RNA干扰与基因功能研究

去除或降低某个或某些基因在细胞或机体中的表达 ,是研究正常基因的结构、功能、疾病的发病机制的重要手段。进行这类研究 ,需要在遗传学和分子生物学上有易于控制的实验体系。比如基因敲除 (ｋｎｏｃｋｏｕｔ)或基因表达降低(ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ)等方法就成功地对许多特殊基因在生理或病理状态下的功能进行了研究。但这些基础方法操作比较复杂 ,费时费力 ,对靶基因的选择有很大的局限性。显性阴性(ｄｏｍｉｎａｎｔｎｅｇａｔｉｖｅ)和反义法 (ａｎｔｉｓｅｎｓｅ)是对以上方法的补充 ,但仍然具有结果不稳定 ,无法预知实验效果等缺点。因此…     

RNA干扰

RNA干扰(RNA interference,简称RNAi)现象是指,当与内源性的mRNA编码区某段序列同源的双链RNA(dsRNA)导入细胞后,该mRNA发生特异性的降解,导致该基因表达沉寂。它是生物界一种古老而且进化上高度保守的现象,由于它的简单性和快速性以及高特异和高效率的特点,已被广泛用于基因功能研究、基因治疗、和新药研究与开发等方面。     

RNA干扰技术

在基因治疗领域里，继反义RNA、核酶和三链DNA技术之后，现在又掀起了RNA干扰技术，这项技术在2002年度里荣登美国著名“科学”杂志评选出的世界十大科技进展之榜首，现将有关RNA干扰技术作一介绍。     

哺乳动物RNA干涉及治疗研究进展

RNA干涉是双链RNA介导的序列特异性的转录后基因沉默机制。自2000年发现哺乳动存在RNA干涉以来，RNA干涉作为基因沉默的一个工具，已广泛用于哺乳动物基因功能和基因治疗研究。笔者介绍了哺乳动物体外RNA干涉研究概况，重点综述了哺乳动物体内RNA干涉及利用RNA干涉进行基因治疗方面的研究进展。     

RNA干扰技术在抗病毒性疾病中的应用

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是多种生物体内由双链RNA介导的同源mRNA降解现象.它首先是在1990年由Jorgensan R等[1]在矮牵牛花的研究中发现的.他将紫色色素合成酶基因导入矮牵牛花以加深花色,结果不仅未加深颜色,反而使许多花呈现杂色甚至白色.Jorgensan 把这种现象称为“共抑制”（Cosuppression）.     

微RNA在肝癌中的研究进展

肝细胞癌(肝癌)的发展经过多个步骤,涉及到遗传和表观遗传变化。除遗传和表观遗传机制,微RNA(miRNA)通过肿瘤相关-基因的转录后调节在肝癌发生中起重要作用。miRNA是一类内源性非编码RNA,在肝癌中具有癌基因、抑癌基因、肿瘤干细胞以及肿瘤转移调节器的作用,与肝癌的发生、发展、治疗及预后等密切联系。探究miRNA在肝癌及其微环境的作用,将会为肝癌发生、发展以及治疗等带来巨大的影响,为肝癌的治疗提供新的靶向目标。     

质粒介导的RNA干扰对AD293细胞中HBcAg表达的抑制作用

目的:研究质粒介导的RNA干扰效应对HBcAg基因表达的抑制作用.方法:设计并构建针对HBcAg基因的小发夹RNA表达载体,将构建好的shRNA表达载体和HBcAg-增强型绿荧光蛋白融合蛋白表达载体共转染人胚肾细胞株AD293,以空载体组以及针对无关序列的shRNA表达载体组为阴性对照,流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测RNAi的抑制效果.结果:构建的特异性shRNA表达载体可以抑制HBcAg基因在AD293细胞中的表达,流式细胞仪检测抑制率可达76%,实时荧光定量PCR 法检测HBcAg基因的mRNA,抑制率可达58.6%.结论:质粒介导的RNAi可以有效抑制HBcAg基因的表达,为利用RNAi进行抗乙型肝炎病毒复制研究提供了一个可供选择的方法.     

RNA干扰技术的原理与应用

RNA干扰作用(RNA i)是通过双链RNA(dsRNA)引发的转录后基因沉默机制。RNA i主要是指dsRNA分子进入细胞内,特异性降解与之同源的mRNA,从而特异高效地抑制相应基因表达活性的现象。近年来,RNA i以其高特异性、高效性等显著优势已成为研究基因功能的新手段,在功能基因组学、基因表达调控机制研究等领域得到了广泛的应用。在此对RNA干扰技术的发展历程、作用机制、作用特点及应用前景予以综述。     

RNA干扰技术在哺乳动物中的应用

RNA干扰技术已被广泛应用于线虫、植物和果蝇的基因功能分析中.随着Dicer酶和siRNAs的发现,人们已经能够利用人工合成的siRNAs,或转染siRNAs的表达载体来诱发哺乳动物细胞特定基因的抑制以及将上述方法应用于整体实验中,证明整体哺乳动物也存在RNA干扰现象.     

RNA干扰技术及其在神经病学中的研究进展

RNA干扰(RNAi)是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象,其机制是通过阻碍特定基因的翻译或转录来抑制基因表达。微RNA(miRNA)在哺乳动物的大脑的不同区域具有不同的作用,并且RNAi在大脑的发育过程中具有重要的作用,miRNA具有调控多种目的基因表达的功能。由于神经元一旦受到损害就很难恢复正常的特性,目前RNAi被认为是治疗和改善神经变性疾病最有潜力的的技术。目前治疗性RNAi已运用于多种神经退行性疾病的体内和体外研究当中(如遗传肌张力障碍、阿尔茨海默病等),但其运用于临床治疗仍需进一步的研究。     

RNA干扰技术在器官移植免疫中的研究进展

人们早就发现随着细胞内转入基因拷贝数目的增加,其表达水平随之降低,同时内源性同源基因也被转入的基因所抑制。目前已阐明这种抑制的主要机制就是RNA干扰(RNA interference,RNAi),现在认为RNAi是一种原始的细胞免疫机制和基因表达的调控机制,对于维持生物体基     

RNA干扰-转录后水平的基因沉默

随着人类基因组计划的初步完成,生命科学也随之进入后基因组计划的时代.在各种研究基因功能的方法中,RNA水平使目的基因沉默无疑是目前研究的新点和热点,特别是双链RNA(dsRNA)介导的转录后水平的基因沉默(PTGS),更是快速关闭基因的途径,目前在植物、线虫、果蝇和小鼠早期胚胎中均有发现和证实.这一现象的发现和应用将有助于基因功能及其在信号传导、病毒抵御机制等方面的研究,并有可能开创基因治疗的新模式.     

微小RNA在免疫调节中的作用研究进展

微小RNA(miRNA)是一类新发现的内源性非编码RNA分子,能在转录后水平调控基因的表达.研究证实,miRNA在细胞增殖、发育、分化、凋亡、代谢、信号转导以及肿瘤发生中发挥重要的调节作用.近年来,一系列的miRNA已被证实参与了免疫反应调控,如固有性免疫应答,T、B淋巴细胞的分化,病原体感染与免疫及炎症的免疫调控等.文中就miRNA在固有性与获得性免疫应答中的调控作用作一综述.     

RNA干扰靶向沉默FLIP基因对卵巢癌细胞A2780生物学特性的影响及生长抑制作用

目的探讨靶向FLIP基因的小干扰RNA（siRNA）对人卵巢癌细胞A2780生物学特性的影响及生长抑制作用。方法设计并体外化学合成FLIP序列特异性双链RNA,在脂质体（LipofectamineTM2000）介导下转染人卵巢癌细胞株A2780。采用半定量RT-PCR和Western blot法检测FLIP siRNAs转染前后A2780细胞FLIP基因mRNA和蛋白表达的变化,并筛选出抑制作用最强的FLIP-siRNA。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、Annexin-V-PI双染法流式细胞术（FCM）分别检测FLIP-siRNA转染对A2780细胞的生长抑制作用和对凋亡的影响。结果特异性FLIP-siRNAs片段能有效降低A2780细胞中FLIP的 mRNA和蛋白水平（P＜0.01）,最大抑制率分别为77.4％和66.1％;转染FLIP-siRNA后,A2780细胞的生长活力明显下降（P＜0.05）,RNA干扰组的细胞凋亡也显著增加（P＜0.05）。结论靶向FLIP基因的siRNAs可在转录和翻译水平抑制FLIP基因表达;并可抑制卵巢癌A2780细胞生长,促进其凋亡。     

活细胞RNA成像技术及其在生物医学中应用研究进展

RNA可与各种核酸及蛋白质相互作用,在多种生理和病理过程中发挥重要的调控作用,其生物学过程高度动态。追踪活细胞中的RNA动态对理解基因表达的时空调控以及RNA的调控功能至关重要。基于荧光蛋白的RNA标记系统包括MS2/MCP系统、PP7/PCP系统、boxB/λN22和CRISPR-Cas系统等,其中MS2/MCP系统目前应用最为广泛,其具有结合稳定、信噪比高等优点,局限性是RNA成像的实现需要对靶RNA进行基因编辑,这可能导致靶RNA特性的潜在改变。近期开发的CRISPR-dCas13系统不需要对RNA进行改造,但其局限性在于CRISPR RNA效率的不确定性,且信噪比较低。基于荧光染料的RNA标记系统包括分子信标和荧光基团-适体对,其中分子信标具有高特异性和较高信噪比,而荧光基团–适体对Pepper系统和Mango系统在RNA成像的信噪比上更具有优势,但也需要对靶RNA进行基因编辑。活细胞RNA成像技术可应用于观察并研究RNA转录、剪接、转运、翻译（特指信使RNA）和亚细胞定位,有助于研究细胞分化等生物学过程以及细胞适应外界环境时的转录调控机制,有利于理解RNA行为异常导致的各种疾...     

Lnc RNA GAS 5在恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA GAS 5（Lnc RNA GAS 5）是一类非转录翻译蛋白的长片段RNA,片段大小一般>200bt,在许多恶性肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭和浸润中发挥着重要的作用。目前研究者们认为长链非编码RNAs不仅只有转录功能,还能调控下游基因的表达或被上游基因调控表达,从而发挥着癌基因或抑癌基因的作用。目前对Lnc RNA GAS 5的作用机制仍不十分清楚,本文对Lnc RNA GAS 5在各种恶性肿瘤中的作用的最新研究进展进行综述,明确其作用并总结可能的机制。