安体优抑制小鼠Lewis肺癌血管生长作用的实验研究

目的:探讨安体优抑制小鼠Lewis肺癌血管生长的作用及其抗Lewis肺癌转移的相关机理.方法:利用Lewis肺癌细胞肺转移模型,随机分为三组,分别予安体优、蒸馏水、环磷酰胺治疗,运用免疫组化方法对移植瘤中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达、微血管密度(MVD)等有关转移指标进行检测和分析.结果:安体优组移植瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)的高表达率30%和微血管密度(MVD)14.3±5.38,空白对照组VEGF的高表达率80%与MVD19.8±3.65,经统计学处理有显著性差异VEGF高表达率与MVD的关系经直线相关分析,呈显著正相关(P＜0.05).结论安优优可以降低移植瘤MVD与VEGF高表达率,VEGF表达率与MVD有呈正相关.     

miRNA-145、VEGF与川崎病患儿冠脉损伤关系的初步研究

目的:探讨miRNA-145和VEGF在儿童川崎病中的表达水平及其临床意义。方法:共纳入27例急性期川崎病的患儿,并依据心脏超声结果分为:伴有冠状动脉损伤组(CAL组)12例,无冠状动脉损伤组(NCAL组)15例。同期匹配18例健康儿童作为对照组。分别采用实时荧光定量PCR及ELISA法方法监测血浆中miRNA-145和VEGF在川崎病患儿CAL组、NCAL组及正常儿童血浆中的表达水平。结果:RT-PCR结果提示,三组miRNA-145的差异有统计学意义(F=64.53,P<0.01),CAL组患儿相对表达量低于NCAL组及正常对照组,NCAL组介于两组之间,差异具有统计学意义;ELLISA法提示三组间VEGF差异有统计学意义(F=52.87,P<0.01),其中CAL组患儿表达量明显高于NCAL组与正常对照组,NCAL组介于两组之间,差异有统计学意义。相关分析发现, miRNA-145和VEGF表达呈明显负相关关系(r=-0.707,P<0.01)。结论:miRNA-145可能通过调节VEGF的表达参与川崎病的发病机制,且与冠脉损伤的发生相关,miRNA-145和VEGF可作为川崎病辅助诊断指标。     

人类骨肉瘤细胞的血管形成作用

探讨骨肉瘤是否能有效地促进自身血管形成,以便阐明肿瘤细胞生长和转移的机制,开辟一条以恶性肿瘤血管为靶器官的治疗途径,我们进行了以下实验,报道如下。1 材料与方法1.1 人类骨肉瘤细胞的体外培养:肿瘤细胞取自-23岁男性患者截肢左膝部肿瘤。术后病理诊断为骨母细胞型骨肉瘤。原代培养:①将肿瘤组织切成     

血管内皮细胞生长因子抑制剂对成骨肉瘤生长的影响

通过动物接种方法研究血管内皮细胞生长因子 (VEGF)抗体对骨肉瘤生长的抑制作用。将OS 732骨肉瘤细胞以 1 0 70 / (mL·只 )的剂量接种于BALB/C型裸鼠腋窝部皮下 ,并分成 4组 :A组于接种次日于瘤体局部注射VEGF抗体 ,B组于接种后 2周瘤体局部注射抗体 ,C组于接种次日于瘤体局部注射PBS ,D组不注射抗体。VEGF注射剂量为 2 0 0 μg/ (只·次 ) ,每周 3次 ,共 3周。 4周后处死A、C2组裸鼠 ,6周后处死B、D 2组裸鼠。每组均取出瘤组织作病理切片。计算肿瘤体积及肿瘤内微血管密度 ,并对结果进行分析。结果显示 ,A组的肿瘤体积小于B、C、D 3组 ,在接种后 2 5d与D组有统计学差异 (P <0 .0 5 ) ;B、C、D 3组间无统计学差异。 4组肿瘤内微血管密度的比较 ,无统计学差异。提示 ,VEGF抗体对骨肉瘤早期的生长有明显的抑制作用 ,可作为转移病灶的预防及治疗方法之一。     

microRNA-145通过靶向抑制CREB调节内皮细胞增殖和血管新生

目的 构建微小RNA 145(microRNA-145,miR-145)过表达及干扰腺病毒载体,并探究miR-145对内皮细胞增殖和血管新生的影响及机制.方法 利用T4连接酶分别将miR-145过表达和干扰目的序列插入到pHBAd-EF1-MCS-GFP和pHBAd-U6-CMV-GFP载体,构建出重组miR-145过表达和干扰腺病毒质粒.将重组miR-145过表达和干扰腺病毒质粒分别与骨架质粒pHBAd-BHG共转染人胚肾HEK293细胞进行重组腺病毒的包装与扩增,TCID50法检测病毒感染滴度.miRNA qRT-PCR检测感染腺病毒的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中miR-145的表达水平,MTT及Western blot检测PCNA蛋白表达量以检测细胞增殖情况.小管形成实验检测血管生成能力的变化.采用miRanda、miRwalk等生物信息学方法预测miR-145的靶基因及与环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein,CREB) 3'UTR的结合位点.Western blot检测CREB及其调控的VEGF的表达情况,双荧光素酶实验验证miR-145与目的基因CREB 3'UTR相互作用.结果 基因测序提示miR-145过表达及干扰质粒序列与目标序列一致,qRT-PCR结果亦提示病毒构建成功.细胞增殖和小管形成实验结果显示,与转染空载体组相比,过表达miR-145使570 nm处光密度值明显降低(P＜0.05),亦显著抑制了HUVECs PCNA蛋白表达和小管样结构的形成(P＜0.01),而干扰miR-145表达则使光密度值增高(P＜0.01),亦促进HUVECs PCNA蛋白表达和小管样结构的形成(P＜0.05).同时,过表达miR-145可显著抑制CREB和VEGF蛋白表达(P＜0.05),而干扰miR-145表达则明显促进CREB和VEGF蛋白上调(P＜0.05).双荧光素酶实验亦证实了miR-145与CREB 3'UTR的直接结合作用.结论 miR-145调节内皮细胞增殖和血管新生,其机制与miR-145直接靶向抑制CREB/VEGF信号有关.     

VEGF反义寡核苷酸抑制裸鼠骨肉瘤生长的实验研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对裸鼠骨肉瘤生长的抑制作用。方法制备BALC/C裸鼠皮下骨肉瘤模型18只,随机分为3组:VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组,每组6只。接种MG-63人成骨肉瘤细胞后24 h内,分别皮下注射ASODN及SODN进行治疗,对照组只注射生理盐水,每周2次,连续4周;观察各组裸鼠肿瘤的生长情况、裸鼠的一般情况与生存期。断颈处死裸鼠,游标卡尺测量肿瘤体积大小,天平称量肿瘤的重量。结果与对照组瘤重(7.45±0.60 g)比较,VEGF ASODN组(4.13±0.80 g)能明显抑制裸鼠肿瘤生长(P<0.01),VEGF SODN组(6.92±0.69 g)则无明显抑制作用(P>0.05)。VEGF ASODN组、VEGFSODN组抑瘤率分别为44.56%、7.11%。结论VEGF反义寡核苷酸能抑制裸鼠体内骨肉瘤生长,通过反义寡核苷酸下调VEGF的表达,可达到治疗骨肉瘤的目的,为骨肉瘤的基因治疗提供了实验依据。     

TRAIL及联合阿霉素治疗骨肉瘤的动物实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)以及TRAIL联合阿霉素(ADM)对裸鼠移植性骨肉瘤的治疗作用及机制.方法 取对数生长的MG-63骨肉瘤细胞,以5×10~6/ml浓度的细胞悬液0.2 ml接种于裸鼠下肢外侧皮下,建立裸鼠肿瘤模型随机分组.各以1、2 μg TRAIL,15 μg ADM,1μ,g TRAIL+15μg ADM和100 μl生理盐水腹腔注射,观察肿瘤生长速度,处死裸鼠取血清,应用血清碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测血清ALP的活性,取下瘤体应用TUNEL技术检测瘤体中细胞凋亡情况,应用免疫组化法检测Bax基因的表达,应用RT-PCR技术分析TRAIL受体表达的情况.结果 肿瘤生长曲线显示:腹腔注射TRAIL蛋白组与注射生理盐水组相比,裸鼠皮下移植瘤生长更慢,且2 μg TRAIL组的抑制作用强于1μg TRAIL组;TRAIL与ADM联用较两种药物单用具备更强的抑瘤作用.各实验组间ALP活性差异统计学意义.细胞凋亡的TUNEL检测显示TRAIL与ADM联用组较两种药物单用组有更多的凋亡细胞出现.免疫组化检测Bax基因的表达显示TRAIL与ADM联用出现Bax蛋白表达量上调.RT-PCR检测显示TRAIL与ADM联用出现TRAIL-R2的mRNA表达上调.结论 在活体水平TRAIL具有促进骨肉瘤细胞凋亡、抑制肿瘤生长的作用,且这种作用一定范围内随药物的剂量提高而增强.TRAIL与ADM联用具备协同效应,其机制与TRAIL-R2的mRNA和Bax基因的表达上调有关.     

Avastin抑制骨肉瘤裸鼠模型血管生成实验研究

目的 观察Avastin抑制骨肉瘤裸鼠移植瘤血管生成并探讨其作用机制.方法 人骨肉瘤细胞9901荷瘤裸鼠12只随机分为3组:对照组、Avastin低剂量组(2mg·kg-1·w-1)和Avastin高剂量组(5mg·kg-1·w-1),每周瘤内注射1次,共治疗2次,治疗过程中观察肿瘤生长情况.治疗后处死裸鼠,计算抑瘤率,并通过病理组织学观察、免疫组织化学和激光共聚焦观察肿瘤内微血管密度、坏死、增殖、凋亡和肿瘤细胞缺氧情况.结果 Avastin低剂量治疗组和Avastin高剂量治疗组的抑瘤率分别为32.87%、39.81%;对照组、Avastin低剂量治疗组和Avastin高剂量治疗组3组坏死的比例分别为2.01%、11.49%和12.15%.Avastin低剂量治疗组和Avastin高剂量治疗组的微血管密度及增殖指数明显低于对照组(P<0.05),凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),但Avastin低剂量治疗组和Avastin高剂量治疗组的微血管密度、增殖指数和凋亡指数差异无统计学意义(P>0.05).EF-5和CD31免疫荧光双标激光共聚焦显微镜观察显示Avastin治疗组血管密度降低、组织缺氧加重.结论 Avastin能显著抑制骨肉瘤的血管生成和肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,进而显著抑制裸鼠原位肿瘤的生长.     

骨肉瘤VEGF表达及VEGF抗体抑制血管生成的实验研究

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）表达与骨肉瘤血管生成和预后的关系,以及VEGF抗体抑制骨肉瘤细胞OS-732诱导血管生成的作用和可能机制,为以VEGF为靶点治疗骨肉瘤提供实验依据。方法应用免疫组化和形态计量方法,检测80例骨肉瘤VEGF表达、肿瘤微血管密度（MVD）,以及OS-732血管生成相关因子的表达。进一步应用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型观察VEGF抗体对OS-732诱导血管生成及肿瘤细胞生长的抑制作用。结果（1）骨肉瘤VEGF表达与肿瘤微血管密度（MVD）及预后密切相关。（2）OS-732表达VEGF和BFGF,而且VEGF表达强度明显高于BFGF,OS-732具有很强的诱导血管生成能力。（3）VEGF抗体干预实验结果显示VEGF抗体组肿瘤区血管密度明显低于PBS对照组,细胞凋亡指数显著高于PBS对照组,而增殖指数两组差异无统计学意义。同时,VEGF抗体组凋亡的微血管内皮细胞增多,增殖期内皮细胞少见。结论VEGF是骨肉瘤重要的血管生成因子,其表达可能是评估骨肉瘤预后的一项有价值的指标。VEGF抗体能够抑制内皮细胞增殖,促进内皮细胞凋亡,显著抑制骨肉瘤OS-732血管形成,并可能通过抑制血管形成而促进肿瘤细胞凋亡,达到抑制瘤细胞生长的作用。该结果提示VEGF可以作为骨肉瘤抗血管生成治疗的潜在靶分子。     

骨肉瘤预后相关的血管生成因子研究进展

骨肉瘤是实体性的肿瘤且血运丰富,其生长和转移都有依赖于肿瘤中血管的生成。已发现多种骨肉瘤血管生成相关的因子,其中一些血管生成因子和患者的预后及病程转归密切相关。文中就近年发现和骨肉瘤预后相关的血管生成因子：血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）、血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor,PDGF）、表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）、色素上皮衍生因子（pigment epithelium-derived factor,PEDF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）做一综述。     

microRNA-145对人结肠癌Caco-2细胞生物学行为的影响

目的探讨微小核糖核酸-145(miRNA-145)对人结肠癌细胞系Caco-2细胞迁移、增殖及细胞周期等生物学行为的影响。方法选用Caco-2细胞并进行培养,用脂质体转染法分别将miRNA-145及阴性对照miRNA过表达的质粒转入Caco-2细胞,分为对照组和miRNA-145组进行实验。在倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率;采用划痕试验检测miRNA-145对Caco-2细胞迁移的影响;噻唑蓝法检测miRNA-145对Caco-2细胞增殖的影响;流式细胞术检测miRNA-145对Caco-2细胞周期的影响。结果与对照组相比,Caco-2细胞过表达miRNA-145后,细胞迁移速度减慢,生长活力明显受到抑制(P<0.05),G1期细胞百分比增高(P<0.05),而G2期及S期细胞百分比则无明显改变(P>0.05)。结论miRNA-145可抑制Caco-2细胞的迁移和增殖,同时可使Caco-2细胞发生G1期阻滞,减慢细胞周期进程。     

MicroRNA-199a-3p对人骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨microRNA-199a-3p (miR-199a-3p)对人骨肉瘤细胞凋亡的影响?方法:用合成的成熟miR-199a-3p序列模拟物(miR-199a-3p mimics)转染人骨肉瘤细胞(U2-OS),以阴性对照物序列(NC mimics)转染细胞作为阴性对照?转染后应用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞miR-199a-3p的表达量,Western blot法检测各组细胞中髓样细胞白血病-1(MCL-1)蛋白的表达水平及多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的剪切情况,利用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率,并对实验结果进行统计学分析?结果:与对照组相比,转染miR-199a-3p mimics的实验组细胞中,miR-199a-3p的表达量明显升高,MCL-1蛋白的表达降低,PARP蛋白的剪切水平增加,细胞的凋亡率增高,差异均有统计学意义(P < 0.05)?结论:miR-199a-3p可以有效促进骨肉瘤细胞的凋亡?     

MicroRNA-203抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移的机制研究

摘要：目的  探讨microRNA-203（miR-203）对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响及机制。方法  通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定miR-203在正常成骨细胞hFOB及骨肉瘤细胞系中的表达,将MG-63细胞系分成miR-203组、Scramble组、RAB22A组、NC组,Lipofectamine 2000分别转染miR-203 mimics、Scrambles、pcDNA3.1-RAB22A、空白对照质粒;通过噻唑蓝（MTT）实验测定增殖能力,细胞划痕实验测定迁移能力;通过Target Scan和双荧光素酶实验预测及验证miR-203与RAB22A基因的靶向调节关系;RT-PCR测定RAB22A mRNA表达水平;Western blot测定E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果  miR-203在骨肉瘤细胞系SAOS-2、SOSP-9607、U2OS及MG-63中较hFOB细胞系表达降低。MTT显示,在培养48和72 h后,miR-203组相对细胞数少于Scramble组（P <0.05）;培养24 h后,Scramble组细胞相对划痕面积小于miR-203组（P <0.05）;双荧光素酶实验示,miR-203与RAB22A基因存在靶向调节关系。RAB22A组相对划痕面积小于NC组（P <0.05）;MTT显示,在培养24、48和72 h后,RAB22A组相对细胞数多于NC组（P <0.05）;RAB22A组与NC组比较,E-cadherin下调表达,N-cadherin上调表达,Vimentin上调表达。结论  miR-203通过下调RAB22A基因表达,抑制上皮间质转化,进而抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移。

     

microRNA-145在子宫内膜异位症中的研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是一种常见的雌激素依赖性疾病,病因尚不明确。表观遗传异常可能是EMs的潜在致病机制,它改变了激素和环境因素对基因表达的反应,其中小分子RNA(miRNA)的差异性表达在EMs的发生、发展过程中发挥一定作用。miRNA是一种非编码调节性单链RNA,通过与信使RNA(mRNA)的3'非编码区(3' UTR)结合在转录或转录后的水平上调节基因表达。已有大量的研究揭示了miRNA作为EMs潜在的强有力的生物标记,这些失调的miRNA中,有些直接参与了疾病的发生,而另一些则与疾病的存在相关,但它们的生物学作用尚不清楚。在这些miRNA中,miR-145在EMs中存在明显的差异性表达。miR-145通过介导细胞黏附分子和细胞骨架元素,如纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)、八聚体结合转录因子4(OCT4)以及肌成束蛋白-1(FSCN1)等因子影响内异症病灶的生成。miR-145还受其上游RNA分子的调控,如长链非编码RNA(lncRNA)前列腺癌相关转录物1(PCAT1)可通过miR-145信号通路靶向调控特定基因的表达,从而对EMs的患病风险产生影响。此外,miR-145表达水平的变化可能与EMs中的不孕症有关。本文旨在阐述miR-145在内异症中的作用机制,主要包括细胞的血管形成、腹膜黏附、侵袭、迁移、增殖、自噬、不孕症等内容,以期为临床治疗EMs提供进一步的理论支持。      

去甲二氢愈创木酸对活体血管生成作用的实验研究

目的　观察去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对在体血管生成的影响。方法　采用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)试验 ,检测NDGA对血管生成的影响。结果　 2 .5× 1 0 -6mmol以上量的NDGA均对血管生成有抑制作用 ,在实验剂量 ( 0 .5～ 5 0 )× 1 0 -6mmol范围内 ,随给药量的增加 ,其抑制作用愈加明显。采用Bouin’s液原位固定后取膜、DAB染色、普通显微镜下观察或用图像分析方法可使结果更具可信性与可比性。结论　NDGA可抑制血管生成 ,对肿瘤及其它病理情况下的抗血管生成治疗可能具有重要的应用价值     

骨肉瘤微血管密度与血管内皮生长因子表达的关系

目的 研究骨肉瘤微血管密度（MVD）与血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达是否具有相关性。方法 对33例骨肉瘤组织标本应用CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞。计数骨肉瘤MVD;用VEGF多克隆抗体检测肿瘤细胞浆中VEGF的表达情况。结果 （1）骨肉瘤MVD与VEGF表达程度呈正相关,VEGF高表达组的MVD平均值明显高于VEGF低表达组;（2）骨肉瘤中VEGF的表达和MVD与骨肉瘤组织病理分级无关。结论 VEGF是骨肉瘤血管形成的一种重要调节因子。     

微小RNA-203表达与骨肉瘤细胞生物学特征相关性的实验研究

目的:研究微小RNA-203表达与骨肉瘤细胞生物学特征的相关性。方法:收集骨肉瘤组织和肉瘤旁正常组织,检测miRNA-203的表达量;培养骨肉瘤细胞株MG63和成骨细胞细胞株hFOB1.19,检测细胞中miRNA-203的表达量;转染miRNA-203的模拟物后6h、12h、18h、24h时,检测细胞增殖、侵袭能力以及相关基因的表达量。结果:骨肉瘤组织中miRNA-203的表达量低于肉瘤旁正常组织,骨肉瘤细胞株MG63中miRNA-203的表达量低于成骨细胞细胞株hFOB1.19;在骨肉瘤细胞株MG63中,miRNA-203的模拟物能够以时间依赖性的方式降低细胞活力、减少侵袭细胞的数目,抑制Bcl-2、cMet、Notch-3、MMP-9的表达。结论:骨肉瘤组织中微小RNA-203的表达量显著降低,增加微小RNA-203的表达能够抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭,其靶基因为Bcl-2、cMet、Notch-3、MMP-9。     

Smac对骨肉瘤细胞系Saos-2生长及耐药性的影响

目的：观察Smac表达对骨肉瘤细胞Saos-2生长和耐药性的影响。方法：构建smac和反义smac表达载体pcDNA-smac和pcDNA—anti-smac，G418筛选出分别稳定转染pcDNA—$mac和pcDNA—anti—$mac的骨肉瘤细胞Saos—2。利用流式细胞仪检测各转染细胞的细胞周期分布；绘制各细胞在6d内的生长曲线以观察各细胞生长情况的变化。同时采用MTT法检测各转染Saos—2细胞对依托泊苷的敏感性。结果：与转染空载体pcDNA3．0的Saos—2细胞相比，转染反义smac的Saos—2细胞G1／G0期比例升高，细胞生长自第4天起明显加快。转染smac的Saos—2细胞的细胞周期及生长曲线无明显差别；依托泊苷作用细胞后，与转染空载体pcDNA3．0的Saos—2细胞相比，转染反义smac的Saos—2细胞的存活率增高；而转染smac的Saos—2细胞的存活率降低。结论：抑制Smac在细胞中表达，可使Saos—2细胞生长加快，增强对依托泊苷的耐受性，Smac在细胞中的过表达可提高Saos—2对依托泊苷的敏感性。     

阿司匹林对小鼠S180肉瘤生长及血管和淋巴管生成的影响

目的   观察阿司匹林对小鼠S180肉瘤生长的影响,并探讨其可能的作用机制。方法   昆明种小鼠40只,接种S180肉瘤细胞,随机分为荷瘤对照组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、阿司匹林高(250mg/kg)、低剂量(50mg/kg)组,描绘肿瘤体积生长曲线并计算抑瘤率;HE染色观察各组肿瘤组织病理变化;免疫组化检测各组肿瘤组织微血管密度(MVD)、淋巴管密度(LVD)、血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)的变化;Western blot检测各组肿瘤组织VEGF-A、VEGF-C的表达。结果   阿司匹林高、低剂量组抑瘤率分别为45.4%和22.2%(P<0.05),与荷瘤对照组相比,5-FU组与阿司匹林高、低剂量组VEGF-A和VEGF-C的表达明显下调,LVD、MVD降低(P<0.05),阿司匹林的作用呈剂量依赖性。结论   阿司匹林能抑制小鼠S180肉瘤的生长,其作用机制可能与减少VEGF-A和VEGF-C产生从而抑制肿瘤血管和淋巴管生成有关。