脂联素对高糖环境下人肾小管上皮细胞凋亡及氧化应激水平的影响

目的探讨脂联素对体外高糖环境下培养的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2细胞)凋亡及氧化应激水平的影响。方法将人近曲肾小管上皮细胞分为3组:正常对照组(5.5mmol/L D-葡萄糖)、高糖组(30.0mmol/L D-葡萄糖)、高糖+脂联素组(30.0mmol/L D-葡萄糖+2.5μg/ml脂联素),各组细胞分别培养24、48、72h后,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,实时荧光定量PCR测定细胞血红素加氧酶-1(HO-1)及衔接蛋白p66Shc mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,高糖组细胞凋亡率增高,细胞培养液内SOD活性下降,MDA含量增高,同时诱导细胞HO-1及p66Shc mRNA表达上调,且呈时间依赖性(P<0.05)。与高糖组相比,高糖+脂联素组细胞凋亡受到抑制,细胞培养液内SOD活性增高,MDA含量降低,细胞HO-1 mRNA表达进一步增强,而p66Shc mRNA表达降低,呈时间依赖性(P<0.05)。结论随时间延长,高糖环境可引起HK-2细胞过度凋亡和高水平氧化应激;脂联素可通过延缓细胞凋亡和抑制氧化应激来发挥对肾脏的保护作用。     

大鼠急性肾功能衰竭时肾小管上皮细胞凋亡及其意义

目的探讨肾小管上皮细胞凋亡在急性肾功能衰竭（ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ,ＡＲＦ）中的意义。方法以体积分数为５０％的甘油分别按５ｍｌ／ｋｇ和１０ｍｌ／ｋｇ的剂量注射于Ｗｉｓｔａｒ大鼠后肢肌肉,造成不同程度的ＡＲＦ,在注射后１,３,６,１２,２４,４８,９６ｈ测定肾功能,并取肾脏分别以原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）、流式细胞仪（ＦＣＭ）及瑞氏染色等检测肾小管上皮细胞的凋亡。结果甘油注射后有肌     

Apocynin对缺氧复氧后肾小管上皮细胞凋亡的干预研究

 目的 研究缺氧复氧后肾小管上皮细胞凋亡的表达及Apocynin对其影响.方法 选用人肾小管上皮细胞(HK2)建立缺氧复氧损伤模型,设正常对照组、单纯缺氧复氧组、不同浓度(0.05、0.25、0.5 mM)Apocynin干预组.流式细胞术检测细胞内氧化应激水平,检测细胞凋亡.结果 缺氧复氧后HK2细胞内氧化应激水平提高,HK2细胞凋亡和死亡细胞数量增多,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高,凋亡细胞和死亡细胞数量逐渐增多;Apocynin呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平,同时呈剂量关系减少凋亡细胞和坏死细胞的数量.结论 缺氧复氧诱导细胞内氧化应激的产生,诱导HK2细胞凋亡和死亡;Apocynin可以通过抑制细胞内氧化应激,减少细胞和坏死细胞的数量.     

激活素A刺激肾小管上皮细胞转分化的研究

目的研究激活素A对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化的影响。方法取人肾小管上皮细胞株进行体外培养,分为ACT—A组（含不同浓度激活素A）、FS组（含不同浓度卯泡抑素）、ACT—A＋Fs组（含30ng／mlACT＋不同浓度卵泡抑素）和对照组（含无血清培养基及0ng／mlACT—A和0ng／mlFS）,应用免疫组化法检测培养细胞转化生长因子β蛋白（TGF—β）的表达,以观察肾小管上皮细胞转分化的情况。结果与对照组和卵泡抑素组相比,激活素组。肾小管—巳皮细胞表达的TGF-β蛋白显著增多（P〈0．05）。结论激活素A能促进肾小管上皮细胞增殖、转分化,激活素A可能在肾小管问质纤维化中起重要作用。     

激活素A刺激肾小管上皮细胞转分化的研究

目的研究激活素A对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化的影响。方法取人肾小管上皮细胞株进行体外培养,分别向培养液中加入激活素A或激活素A＋卵泡抑素,应用免疫组化法检测培养细胞转化生长因子β蛋白（TGF-β）的表达,以观察肾小管上皮细胞转分化的情况。结果与对照组和卵泡抑素组相比,激活素组肾小管上皮细胞表达的TGF—β蛋白显著增多。结论激活素A能促进肾小管上皮细胞增殖、转分化,提示激活素A可能在肾小管间质纤维化中起重要作用。     

脂联素对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞凋亡的干预作用

目的 探讨脂联素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的干预作用及其机制.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,采用α-肌动蛋白免疫荧光法进行细胞鉴定.将心肌细胞分为3组:对照组、AngⅡ组、AngⅡ+脂联素组,分别采用流式细胞术检测心肌细胞的凋亡状态及细胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达变化.结果 1μmol/L AngⅡ可明显诱导乳鼠心肌细胞凋亡,凋亡率达26.0%,伴有Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达减少以及ROS水平增高(P<0.05);加入30mg/L的脂联素后可明显抑制细胞凋亡的发生,凋亡率降至8.0%左右,同时伴有Bax表达减少,Bcl-2的表达增加以及ROS水平的降低(P<0.05).结论 脂联素可减轻AngⅡ导致的心肌细胞凋亡,这一作用可能是通过增加心肌细胞Bax和ROS的表达,减少Bcl-2的表达来实现的.     

脂联素对钙化大鼠血管组织的影响

 目的 观察脂联素及其受体在钙化大鼠血管组织中的变化,探讨脂联素(adiponectin, APN)对钙化组织的作用。方法 大鼠随机分为正常对照组、钙化组和脂联素组。制备大鼠血管钙化模型。用ELISA法测定血浆和血管组织中脂联素的含量,用real-time PCR方法检测组织中脂联素与其受体adipo R1的mRNA水平,用Western blot方法检测组织中受体adipo R1蛋白含量,测定血管中钙含量及碱性磷酸酶活性。结果 与对照组相比,钙化大鼠血浆和血管组织中脂联素的含量明显降低,分别降低了47.1% 和 57.1%;钙化组大鼠血管组织中APN 和adipo R1 mRNA 水平较对照组有显著降低,分别降低了65.0 %和72.0 %;钙化大鼠的血管组织中adipo R1蛋白降低了77.2%(均P<0.01)。给予脂联素的大鼠血管组织中钙含量和碱性磷酸酶活性分别降低68.5%和34.8% (P<0.01)。结论 钙化的血管组织中APN与其受体adipoR1系统是明显下调,APN可明显抑制钙化大鼠血管组织中钙含量和碱性磷酸酶的活性,提示APN可抑制维生素D₃和尼古丁引起的血管钙化。     

骨化三醇对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的骨化三醇在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾小管上皮细胞（NRK52E）表型转化中的作用。方法体外传代培养NRK52E后按以下分组加入不同干预因素,骨化三醇终浓度为10-6mmol/L,AngⅡ终浓度为10-6mmol/L,①对照组：NRK52E培养液中不加入干预因素;②AngⅡ组：NRK52E培养液中加入AngⅡ;③骨化三醇组：NRK52E培养液中加入骨化三醇;④AngⅡ＋骨化三醇组：NRK52E培养液中加入AngⅡ和骨化三醇。经AngⅡ和骨化三醇干预12、24、48h后,应用细胞免疫化学染色法检测E-钙粘蛋白（E-cadherin）和α-肌动蛋白（α-SMA）的表达,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤维粘连蛋白（FN）的表达。结果①与对照组比较,AngⅡ作用48h后,E-cadherin的表达减弱（P〈0.05）,α-SMA的表达显著增强（P〈0.05）,同时加入AngⅡ和骨化三醇后,与AngⅡ组比较,E-cadherin的表达增强（P〈0.05）,α-SMA的表达减弱（P〈0.05）;②AngⅡ作用48h后,细胞上清液细胞外基质成分FN、ColⅠ含量在AngⅡ组较对照组明显升高（P〈0.05）,同时加入骨化三醇和AngⅡ后,与AngⅡ组比较,FN、ColⅠ分泌有明显减少（P〈0.05）。结论①骨化三醇能抑制AngⅡ诱导的NRK52E细胞的表型的转化;②骨化三醇能减少血管紧张素Ⅱ诱导的NRK52E细胞外基质FN、ColⅠ的分泌。     

不同运动形式对脂联素影响的研究进展

脂联素(Adiponectin,AdipoQ)是一种脂肪细胞分泌的内源性生物活性多肽,作为一种胰岛素增敏激素,能改善小鼠的胰岛素抵抗状态,同时对抗动脉粥样硬化症。人体研究也发现,AdipoQ水平能预示2型糖尿病和冠心病的发展,并在临床试验中表现出抗糖尿病、抗动脉粥样硬化及炎症改变的潜力。运动作为影响机体胰岛素敏感性的有效手段,近年来,有大量研究对其引起的血浆AdipoQ及其受体变化情况进行研究,但结果却大相径庭。本文对目前已有的经典研究及近年针对不同运动形式对AdipoQ影响的研究结果进行分析,同时归纳总结其中存在差异的可能原因,为揭示AdipoQ在运动改善机体组织细胞胰岛素信号活性中的作用机制提供思路和方向,为临床合理设计个性化运动干预方案提供可靠依据。     

脂联素与动脉粥样硬化

脂联素为脂肪组织分泌的一种细胞因子,实验证实其具有改善胰岛素抵抗、抗动脉粥样硬化、抗炎等作用.脂联素与动脉粥样硬化具有明显相关性,低脂联素血症与初始的动脉粥样硬化相关,是动脉粥样硬化严重程度的重要标志.动脉粥样硬化是一种炎症过程,而脂联素在多个环节上均有抗炎、抗动脉粥样硬化的作用:脂联素通过抑制动脉粥样硬化因子的产生,抑制血管内皮细胞炎症及黏附,抑制泡沫细胞的形成,抑制血管平滑肌的增殖等多种途径发挥抗动脉粥样硬化的作用.血浆脂联素水平有可能成为预测、诊断冠心病的一个指标,增加脂联素的血浆浓度可能为心血管疾病提供一个全新的治疗手段.     

胡黄连提取物对缺氧复氧后肾小管上皮细胞氧化损伤的作用

目的研究胡黄连提取物对缺氧复氧后肾小管上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法采用肾小管上皮细胞建立缺氧复氧损伤模型（分别缺氧0.5、1、2 h）,取缺氧2 h组分别用不同浓度胡黄连提取物（10、100、1000μg/ml）进行预处理,采用流式细胞术检测不同组细胞凋亡及细胞内氧化应激水平。结果正常情况下肾小管上皮细胞内氧化应激水平非常低,可见极少量凋亡细胞和死亡细胞,与正常对照组相比,各缺氧复氧组细胞内氧化应激水平提高（P〈0.05）,凋亡细胞和死亡细胞数量明显增多（P〈0.05）,且随缺氧时间的延长,细胞内氧化应激水平逐渐升高（P〈0.05）,凋亡细胞和死亡细胞数量逐渐增多（P〈0.05）。与单纯缺氧复氧组相比,不同浓度胡黄连提取物呈剂量关系抑制细胞内氧化应激水平（P〈0.05）,同时呈剂量关系减少凋亡细胞和坏死细胞的数量（P〈0.05）。结论胡黄连提取物可以通过抑制细胞内氧化应激减少肾小管上皮细胞缺氧复氧后细胞凋亡和坏死。     

Cyr61基因过表达对人肾小管上皮细胞表达细胞外基质成分的影响

目的观察Cyr61基因过表达对人肾小管上皮细胞(HKC)表达细胞外基质成分的影响,探讨Cyr61在常染色体显性多囊肾病(ADPKD)发病中的作用及机制。方法RT PCR扩增Cyr61全长基因,构建pcDNA3.1+Cyr61重组质粒,转染HKC细胞。经RT PCR、Westernblot鉴定转染细胞系Cyr61基因的整合及表达。荧光定量PCR检测空白HKC、空质粒pcDNA3.1转染的HKC、Cyr61转染的HKC和囊肿衬里上皮细胞内Cyr61、I型和Ⅳ型胶原、层黏连蛋白的基因表达。结果构建了pcDNA3.1+Cyr61重组质粒并转染HKC细胞。Cyr61基因转染组和囊肿衬里上皮细胞内Cyr61蛋白表达显著高于空白HKC组,Cyr61基因转染组的I型和Ⅳ型胶原、层黏连蛋白mRNA表达都明显增高,且Ⅳ型胶原的基因表达增高程度远大于Ⅰ型(P<0.01)。但Cyr61基因转染组上述细胞外基质成分的表达仍显著低于囊肿衬里上皮细胞(P<0.01)。结论过表达Cyr61的HKC表达细胞外基质成分明显增强,尤以Ⅳ型胶原为著。过表达的Cyr61可能通过调节细胞外基质成分,促进细胞外基质重构,参与ADPKD囊肿的形成和发展。     

0.075 Gy X射线诱导EL-4细胞凋亡及细胞周期的适应性反应

观察低剂量Ｘ射线照射能否诱导ＥＬ－４细胞凋亡及细胞周期的适应性反应。方法采用流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋亡及细胞周期。结果单纯２ＧｙＸ射线照射后１２小时ＥＬ－４细胞凋亡显著增多，并伴有明显Ｇ１阻滞；０．０７５Ｇｙ预照射可明显减轻间隔６小时后２Ｇｙ攻击剂量照射所致的细胞凋亡和Ｇ１阻滞。结论０．０７５ＧｙＸ射线离体照射可诱导ＥＬ－４细胞凋亡及Ｇ１阻滞的适应性反应     

低剂量X射线照射选择性诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应

目的 研究低剂量X射线照射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的适应性反应。方法 昆明雄性小鼠接受诱导剂量(D1，75mGy)和攻击剂量(D2，1．0，2．0和3．0Gy)全身照射。通过不连续泛影葡胺密度梯度离心法分离小鼠睾丸组织不同种类生精细胞，流式细胞术(FCM)检测各类生精细胞凋亡。结果 当D2照射前6h给予D1预照射时明显减轻D2对睾丸精原细胞和精母细胞凋亡的损伤作用，而对精子细胞和精子影响不明显。当D1和D2间隔3，6，12和24h，发现D2剂量较小(1．0和2．0Gy)时，精原细胞和精母细胞的凋亡百分率减少出现较早、较明显，而且持续时间较长；反之，D2剂量较大(3．0Gy)时，精原细胞和精母细胞凋亡百分率变化不明显。结论 低剂量X射线照射可以选择性诱导小鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡的适应性反应，并与D1和D2间隔时间及D2剂量有关。     

葛根素对火药烟雾诱导支气管上皮细胞凋亡的防护作用

目的 探讨葛根素对火药烟雾诱导的支气管上皮细胞(BEAS-2B)凋亡的保护作用及其机制.方法 体外培养BEAS-2B细胞,随机分为对照组(不加任何干预)、烟熏组(火药烟雾4g,作用10min)、烟熏+葛根素组(12.5、25、50、100μg/ml).细胞接种12h后加入葛根素,继续培养至24h后烟雾作用10min,继续培养2h后进行检测.采用CCK-8试剂盒检测细胞活力,Hoechst染色观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测Annexin V-PI双染细胞及caspase-3阳性率.结果 与对照组相比,烟熏组BEAS-2B细胞活力明显下降(P＜0.01),不同浓度葛根素能够不同程度地对抗烟熏的作用,其最佳保护浓度为25μg/ml.与烟熏组相比,烟熏+葛根素组Hoechst染色细胞凋亡率、Annexin V-PI双染细胞凋亡率及caspase-3阳性率均明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 火药烟雾可致体外BEAS-2B细胞凋亡,而葛根素对火药烟雾诱导的BEAS-2B气管上皮细胞凋亡具有一定防护作用.     

彩色多普勒超声对胎鼠小肠上皮细胞凋亡影响的实验研究

目的 :探讨彩色多普勒超声对胎鼠小肠粘膜上皮细胞是否构成影响。方法 :2 4只孕 14天SD大鼠按彩超辐照时间不同随机等分为四组 :Ⅰ组 (对照组 ) ,Ⅱ组 (照射 10min组 ) ,Ⅲ组 (照射 2 0min组 ) ,Ⅳ组 (照射 30min组 )。仪器采用Accuson公司Sequeoia 5 12型彩色电脑声像仪 ,照射条件 :4V1探头 ,二维频率H3.0MHz ,彩色频率 3.0MHz,Tis=1.8,Micd =1.6。照射后 2 4h取胎鼠小肠标本 ,HE染色光镜观察 ,TUNEL法检测凋亡细胞 ,透射电镜观察超微结构的变化。结果 :各组光镜下观察均未见异常 ,TUNEL法检测结果 ,Ⅰ组及Ⅱ组胎鼠小肠上皮可见散在凋亡细胞 ,Ⅲ组及Ⅳ组凋亡细胞明显增多。Ⅲ组及Ⅳ组荧光强度与Ⅰ组有显著差异 (ⅢvsIP <0 .0 5 ,IVvsIP <0 .0 1) ,荧光强度与照射时间呈正相关 (P <0 0 1) ,(r=0 .5 71)。Ⅳ组标本电镜检查发现核染色质浓缩边集 ,内质网及线粒体肿胀等超微结构变化。结论 :彩色多普勒超声照射孕鼠 2 0min以上可引起胎鼠小肠粘膜上皮细胞凋亡。     

BMSCs对IRI大鼠肾小管病理、ROCK蛋白水平的影响

目的 研究骨髓间充质干细胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)移植对缺血再灌注损伤(Ischemia Reperfusion Injury,IRI)大鼠肾小管病理、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rho Associated Coiled Coil Forming Pro...     

活性氧作用下肾上皮细胞的药物保护及机理

观察了三磷酸腺苷（ＡＴＰ）、过氧化氢酶（ＣＡＴ）及异搏停（ＶＥＲ）对活性氧作用下的肾上皮细胞（ＲＥＣ）的保护效果，以探讨其可能机制。结果显示预先应用ＡＴＰ、ＣＡＴ和ＶＥＲ均使处于活性氧作用下肾上皮细胞培养基中的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性及细胞活力维持或接近正常水准。提示能量危机、氧自由基（ＯＦＲ）毒性和钙超载可能是细胞缺血／再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤病理生理中的重要环节，向细胞供能、清除ＯＦＲ及维持钙稳态是防治肾Ｉ／Ｒ损伤的重要措施。