shRNA-FAM38 A基因对肺癌A549细胞系增殖、迁移和凋亡的影响

目的构建shRNA-FAM38A慢病毒载体,对肺腺癌A549细胞中FAM38A基因表达进行沉默干扰,研究其对肿瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法采用慢病毒载体构建的方法,构建shRNA-FAM38A慢病毒载体,免疫组织化学染色检测FAM-38A的表达; RT-qPCR用来检测凋亡因子Bcl-2,Caspase-3和Caspase-9的表达量; CCK-8试剂盒检测肺癌细胞的增殖; Transwell小室检测肺癌细胞的迁移; AV-PI凋亡试剂盒检测肺癌细胞的凋亡。结果 (1)慢病毒转染效率较高,以肺癌细胞A549为靶点种子细胞,慢病毒转染率为90%。这说明慢病毒转染细胞具有较高的转染效率。(2)免疫组织化学方法检测到FAM-38A可以在肺癌组织中过度表达;(3)阴性对照组(shRNAFAM38A-Con),空质粒组,shRNAFAM38A1组和shRNAFAM38A 2组的FAM38A,凋亡因子Bcl-2,Caspase-3和Caspase-9的mRNA的相对表达量具有统计学差异(F=17. 967; P 0. 05)。shRNA FAM-38A1组中FAM38A,凋亡因子Bcl-2,Caspase-3和Caspase-9的mRNA的相对表达量与shRNAFAM38A 2组相比,表达量降低,表明shRNA FAM-38A1可以有效抑制FAM38A的表达,抑制Bcl-2的表达,促进Caspase-3和Caspase-9的表达,进而促进肿瘤细胞凋亡。然而shRNA FAM-38A2是个无效干扰序列,没有起到沉默FAM38A基因表达的作用。(4) Transwell实验,CCK-8实验和AV-PI实验的结果显示,shR-NA FAM-38A1可以抑制肺癌肿瘤细胞的增殖,抑制肿瘤细胞的迁移,并且可以促进肿瘤细胞的过度凋亡。结论 shRNA FAM38A1可以有效的抑制肺癌细胞的迁移和增殖,并且提高其凋亡率。     

RNAi沉默HMGN5基因对肺癌A549细胞增殖的影响

目的构建HMGN5基因的shRNA慢病毒载体,并在肺癌A549细胞上鉴定其沉默效率,观察其对细胞增殖能力的影响。方法筛选HMGN5基因特异性siRNA靶点,合成短发卡结构shRNA,与LentiLox3.7慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒,感染肺癌A549细胞,设阴性组及干涉组,应用Real-time PCR和Western印迹的方法检测HMGN5在mRNA和蛋白水平的沉默效率,MTT和克隆形成实验观察HMGN5基因沉默对A549细胞增殖的影响。结果构建的shRNA慢病毒颗粒感染A549细胞后,干涉组HMGN5基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组下降了71.7%,显著抑制其蛋白表达;MTT结果表明细胞增殖能力明显降低,干涉组克隆形成能力较阴性组明显减弱。结论成功构建了HMGN5基因的shRNA慢病毒表达载体,其能够在肺癌A549细胞上有效沉默靶基因。HMGN5基因具有影响肺癌细胞恶性增殖的能力,为肺癌的基因治疗奠定了实验基础。     

Frat1通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨Frat1能否通过Wnt/β-catenin信号通路对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、凋亡产生影响。方法 RT-PCR检测非小细胞肺癌组织及正常肺组织中Frat1、β-catenin的表达;CCK-8试验检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的增殖;TUNEL免疫荧光法检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞的凋亡;Western Blot检测Frat1沉默组和Frat1正常表达组非小细胞肺癌A549细胞β-catenin蛋白的表达。结果非小细胞肺癌组织中Frat1、β-catenin基因的表达显著高于正常肺组织(P0.05);Frat1沉默组细胞的增殖能力显著弱于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1沉默组细胞的凋亡显著高于Frat1正常表达组(P0.05);Frat1正常表达组细胞β-catenin蛋白的表达显著高于Frat1沉默组(P0.05)。结论 Frat1与β-catenin在非小细胞肺癌的表达被激活;Frat1能促进非小细胞肺癌A549细胞的增殖,抑制其凋亡,这种作用可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路而实现的。     

慢病毒靶向溴样结构域蛋白4通过抑制SHH通路对非小细胞肺癌细胞A549能量代谢水平的影响

目的:探究溴样结构域蛋白4(BRD4)siRNA通过SHH通路对非小细胞肺癌细胞A549能量水平的影响。方法:RT-qPCR分析非小细胞肺癌细胞A549、HLF-1细胞内BRD4表达水平;将BRD4 siRNA转入A549细胞内,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)和细胞克隆形成实验检测BRD4 siRNA对A549生长增殖的影响;2-[N-(7-硝基苯并-2-氧-1,3-二唑-4-基)氨基]-2-脱氧葡萄糖法(2-NBDG)法和乳酸检测试剂盒检测BRD4 siRNA对A549细胞葡萄糖摄取率和乳酸生成量的影响;RT-qPCR和Western blot检测BRD4 siRNA对基因SHH、胶质瘤相关癌基因同源物1(GLI1)的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果:BRD4基因在A549细胞中上调表达(P0.05);BRD4 siRNA对A549细胞的增殖、克隆形成、葡萄糖摄入和乳酸生成具有抑制作用(P0.05),且能够促进SHH和GLI1基因的mRNA和蛋白表达显著下调(均P0.05)。结论:慢病毒靶向BRD4基因能够通过抑制SHH通路降低非小细胞肺癌细胞A549的能量代谢水平。     

shRNA-Survivin基因对A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的构建shRNA-Survivin慢病毒载体,对肺腺癌A549细胞中Survivin基因表达进行干扰,探讨其对肿瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法将A549细胞分成3组,即空白对照组,空白病毒载体对照组和shRNA干扰Survivin慢病毒载体组。采用慢病毒载体构建的方法,采用RT-qPCR和Western-Blot检测凋亡因子Caspase-3和Caspase-9的表达量,采用CCK-8试剂盒检测肺癌细胞的增殖,Transwell小室检测肺癌细胞的迁移,AV-PI凋亡试剂盒检测肺癌细胞的凋亡。结果 (1)慢病毒转染效率较高,以肺癌细胞A549为靶点种子细胞,慢病毒转染率为90%;(2)空白载体病毒组的Caspase-3的mRNA的相对表达量(与空白对照组相比)为(1. 231±0. 112,n=3),shRNA-Survivin组的Caspase-3的mRNA的相对表达量为(0.121±0. 009,n=3);两组比较具有统计学差异(t=2. 097,P=0. 0219 0. 05),Caspase-9的mRNA表达具有相同的趋势;(3) Caspase-3的蛋白相对表达量为(0. 173±0. 231,n=3),shRNA-Survivin组与空白载体病毒组相比,具有统计学差异(t=3.221,P=0.02410.05);(4)Transwell实验结果,CCK-8检测结果和AV-PI检测结果显示,空白对照组、空白载体病毒组、shRNA-Survivin组三组之间比较具有明显的统计学差异(P0.05)。结论 shRNA干扰Survivin可以有效的抑制肺癌细胞的迁移和增殖,并且提高其凋亡率。     

siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19转录、表达的影响

目的 研究siRNA-Med19对人肺癌A549细胞Med19的影响.方法 利用前期已合成的siRNA-Med19慢病毒载体,感染A549细胞,并以无病毒感染组作为空白对照组,以慢病毒载体感染组作为阴性对照组.采用荧光图片和白光图片对比方法判断细胞的感染率;RT-PCR法检测细胞Med19mRNA的转录水平; Western 印迹法检测细胞Med19蛋白表达水平.结果 慢病毒载体对人肺癌A549细胞的感染率在80%以上,siRNA-Med19慢病毒感染组Med19mRNA转录水平明显降低,敲减效率大于70%,Med19蛋白表达量也明显降低.结论 siRNA-Med19慢病毒载体可以高效感染人肺癌A549细胞,siRNA-Med19对A549细胞Med19的转录和表达具有明显的抑制和消减作用.     

沉默Survivin人耐药肺癌细胞凋亡相关基因表达变化及临床意义

目的探讨沉默Survivin基因后人耐药肺腺癌(A549DDP)细胞系凋亡相关基因表达变化及临床意义。方法应用RT-PCR法及Western印迹法比较Survivin在人肺腺癌A549细胞系及其耐药A549DDP细胞系的表达水平;通过小分子RNA干扰沉默Survivin基因,并采用微阵列PCR基因芯片(PCR-Array)技术比较沉默Survivin后A549DDP细胞凋亡相关基因表达水平变化。结果 (1)Survivin mRNA、Survivin蛋白在人耐药非小细胞肺癌细胞系呈现高表达。(2)沉默Survivin后A549DDP细胞部分抗/促凋亡基因表达发生改变,促凋亡基因TP53、CASP3、CASP7呈高表达,抗凋亡基因bcl-2、TRAF1、BFAR呈低表达。结论 (1)Survivin与部分抗/促凋亡基因共同参与了非小细胞肺癌耐药的发生。(2)封闭Survivin可改变耐药肺癌细胞的促/抗凋亡基因的表达,Survivin可能作为上游调控点参与调控部分促/抗凋亡基因组的表达。(3)Survivin可能成为逆转肺癌耐药的一个新靶点。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用

目的观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法体外培养肺癌A549细胞,分别给予40、80、160μg/ml的藤梨根乙酸乙酯提取物（实验组）,同时设对照组（0.04%DMSO＋肺癌A549细胞）。采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测用药后DNA梯状条带、TUNEL检测用药后肺癌A549细胞凋亡率的变化、免疫组化SP法检测用药后肺癌A549细胞Survivin蛋白表达变化、RT-PCR法检测用药后A549细胞Survivin mRNA的表达。结果实验组细胞DNA凝胶电泳均出现凋亡细胞所特有的DNA梯状条带图谱,而对照组细胞未出现。各实验组细胞随着藤梨根乙酸乙酯提取物浓度的增加,细胞凋亡率明显增加,并存在时相性和量—效依赖性;其Survivin蛋白和mRNA表达均低于对照组（P均〈0.05）,亦存在时相性和量—效依赖性。结论藤梨根乙酸乙酯提取物可明显诱导肺癌A549细胞凋亡,其机制可能与降低Survivin蛋白和mRNA表达有关。     

survivin—siRNA对肺癌细胞A549增殖抑制的影响

目的探讨survivin—siRNA对肺癌细胞A549的增殖抑制作用。方法将针对survivin的siRNA表达载体与脂质体和pSi—scrambled两个对照组一起分别转染肺癌细胞A549后，利用半定量RT—PCR和Western印迹法分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平，MTT法测定细胞的增殖能力，流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果转染72h后，实验组细胞的survivin mRNA水平是脂质体对照组的31.1％，蛋白表达水平是脂质体对照组的29．2％。MTT检测实验组细胞的生长速度是脂质体对照组的36．6％，流式细胞术发现实验组G1期细胞比例明显高于两个对照组，而G2期和S期细胞比例减少，细胞出现凋亡。结论利用survivin—siRNA可明显抑制肺癌细胞A549的增殖，细胞受阻于G1期，诱导细胞凋亡。     

槐角黄酮通过调控miR-188-5p/PRMT5基因表达对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的研究槐角黄酮对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测蛋白质精氨酸甲基转移酶(PRMT)5和miR-188-5p mRNA的表达,Western印迹检测PRMT5、增殖相关蛋白细胞周期蛋白(Cyclin)D1和p21、迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平,四氮唑蓝(MTT)法测定A549细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证miR-188-5p与PRMT5的调控关系,流式细胞术检测细胞凋亡。结果槐角黄酮可抑制肺癌细胞A549的侵袭、迁移和增殖,且呈显著的剂量依赖性;槐角黄酮可以促进A549细胞中miR-188-5p表达,抑制PRMT5表达;双荧光素酶报告系统实验结果表明,miR-188-5p靶向调控PRMT5的表达;过表达miR-188-5p和抑制PRMT5均可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭;抑制miR-188-5p逆转了槐角黄酮对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论槐角黄酮通过miR-188-5p靶向PRMT5基因抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭。槐角黄酮对肺癌具有潜在治疗作用。     

汉黄芩素调节JAK/STAT信号通路并诱导肺癌A549细胞凋亡及周期阻滞的作用及机制研究

目的研究汉黄芩素对肺癌A549细胞凋亡、周期及对JAK/STAT信号通路的调节作用。方法取对数生长期的肺癌A549细胞,采用低(20μmol/L)、中(40μmol/L)、高(80μmol/L)剂量的汉黄芩素分别干预24 h、48、72 h,MTT法测定不同浓度汉黄芩素对肺癌A549细胞的增殖抑制率,实时定量PCR检测各组肺癌A549细胞中JAK2、STAT3mRNA水平,AnnexinV-FITC/PI双染法检测汉黄芩素对A549细胞凋亡的影响,流式细胞术检测汉黄芩素对A549细胞周期的影响,Western blot检测汉黄芩素对A549细胞JAK2、STAT3水平的影响。结果与对照组相比,汉黄芩素各剂量组肺癌A549细胞24 h、48、72 h增殖抑制率、p-Chk1、P53、Bax水平显著升高(P<0.05),不同浓度的汉黄芩素作用于肺癌A549细胞48 h后,CyclinB1、PCNA、Bcl-2、Survivin、JAK2及STAT3 mRNA水平显著降低(P<0.05),A549细胞凋亡率、G2/M期细胞比例显著升高(P<0.05),Western blot结果表明,汉黄芩素各剂量组A549细胞JAK2及STAT3水平显著降低(P<0.05)。结论汉黄芩素能够抑制肺癌A549细胞的增殖及迁移能力,诱导肺癌A549细胞凋亡及G2/M周期阻滞,其机制可能与调节JAK/STAT信号通路有关。     

长链非编码RNA linc00261在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)linc00261在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法纳入中南大学湘雅医学院附属海口医院2017年2月至2018年9月收治的100例NSCLC患者,采用实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测患者癌组织及对应癌旁组织中lncRNA linc00261的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。通过设计合成lncRNA linc00261表达质粒,转染A549细胞,采用qRT-PCR检测转染细胞中lncRNA linc00261表达水平,使用MTT法检测转染细胞的增殖情况,使用流式细胞术检测转染细胞的凋亡情况。结果qRT-PCR检测结果显示,100例NSCLC患者癌组织中lncRNA linc00261的平均相对表达量(0.15±0.06)明显低于癌旁组织(1.19±0.23),差异有统计学意义(t=7.753,P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤直径及病理组织类型的NSCLC患者癌组织中lncRNA linc00261相对表达量比较差异均无统计学意义(P值均>0.05),但不同组织分化程度、临床分期及有无淋巴结转移患者癌组织中lncRNA linc00261相对表达量差异均有统计学意义(P值均<0.05)。qRT-PCR检测结果显示,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞中lncRNA linc00261的表达量显著高于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(F=5.196,P<0.001)。MTT检测结果显示,转染24 h后,3组之间细胞增殖能力差异无统计学意义(F=0.183,P>0.05);转染48、72、96 h后,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞的细胞增殖能力显著低于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(t=3.187、5.549,P值均<0.05)。流式细胞书检测结果显示,转染48 h后,转染lncRNA linc00261表达质粒的A549细胞的凋亡比例显著高于转染空载体的阴性对照组及空白对照组(χ^2=4.175、6.093,P值均<0.05)。结论lncRNA linc00261在NSCLC患者癌组织中表达下调,并与NSCLC的发生发展有关,其在NSCLC中可能发挥抑癌基因作用,过表达lncRNA linc0026可抑制NSCLC细胞增殖并诱导凋亡,有可能成为NSCLC潜在的治疗靶点。     

着丝粒蛋白F在非小细胞肺癌组织中的表达及其对A549细胞生物学行为的影响研究

背景非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌的85%左右,由于易错失最佳手术切除时机,且放化疗效果不佳,导致生存率偏低。而着丝粒蛋白F(CENPF)是在多种癌症中高表达的分子,探讨其对肺癌细胞生物学行为的影响,将有助于NSCLC的靶向治疗。目的探讨CENPF在NSCLC组织中的表达及其对A549细胞生物学行为的影响。方法收集2018年10月—2019年10月于西安医学院第一附属医院行外科切除手术的26例NSCLC患者的癌组织、癌旁组织标本。采用Western blotting法检测NSCLC组织、癌旁组织中CENPF表达水平。取生长良好的对数期A549细胞,将其分为对照组、阴性对照组、CENPF抑制组,其中对照组A549细胞不进行转染处理,阴性对照组、CENPF抑制组A549细胞使用Lipofectamine 2000转染试剂分别转染阴性对照(NC)-干扰性小核糖核酸(si RNA)、CENPF-si RNA。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测三组A549细胞中CENPF m RNA表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测A549细胞增殖情况[吸光度(OD)值],流式细胞仪检测A549细胞凋亡情况、A549细胞周期,Western blotting法检测A549细胞中CENPF、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白(Bax)表达水平。结果 NSCLC组织中CENPF表达水平高于癌旁组织(P <0.05)。CENPF抑制组A549细胞中CENPF m RNA表达水平低于对照组、阴性对照组(P<0.05)。CENPF抑制组A549细胞OD值低于对照组、阴性对照组(P<0.05)。CENPF抑制组A549细胞凋亡率高于对照组、阴性对照组(P <0.05)。CENPF抑制组G0/G1期A549细胞所占比例高于对照组、阴性对照组,S期、G2/M期A549细胞所占比例低于对照组、阴性对照组(P <0.05)。CENPF抑制组A549细胞中CENPF、cyclin D1表达水平低于对照组、阴性对照组,Bax表达水平高于对照组、阴性对照组(P <0.05)。结论 CENPF在NSCLC组织中表达升高,其可通过影响cyclin D1、Bax表达水平来影响A549细胞周期进展及增殖、凋亡过程;下调其表达可将A549细胞周期阻滞于G0/G1期,抑制细胞增殖并诱导其凋亡。     

土贝母苷甲对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨土贝母苷甲对人肺腺癌细胞(A549)增殖及凋亡的影响.方法 应用MTS法检测土贝母苷甲不同浓度、不同时间对A549细胞增殖的影响;使用1μg/mL土贝母苷甲处理A549细胞48 h作为处理组,对照组加入培养基培养48h;使用流式细胞仪分别检测两组细胞的周期分布及细胞凋亡率;并使用Western blot检测两...     

微小RNA-190低表达调控肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的实验研究

目的 探讨微小RNA(miR)-190对肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的A549细胞分为对照(Ctrl)组、抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)组和miR-190抑制剂(anti-miR-190)组,转染miR-190抑制剂及其阴性对照后,采用实时荧光定量PCR检测检测A549细胞...     

BAG-1基因沉默对非小细胞肺癌放射敏感性的影响及机制

目的探讨BAG-1基因与非小细胞肺癌放射敏感性的关系,为非小细胞肺癌个体化治疗提供理论依据。方法对A549肺腺癌细胞、H460大细胞癌及NCL-H520鳞癌细胞三株非小细胞肺癌细胞株及人胚肾细胞株HEK293行细胞放射敏感性试验,采用Western blot法检测各细胞株中BAG-1蛋白表达情况。选择其中对放射线相对较抗拒、BAG-1蛋白表达最高的A549细胞株,构建干扰载体pGCsi-BAG-1并筛选BAG-1基因沉默细胞株,用shRNA-2转染,酶标仪检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率,放射敏感性试验观察细胞对放射线的敏感性。结果 shRNA-2转染的细胞株生长受到抑制,且随时间延长抑制作用明显,而阴性对照质粒转染的A549细胞株生长无明显变化;6 Gy射线照射后24 h,shRNA-2转染细胞凋亡率为(49.6±4.23)%,未转染的A549细胞为(15.3±2.11)%,阴性对照质粒转染细胞为(14.8±3.55)%,shRNA-2转染细胞凋亡率较未转染细胞增加了3.2倍(P<0.01),而阴性对照转染细胞与未转染细胞间相比差异无统计学意义;亲本A549细胞和阴性对照转染细胞之间的放射敏感性无差异(P>0.05)。而shRNA-2转染细胞的放射敏感性明显增加,与前二者比较差异有显著性(P<0.05)。结论 BAG-1基因沉默可增强非小细胞肺癌放射敏感性,可能机制为BAG-1基因沉默后抑制细胞生长,抗凋亡作用减弱,细胞内BAG-1分布发生改变,细胞对射线更敏感。     

长链非编码RNA GIHCG对非小细胞肺癌恶性表型的影响

目的探讨长链非编码RNA GIHCG(lncRNA GIHCG)对非小细胞肺癌(NSCLC)恶性表型的影响。 方法使用qRT-PCR法分别检测50例NSCLC的肿瘤组织及其癌旁组织中lncRNA GIHCG及正常人支气管上皮细胞系E16HB,NSCLC细胞系A549、H1299、H1650、H2087中lncRNA GIHCG的表达。分别使用小干扰RNA(siRNA-1、siRNA-2)及对照转染A549和H1299细胞,实验设siRNA-1转染组、siRNA-2转染组、阴性对照组和空白对照组。各组转染48 h后采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测各组细胞周期变化。 结果qRT-PCR结果显示,lncRNA GIHCG在肺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,同时非小细胞肺癌细胞系A549、H1299、H1650、H2087中lncRNA GIHCG的表达均高于16HBE细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后,与空白对照组和阴性对照相比,siRNA-1组和siRNA-2组细胞存活率明显下降,穿膜细胞数明显减少,G0/G1期细胞比例明显增加,S期细胞减少,差异均有统计学意义,而阴性对照组和空白对照组上述指标差异均无统计学意义。 结论lncRNA GIHCG高表达于NSCLC组织及细胞系中,沉默lncRNA GIHCG表达可明显抑制NSCLC恶性生物学表型。     

Effect of 5- AZn-2 ′-deoxycytidine on proliferation of human lung adenocarcinoma cell line A549 in vitro

ObjectiveTo explore effect of 5-AZn-2 ′-deoxycytidine on proliferation of human lung adenocarcinoma cell line A549 in vitro.MethodsSuperoxide dismutase (SOD) activity was measured by hydroxylamine colorimetric method. Inhibition effect of 5-AZn-2′ deoxycytidylic acid at different concentration and different time on growth of A549 cell was determined by MTT assay. Methylene dioxyamphetamine (MDA) was measured by thiobarbituric acid colorimetric method. Effect of 5-AZn-2′ deoxycytidylic acid on apoptosis of A549 cell was determined by Hoechst 33258 dyeing detection.Results5-AZn-2′ deoxycytidylic acid had significant inhibition effect on proliferation of A549 cells in vitro, and the inhibition was notably dependent on time and dosage during 48-72 h; SOD level was significantly lower than those of control group (P<0.05, P<0.01), MDA level was significantly higher than those in the control group (P<0.05, P<0.01). A549 cells began to be in apoptosis after using 5-AZn-2′deoxycytidylic acid.Conclusions5- AZn-2′ deoxycytidylic acid has significant inhibition effect on growth of A549 cell, and can lead the change of lipid peroxidation. It indicates that the mechanism has relationship with A549 cell cycle tissue and induction factor of apoptosis.     

浙贝母碱对肺癌A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用观察及机制探讨

目的观察浙贝母碱对肺癌A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用,并探讨其可能的机制。方法将对数生长期的细胞随机分成2组,对照组分别加入不同浓度的DDP,实验组在对照组基础上再加入400μg/mL的浙贝母碱;采用MTT法测算细胞增殖抑制率,计算两组细胞DDP的半数抑制浓度(IC50)及浙贝母碱的逆转倍数。将对数生长期的细胞分为3组,空白对照组不加任何药物,对照组加入DDP,实验组在对照组基础上再加入400μg/mL的浙贝母碱;药物作用48 h后,采用流式细胞术测算细胞凋亡率,用细胞免疫荧光法检测细胞中的人肺耐药蛋白(LRP)。结果实验组DDP的IC50为4.15μg/mL,对照组为15.46μg/mL,浙贝母碱的逆转耐药倍数为3.73。培养48 h后,空白对照组细胞凋亡率为2.56%±0.44%、LRP蛋白阳性细胞为(9.8±1.92)个/HP,对照组分别为为13.5%±1.42%、(9.2±1.9)个/HP,实验组为38.16%±2.25%、(5.8±1.3)个/HP;实验组与对照组、空白对照组比较,P均<0.05。结论浙贝母碱可逆转肺癌A549/DDP细胞株的多药耐药,其作用机制可能与其促进耐药细胞凋亡、下调LRP蛋白表达有关。     

铜绿假单胞菌注射液对肺癌A549细胞自噬及PI3 K/Akt通路的影响

目的探究铜绿假单胞菌注射液(PA-MSHA)对肺癌A549细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的影响。方法体外培养人肺癌A549细胞,随机分为空白对照组、LY294002组(加入20μmol/L LY294002),PA-MSHA干预组(加入0.5×10^9/mL、1.0×10^9/mL、2.0×10^9/mL PA-MSHA)。干预培养48 h后,MTT法检测各组细胞活性,平板克隆形成实验检测各组细胞增殖能力,透射电子显微镜观察各组细胞自噬情况,Western blot检测各组细胞中自噬相关蛋白p62、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ及PI3K/Akt通路相关蛋白PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt表达。结果与空白对照组相比,LY294002组、0.5×10^9/mL、1.0×10^9/mL、2.0×10^9/mL PA-MSHA组细胞增殖抑制率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显著升高(P<0.05),自噬体个数增加,细胞克隆形成率、p62、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达显著降低(P<0.05);与LY294002组相比,0.5×10^9/mL、1.0×10^9/mL PA-MSHA组细胞增殖抑制率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显著降低(P<0.05),自噬体个数减少,细胞克隆形成率、p62、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达显著升高(P<0.05);与0.5×10^9/mL、1.0×10^9/mL PA-MSHA组相比,2.0×10^9/mL PA-MSHA组细胞增殖抑制率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显著升高(P<0.05),自噬体个数增加,细胞克隆形成率、p62、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论PA-MSHA可能通过调控PI3K/Akt信号通路,促进肺癌A549细胞自噬,抑制细胞增殖。