人源McAb的研究进展

人源ＭｃＡｂ的研究进展微生物教研室周虹综述李晓眠审校１９７５年Ｍｉｌｓｔｅｉｎ和Ｋｏｈｌｅｒ将细胞融合法应用于免疫学领域建立了杂交瘤技术，并获得了能针对某一抗原决定簇的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。仅仅二十年，ＭｃＡｂ就由于它的高度特异性被广泛应用于医学研...     

布鲁氏菌McAb的研究 I.7株牛种布氏菌McAb的建立

Milstein和Kohler于1975年首创的单克隆技术已引起免疫学革命性的变化,从而推动了生物学各学科的深入发展。布氏菌单克隆技术迟于其他细菌工作,早是Hulman于1983年首次报道,国内哈尔滨兽医研究所亦于1984年报道了羊种布氏单克隆技术的研究工作,继有乌鲁木齐兽医与医学研究单位协作,也报道了建立杂交瘤株,并初步探讨了牛种布氏McAb对病牛的治疗。与此同时,为进一步提高布氏菌的诊断技术,我们也开展了这方面的研究,并建立了布氏菌杂交瘤细胞株。材料和方法一、骨髓瘤细胞:Sp2/0来源于中国药品生物制品检定所肝炎室保存株。二、免设小鼠脾细胞:以每毫升含1亿菌体的牛种布氏菌104M灭活菌液,注射于体重18～20克     

抗人IgG结合型Lambda McAb和抗人IgG McAb的鉴定

SP2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞和经人IgG的Fab抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,其融合率为97.22％。用微量ELISA和PHA试验检测抗体,筛出7个亚克隆杂交瘤细胞株,对其中的C31.10和C31.6株的鉴定结果为:用人IgG作抗原,两个McAb的PHA效价均为1∶16000～1∶32000,被动血凝抑制的抑制率随抗原量而增加,两者呈线性关系,证明它们对人IgG特异;用含2～3％PEG-6000的琼脂糖双扩散试验,C31.JoMcAb与IgG,Lambda型IgG1、IgG2、IgG3、IgG4及正常人血清呈阳性反应,但不与IgA、IgM、IgD、     

应用抗肿瘤McAb3D5和抗CEA McAb对肺癌的免疫组化研究

应用抗肿瘤单克隆抗体McAb 3D5和抗CEA单克隆抗体,对101例肺癌手术切除标本,作免疫组织化学研究。结果表明,抗肿瘤单克隆抗体McAb 3D5可与63.4%的肺癌标本反应,且对肺鳞癌有较高的阳性率。抗CEA单克隆抗体可与77.2%的肺癌起反应,特别对肺腺癌有较高的阳性率。两种单克隆抗体不具相同抗原性,联合应用时可提高阳性率。     

弓形虫McAb的制备和鉴定

弓形虫是一种人兽共患病的病原寄生虫,是一级实验动物必须检测的项目之一。目前最常用的检查方法是检测血清抗体。抗原检查应该是最直接、直观的手段,但是直接涂片、饱和盐水漂浮和动物接种等方法或检出率低或步骤繁琐。制备制异性的ＭｃＡｂ,用于弓形虫抗原检测是这个研究的出发点。我们通过小鼠腹腔繁殖弓形虫速殖子,利用Ｇ２砂蕊漏斗过滤,提纯速殖子,反复冻融及超声波粉碎,制备可溶性抗原。常规方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,免疫剂量为１００μｇ／只,取免疫后小鼠脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合,间接ＥＬＩＳＡ法筛选,有限稀…     

McAb—BA—ELISA及McAb—ELISA检测青霉素特异IgE及其评价

用单克隆抗体及生物素与亲和素，建立了ＭｃＡｂ－ＢＡ－ＥＬＩＳＡ（单克隆抗体－生物素亲和素－酶联免疫吸附试验）和ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ（单克隆抗体酶联免吸附试验），用于检测Ⅰ型青霉素过敏患者中，ＢＰＯ－Ｓｐｅｃ－ＩｇＥ阳性率为４５％，ＢＰＯ－Ｓｐｅｃ－ＩｇＥ阴性者中，用ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测ＢＰＥ－Ｓｐｅｃ－ＩｇＥ与６－ＡＰＡ－Ｓｐｅｃ ＩｇＥ，阳性率分别为１２．５％及３５．０％，总阳性率为９２．…     

日本血吸虫McAb的初步研究

用BALB/C小鼠骨髓瘤细胞X63-Ag8-653与感染日本血吸虫尾蚴20条后25～80天的同种小鼠脾细胞进行细胞杂交,获得了能产生特异性抗体的杂交瘤;杂交的成功率达到50％～100％。实验表明,童虫或成虫冰冻切片的间接荧光抗体试验是筛选杂交瘤分泌的特异抗体的简易而有效的方法。童虫的荧光反应类型不明显;但在成虫切片上,发现至少有3种不同     

CD3McAb、CD28McAb、CpG ODN刺激PBMC活化的研究

目的　为肿瘤生物治疗寻找高效、安全的效应细胞。方法　采用CD3 单克隆抗体与CD2 8单克隆抗体及CpGODN共刺激外周血单核细胞活化增殖。对增殖细胞的增殖量、剂量依赖性与细胞表型进行测定。结果　单用CD3 单克隆抗体和小剂量的IL - 2就可以引起PBMC有效扩增 ,CD2 8单抗可提供协同刺激信号 ,使PBMC扩增达到最高。而CpGODN亦可提供第二信号 ,但较CD2 8单抗为弱。CD2 8协同扩增呈剂量非线性相关型 ,而CpGODN则为剂量正相关。表型测定表明共刺激细胞中NK细胞比率明显增高 ,分别达到 33.1 0 %± 1 3.82 % (CD3 CD2 8) ,2 9.5 0 %± 1 3.2 0 % (CD3 CPGODN) ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。同时 ,CD4 CD8 T细胞比值发生倒置。结论　CD2 8、CpGODN均能协同CD3 单抗诱导PBMC活化增殖 ,CD2 8单抗激活无剂量线性相关 ,而CpGODN激活有剂量正相关。激活的细胞是以NK细胞、CD4 CD8-、CD4- CD8 T细胞为主体的异质细胞群。     

抗人IgA McAb的鉴定

用人IgA免疫BALB/C小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP 2/0-Ag 14融合,测定99个融合孔,抗体阳性者10孔。其中2个经克隆获得代表株39-1,2-9。对后者所分泌的McAb及杂交瘤细胞免疫小鼠的腹水,进行了特异性和纯度鉴定。被动血凝抑制试验证明,2个McAb均可被抗原IgA所抑制,抑制率与抗原量成正比;用含2％PEG-6000的琼脂免疫双扩散试验,39-1McAb和免疫抗原IgA产生一条沉淀线,     

McAb-ELISA检测血吸虫循环抗原——Ⅰ.McAb的制备、筛选及初步试验

将感染日本血吸虫或曼氏血吸虫尾蚴的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,制备了30余株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,其靶抗原分别为血吸虫成虫表面膜、肠道、体细胞和虫卵。预试验结果表明,抗血吸虫成虫肠道多糖抗原McAb活性最强,将其用于夹心ELISA检测血吸虫成虫三氯醋酸可溶性抗原,敏感度达1ng/ml。用夹心ELISA测定正常兔血清呈阴性反应;测定感染兔血清呈阳性反应,且抗原水平与感染度呈正相关;8只感染兔治疗后3个月,除2份兔血清外,其余血清均转为阴性。提示本方法优于一般抗体测定法,是一种有潜力的免疫诊断方法。     

胱抑素C的IgG-和IgY-ELISA检测体系的建立与评价

目的建立适用于检测人胱抑素C（Cystatin C）的IgG与IgY双抗体夹心ELISA检测体系。方法以人Cystatin C作为抗原免疫产蛋的罗曼鸡和新西兰兔,纯化抗Cystatin C的鸡抗体IgY和兔抗体IgG,并分别建立三种ELISA夹心检测体系,I：捕捉抗体IgG＋检测抗体IgY＋抗鸡IgY酶标抗体;Ⅱ：捕捉抗体IgG＋检测抗体IgY＋兔F（ab＇）2抗鸡酶标抗体;Ⅲ：捕捉抗体IgY＋检测抗体IgG＋抗兔IgG酶标抗体。通过比较Cystatin C的最低检测浓度和阴性对照的OD值评价三种夹心法的灵敏度和特异性。结果体系I的Cystatin C最低检测浓度为7.5ng/mL（阴性对照OD值为0.737）,体系Ⅱ的Cystatin C最低检测浓度为13ng/mL（阴性对照OD值为0.313）,体系Ⅲ的Cystatin C最低检测浓度为10ng/mL（阴性对照OD值为0.31）。结论成功建立了Cystatin C的双抗体夹心ELISA检测体系,体系I的灵敏度最高但其特异性差,体系Ⅱ和Ⅲ的检测灵敏度和特异性均较好,可以用于Cystatin C的检测。     

抗Sj14-3-3特异性IgY的制备及其诊断日本血吸虫病循环抗原的价值

目的制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值。方法利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清。探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值。结果成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6%和48.4%,正常人血清的阴性率为94.7%;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%。结论建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断。     

循环抗原及血清抗体的联合检测诊断日本血吸虫病

目的探讨日本血吸虫信号蛋白14-3-3(Sj14-3-3)在血吸虫病免疫诊断中的价值。方法制备并纯化抗重组日本血吸虫信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)的单抗和多抗,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA);以纯化的rSj14-3-3建立间接ELISA,分别比较该两种方法以及两种方法联合检测对于急、慢性血吸虫病患者免疫诊断的特异性和敏感性。结果利用双抗体夹心ELISA、间接ELISA和联合检测3种方法检测急性患者血清70例,敏感性分别为72.9%、75.7%和91.4%;检测慢性患者血清110例,敏感性分别为46.4%、61.8%和82.7%;检测正常人血清100例,特异性分别为96%、92%和92%;吡喹酮治疗后患者血清161份,其中急性治疗后1年以内转阴率分别为50%、38.9%和33.3%;慢性治疗后1年内分别是76.4%、55.6%和43.1%;慢性治疗后2年以上分别为93.0%、83.0%和78.9%。3种方法检测华支睾吸虫病、钩虫病的交叉反应性分别为0%、15.6%和15.6%,8.7%、19.6%和21.7%。3种方法的敏感性、与华支睾吸虫感染者血清交叉反应、慢性治疗1年内及慢性治疗2年以上患者血清的转阴率差异具有显著性(P<0.05),而特异性、与钩虫感染者血清交叉反应及其他化疗后患者血清的转阴率差异无显著性(P>0.05)。结论循环抗原Sj14-3-3和抗体联合检测在日本血吸虫病免疫诊断中具有潜在的临床应用价值。     

Detection of a circulating SJ 70 antigen in human schistosomiasis japonica using a monoclonal antibody

A double antibody enzyme-linked immunosorbent assay (sandwich ELISA) was used for detection of a circulating antigen from human Schistosoma japonicum infections. This assay involves the use of poly clonal rabbit anti-schistosoma japonicum soluble egg antigen (SEA) antiserum to bind circulating antigen and a monoclonal antibody (MCAb-H4) to identify and quantify this antigen. Sera from 108 S. japonicum infected patients (acute and chronic) were tested. Sera from 93 of 95 (98%) patients with chronic infection were positive for this antigen; sera from 12 of 13 patients (93%) with acute infections were also positive. Antigen was not detectable in control human sera. Sera from 35 chronic schistosomiasis patients were collected between 6 and 12 months after paraziquantel treatment. Circulating antigen was not detectable in the sera from 33 of these patients (94%) and was dramatically reduced in the other two patients.     

用ELISA考核吡喹酮治疗家兔血吸虫病疗效的实验研究

以吡喹酮治疗实验性日本血吸虫病家兔,观察治后一年内ELISA 所测得的血清抗体水平的变化,以验证其是否可作为考核疗效的方法。结果表明:凡试验结束时解剖检虫阴性的病兔,ELISA 皆于治后8～12月内阴转,仅有雄虫 1条的病兔,亦于同期内阴转;凡检出雌雄成虫的病兔,ELISA 呈持续阳性。     

Detections of HFRS Virus Antigen and Antibody by a McAb ELISA Indirect Sandwich Method

An ELISA indirect sandwich method using monoclonal antibodies(McAb)against hem-orrhagic fever with renal syndrome(HFRS)virus has been developed fordetections of HFRS virus antigen and specific antibody.Dynamic changes of HFRS virusantigens in the cells infected and their culture supernatants were observed by indirectfluorescence-antibody technique(IFAT)and ELISA separately.It was shown that HFRSvirus antigens in the cells and in the supernatants peaked separately 8 days and 14 daysafter infection.A hundred and seventy-nine brain and lung specimens of suckling miceinfected were examined by ELISA and IFAT.The positive rates were 72.1% and 68.2%,respectively.Furthermore,the IgM antibodies of 121 sera from HFRS patients wereexamined by ELISA and IFAT.The positive rates were 90.1% and 83.5% respectively.The IgG antibodies of 178 sera from HFRS patients were also examined by the twomethods,and both of the positive rates were 89.3%.The antibody titer measured byELISA was higher than the titer by IFAT.The above results suggest that the ELISA is aspecific and sensitive method and can be used for early diagnosis,epidemiologicalsurveillance and etiological study of HFRS.     

抗炭疽PA15单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立

目的:制备抗炭疽保护性抗原15(protective antigen,PA15)单克隆抗体,初步建立双抗体夹心ELISA检测炭疽感染者血清中的保护性抗原?方法:以纯化的PA63蛋白为免疫原免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度,间接ELISA?Western blot?免疫沉淀(IP)和蛋白质谱分析单抗特异性,并建立双抗体夹心ELISA检测方法?结果:制备了2株抗PA15单克隆抗体,命名为3D7和8E9?SDS-PAGE电泳可见抗体的重链和轻链,间接ELISA?Western blot发现单抗3D7和8E9可与PA15?PA63特异性结合,IP和蛋白质谱分析发现单抗3D7可与PA83特异性结合,双抗体夹心ELISA方法检测炭疽感染血清中保护性抗原的最低检出浓度为16 ng/ml?结论:成功制备了抗PA15单克隆抗体,并建立了双抗体夹心ELISA方法检测炭疽感染血清中的保护性抗原?     

囊尾蚴循环免疫复合物检测在脑囊尾蚴病诊断中的价值

目的: 探讨囊尾蚴循环免疫复合物检测在脑囊尾蚴病诊断中的价值。方法: 用ELISA法检测109例脑囊尾蚴病患者血清抗原、抗体及循环免疫复合物。结果: 在109例标本中,检出囊尾蚴抗原阳性率33.03%,抗体阳性率68.81%,循环免疫复合物阳性率47.71%。在52例循环免疫复合物阳性标本中,12例囊尾蚴抗原和抗体均为阴性。结论: 检测循环免疫复合物有助于提高脑囊尾蚴病的诊断率。     

Vertical Transmission 0f Schistosoma Japonicum in the Rabbit

Summary: The aim of the present study was to confirm observations on the vertical transmissionof Schistosoma japonicum in the rabbit. S. japonicum-infected pregnant rabbits were used in thisstudy. Perfusion of mother rabbits was done 9 weeks after infection in order to obtain worm bur-dens in relation to their initial cercarial dose. Anti-schistosoma specific IgM antibodies in serumsamples collected from rabbit kittens were detected by ELISA. Our results showed that gestationperiod lasted the normal 29-31 days. All the exposed mother rabbits became infected with S.japonicum. Positive IgM antibody OD values were detected in 12 out of the 60 kittens examined(20.0 %). In group C and A, 40. 0 % and 17.9 % of the kitten were congenitally infected, re-spectively. 18. i % of the kittens born to mothers infected with a single dose of 200 cercariae perrabbit were positives; this is not significantly different from that obtained for the 600 dose group(22.2 %). Three randomly selected IgM+ kittens harbored between one and two adult worms.The livers of these kittens displayed granulomatous lesions. It is concluded that congenital S.japonicum infection does occur in the rabbit and is affected by the mother stage of pregnancy andto a lesser extent by its infection load.