薄型子宫内膜大鼠模型microRNAs差异表达研究

目的 对薄型子宫内膜大鼠模型差异microRNAs(miRNAs)进行筛选和靶基因预测,并对其进行生物信息学分析。方法 采用95%乙醇宫腔灌注制备大鼠薄型子宫内膜模型,取模型组及正常对照组的大鼠子宫内膜组织进行总RNA提取、RNA质检、文库构建后,使用测序平台为illumina HiSeqTM2500进行高通量测序,以P<0.05的标准筛选差异miRNA,利用miRanda和RNAhybrid得出差异表达miRNA候选靶基因,进行基因本体(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果 共有52个差异miRNA,符合预测要求的有48个差异miRNA,共预测出1530个靶基因。其中表达上调的miRNA为rno-miR-375-3p、rno-miR-292-3p、rno-miR-129-1-3p、rnomiR-129-2-3p、rno-miR-291a-3p等,表达下调的miRNA为rno-miR-144-3p、rno-miR-542-3p、rno-miR-144-5p等,涉及的生物过程主要有肽基-苏氨酸磷酸化修饰、细胞代谢过程调控、树突状细胞凋亡过程的调控;细胞成分主要...     

补肾调冲汤治疗子宫内膜腺瘤样增生293例疗效观察

目的 探讨补肾调冲汤治疗子宫内膜腺瘤样增生293例疗效观察。方法 分析293例经诊断性刮宫术后确诊为子宫内膜腺瘤样增生,以补肾、化痰、软坚、散结之法治之。同期口服安宫黄体酮80例为对照组。结果 治疗组293例,治愈264例,占90.1%;无效29例,占9.8%.对照组口服安宫黄体酮80例,治愈47例,占58.8%；无效33例,占41.3%,治疗组明显优于对照组。结论 根据中医“肾为月经之本”,“百病皆有痰化祟”之理论,以补肾,化痰、软坚、散结之方法,可有效提高治疗子宫内膜腺瘤样增生治愈率。     

补肾活血方对薄型子宫内膜干细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨补肾活血方对薄型子宫内膜干细胞Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路的影响。方法选取薄型子宫内膜患者在确定排卵日后第7~9天,用一次性子宫内膜取样器吸取子宫内膜组织约100 mg,生理盐水冲洗干净后,投入4%多聚甲醛中固定。将取得的内膜组织分离培养子宫内膜干细胞,制备药物血清。将子宫内膜干细胞分为对照组、补肾活血方高、中、低剂量组、西药组。给予药物干预后双荧光素酶报告系统检测β-catenin/T细胞因子(TCF)转录活性,免疫荧光法检测CD34/CD117蛋白的表达,RT-PCR法检测Oct-4基因,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测腺苷三磷酸结合转运蛋白(ABCG2)的表达。结果转染相同量的质粒,补肾活血方中、高剂量组和西药组与对照组比较有显著性差异(P0.05)。CD34/CD117、Oct-4基因、ABCG2蛋白在子宫内膜干细胞中均呈阳性表达,CD34蛋白的表达补肾活血方中剂量组与对照组比较有显著性差异(P0.05),补肾活血方高剂量组、西药组与对照组比较有极显著性差异(P0.01),CD117蛋白的表达补肾活血方中剂量、高剂量组与对照组比较有显著性差异(P0.05),西药组与对照组比较有极显著性差异(P0.01)。RT-PCR检测结果显示,Oct-4 mRNA的表达率各给药组与对照组存在显著性差异(P0.05);Western blot检测结果显示,ABCG2蛋白的表达率各给药组与对照组比较均存在显著性差异(P0.05)。结论补肾活血方可以增加薄型子宫内膜干细胞的荧光活性,从而促进Wnt/β-catenin信号通路的激活,并可以不同程度的增加CD34/CD117、Oct4基因及ABCG2蛋白的表达。     

补肾调冲方对PCOS患者子宫内膜保护作用研究

[目的]探讨补肾调冲方对多囊卵巢综合征患者子宫内膜的保护作用。[方法]诊刮获取多囊卵巢综合征患者的子宫内膜组织,体外混合培养子宫内膜细胞,分别予以补肾调冲方、孕酮、17β-雌二醇干预子宫内膜细胞,并设置空白对照组。利用透射电镜观察子宫内膜细胞超微结构;ELISA法检测子宫内膜细胞中孕激素受体的表达,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测转化生长因子（TGF-β1）、Smad4 mRNA及蛋白的表达。[结果]药物干预后经透射电镜观察发现,与雌激素组、空白对照组相比,实验组、孕激素组细胞表面微绒毛数量增多,有分支,线粒体体积增大,粗面内质网扩张,高尔基体肿胀;实验组子宫内膜细胞中孕激素受体表达低于雌激素组、空白对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;与雌激素组、空白对照组相比,实验组TGF-β1、Smad4 mRNA及蛋白表达增多,差异有统计学意义（P<0.05）.[结论]补肾调冲方能够促进多囊卵巢综合征患者子宫内膜由增生期向分泌期转变。     

补肾调冲方改善促排卵周期中子宫内膜容受性的临床观察*

[目的]探讨补肾调冲方对不孕症患者促排卵周期子宫内膜容受性的影响。[方法]将36例子宫内膜生长不良继发不孕患者随机分为中药组及戊酸雌二醇对照组,应用经阴道彩色多普勒超声检测绒毛促性腺激素(HCG)注射日子宫内膜厚度、类型及血流状态[。结果]1)中药组子宫内膜厚度较对照组明显改善,差异显著(P<0.05)。2)中药组A型+B型内膜与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3)中药组子宫内膜阻力指数(RI)和搏动指数(PI)明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);子宫内膜穿支血流与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。4)中药组临床妊娠率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]补肾调冲方有增加子宫内膜厚度及改善子宫内膜血流的作用,可提高子宫内膜容受性,有助于胚胎着床。     

基于PI3K/AKT通路探讨何氏补肾厚膜方改善大鼠薄型子宫内膜的作用机制

目的 基于磷脂酰肌醇激酶（PI3K）/蛋白激酶B(AKT)通路探讨何氏补肾厚膜方（HBHP）改善大鼠薄型子宫内膜（TE）的作用机制。方法 48只SD雌性大鼠,按体质量随机分为对照组、模型组、阳性组和HBHP组,每组12只。除对照组外,其余各组在发情期对大鼠右侧子宫注入95%乙醇建立TE模型。HBHP组在模型建立后灌胃给药HBHP 10 g/（kg·d）,按1 mL/100 g灌胃。阳性组给予小剂量阿司匹林肠溶片0.5 mg/（kg·d）,按1 mL/100 g灌胃;对照组及模型组每日灌服生理盐水1 mL/100 g。各组大鼠连续灌胃15 d后,剖腹取子宫。苏木精-伊红（HE）染色观察子宫内膜厚度的变化。免疫组织化学染色和逆转录-定量实时聚合酶链反应（RT-qPCR）检测子宫内膜组织中PI3K、AKT蛋白和mRNA的表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠的子宫内膜厚度[（357.34±14.35）μm比（526.08±23.21）μm]、腺体数量[（8.09±1.57）比（19.08±1.31）]、子宫湿重[（0.42±0.05）g比（0.80±0.06）g]和子宫脏器指数[（0.16±0...     

补肾祛瘀汤对子宫内膜异位症大鼠治疗的机制研究

 目的 研究补肾祛瘀汤对子宫内膜异位症（EMS）模型大鼠血管内皮生长因子（VEGF）及survivin蛋白的影响,探讨补肾祛瘀汤对EMS的疗效机制。方法 SD大鼠50只随机分为5组：正常组（A组）、模型组（B组）、补肾祛瘀汤组（C组）、孕三烯酮组（D组）、补肾祛瘀汤加孕三烯酮组（E组）,除正常组外其余均采用大鼠子宫内膜组织自体移植手术建立子宫内膜异位症模型,灌胃给药28 d后检测各组大鼠血清中和子宫内膜移植物局部VEGF和survivin蛋白表达。结果 与模型组比较,各治疗组大鼠VEGF及Survivin蛋白含量降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 补肾祛瘀汤对大鼠子宫内膜异位症具有治疗作用,其作用机制可能与抑制异位内膜的血管新生有关,中西医结合治疗子宫内膜异位症效果更佳。     

补肾调冲法促排卵作用机理研究

排卵功能障碍是妇科常见的疑难病症。临床主要表现为功能性子宫出血、闭经、不孕等,严重影响患病妇女的身心健康。对于该病的治疗,现代医学均采用激素类促排卵药物,虽在临床上有肯定疗效,但副作用明显。近年来,我们在中医药促排卵研究的基础上,结合多年的临床经验,提出补肾调冲法是治疗排卵功能障碍性病症的基本大法,并对其进行促排卵作用机理实验研究,现将研究结果报告于下。     

补肾活血方对子宫内膜干细胞移植治疗薄型子宫内膜大鼠子宫内膜CD34、整合素ανβ3、LIF表达的影响

目的 探讨补肾活血方对子宫内膜干细胞(EDSCs)移植治疗薄型子宫内膜模型大鼠子宫内膜CD34、整合素ανβ3、白细胞抑制因子(LIF)表达的影响.方法 从8周龄雌性SD大鼠子宫内膜中分离提取EDSCs,采用机械分离与两步酶消化法,实验选用纯度较高的第3代细胞,分别采用尾静脉和宫腔注射的方法移植到实验大鼠体内;采用雌性...     

基于络病学说探讨补肾活血通络法治疗薄型子宫内膜

胞络为络脉之一,胞络为病亦分虚实.薄型子宫内膜的发生分为胞络虚损和胞络不通两方面.因胞络空虚,无血可充,导致胞宫失养为病者当属虚;因寒、热、湿、毒外邪入侵及金刃等不内外因导致胞络气血运行不畅、瘀血内阻、络脉不通而无法将气血输送至胞宫者当属实.薄型子宫内膜的治疗应以通络为主,根据虚实不同,可分为扶正通络和祛邪通络.扶正通...     

补肾祛瘀汤对子宫内膜异位症大鼠细胞凋亡的影响

目的:研究补肾祛瘀汤(BQT)对子宫内膜异位症(EMS)模型大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)及survivin蛋白的影响,探讨补肾祛瘀汤对EMS的疗效机理。方法:SD大鼠50只随机分为5组:正常组、模型组、补肾祛瘀汤组、孕三烯酮组、补肾祛瘀汤加孕三烯酮组,除正常组外其余均采用大鼠子宫内膜组织自体移植手术建立子宫内膜异位症模型,灌胃给药28 d后检测各组大鼠血清中和子宫内膜移植物局部TNF-α和survivin蛋白表达。结果:①与正常组相比,模型组大鼠血浆TNF-α显著升高,差异有统计学意义(P=0.004);与模型组相比,西药组、中药组大鼠血清中TNF-α下降,差异有统计学意义(P=0.035,P=0.037);中西结合组大鼠血清中TNF-α与正常组相比,差异有统计学意义(P=0.01);②与正常组相比,模型组大鼠异位内膜中survivin蛋白的表达是显著上调的(P=0.005),与模型组大鼠相比,各个治疗组大鼠异位内膜中survivin蛋白的表达明显下降(P<0.01),而西药组和中西结合组相比,EMS模型大鼠异位内膜当中survivin的含量差异有统计学意义(P=0.018,P<0.05)。结论:补肾祛瘀汤对大鼠子宫内膜异位症具有治疗作用,其作用机制可能与增强异位内膜细胞的凋亡有关,运用传统中药治疗子宫内膜异位症更具优势。     

月经血干细胞对薄型子宫内膜大鼠的治疗修复作用

目的:探究月经血干细胞（MenSC）移植对薄型子宫内膜的治疗修复作用及机制。方法:选取8～10周龄无特定病原体级雌性SD大鼠30只,随机分为模型对照组和MenSC组,每组各15只。两组通过化学损伤法在大鼠一侧子宫内膜建立薄型子宫内膜损伤模型,建模7 d后分别将等渗氯化钠溶液及MenSC多点注入大鼠损伤侧子宫内,另一侧子宫作为手术对照组不做任何处理。第三代传代MenSC治疗薄型子宫内膜模型大鼠。苏木精-伊红染色观察子宫内膜组织结构;免疫组织化学染色观察子宫内膜组织细胞角蛋白（CK）18、波形蛋白表达;5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测子宫内膜组织中细胞增殖情况;免疫荧光染色检测子宫内膜组织血管内皮标志物CD34和血管内皮生长因子（VEGF）的表达;实时逆转录PCR检测子宫内膜组织白血病抑制因子（LIF）、整合素β3(ITGβ3)及同源异型框A10(HOXA10)的基因表达。两组分别按雌鼠和雄鼠2∶1比例进行合笼实验,观察MenSC对模型大鼠生殖功能的影响。结果:与手术对照组比较,模型对照组子宫内膜薄,腺体及血管数少（均P<0.01）,MenSC移植后大鼠子宫内膜厚度、...     

补肾活血方对肾虚血瘀薄型子宫内膜大鼠子宫内膜容受性的影响研究

目的　探讨补肾活血方对肾虚血瘀薄型子宫内膜大鼠子宫内膜容受性的影响。方法　2016年6月—2017年3月选取SPF级雌性SD大鼠42只,将其随机分为对照组9只,造模组33只。造模组参照《雌性大鼠肾虚血瘀模型初探》建立肾虚血瘀薄型子宫内膜大鼠模型。造模结束后对照组、造模组均随机选取3只大鼠验证造模成功与否,随后将30只造模组大鼠随机分为模型组、补肾活血低剂量组、补肾活血中剂量组、补肾活血高剂量组、补佳乐组5组,每组6只。对照组、模型组均灌服蒸馏水10 ml/kg;补佳乐组灌服补佳乐0.3 mg•kg-1•d-1;补肾活血低剂量组灌服补肾活血方2.16 mg/kg,10 ml/d;补肾活血中剂量组灌服补肾活血方4.32 mg/kg,10 ml/d;补肾活血高剂量组灌服补肾活血方8.64 mg/kg,10 ml/d;均为1次/d,给药3个动情周期即15 d后处死大鼠开腹取子宫,观察子宫内膜厚度、子宫间质厚度、子宫腺体数、子宫血管数、子宫内膜上皮细胞面积和子宫内膜间质细胞面积。结果　对照组子宫内膜结构完整,腺上皮和腔上皮细胞完整,腺体和血管数量正常;模型组子宫内膜厚度变薄,腺上皮和腔上皮细胞呈扁平状,腺体稀少,毛细血管数量减少;补肾活血低、中剂量组腺上皮及腔上皮细胞呈矮柱状,腺体减少,毛细血管增多,内膜稍厚;补肾活血高剂量组、补佳乐组大部分腺上皮和腔上皮细胞完整,排列整齐。模型组大鼠子宫内膜厚度、子宫间质厚度小于对照组（P<0.001）;补肾活血低、中、高剂量组及补佳乐组大鼠子宫内膜厚度、子宫间质厚度大于模型组（P<0.05）;补佳乐组大鼠子宫内膜厚度、子宫间质厚度大于补肾活血低、中剂量组（P<0.05）。模型组大鼠子宫腺体数、子宫血管数少于对照组（P<0.001）;补肾活血中、高剂量组及补佳乐组大鼠子宫腺体数、子宫血管数多于模型组（P<0.001）;补佳乐组大鼠子宫腺体数、子宫血管数多于补肾活血低剂量组(P<0.05）。模型组大鼠子宫内膜上皮细胞面积、子宫内膜间质细胞面积小于对照组（P<0.001）;补肾活血中、高剂量组及补佳乐组大鼠子宫内膜上皮细胞面积、子宫内膜间质细胞面积大于模型组（P<0.05）;补佳乐组大鼠子宫内膜上皮细胞面积、子宫内膜间质细胞面积大于补肾活血低剂量组,小于补肾活血高剂量组（P<0.05）。结论　补肾活血方能够增加子宫内膜各层厚度、腺体数、血管数以及上皮细胞、间质细胞面积。     

补肾调冲药对去卵巢小鼠作用的实验研究

本实验表明补肾调冲药可使去卵巢小白鼠子宫，肾上腺的重量和雌二醇（Ｅ２）的含量增加。阴道上皮细胞角化率提高，子宫内膜呈增生期，晚期或分泌期的表现，颗粒层细胞呈明显活跃状态。以上实验结果表明补肾调冲药具有类雌激素样作用。     

补肾助孕方对肾虚薄型子宫内膜大鼠组织形态ERa、PR表达影响及容受性的调控作用

目的 观察补肾助孕方对肾虚薄型大鼠子宫内膜、卵巢组织形态影响及ERa、PR表达变化,探讨中药对子宫内膜容受性的调控作用.方法 雌性SD大鼠30只随机分为正常组、模型组、中药组,每组10只.后两组经羟基脲灌胃建立肾虚薄型子宫内膜大鼠模型.模型成功后,中药组给予补肾助孕方0.3 mg/(kg·d)灌胃,对照组和模型组给予等...     

薄型子宫内膜模型的动物选择及其造模方法改进

薄型子宫内膜是影响体外受精-胚胎移植的一个重要因素,而目前对于薄型子宫内膜的治疗缺乏有效的治疗手段。探讨稳定有效的薄型子宫内膜的动物模型,对于薄型子宫内膜疾病发病机制探索及治疗的研究提供实验基础。     

中西医结合治疗薄型子宫内膜研究进展

在育龄期妇女中,薄型子宫内膜已逐渐成为月经不调和不孕症的重要影响因素之一,目前现代医学针对年龄、宫腔操作、药物应用和原发性因素等发病因素,治疗薄型子宫内膜的手段大多以药物治疗和手术治疗为主,其具体通过改善内膜血液循环,增加子宫内膜容受性相关细胞因子的表达,刺激细胞的血管生成和有丝分裂以及增加内膜组织含氧量等来增加内膜厚度,但不良反应较大,疗效欠佳。中医学基于肾虚为此病之本源,辨证施治,以补肾活血通络、补肾养血填精、滋肾疏肝和补肾健脾为治疗原则,肾精充盛,肝血充足,脾气健运,则五脏调和,任通冲盛,促使气血下注胞宫,配合温针灸、隔药灸等疗法刺激子宫内膜局部血液灌流量,安全有效,独具特色,在临床实践中前景广阔。     

子宫内膜腺癌组织中miRNA的差异表达

目的 探讨miRNA在子宫内膜腺癌及其癌旁组织中的表达差异.方法 收集子宫内膜腺癌患者癌灶和癌旁内膜组织,分别采用Trizol一步法提取总RNA,利用含有miRNA探针的芯片检测系统进行miRNA表达谱差异分析.结果 子宫内膜腺癌与癌旁组织中111个miRNA表达存在显著差异,其中腺癌组织中68个miRNA表达上调,43个表达下调.结论 miRNA可能参与子宫内膜腺癌的发生发展过程,这为进一步揭示子宫内膜腺癌发生的分子机制提供了依据.