非诺贝特对氧化型低密度脂蛋白诱导的脂肪细胞肿瘤坏死因子-α分泌的影响

目的 探讨调脂药物非诺贝特对兔脂肪细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响及可能机制。方法 取新西兰兔皮下脂肪组织行脂肪细胞原代培养，分别给予不同浓度的氧化型低密度脂蛋白（OxLDL）及非诺贝特刺激。采用酶联免疫吸附法检测脂肪细胞培养液中TNF-α蛋白水平，半定量逆转录多聚酶链式反应测定脂肪细胞TNF-α和PPAR仅mRNA的表达。结果 较低剂量的OxLDL刺激脂肪细胞TNF-α分泌，呈剂量依赖性；不同浓度的非诺贝特呈剂量依赖性降低OxLDL诱导的脂肪细胞TNF-α分泌及mRANA表达，而相应的PPAR仅mRANA的表达则无显著变化。结论 非诺贝特可显著抑制OxLDL诱导的免脂肪细胞TNF-α分泌，这一作用可能有利于胰岛素抵抗的改善。     

核因子-κB对TNF-α诱导的脂肪细胞葡萄糖转运 蛋白4表达的影响

 【目的】 观察TNF-α对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4) mRNA与蛋白表达的作用,并探讨核因子-κB(NF-κB)对上述作用的影响。【方法】 成熟的3T3-L1脂肪细胞分成3组:A组正常对照组,B组肿瘤坏死因子α(TNF-α)组,C组吡咯烷二硫基甲酸酯(NF-κB活性抑制剂) + TNF-α组。各组干预48 h后检测phospho- NF-κB p65(Ser536)的蛋白水平。GLUT4 mRNA及蛋白水平。蛋白检测采用Western法,mRNA检测采用RT-PCR法。【结果】 B组phospho- NF-κB p65蛋白水平(71.1 ± 5.9)高于A组(41.3 ± 1.7, P < 0.001)和C组(25.4 ± 4.7, P < 0.001)。B组GLUT4的mRNA水平(0.86 ± 0.14, P < 0.001)与蛋白水平(31.6 ± 7.2, P < 0.001)低于A组(2.01 ± 0.65; 60.7 ± 8.4),C组mRNA水平(0.46 ± 0.12)与B组比较有下降趋势但无统计学意义(P = 0.100),C组蛋白水平(9.5 ± 3.0)低于B组(P = 0.001)。【结论】 TNF-α下调3T3-L1脂肪细胞的GLUT4表达,抑制NF-κB活性后GLUT4表达进一步下调。这提示了TNF-α可能不是通过激活NF-κB而使GLUT4的表达下调。     

褪黑素对ox-LDL所致巨噬细胞TNF-α释放及核因子κB活性的影响

目的探讨褪黑素对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）所致的巨噬细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）释放及核因子κB活性的影响。方法以ox-LDL、ox-LDL加不同浓度的褪黑素处理RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用酶联免疫吸附测定细胞上清液中TNF-α的浓度,免疫印迹法检测p65/核因子κB的核移位,凝胶电泳迁移率分析核因子κB与DNA的结合活性。结果褪黑素能够显著减少ox-LDL所致的巨噬细胞TNF-α的释放,且p65/核因子κB的核移位减少,核因子κB与DNA的结合活性降低。结论褪黑素减少ox-LDL所致的巨噬细胞TNF-α的释放与其调节核因子κB的活性有关。     

核因子-κB对TNF-α诱导的脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

【目的】观察TNF-α对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）mRNA与蛋白表达的作用,并探讨核因子-κB（NF-κB）对上述作用的影响。【方法】成熟的3T3-L1脂肪细胞分成3组：A组正常对照组,B组肿瘤坏死因子α（TNF-α）组,C组吡咯烷二硫基甲酸酯（NF-κB活性抑制剂）＋TNF-α组。各组干预48h后检测phospho-NF-κBp65（Ser536）的蛋白水平、GLUT4mRNA及蛋白水平。蛋白检测采用Western法,mRNA检测采用RT-PCR法。【结果】B组phospho-NF-κBp65蛋白水平（71.1&#177;5.9）高于A组（41.3&#177;1.7,P〈0.001）和C组（25.4&#177;4.7,P〈0.001）。B组GLUT4的mRNA水平（0.86&#177;0.14,P〈0.001）与蛋白水平（31.6&#177;7.2,P〈0.001）低于A组（2.01&#177;0.65;60.7&#177;8.4）,C组mRNA水平（0.46&#177;0.12）与B组比较有下降趋势但无统计学意义（P=0.100）,C组蛋白水平（9.5&#177;3.0）低于B组（P=0.001）。【结论】TNF-α下调3T3-L1脂肪细胞的GLUT4表达,抑制NF-κB活性后GLUT4表达进一步下调。这提示了TNF-α可能不是通过激活NF-κB而使GLUT4的表达下调。     

氧化型低密度脂蛋白对平滑肌细胞核因子-κB激活的影响

目的:观察氧化型低密度脂蛋白对人平滑肌细胞核因子κB激活的影响,探讨氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化机制。方法:以体外培养的人脐动脉平滑肌细胞为对象,采用免疫细胞化学法测定氧化型低密度脂蛋白与核因子κB亚单位p65核移位的时间效应与浓度效应关系。结果:在氧化型低密度脂蛋白刺激下,平滑肌细胞中0.5h即出现核因子κB核移位,2h达高峰,4h仍持续可见。不同浓度(12.5,25,50及100mg/L)氧化型低密度脂蛋白均可诱导平滑肌细胞中核因子κB核移位,在一定剂量范围内,氧化型低密度脂蛋白的浓度越大,核因子κB核移位越明显,尤以50mg/L的氧化型低密度脂蛋白作用最明显。结论:氧化型低密度脂蛋白可刺激平滑肌细胞中核因子κB的激活,进一步提示氧化型低密度脂蛋白/核因子κB信号途径在促进动脉粥样硬化发病机制中起重要作用。     

罗格列酮对TNF-α刺激人脐静脉内皮细胞CF6表达的影响

目的 研究噻唑烷二酮类药物罗格列酮(ROS)对肿瘤坏死因子仅(TNF-α)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)核因子-κB(NF-κB)激活与线粒体偶联因子6(CF6)表达的影响.方法 体外培养的第3～5代HUVEC用于实验.采用RIA检测培养基中CF6的含量,用免疫组织化学分析检测细胞NF-κB亚单位p65的表达程度.结果 TNF-α能有效激活NF-κB并诱导HUVEC表达CF6增加;ROS干预能抑制NF-κB激活并减轻TNF-α诱导的HUVEC之CF6表达.结论 TNF-α通过激活NF-KB使CF6表达增加;ROS可抑制TNF-α对NF-κB激活,进而抑制NF-κB对CF6的表达上调,这可能是噻唑烷二酮类药物抗高血压的机制之一.     

罗布麻提取物对动脉粥样硬化早期TNF-α表达的影响

目的：通过观察罗布麻提取物对动脉粥样硬化早期炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）-α表达的影响,研究罗布麻抗动脉粥样硬化的作用。方法人 U937单核细胞经佛波脂诱导分化为巨噬细胞,与100 mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）作用形成泡沫细胞,建立动脉粥样硬化早期模型（ox-LDL组）,加入不同浓度（0．2、0．4、0．8 mg/L）的罗布麻共同孵育48 h（AV1、AV2、AV3组）,ELISA和 RT-PCR方法分别检测细胞上清液中 TNF-α表达水平。结果 ox-LDL组较对照组 TNF-α的表达明显增加,AV1、AV2、AV3组较ox-LDL组 TNF-α明显减少（P＜0．05）。罗布麻浓度的增加与 TNF-α表达水平呈负相关（P＜0．05）。结论 TNF-α是动脉粥样硬化早期重要的炎症因子,罗布麻通过抑制炎症因子发挥抗动脉粥样硬化作用。     

高密度脂蛋白对氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的影响

目的　探讨高密度脂蛋白 (HDL)对氧化型低密度脂蛋白 (ox L DL)诱导体外培养的人血管内皮细胞凋亡的影响及相关机制。方法　 ox L DL 单独或与 HDL 共同处理体外培养的人脐静脉内皮细胞株 (ECV- 30 4 )后 ,通过流式细胞仪、DNA电泳检测细胞凋亡并测定 Caspase- 3酶活性。结果　 10 0 μg/ml和 2 0 0 μg/m l浓度 ox L DL 作用内皮细胞后 ,其细胞凋亡率分别为 2 8.4 0± 5 .30 %、34.72± 4 .6 4 % ,DNA电泳呈典型的梯状图谱 ,Caspase- 3酶活性达到 16 6 .0 1± 16 .4 4、2 6 3.74± 4 6 .6 2 pmd/(m in· mg protein) ,与空白组比较均有显著性差异 (P<0 .0 1)。HDL(2 0 0 μg/ml)与 ox L DL(10 0 μg/ml、2 0 0 μg/m l)共同作用后 ,凋亡率降至 8.0 6± 2 .35 %及 9.4 0± 2 .5 8% ,未出现梯状图谱 ,Caspase- 3酶活性减低 (分别为 6 7.73± 14 .83、111.2 6± 2 7.13min· m g protein) ,与对应的 ox L DL 组比较均差异显著 (P<0 .0 1)。结论　 HDL 能减少 ox L DL 所致体外培养的内皮细胞凋亡 ,这一作用可能与降低Caspase- 3酶活性有关     

趋化因子FKN对外周血单核细胞NF-κB和TNF-α表达的影响及蛋白激酶C在其中的作用

[目的]对单核细胞合成核因子-κB(nuclear factor-KappaB,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响,探讨趋化因子(fractalkine,FKN)-CX3CR1可能存在的信号转导机制及在动脉粥样硬化形成中的作用,并探讨了蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的介导作用.[方法]①Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞.②每份提取的单核细胞分为空白对照组、FKN、R031-8220(PKC特异性阻断剂)组.③免疫细胞化学法检测各组单核细胞中NF-κB的表达.④酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平.[结果]FKN、R031-8220与空白对照组的NF-κB的阳性细胞率分别为(34.80±2.69)%.(20.10±2.78)%与(3.80±0.95)%(三组间差异P＜0.05);TNF-α含量分别为(1506.1±69.3)pg/mL,(820.2±22.8)pg/mL,(80.5±5.5)pg/mL(三组间差异P＜0.05).[结论]FKN-CX3CR1能增加NF-κB、TNF-α单核细胞的表达:而FKN与CX3CR1结合以后,可能通过激活细胞内蛋白激酶C,进而诱导单核细胞合成NF-κB、TN-α.     

高密度脂蛋白的氧化修饰的特征及对低密度脂蛋白氧化的影响

研究高密度脂蛋白（ＨＤＬ）氧化修饰后对其结构及对低密度脂蛋白（ＬＤＬ）氧化的影响。在体外用Ｃｕ＾２＋氧化人血浆ＨＤＬ，观察其蛋白和脂质部分的变化，并测定在ＨＤＬ条件下ＬＤＬ氧化的何苦充代巴比妥酸值（ＴＢＡＲＳ）。结果：氧化ＨＤＬ（ＯＸ－ＨＤＬＯ）的ＴＢＡＲＳ值升高，色氨酸残苦（Ｔｒｐ）的特征荧光吸收强度降低且λｍａｘ（发射）从３３５ｎｍ升至３４１ｎｍ，紫外吸收增高，琼脂糖凝胶是泳迁移增快，ＬＤＬ氧     

NF-κB活化和TNF-α表达在大鼠心肌梗死后心力衰竭中的作用

目的　探讨心肌梗死后 (MI)大鼠心肌核因子 κB (NF κB)活化、肿瘤坏死因子 α(TNF α)表达在心室重塑和心力衰竭 (心衰 )进展中的作用。方法　结扎大鼠冠状动脉前降支复制MI模型 ,同时设假手术组 (SH组 ) ,4、8、12周后检测血流动力学指标 ,称取心脏组织湿重。对左室非梗死区心肌组织采用Western blot法检测TNF α蛋白表达 ,电泳动度迁徙率法 (EMSA)检测NF κB活性。结果　各时相MI组与同期SH组相比 :①MI组左室舒张末压 (LVEDP)显著增加 (P <0 0 5 ) ,平均动脉压 (MAP)、左心室内压最大上升和下降速率 (±dp dtmax)均显著降低 (P <0 0 1) ;另外 ,除MI1 2w 组左室相对重量 (LVRW )外 ,其余组LVRW、右室相对重量 (RVRW )均明显增加 (P <0 .0 5 )。②MI组心肌TNF α蛋白表达均显著增加 ,呈时间依赖性 ,与心功能呈负相关 ;③MI组心肌NF κB活性均明显增加。结论　MI后衰竭心肌NF κB持续激活和炎性细胞因子TNF α表达增加可能是心室重塑、心衰进行性发展的重要机制之一。     

乙酰半胱氨酸对急性酒精性肝损伤大鼠NF-κB和TNF-α的影响

目的探讨乙酰半胱氨酸对酒精所致大鼠急性肝损伤的保护作用及机制。方法采用酒精灌胃法制作急性酒精性肝损伤大鼠模型。50只雄性Wistar大鼠随机分为5组（n=10）：正常对照组、急性酒精肝损伤模型组、乙酰半胱氨酸低、中、高剂量（150,300,600mg／kg）组。测定并比较各组大鼠肝脏中核转录因子-κB（NF-κB）的表达及血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。结果急性酒精性肝损伤大鼠模型制作成功。与模型组比较,治疗结束后,乙酰半胱氨酸各剂量组急性酒精性肝损伤大鼠肝组织中NF-κB的表达均减少（P〈0．01）,血清TNF-α的含量降低（P〈0．01）,炎性介质的释放不同程度地减少。结论乙酰半胱氨酸可以减轻肝脏的炎性损伤,对大鼠急性酒精性肝损伤起到保护作用。     

高热量、高脂肪饮食对幼龄大鼠血清LDL、ox-LDL及脂肪组织TNF-α的影响

目的 研究高热量、高脂肪饮食对幼龄大鼠血清低密度脂蛋白(LDL)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)及脂肪组织中肿瘤坏死因子—α(TNF—α)的影响．探讨高能、高脂饮食对幼龄大鼠脂代谢的影响。方法 采用高热量、高脂肪饲料饲养21日龄SD大鼠8周．检测大鼠血清LDL、ox-LDL及脂肪组织中TNF—α的浓度。结果 实验组ox-LDL、LDL、TNF-α较正常对照组显著升高．ox-LDL水平与LDL、TNF-α水平呈一定程度的正相关。结论 高热量、高脂肪饮食造成了幼龄大鼠ox-LDL水平升高．TNF-α的表达量增高．脂质代谢紊乱与免疫炎性反应协同作用可能导致幼龄大鼠处于亚临床状态的动脉粥样硬化,增加了成年后患动脉粥样硬化的危险性。     

灯盏乙素对OX-LDL损伤的RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达的影响

目的 研究灯盏乙素(scutellarin)对OX-LDL诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7脂质吞噬能力及对PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达调控的影响.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,复制OX-LDL诱导损伤模型,通过油红O染色检测脂质吞噬及试剂盒检测细胞损伤模型胆固醇酯的含量.Western blot和RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达变化.结果(1)油红O结果显示:与正常对照组比较,模型组细胞红染程度明显高于正常对照组;与模型组比较,辛伐他汀组、灯盏乙素50和100μmol/L组细胞红染程度均低于模型组;(2)胆固醇酯含量检测显示:与正常对照组比较,各时间点模型组细胞CE/TC值均明显升高;与模型组比较,各时间点用药组细胞CE/TC值均降低.(3)WB和RT-PCR结果显示:与正常对照组比较,模型组PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达升高;与模型组比较,辛伐他汀组(simvastatin)PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达降低,且灯盏乙素组呈浓度依赖性下调PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达.结论(1)灯盏乙素能明显抑制OX-LDL诱导损伤的RAW264.7细胞脂质吞噬能力.(2)灯盏乙素能够明显下调OX-LDL诱导损伤的RAW264.7中PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达水平.     

灯盏乙素对OX-LDL损伤的RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达的影响

目的 研究灯盏乙素(scutellarin)对OX-LDL诱导损伤的巨噬细胞RAW264.7脂质吞噬能力及对PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达调控的影响.方法 体外培养小鼠单核巨噬细胞RAW264.7,复制OX-LDL诱导损伤模型,通过油红O染色检测脂质吞噬及试剂盒检测细胞损伤模型胆固醇酯的含量.Western blot和RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中PKC和TNF-α表达变化.结果(1)油红O结果显示:与正常对照组比较,模型组细胞红染程度明显高于正常对照组;与模型组比较,辛伐他汀组、灯盏乙素50和100μmol/L组细胞红染程度均低于模型组;(2)胆固醇酯含量检测显示:与正常对照组比较,各时间点模型组细胞CE/TC值均明显升高;与模型组比较,各时间点用药组细胞CE/TC值均降低.(3)WB和RT-PCR结果显示:与正常对照组比较,模型组PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达升高;与模型组比较,辛伐他汀组(simvastatin)PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达降低,且灯盏乙素组呈浓度依赖性下调PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达.结论(1)灯盏乙素能明显抑制OX-LDL诱导损伤的RAW264.7细胞脂质吞噬能力.(2)灯盏乙素能够明显下调OX-LDL诱导损伤的RAW264.7中PKC和TNF-α的蛋白和mRNA表达水平.     

幽门螺杆菌新毒素Tip-α对IL-8、TNF-α、IL-1β表达的影响

目的:研究幽门螺杆菌(H.pylori,HP)毒素肿瘤坏死因子α诱导蛋白(Tip-α)对细胞因子白介素(IL)-8?肿瘤坏死因子(TNF)-α?IL-1β表达的影响及其意义?方法:从HP的26695菌株扩增位于H.pylori0596的Tip-α基因,重组载体转化至大肠杆菌表达并纯化Tip-α蛋白,用Western blot方法进行鉴定?以不同浓度的Tip-α作用于胃上皮细胞GES-1,用ELISA方法检测不同时间点GES-1细胞中IL-8?TNF-α?IL-1β表达变化?以四氢吡咯烷 (PDTC,NF-κB特异性的抑制剂)阻断NF-κB信号通路后,检测Tip-α作用GES-1后IL-8?TNF-α?IL-1β的表达变化?结果:用Western blot检测纯化蛋白,抗Tip-α抗体可与纯化蛋白特异性结合?Tip-α刺激细胞后细胞因子IL-8?TNF-α?IL-1β的表达水平较刺激前明显升高,刺激前后差别具有统计学意义(P < 0.05)?PDTC作用后再给予Tip-α刺激,细胞中IL-8?TNF-α?IL-1β的表达水平与无PDTC作用组相比明显下降(P < 0.05)?结论:Tip-α可使细胞因子IL-8?TNF-α?IL-1β表达明显升高,在HP致炎中起重要作用,这种作用可能通过NF-κB途径?     

α干扰素对TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及NF-κB表达的研究

目的:探讨应用α干扰素与宫颈癌细胞核因子κB(NF-κB)表达的关系以及对肿瘤细胞凋亡的影响.方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot分析方法检测NF-κB表达.结果:100 U/ml的α干扰素与10 ng/ml肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合作用24 h后,细胞凋亡率达到92%;与15 ng/ml TNF-α联合作用12 h后,凋亡率上升至92.6%.α干扰素不影响NF-κB的表达,TNF-α可显著增加NF-κB的表达(P＜0.01),α干扰素预先作用后加用TNF-α可以显著抑制NF-κB的表达(P＜0.01).结论:α干扰素能够显著抑制TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞NF-κB的表达,增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用.     

TNF-α对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）的核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）及其饵受体骨保护素（OPG）mRNA表达的影响,了解TNF-α在破骨细胞性骨吸收调节中的作用机制。方法 将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的TNF-α处理24h,通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）来观察人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达强度变化。结果 TNF-α上调人牙周膜成纤维细胞的RANKLmRNA表达,RANKL／OPG比率呈上升趋势。结论TNF-α通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL／OPG的比值可间接地调节破骨细胞分化和活性,从而影响骨代谢。     

缺氧条件下大鼠单核细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β表达变化规律的研究

目的研究缺氧培养的大鼠外周血单核细胞核转录因子κB(NF-κB)结合活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)表达的变化规律,探讨缺氧与全身炎症反应综合征的关系,为进一步研究老年多器官功能障碍综合征的肺启动机制奠定基础.方法采用明胶法分离大鼠外周血单核细胞,于低氧条件下(3%O2, 5%CO2, 92%N2)培养0、1、3、6、9、12、24 h后,收集细胞及培养液上清,分别采用电泳迁移分析法(EMSA)、逆转录PCR(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其NF-κB活性及TNF-α、IL-1β表达量.结果缺氧1～12 h,NF-κB结合活性及TNF-α、IL-1β表达量均显著高于正常(P<0.01),其峰值见于缺氧6 h.缺氧24 h,上述指标与正常无显著差异(P＞0.05).NF-κB结合活性与TNF-α、IL-1β mRNA和蛋白表达水平显著相关(P<0.01,P<0.05).结论缺氧可显著增强大鼠外周血单核细胞的NF-κB结合活性,并可诱导其产生大量的促炎症因子TNF-α、IL-1β,这些变化可能与急性呼吸窘迫综合征时血浆中大量促炎症因子持续存在密切相关.