健脑安对MCAO模型大鼠HPA轴影响的实验研究

脑缺血再灌注的病理改变可引发神经内分泌功能的紊乱，使促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone，CRH)、促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone，ALlH)、糖皮质激素(glucocorticoid，GCs)中的皮质醇(cotisiol，COR)等在再灌注后迅速升高。神经-内分泌-免疫网络的功能失调将进一步加重脑缺血再灌注后的神经     

紫外线照射对大鼠白内障晶状体HSP70表达的影响

白内障是世界首位致盲疾病,流行病学调查和实验研究均显示白内障的发生与紫外线照射关系密切[1],尤其中波紫外线(290~320nm)能够穿过角膜,被晶状体所吸收,是紫外线诱导白内障发生的重要因素[2]。紫外线照射可产生大量的活性氧化簇(Reactive oxygen species,ROS),氧化损伤DNA[3]及晶状体上皮细胞[4],使晶状体产生渗透性膨胀,不溶性蛋白质增加,从而诱导白内障的发生。热休克     

葛根素对急性脑缺血模型大鼠脑细胞损伤后HSP70及Fas蛋白表达的干预作用研究

目的:探讨葛根素对急性脑缺血模型大鼠脑细胞损伤后热休克蛋白70(HSP70)及Fas蛋白表达的干预作用机制。方法:将12只急性脑缺血模型大鼠随机分为单纯缺血组(生理盐水)和葛根素干预组,各6只,每只大鼠再分别按缺血侧(实验组)和非缺血侧(对照组)进行自身对照,用HE染色及免疫组织化学SP法测定HSP70表达情况;另将脑缺血模型大鼠随机分为对照组(生理盐水、缺血侧)、葛根素干预组(缺血侧)、正常组(非缺血侧),各6只,用HE染色及免疫组织化学SP法测定Fas表达情况。结果:单纯缺血对照组及葛根素干预对照组HSP70呈阴性或弱阳性表达,而在单纯缺血…     

胱氨酸对MCAO模型鼠海马CA1区神经干细胞核磷蛋白表达的影响

目的：研究胱氨酸（CYS）对大鼠MCAO模型再灌注后海马CA1区神经干细胞凋亡相关蛋白核磷蛋白（NPM）表达水平的影响,探讨CYS保护细胞的机制.方法：线栓法制备MCAO模型,104只大鼠随机分为假手术组8只,MCAO组与MCAO＋ CYS治疗组各按时间点随机分为6个亚组,每亚组8只.MCAO＋ CYS治疗组给予CYS（0.15mg/g）,腹腔注射;MCAO组与假手术组给予生理盐水（1mL/d）,腹腔注射;TUNEL染色方法检测海马CA1区的神经干细胞的凋亡水平,免疫组织化学染色方法检测NPM表达水平的变化.结果：MCAO组与MCAO＋CYS治疗组海马CA1区TUNEL阳性细胞数目增加,MCAO组增加显著.假手术组海马CA1区NPM的表达有一定的数量,MCAO组表达数量增加,MCAO＋CYS治疗组显著增强.结论：大鼠海马CA1区核磷蛋白可受大脑中动脉阻塞急性缺血缺氧的作用而表达水平增加,应用胱氨酸治疗大大增加核磷蛋白的表达。     

黄芩苷对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马神经元HSP70表达的影响

目的研究黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马神经元热休克蛋白质(HSP)70表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、黄芩苷组(50，100和200 mg·kg^-1)以及尼莫地平0.4 mg·kg^-1组。利用大鼠大脑中动脉内栓线阻断法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型，通过HE染色、流式细胞术、免疫组织化学以及RT-PCR等方法，观察黄芩苷对缺血再灌注损伤大鼠脑组织病理形态学改变、神经细胞凋亡率以及HSP70表达的影响。结果黄芩苷可明显改善缺血再灌注损伤所致的大鼠脑组织病理形态学改变,降低神经细胞凋亡率，促进HSP70基因的转录与翻译。结论黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其作用机制可能与黄芩苷促进HSP70表达、抑制神经细胞凋亡有关。     

免疫组化HSP70在大鼠磨牙损伤刺激后的表达

目的：研究大鼠磨牙在不同程度的机械性钻磨损伤刺激后的HSP70动态表达及定位。方法：选取Wistar大鼠用于动物模型制作,应用HSP70抗体进行免疫组化染色。结果：在对大鼠磨牙机械性钻磨损伤过程中。浅磨24h组HSP70在牙髓中大多阴性着色;深磨24h组可见成牙本质细胞及其相邻几层牙髓成纤维细胞和中性粒细胞强阳性表达;穿髓24h组和穿髓3d组表现为急性炎症反应,HSP70在成纤维细胞,血管内皮细胞中呈强阳性表达,成牙本质细胞呈中度阳性表达;至穿髓7d时为弱阳性表达,可能为修复期所致。结论：①HSP70在炎症牙髓中能广泛表达,且随着刺激程度的加深HSP70在牙髓中的表达有不同程度的变化．提示其在炎症牙髓中可能发挥着重要的生理病理作用。②在牙髓炎症进程中HSP70的表达逐渐减弱,提示其可能参与牙齿的矿化和修复过程。     

HSP70在大鼠磨牙机械性损伤后的免疫组化表达

热休克蛋白又称应激蛋白,是在热休克状态下启动的一系列特殊基因编码合成的蛋白质,广泛存在于真核细胞内,能够在应激状态下保护细胞组织免受伤害,并对受损组织有修复作用。因其在体内与多种多肽和蛋白质形成复合体,生理状态下在蛋白质的折叠与伸展,多肽的组装过程中起调节作用,但又不改变靶蛋白的结构,故热休克蛋白又被称作分子伴侣。基于其分子量的大小有学者建议将其分为四类,HSP90家族,HSPT0家族,HSP60家族及小分子量sHSP家族。     

热休克蛋白HSP72在大鼠脊髓缺血耐受中的表达及其作用

目的 热休克蛋白HSP72在大鼠脊髓缺血耐受中的表达及其作用.方法 采用球囊阻断主动脉法建立大鼠脊髓缺血模型;RT-PCR测HSP72 mRNA表达水平;免疫组化法测脊髓组织HSP72含量.结果与假手术组相比,缺血3 min组HSP72 mRNA表达呈再灌注时间依赖性增加,再灌注时间30 min HSP72 mRNA表达显著增高（P＆lt;0.05）,2 h达到峰值,24 h后其表达开始下降;与缺血3 min相比,缺血6 min组再灌注30 min显著增加（P＆lt;0.05）,免疫组化显示：与假手术组相比,缺血3 min组HSP72表达呈再灌注时间依赖性增加,再灌注时间30 min HSP72表达显著增高（P＆lt;0.05）,2 h达到峰值,24 h后其表达开始下降;与缺血3 min组相比,缺血6 min组再灌注30 min,2 h,24 h HSP72均有统计学意义（P＆lt;0.05）.结论 脊髓缺血一定时间后恢复血液供应,可以发生再灌注损伤;脊髓缺血灌注后HSP72的表达增加且增加水平与缺血时间有关.     

β-石竹烯通过激活HSF1/HSP70通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的:探究β-石竹烯(β-caryophyllene, BCP)通过激活热休克转录因子1(heat shock factor 1,HSF1)/热休克蛋白70(heat shock proteins 70,HSP70)通路减轻大鼠脑缺血再灌注(cerebral ischemia-reperfusion, CIR)损伤的机制。方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BCP低、中、高剂量组(204,306,408 mg·kg^-1)、BCP(306 mg·kg^-1)+Kribb11组和Kribb11组。采用线栓法建立大鼠CIR模型,再灌注24 h后进行神经行为学评分;2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色法测定脑梗死体积;苏木精-伊红染色、尼式染色观察皮层神经元病理变化;蛋白印迹法检测大鼠脑皮层中HSP70,HSF1,p-HSF1和凋亡相关蛋白(Chop, Caspase 3,Bcl2,Bax)的蛋白表达;免疫荧光染色检测p-HSF1和HSP70蛋白表达;Tunel染色检测细胞凋亡水平;化学比色法检测皮层组织中丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(...     

尼可地尔、谷氨酰胺、美托洛尔单独及合用对大鼠心肌缺血/再灌注损伤后心肌细胞抗凋亡和HSP70的影响

目的研究尼可地尔(nicorandil,Nic)、谷氨酰胺(glutamine,Glu)、美托洛尔(metoprolol,Met)三药联用对大鼠心肌缺血/再灌注损伤后心肌细胞抗凋亡能力和保护性蛋白HSP70表达的影响。方法将健康♂Wistar大鼠随机分为7组:1假手术(Sham)组,只实施冠状动脉左前降支(left anterior descending,LAD)穿线;2 I/R组,实施LAD 30 min缺血/120 min再灌注程序(ischemia/reperfusion,I/R);3 Nic组;4 Glu组;5 Met组;6三药联用(NGM)组;7三药联用低剂量(NGML)组。药物预处理组则在执行I/R程序前30 min腹腔注射Nic、Glu和Met,三药的初始给药剂量均为1mg·kg-1。TUNEL(terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling)法检测心肌细胞凋亡情况,通过凋亡指数衡量心肌细胞凋亡率;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax以及保护性蛋白热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP 70)的表达情况。结果 I/R组中,缺血区的细胞凋亡率较高(36.9%±10.3%),细胞凋亡相关蛋白表达Bcl-2/Bax值较低(0.14±0.08);与I/R组相比,药物预处理组的细胞凋亡率明显降低(P<0.01),凋亡相关蛋白表达Bcl-2/Bax值明显升高(P<0.01);与Sham组相比,I/R组的HSP70表达明显增加(P<0.01);与I/R组相比,药物预处理组的HSP70表达明显增加(P<0.01);与药物单用组相比,3药联用组的HSP70表达更高(P<0.01)。结论对于大鼠在体I/R损伤,三药联用组与药物单用组相比细胞凋亡率明显降低,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达有所改善;保护性蛋白HSP70的表达增加。     

银杏叶提取物GBE50对培养细胞内胆固醇代谢的影响

目的研究银杏叶提取物GBE50对不同培养细胞内胆固醇含量的影响,及对HepG2细胞内胆固醇代谢相关基因HMGCR和SREBF2表达的调节。方法采用MTT法观察了GBE50对HepG2细胞生长的影响,用胆固醇氧化酶终点法检测GBE50对培养细胞HepG2、HUVEC、SH-SY5Y总胆固醇含量的影响;用荧光实时定量PCR技术检测了药物处理后HMGCR和SREBF2基因表达水平在HepG2细胞中的改变。结果GBE50在不影响HepG2细胞的增殖的剂量下可不同程度降低培养细胞HepG2,HUVEC内总胆固醇含量。对HepG2细胞内总胆固醇的影响呈一定的剂量及时间-效应关系,同时可以调节其中HMGCR、SREBF2基因的表达。结论GBE50可有效降低部分培养细胞内总胆固醇的含量,部分胆固醇代谢相关基因表达量的改变可能是GBE50调节HepG2细胞内胆固醇水平的机制之一。     

颅内注射c-fos反义寡聚核苷酸对急性期脑出血周边组织的HSP70表达的影响

目的：研究c-fos基因对于急性期脑出血周边组织的影响及其作用机制。方法：采用在血肿中心微量注射、免疫组织化学法、原位末端标记的方法在大鼠脑出血模型上观察c-fos反义寡脱氧核苷酸（antisense obligodeoxynucleotides．antisenseODNs）对HSP70表达的影响。结果：antisense ODNs能够抑制脑出血周边组织的C-fos阳性细胞表达（P〈0．01），加重了血肿周边神经元的损伤。同时．HSP70的表达也有下降的趋势（P〈0．01）．而且在c-fos表达的区域也有HSP70的表达。结论；HSP70基因的表达对急性期脑出血周边神经元起保护作用；HSP70基因的表达可能部分通过c-fos调控。     

大鼠急性脊髓损伤热休克蛋白70的表达

目的：观察大鼠急性脊髓损伤后脊髓组织中热休克蛋70的表达。方法：Wistar大鼠56只,随机分成7组,6组制作成急性脊髓损伤模型,另一组作为对照组。分别于伤后2h、6h、12h、24h、48h、72h。建立脊髓损伤动物模型。应用West-blot方法观察各个时段损伤脊髓组织HSP70的表达。结果：急性脊髓损伤后2h,脊髓组织内出现HSP70的表达,损伤后24h脊髓组织中HSP70染色达到高峰,并可维持至损伤后72h。结论：在遭遇损伤性刺激后,脊髓组织HSP70的表达明显增加,表明HSP70有可能在阻止脊髓的继发性损伤方面发挥一定的作用。     

电针对脑缺血再灌注大鼠模型血清中TNF-α含量的影响

目的探讨电针对脑缺血再灌注大鼠模型血清中TNF-α含量的影响。方法采用线栓法建立脑缺血再灌注大鼠模型。随机分为缺血再灌注组、假手术组和电针治疗组。3组按再灌注时间3h、24h、72h的时间点抽血,检测血清TNF-α含量。结果大鼠再灌注3h后,血清TNF-α含量达到峰值,在3h、至72hTNF-α含量维持较高水平,与假手术组、电针治疗组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。电针治疗组与缺血再灌注组进行比较,再灌注3h、24h和72h后大鼠血清TNF-α含量下降,两组各时间点分别对应比较,差异均有统计学意(P<0.01)。结论电针治疗能够拮抗TNF-α生成,使炎症反应程度和脑组织损伤程度减轻。     

葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤后Fas蛋白表达的影响

目的探讨葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤后Fas蛋白表达的影响。方法采用闭夹大脑中动脉后再通造成局部脑缺血再灌注模型,免疫组化SP法测定Fas表达情况,光镜观察脑组织Fas蛋白阳性细胞数和死亡细胞数。结果正常对照组Fas阳性细胞数及死亡细胞数明显少于再灌注组,再灌注葛根素组死亡细胞数和Fas阳性细胞数明显少于再灌注对照组(P均<0.01)。结论葛根素对大鼠急性脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤后Fas蛋白表达的影响

目的探讨葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤后Fas蛋白表达的影响。方法采用闭夹大脑中动脉后再通造成局部脑缺血再灌注模型,免疫组化SP法测定Fas表达情况,光镜观察脑组织Fas蛋白阳性细胞数和死亡细胞数。结果正常对照组Fas阳性细胞数及死亡细胞数明显少于再灌注组,再灌注葛根素组死亡细胞数和Fas阳性细胞数明显少于再灌注对照组(P均<0.01)。结论葛根素对大鼠急性脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

血府逐瘀汤对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶表达的影响

目的观察血府逐瘀汤对大鼠脑缺血再灌注损伤早期神经细胞凋亡、Bcl-2、Bax蛋白及半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)表达的影响。方法将40例健康SD大鼠随机分为中药组和对照组各20只。中药组将药物血府逐瘀汤按人与大鼠体表面积折算动物等效药量,按生药25g·kg-1·d-1灌胃。对照组同期给予等量的葡萄糖生理盐水灌胃,连续灌胃3d后采用线栓法制作大鼠大脑中动脉局灶性缺血再灌注损伤动物模型。40只大鼠建模成功后测量各组神经功能缺损评分,而后腹腔麻醉断头杀死大鼠,取侧脑室层面额叶皮层组织制备石蜡切片,TUNEL法检测脑皮层凋亡神经细胞,用氯化三苯四氮唑染色及免疫组化染色测量脑组织caspase-3阳性细胞数及Bcl-2、Bax蛋白表达。结果建模成功后,中药组神经功能缺损评分为(1.84±0.49)分低于对照组的(3.14±0.61)分,差异有统计学意义(P<0.05)。2组模型大鼠大脑皮层内均检测到凋亡细胞,其中中药组大鼠皮层内凋亡细胞指数明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。中药组Bcl-2蛋白阳性细胞指数明显高于对照组,Bax蛋白阳性细胞指数及脑组织中caspase-3阳性细胞数明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血府逐瘀方能够降低脑缺血再灌注后大鼠神经功能缺损程度,其机制可能与抑制低缺血再灌注后脑组织中caspase-3及Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白表达有关。     

辛伐他汀对大鼠脑缺血再灌注后脑组织NOS表达的影响

目的观察辛伐他汀对大鼠脑缺血再灌注后脑组织eNOS、nNOS和iNOS表达的影响。方法24只Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺血再灌注IR组(IR)、辛伐他汀预处理高、低剂量组,每组6只。高剂量组和低剂量分别以阿伐他汀6mg/kg和1.5mg/kg连续灌胃7天。用线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血2h,再灌注22h,应用免疫组化法检测脑组织中eNOS、nNOS和iNOS的表达。结果与缺血再灌注组比较,辛伐他汀低剂量组eNOS表达差异无显著意义(P>0.05),高剂量组eNOS表达显著增加(P>0.05);高剂量和低剂量组nNOS和iNOS的表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论辛伐他汀预处理能抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织iNOS、nNOS的表达、上调eNOS表达。