).心肌肥厚组NF-κB活性明显增强(P<0.01),罗格列酮能减轻NF-κB的激活(P<0.01). 结论压力负荷增加引起心肌肥厚,肥厚心肌组织中NF-κB激活明显增强,TNF-α、PAF、MPD表达升高,这一明显增强的炎症反应能被PPAR-γ人工合成配体罗格列酮钠所抑制.     

白藜芦醇对急性心肌梗死大鼠核因子-κB信号通路表达的影响

目的探讨白藜芦醇对急性心肌梗死(AMI)大鼠核因子-κB(NF-κB)信号通路表达的干预作用。方法将30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、AMI组和白藜芦醇组,每组10只;AMI和白藜芦醇组大鼠采用结扎大鼠左冠状动脉前降支法制备AMI模型,假手术组大鼠不结扎左冠状动脉前降支;术后第1天白藜芦醇组大鼠开始腹腔注射白藜芦醇10 mg·kg~(-1)·d~(-1),假手术组及AMI组大鼠分别注射等剂量生理盐水;每日1次,持续用药至术后4周。然后处死各组大鼠,取梗死区域的心肌组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot法检测大鼠心肌组织中NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、IκB激酶α(IKKα)蛋白及其mRNA的表达。结果 AMI组大鼠心肌组织中NF-κB、IκBα和IKKαmRNA表达显著高于假手术组(P<0.05),白藜芦醇组大鼠心肌组织中NF-κB、IκBα和IKKαmRNA表达显著低于AMI组(P<0.05),白藜芦醇组与假手术组大鼠心肌组织中NF-κB、IκBα和IKKαmRNA表达比较差异均无统计学意义(P>0.05)。AMI组大鼠心肌组织中NF-κB、IκBα和IKKα蛋白表达显著高于假手术组(P<0.05),白藜芦醇组大鼠心肌组织中NF-κB、IκBα和IKKα蛋白表达显著低于AMI组(P<0.05);白藜芦醇组大鼠心肌组织中NF-κB、IκBα蛋白表达显著高于假手术组(P<0.05),但2组大鼠心肌组织中IKKα蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论白藜芦醇可以抑制AMI大鼠NF-κB信号通路表达情况,具有心脏保护效应。     

肾上腺素受体介导心脏纤维化模型中核转录因子NF-κB的活化

目的:应用非选择性β肾上腺素受体激动剂——异丙基肾上腺素(isoproterenol,ISO)连续皮下注射7d诱导心脏纤维化模型,并观察此模型中炎症调控核转录因子NF-κB的变化.方法:采用10周龄体重为280 ～320 g的SD大鼠,ISO以0.25 mg/(kg·d)剂量连续背部皮下注射7d诱导心脏纤维化模型.心脏组织切片进行苦味酸-天狼猩红染色观察纤维化,以胶原容量分数进行胶原面积定量统计.应用real-time PCR法检测心脏组织中Ⅰ型/Ⅲ型胶原及炎症因子IL-6的mRNA表达.组织切片进行HE染色观察心脏病理变化.免疫组织化学方法检测心脏组织中NF-κB在细胞内的定位,Western blot法检测心脏组织中磷酸化的NF-κB水平.结果:ISO诱导的心脏纤维化模型中天狼猩红染色面积明显大于对照(control,CON)组,且ISO组的胶原容积分数显著高于CON组(12.01±1.64vs.0.95±0.06,P＜0.001);ISO组Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达显著高于CON组(Ⅰ型胶原:10.51±0.47vs.0.98±0.02,P＜0.001;Ⅲ型胶原:9.58±1.33 vs.1.02±0.02,P＜0.001).ISO组心脏组织中可见细胞核增多、聚集,提示可能炎症细胞浸润,且炎症因子IL-6的mRNA表达水平明显增加(1.64±0.18 vs.1.04±0.07,P ＜0.01).CON组NF-κB主要定位于心肌细胞胞浆中,心肌细胞核中未见NF-κB的定位;ISO组出现明显NF-κB核转位活化,心肌细胞胞浆中的NF-κB较CON组减少,心肌细胞核及间质细胞核均可见明显的NF-κB定位,同时,ISO组心脏组织磷酸化NF-κB的水平明显高于CON组(10.83±2.05vs.1.05±0.27,P＜0.001).结论:连续7d皮下注射ISO可成功诱导心脏纤维化模型,且此模型心脏组织中活化的核转录因子NF-κB增加.     

双参通冠方对急性心肌缺血再灌注NF-κB信号途径的影响

目的探讨双参通冠方(SSTG)对急性心肌缺血再灌注损伤心肌核因子-κB(nuclear factor-κappaB, NF-κB)信号途径(NF-κB-TNF-α-ICAM-1)的影响。方法冠状动脉前降支结扎放松法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,免疫组织化学法检测心肌组织NF-κBp65表达,酶联免疫法测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)含量。结果缺血再灌注模型组NF-κBp65表达较正常组明显增强,血清中TNF-α及ICAM-1含量显著升高(P<0.05),SSTG处理后NF-κBp65表达抑制,血清中TNF-α、ICAM-1水平下调(P<0.05)。结论缺血再灌注刺激可激活NF-κB信号途径,SSTG可能通过抑制NF-κB的活化,阻断NF-κB信号途径而起到心肌保护作用。     

电刺激小脑顶核对局灶脑缺血再灌注大鼠脑组织核因子-κB/p65、TNF-α蛋白和基因表达的影响

目的观察电刺激小脑顶核干预对局灶性缺血再灌注大鼠脑组织核因子-κB/p65(NF-κB/p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白和基因表达的影响及其对中枢神经元保护的作用机制。方法 2014年9月—2015年9月在重庆医科大学神经病学实验室进行。Wistar大鼠60只随机分为假手术组(NC组)、缺血再灌注组(I/R组)、电刺激小脑顶核组(FNS组),每组20只,采用线栓法制作脑缺血再灌注动物模型,FNS组予以电刺激小脑顶核干预,造模或干预成功后处死大鼠取脑组织,分别采用免疫组织化学法和RT-PCR检测各组NF-κB/p65、TNF-α的表达。结果与NC组比较,I/R组NF-κB/p65、TNF-α蛋白表达增加(q=0.032、0.020,P<0.05);与I/R组比较,FNS组NF-κB/p65、TNF-α的表达明显降低(q=0.182、0.013,P<0.05)。与NC组比较,L/R组NF-κB/p65mRNA和TNF-αmRNA表达量明显增高(P<0.05);与I/R组比较,FNS组NF-κB/p65 mRNA和TNF-αmRNA表达量明显减少(P均<0.05)。结论电刺激小脑顶核抑制NF-κB/p65的活化和TNF-α的转录,NF-κB/p65的活化抑制和表达减少及所致的TNF-α表达下调可能是其发挥中枢神经源性保护作用的机制之一。     

高脂饮食对糖尿病大鼠心肌损伤的研究

目的 观察高脂饮食对糖尿病大鼠心肌炎症反应及纤维化的影响.方法 SD大鼠分为对照组（N组）、糖尿病组（D组）和高脂饮食组（H组）,每组20只,后两组用小剂量链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型.H组以高脂饲料喂养,其余两组以普通饲料喂养.12周后测血糖、血脂水平及左室质量指数（LVMI）,光镜下观察心肌结构,免疫组化法检测NF-κB、TNF-α表达,Western blot检测心肌组织基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1）表达情况.结果 光镜下可见N组大鼠心肌细胞排列整齐、致密,结构清晰.D组及H组大鼠心肌细胞排列紊乱、扭曲,间质有炎症细胞聚集.D组大鼠心肌NF-κB、TNF-α表达较对照组明显升高,H组心肌NF-κB、TNF-α表达明显较N组及D组升高,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）.D组及H组心肌MMP-2表达减低,MMP-9、TIMP-I表达均增加,但MMP-9/TIMP-1的比值下降,各组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 糖尿病大鼠心肌损伤表现为心肌炎症反应和间质纤维化,高脂饮食通过上调NF-κB、TNF-α表达及影响MMP-2、MMP-9及TIMP-1的调节失衡对心肌造成损伤.     

玄参水提物对心室重构大鼠心肌纤维化的影响

目的探讨玄参对心室重构大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法腹主动脉缩窄法制备大鼠心室重构模型。8周药物干预后,测定大鼠左室及全心肥厚指数(LVWI、HWI);紫外分光光度法测心肌羟脯氨酸的量(hydroxproline,Hyp);病理切片HE染色观察心肌细胞横断面面积;RT-PCR测定心肌组织转化生成因子β1基因(TGF-β1mRNA)表达水平。结果玄参水提液能降低心肌肥厚指数、羟脯氨酸量,减小左心室心肌细胞的横断面面积;显著降低TGF-β1mRNA表达水平。结论玄参水提液对心肌细胞和间质胶原重构两方面都有显著的抑制作用,抗心室重构的作用机制与抑制TGF-β1mRNA表达有关。