旋毛虫幼虫的体外收集法

旋毛虫的成熟幼虫经口感染并在小肠粘膜发育至成虫后产育100μm左右新生幼虫(NBL)。由于NBL幼虫经循环系统进行全身移行,导致旋毛虫感染时出现的各种症状。     

人体旋毛虫病的免疫诊断及旋毛虫特异性抗原识别

用检查肌肉组织中幼虫的方法诊断人体旋毛虫病有敏感性低,活检所致副作用,费时,检查者视觉疲劳等不足,因此,免疫诊断方法尤其是ELISA以其较高的敏感性和重现性被广泛运用。在免疫学检测中常用两种旋毛虫抗原,即由成虫、新生幼虫或感染期幼虫(IL)制备的虫体抗原及排泄分泌(ES)抗原。本研究试图用感染性幼虫的粗制虫体抗原(CLE)作人体旋毛虫病的免疫诊断抗原,检测其敏感性和特异性,并寻找和识别CLE中旋毛虫的特异性抗原组分。     

旋毛虫新生幼虫cDNA文库的免疫筛选

目的　获取具有抗原性的旋毛虫新生幼虫基因。　方法　以旋毛虫感染猪血清为抗体探针,对旋毛虫新生幼虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的阳性克隆进行测序及分析。结果　从45×105旋毛虫新生幼虫cDNA文库重组子中共获得158个阳性克隆。序列分析结果表明,其中有36个新的cDNA序列,已报道的序列有5个,有12个序列无开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒体基因组DNA同源。　结论　获得具有抗原性的旋毛虫抗原编码cDNA分子     

一种大量收集旋毛虫新生幼虫的简便方法

旋毛虫感染后的第2～3周是急性期症状出现的主要阶段。这一时期幼虫的生化、免疫学研究对急性期病人的早期诊断和治疗具有极重要的意义。目前,对旋毛虫的研究集中于成虫和肌肉幼虫阶段,对于引起主要临床症状的新生幼虫(NBL),则因为收集大量纯净NBL困难而研究较少。用传统方法收集NBL易污染且数量有限,我们参照高田伸弘等的方法并略加改进,使大量、高效收集纯净NBL成为可能。一、材料和方法 (一)旋毛虫成虫的收集取雄性大白鼠,每只经口感染旋毛虫肌肉幼虫10 000条。感染后第5d断食,第6d处死。无菌消毒后剖腹取出小肠,纵行剪开。大鼠     

哈尔滨市屠宰场从业人员旋毛虫感染的检测与分析

旋毛虫的宿主选择性极差 ,可感染人及 15 0多种动物 ,引起严重的肉食源性人畜共患寄生虫病 [1 ] 。我国是旋毛虫感染较严重的国家之一 ,到 1996年底 ,已有 15个省 (自治区 )发生旋毛虫病和旋毛虫病的暴发流行 [2 ] 。牡丹江市猪血清旋毛虫抗体阳性率为 10 .4 1% (38/ 36 5 ) [3] 。房其美 [4 ] 对郑州市屠宰场从业人群进行调查 ,其血清旋毛虫抗体阳性率为 9.82 % (2 8/ 2 85 )。为了解哈尔滨市屠宰场从业人员旋毛虫感染情况 ,作者应用 EL ISA法对屠宰场从业人员和其他职业者进行了血清旋毛虫抗体的检测与分析。1　材料和方法1.1　检测对象…     

囊虫病诊断用抗原编码cDNA的分子克隆

目的 :克隆与分析囊虫病诊断用抗原及其编码基因。方法 :采用基因重组技术 ,构建来源于猪囊尾蚴 m RNA的 c DNA文库。以囊虫病患者、囊虫病病猪的血清为探针从 c DNA文库中筛选出目的克隆。结果 :获得人、猪共同抗原 2个 (分子量分别为 2 8k Da和 18k Da) ,人特异性抗原和猪特异性抗原各 1个 (分子量为 34 k Da、 14k Da)。这些抗原的编码克隆分别命名为λc C1、λc C2、λc H1及 λc P1。c C1c DNA含有编码 2 8k Da的人、猪共同抗原的完整基因 ,全长 10 70 bp,起始密码 ( ATG)从自 2 2 bp,终止密码 ( TGA)结于 74 7bp,长为 74 7bp的开放阅读框架编码由 2 4 9个氨基酸组成的多肽 ,其理论推导分子量为 2 7.36k Da。结论 :以 c C1等融合蛋白为诊断用抗原 ,具有高度的特异性和较理想的敏感性。     

旋毛虫新生幼虫抗原的免疫印迹分析

利用免疫印迹法分析了旋毛虫的新生幼虫(NBL)抗原,并与旋毛虫的成虫和肌肉期幼虫抗原加以比较。NBL虫体组分经SDS-PAGE分离出约40条区带,与成虫和肌肉期幼虫的电泳图谱明显不同。免疫印迹表明,用NBL作免疫原可诱导家兔产生具有期特异性的免疫反应,其有抗原性的分子量分别为129、120、89、87、79、72、64、58、43、40、38、34、32和20kDa。但在自然感染过程中,宿主体内未检测到抗NBL的抗体。     

旋毛虫重组抗原的体外表达及其影响因素

旋毛形线虫(Trichinella spiralis)简称旋毛虫,成虫和幼虫分别寄生于同一宿主的小肠和肌肉内。由旋毛虫引起的旋毛虫病(trichinellosis)是一种人兽共患寄生虫病,目前在我国及其他国家仍有爆发流行。由于旋毛虫病的病原学诊断比较困难,免疫诊断则显得尤为重要。但旋毛虫虫体抗原成份复杂,用于免疫诊断时常和其它寄生虫病发生交叉反应而出现假阳性。随着分子生物学技术的发展,基因重组抗原具有可大量制备,特异性好等优点而越来越受到了人们的重视[1-3]。然而,表达载体的种类、目的基因的长度及诱导剂等诸多因素均可影响重组抗原的表达。一、…     

聚合酶链反应技术检测旋毛虫DNA的实验研究

目　的　建立敏感、特异、稳定的聚合酶链反应 (PCR)法 ,以检测旋毛虫病。方法　采用PCR法 ,选择与合成引物并确立最佳扩增条件 ,比较不同的提取DNA方法 ,检测血浆中旋毛虫幼虫。结果　经扩增于 5 0 0bp、6 70bp、12 0 0bp出现特异性片段 ,与原选择的编码基因片段大小相同 ,此特异片段与溶组织内阿米巴、日本血吸虫DNA无交叉反应 ,不同的DNA提取法结果显示 :用裂解煮沸法同样可从仅含 1条旋毛虫幼虫的 2 5 μl正常小鼠血浆中扩增出特异性片段。 结论　PCR法检测旋毛虫敏感高、特异强 ,提示本法可进一步用于人与畜旋毛虫感染的早期诊断与监测     

旋毛虫DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的研究

目的　观察旋毛虫DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法　将旋毛虫肌幼虫编码 31kDa抗原结构基因真核表达质粒pcDNA3-TspE1分别用肌肉注射和基因枪免疫BALB/c小鼠 ,免疫血清用旋毛虫肌幼虫冰冻切片及石蜡切片抗原进行IFAT检测 ,并用旋毛虫肌幼虫可溶性抗原进行Westernblot分析。结果　IFAT表明 pcDNA3-TspE1接种BALB/c小鼠后产生的免疫血清与旋毛虫肌幼虫可产生阳性反应 ,在肌幼虫冰冻及石蜡切片上均显示黄绿色荧光。Westernblot检测结果显示 ,pcDNA3-TspE1接种小鼠后产生的免疫血清只能识别旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中的 31kDa抗原组分 ,而 pcDNA3质粒接种小鼠后的血清不能与旋毛虫肌幼虫可溶性抗原发生免疫反应。结论　旋毛虫DNA疫苗 pcDNA3-TspE1能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。