中药金叶败毒制剂抗人巨细胞病毒感染的作用机制

目的 探讨中药金叶败毒制剂抗人巨细胞病毒(HCMV)感染的作用机制。方法 用HCMV AD169感染人胚肺成纤维细胞，采用MTT法观察细胞的增殖活性，应用半定量RT-PCR方法检测中药金叶败毒制剂和更昔洛韦(GCV)干预后感染细胞cyclinD1 mRNA及细胞周期素依赖激酶4(CDK4)mRNA的表达水平。结果 金叶败毒制剂和更昔洛韦能明显提高HCMV感染细胞cyclinD1及CDK4的表达。诱导G0／G1期细胞进入S和G2／M期。从而促进宿主细胞增殖。结论 金叶败毒制剂可能通过促进HCMV感染细胞cyclinD1及CDK4的表达。促进宿主细胞增殖而发挥抗病毒作用。     

重组人巨细胞病毒pp65蛋白与金叶败毒颗粒联合抗人巨细胞病毒效应

目的 比较重组人巨细胞病毒(HCMV)pp65蛋白与中药金叶败毒颗粒的抗HCMV作用并探讨二者间的关系.方法 用重组HCMV pp65蛋白刺激培养的人外周血单个核细胞,制备HCMV抗原特异性细胞毒T细胞,即pp65-CTL.分别将pp65-CTL、金叶败毒颗粒、pp65-CTL 金叶败毒颗粒、更昔洛韦作用于HCMV感染的人胚肺成纤维细胞(HEL),比较各组对HEL细胞病变的抑制作用,同时用RT-PCR法半定量检测作用前和作用不同时间点HCMV mRNA表达水平的变化.结果 pp65-CTL组在HEL细胞感染后72 h才开始出现少许细胞病变,有显著抗HCMV作用;pp65-CTL 金叶败毒颗粒组作用不同时间点对HCMV mRNA表达及HCMV所致细胞病变的抑制作用明显强于单一用药.结论 重组HCMV pp65蛋白刺激培养的pp65-CTL对HCMV有明显的抑制作用,与中药金叶败毒颗粒有显著的协同作用,可共同应用于HCMV活动性感染的治疗.     

金叶败毒及其拆方体外抗人巨细胞病毒的比较研究

人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)是引起先天性及围产期感染的重要病原，妊娠期HCMV活动性感染可以通过胎盘垂直传播，导致流产、畸形、死胎及新生儿神经系统和脏器损害。HCMV围产期感染的预防和治疗是国内外围产医学研究的热点之一。金叶败毒是由金银花、大青叶、鱼腥草及蒲公英提取后按一定比例混合组成的纯中药制剂，近年来研究表明金叶败毒具抗HCMV作用。为进一步了解拆方中以哪味中药起主导作用，并进一步探讨中药复方配伍的意义，     

更昔洛韦联合中药金叶败毒制剂体外抗人巨细胞病毒作用观察

目的：研究更昔洛节(GCV)联合中药金叶败毒制剂(JYBD)抗人巨细胞病毒(HCMV)感染的可能机制。方法：采用体外细胞培养技术建立HCMV感染细胞模型．应用GCV、JYBD及两药联用进行干预,采用定量RT-PCR法检测干预后不同时间感染细胞HCMV即刻早期基因IE72 mRNA的表达水平,观察感染细胞的病变情况,同时采用放射免疫法测定受染细胞TNF-α和IL-6的分泌水平。结果：JYBD与GCV对HCMV IE72 mRNA的表达以及HC-MV所致细胞病变有明显的抑制作用,降低受染细胞的TNF-α、IL-6的分泌水平,JYBD作用弱于GCV,2药联合作用最强。结论：GCV联合JYBD可通过促进细胞因子的分泌,调节免疫功能,具有良好的体外抗HCMV作用。     

中药金叶败毒制剂体外抗人巨细胞病毒作用观察

目的：研究中药金叶败霉制剂(JYBD)抗人巨细胞病毒(HCMV)感染的可能机制。方法：采用体外细胞培养技术建立HCMV感染细胞模型，应用更昔洛韦(GCV)和JYBD进行干预，采用定量RT-PCR法检测干预后不同时间感染细胞HCMV即刻早期基因IE86 mRNA的表达水平，观察感染细胞的病变进展情况，同时采用放射免疫法测定受染细胞细胞因子TNF-α和IL-6的分泌水平。结果：JYBD与GCV对HCMV IE86 mRNA的表达以及HCMV所致细胞病变有明显的抑制作用，降低受染细胞TNF-α、IL-6的分泌水平，JYBD作用弱于GCV。结论：JYBD可通过抑制HCMV IE基因的转录。促进细胞因子的分泌而发挥体外抗HCMV作用。     

抗病毒药物对HCMV感染的人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的 观察人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC304)细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)基因表达及抗病毒药物对ICAM-1表达的影响.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应技术动态检测HCMV感染的HUVEC304和更昔洛韦(ganciclovir,GCV)与膦甲酸钠(foscarnet sodium,PFA)干预受染的HUVEC304 ICAM-1 mRNA的表达.结果 常规培养的HUVEC304可表达ICAM-1;HCMV感染后4 h,ICAM-1 mRNA的表达开始增加(P＜0.05),6 h达高峰(P＜0.01),36 h表达水平开始下降,但仍高于正常细胞;GCV和PFA可抑制HCMV感染诱导的ICAM-1表达的上调(P＜0.05).结论 HCMV感染可引起ICAM-1 mRNA的表达增加;应用GCV和PFA可抑制HCMV诱导ICAM-1 mRNA的表达.     

中药金叶败毒制剂抗人巨细胞病毒感染作用机理的实验研究

目的探讨中药金叶败毒制剂拮抗HCMV感染的机理。方法采用体外实验的方法建立HCMV感染细胞膜型,给予金叶败毒制剂干预后,FQ-PCR法检测细胞内、维持液HCMV DNA拷贝数,放射免疫法测定TNF-α、IL-6蛋白含量,同时观察致细胞病变作用(CPE)的产生及传播,设立病毒对照组和更昔洛韦(GCV)药物对照组。结果分别于感染后24h、48h,实验组细胞内及维持液HCMV DNA拷贝数(5.35±0.581gGE/106HEL,2.78±0.32lgGE/106HEL)明显低于病毒组(6.12±0.65lgGE/106HEL,3.31±0.381gGE/106 HEL,P<0.05),持续至感染晚期,与药物对照组比较,感染晚期实验组细胞内病毒负荷量(7.97±0.81lgGE/106HEL)高于药物对照组(7.05±0.71lgGE/106HEL,P<0.05),但两者维持液内病毒量无明显差异(P>0.05)。分别于感染后12h、24h,实验组维持液TNF-α、IL-6蛋白含量(0.63±0.06pg/ml,38.26±4.19pg/ml)明显高于病毒组(0.55±0.04pg/ml,31.12±4.53pg/ml,P<0.05)和药物对照组(0.56±0.05pg/ml,32.40±4.97pg/ml,P<0.05),在感染后24～36h达高峰(P<0.01)。实验组和药物对照组CPE出现(感染后96h)均晚于病毒组(感染后48h),且发展缓慢,感染后168h仅为++,而病毒组则达到++++。结论金叶败毒制剂可有效抑制感染细胞内HCMV DNA复制及病毒自受染细胞内释放,并能促进     

金叶败毒颗粒对HCMV感染及母婴垂直传播的临床疗效研究

采用ELISA法筛查育龄妇女2320例及孕妇3488例血清中人巨细胞病毒（HCMV）IgM、IgG，并以IgM阳性者作为研究对象；采用RT－PCR技术检测孕中期脐血、羊水、孕晚期脐血中晚期HCMV－mRNA，检测胎儿先天性感染。采用金叶败毒颗粒、更昔洛苇治疗HCMV感染并与对照组（IgM自然转阴组）比较IgM转阴率及垂直传播率。结果表明：对育龄妇女金叶败毒颗粒治疗组、更昔洛韦治疗组其HCMV－IgM转阴率分别为81．32％、100％，明显高于对照组（48．08％），差异具有极显著意义（P＜0．001）；两治疗组之间差异无显著意义。对孕妇金叶败毒颗粒治疗组其HCMV－IgM转阴率为80．91％，明显高于对照组（39．81％），差异具有极显著意义（P＜0．001）；金叶败毒治疗组母婴传播率为19．64％，明显低于对照组（47．37％），差异具有显著意义（P＜0．05），。提示；金叶败毒颗粒是治疗HCMV感染安全、有效的药物，能降低胎儿先天性HCMV感染率，对孕妇HCMV感染具有独特的临床应用价值。     

中药金叶败毒颗粒对母乳中HCMV的阻断作用

推行母乳喂养是解决儿童健康问题的重要措施,世界卫生组织（WHO）要求在2000年母乳喂养率达到80％。但由于孕妇HCMV—IgM的检出率达6．97％,感染孕妇产后乳汁HCMV检出率达46．43％,该乳汁喂养的婴儿HCMV的感染率为53．85％C21,是导致婴儿病毒性肝炎、肺炎以及婴幼儿智力障碍的重要病因。本研究采用中药金叶败毒颗粒对HCMV活动性感染的妊娠晚期孕妇进行干预,以探讨金叶败毒颗粒对HCMV活动性感染孕妇产后母乳中HCMV的阻断作用。     

金叶败毒治疗妊娠期巨细胞感染36例临床分析

人巨细胞病毒(HCMV)宫内感染可导致流产、死胎、死产、听力障碍等并发症.因孕妇感染HCMV后,所产生的特异性抗体IgG,几乎不能起到保护胎儿的作用,故目前多认为HCMV是TORCH感染中对母儿危害最大的病毒.当前治疗HCMV感染首选更昔洛韦(GCV),但该药有致畸作用,孕妇禁用,据报道[1]金叶败毒(热毒清)可用于治疗早期HCMV感染,为进一步证实其治疗的有效性、安全性,我院进行了临床观察,现报告如下.     

巨细胞病毒感染致人脐静脉内皮细胞E选择素时序性的表达

目的：观察人类巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）作用于血管内皮细胞（vein endothelial cells,ECV）对E选择素时序性的表达,探讨HCMV感染致动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）发生和发展的可能机制。方法:用HCMV感染ECV,采用RT-PCR方法检测不同感染时段细胞E选择素mRNA及蛋白的表达。结果:HCMV感染ECV后,感染0h时E选择素mRNA有基础水平的表达,4h升高并达高峰,8h时开始回落,12h回落显著,24h回落更明显,与0h比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）,48h接近0h表达水平（P＞0.05）。结论:HCMV感染ECV后能够促进E选择素表达,并且呈时间依赖性。HCMV有可能通过上调E选择素的表达,介导ECV的炎症反应,促进AS的发生、发展。     

In vitro transmission of HCMV between fibroblasts and peripheral blood leukocytes in the presence of IL-4

We demonstrated transmission of human cytomegalovirus (HCMV) from the human lung fibroblast MRC-5 to peripheral blood leukocytes (PBLs). mRNA of the HCMV immediately-early (IE) antigen was detected in PBLs cultured with IL-2 or IL-2 + IL-4 that made direct contact with HCMV-infected MRC-5, whereas it was not detected in PBLs prevented from making cell-to-cell contact. However, mRNA of HCMV IE was not detected in PBLs cultured with IL-2 and IFN-gamma that made direct contact with HCMV-infected MRC-5. Transmission of the pp65 antigen was increased in culture medium containing IL-4. At a higher viral infection titer, cell-free HCMV infected adherent PBLs cells. The subset, which did not adhere, did not infect cell-free viruses even at a very high multiplicity of infection. Moreover, the adhered subset of PBLs infected with HCMV was able to transmit HCMV to non-infected fibroblasts. Our results suggest that cell-to-cell contact (when PBLs make direct contact with HCMV-infected cells) is important in the mechanism of HCMV transmission and that the adherent cells of PBLs are one of the most important vehicles for HCMV infection. Moreover, we suggest that type 2 cytokines such as IL-4 enhance the transmission of HCMV to PBLs.     

巨细胞病毒感染人脐静脉内皮细胞后RAGEmRNA的时序性表达及其意义

目的：研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响，探讨HCMV感染致动脉粥样硬化的作用机制。方法：用HCMV感染HUVEC，采用RT PCR方法检测不同感染时段细胞RAGEmRNA的表达。结果：HCMV感染HUVEC后，0?h时RAGEmRNA有基础水平的表达，4?h开始升高，8?h时表达水平明显升高，随感染时间延长，表达量逐渐增高，感染24?h时达高峰，48?h开始回落，72?h表达量仍维持在较高的水平，显著高于0?h。各时段与0?h比较，均有统计学意义(P＜0.01)。结论：HCMV感染人脐静脉内皮细胞后能够促进RAGE mRNA的表达，并且呈时间依赖性。HCMV有可能通过上调RAGE介导内皮细胞的炎症反应，促进动脉粥样硬化的发生、发展。     

人类巨细胞病地人胚肺细胞HOX基因表达的影响

应用半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术研究人胚肺（ＨＥＬ）细胞ＨＯＸ基因的表达状态及人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对ＨＥＬ细胞ＨＯＸ基因表达的影响。结果发现：ＨＥＬ细胞表达ＨＯＸＢ７基因;ＨＣＭＶ感染后,其表达上调;用全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）处理ＨＥＬ细胞,ＨＣＭＶ对ＨＯＸＢ７基因表达的上调作用更强。提示ＨＣＭＶ可能通过影响ＨＯＸＢ７基因的表达导致胚胎发育畸形。     

人类巨细胞病毒对人胚肺细胞HOX基因表达的影响

应用半定量RT PCR技术研究人胚肺 (HEL)细胞HOX基因的表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对HEL细胞HOX基因表达的影响。结果发现 :HEL细胞表达HOXB7基因 ;HCMV感染后 ,其表达上调 ;用全反式维甲酸 (ATRA)处理HEL细胞 ,HCMV对HOXB7基因表达的上调作用更强。提示HCMV可能通过影响HOXB7基因的表达导致胚胎发育畸形。 更多还原     

人巨细胞病毒和糖基化终产物共同作用对血管内皮细胞的影响

目的：观察人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）和糖基化终产物（advanced glycation end products, AGEs）共同作用对血管内皮细胞（vein endothelial cells，ECV）氧化应激的影响及对糖基化终产物受体（the receptor for advanced glycation end products, RAGE）表达的影响，明确HCMV和AGEs在致内皮细胞损伤作用中是否具有协同效应，探讨HCMV和AGEs致动脉粥样硬化 （AS）发生和发展的可能机制。方法：用HCMV和AGEs分别及共同作用于ECV，将实验对象分为：对照组、HCMV组、牛血清白蛋白（BSA）组、AGEs组、AGEs＋HCMV组5组；用激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧（ROS）的改变；采用RT-PCR方法检测血管内皮细胞RAGEmRNA的表达。结果：HCMV感染ECV后，对照组荧光强度和BSA组荧光强度均较弱，两组间比较差异无统计学意义（P>0.05）；AGEs组和HCMV组荧光强度强于对照组（P<0.01）；AGEs＋HCMV组荧光强度高于AGEs组和HCMV组（P<0.05），两者联合作用存在协同效应。对照组和BSA组ECV细胞RAGEmRNA均有低水平表达，两组之间比较无差异（P>0.05）；AGEs组和HCMV感染组RAGEmRNA表达量高于对照组（P<0.01）；AGEs＋HCMV组表达量高于AGEs组和HCMV组（P<0.01）。在相同病毒滴度感染的情况下，随AGEs浓度增加RAGEmRNA的表达增高，呈浓度依赖性；在相同AGEs浓度作用时，随HCMV感染滴度增加RAGEmRNA的表达水平升高，呈滴度依赖性。各组之间比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：HCMV和AGEs均能够增强血管内皮细胞氧化应激，促进RAGEmRNA的表达，两者共同作用时呈协同效应。HCMV和AGEs有可能通过协同增强氧化应激、进一步上调RAGEmRNA的表达，介导血管内皮细胞的炎症反应，促进动脉粥样硬化的发生、发展。     

临床低传代人巨细胞病毒株UL148开放阅读框mRNA的表达与鉴定

目的 研究广州地区人巨细胞病毒(HCMV)临床病毒株特有基因UL148的结构,分析其结构多态性与HCMV先天性感染致病的关系;研究UL148的表达情况,探讨其产物可能的功能及在致病机制中的可能作用.方法 采集广州地区新生儿HCMV感染患者尿液标本进行病毒分离培养,从分离的病毒株中提取病毒DNA,扩增鉴定UL148基因片段;TA克隆,基因测序;抽提病毒总RNA,用RT-PCR方法鉴定UL148基因mRNA表达情况.结果 成功分离到HCMV低传代临床株,获得UL148基因全序列.RT-PCR产物检测582 bp大小的特异性条带,证实了UL148基因mRNA的表达.结论 广州地区临床低传代HCMV分离病毒株存在UL148基因结构,证实UL148开放阅读框是具有mRNA水平表达的基因结构.     

地塞米松、二甲亚砜及低速离心对人巨细胞病毒复制的影响

本文报道低速离心、地塞米松和二甲亚砜对人类巨细胞病毒AD_(169)株在人胚肺细胞上增殖的影响。结果表明本法能使人类巨细胞病毒的细胞病变分别提前2～3天。地塞米松能增加人类巨细胞病毒AD_(169)株在人胚肺细胞上空斑形成能力约3倍。