软脂酸对美吡哒刺激的大鼠胰岛β细胞功能的影响

目的:观察软脂酸对美吡哒刺激的鼠胰岛β细胞功能的影响。方法:以0、0.25、0.5、1.0mmol/L软脂酸原代培养SD大鼠胰岛细胞,在24、72、120小时测定上清胰岛素、细胞内胰岛素、甘油三酯含量。结果:不含软脂酸组上清中胰岛素、细胞内胰岛素、甘油三酯含量差别无统计学意义;余各浓度组及各时间组差别有统计学意义。结论:在体外软脂酸抑制美吡哒刺激的鼠胰岛β细胞功能;脂毒性可能是磺脲类药物作用失效的重要原因之一。     

利拉鲁肽对人HepG2肝细胞脂代谢的影响及作用机制

目的:建立HepG2肝细胞脂肪变性模型,了解利拉鲁肽是否可改善HepG2细胞内脂代谢状态,并对相关机制进行初步探讨?方法:软脂酸钠诱导建立HepG2肝细胞脂肪变性模型,并给予利拉鲁肽干预?油红O染色确定HepG2肝细胞脂肪变性模型的建立?Western blot检测HepG2 中脂质合成和分解关键酶蛋白水平的变化情况及HepG2 中PI3K信号通路活化情况?采用PI3K信号通路抑制剂预处理HepG2 细胞,观察PI3K信号通路在软脂酸钠诱导建立HepG2肝细胞脂肪变性中的作用?结果:油红O染色结果显示模型建立成功?Western blot结果显示,软脂酸钠诱导可显著升高HepG2中固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein1c,SREBP1c)?脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)的蛋白水平,降低脂肪甘油三酯脂酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)的蛋白水平(P < 0.01),并上调HepG2中PI3K信号通路活化水平;与软脂酸钠组相比,利拉鲁肽干预可显著降低HepG2中SREBP1c?FAS 的蛋白水平,升高ATGL的蛋白水平,并抑制HepG2中PI3K信号通路活化水平;阻断HepG2中的PI3K信号通路后,软脂酸钠诱导HepG2脂肪变性的能力显著降低(P < 0.01)?结论:利拉鲁肽可通过调节HepG2中的PI3K信号通路,进而改善HepG2细胞的脂代谢情况?     

软脂酸对美吡哒和高糖刺激大鼠胰岛β细胞功能抑制作用的研究

目的 观察软脂酸对美吡哒和高糖刺激的大鼠胰岛细胞β细胞功能的影响。方法 以0、0．25、0．5、1．0mmol/L软脂酸原代培养SD大鼠胰岛细胞,在24h、72h、120h测定上清胰岛素、葡萄糖浓度及细胞内胰岛素。结果 在不同培养时间不合软脂酸组上清中胰岛素、葡萄糖及细胞内胰岛素含量差别无统计学意义（P〉0．05）;而含软脂酸组随软脂酸浓度增加和培养时间延长,胰岛素分泌量、葡萄糖利用量和细胞内胰岛素含量逐渐减少（P〈0．05）。结论 在体外软脂酸抑制了美吡哒和高糖刺激的大鼠胰岛β细胞功能,这种抑制作用与胰岛细胞本身胰岛素抵抗相关。     

软脂酸对体外原代培养大鼠胰岛细胞凋亡作用的实验研究

目的 观察软脂酸诱导体外原代培养胰岛细胞的凋亡，初步探讨软脂酸在2型糖尿病发病中的机制。方法 应用分离的体外单层培养SD大鼠胰岛细胞，与不同浓度软脂酸(分别为0、0．125、0．250、0．500mmol／L)共同孵育48h，用放免法测定培养液中胰岛素含量，PI／Hoechst33342双染法荧光显微镜观察胰岛细胞凋亡的形态变化。结果 0．250、0．5mmol／L软脂酸可抑制高糖刺激下的胰岛素分泌，促进胰岛细胞的凋亡。结论 软脂酸可诱导胰岛细胞凋亡，凋亡程度与游离软脂酸浓度有关。     

白藜芦醇对高糖高脂处理的原代人脐静脉血管内皮细胞E-选择素表达及NO分泌的影响

目的：探讨白藜芦醇对高糖、高脂培养人原代脐静脉血管内皮细胞E-选择素mRNA表达及胰岛素刺激的一氧化氮（NO）分泌的影响。方法：原代培养人脐静脉内皮细胞,以0．1μmol／L白藜芦醇预处理4h后,以高糖（33．3mmol／L葡萄糖）＋高脂（棕榈酸0．5mmol／L）DMEM培养基培养24h,以RT—PCR法检测培养细胞E-选择素的表达。部分细胞经100nmol／L胰岛素刺激25min后,以硝酸还原酶法检测培养上清NO的含量。结果：与正常对照组相比．高糖高脂培养使内皮细胞E-选择素的表达升高,同时胰岛素刺激的NO分泌降低。而白藜芦醇预处理可以明显降低E-选择素的表达,并明显促进胰岛素对内皮细胞NO分泌的刺激作用。结论：白藜芦醇可以改善高糖、高脂诱导的血管内皮细胞胰岛素刺激的NO分泌作用,并可降低E-选择素表达,保护内皮细胞的功能,从而可能在糖尿病动脉粥样硬化的防治中具有广阔的前景。     

内质网应激在软脂酸钠诱导的脂肪变性L02肝细胞凋亡中的作用

目的 观察内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）蛋白在软脂酸钠诱导的脂肪变性L02肝细胞凋亡过程中的改变,探讨ERS与脂变肝细胞凋亡的关系。方法用软脂酸钠（饱和脂肪酸）诱导建立L02肝细胞脂肪变性模型。将细胞分为正常对照组和实验组(软脂酸钠72 μmol/L)。MTT法筛选软脂酸...     

白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制

研究白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制。采用MTT检测细胞增殖情况,活性氧试剂盒分析细胞内ROS水平;流式细胞术观察细胞凋亡和细胞周期的变化。Western blot检测凋亡相关蛋白以及相关通路蛋白表达。结果表明,经不同药物浓度处理,白藜芦醇可以诱导DU145细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于G₀/G₁期,提高细胞内ROS水平,降低细胞内线粒体膜电位水平,并呈剂量依赖性。白藜芦醇通过上调Bax蛋白的表达和抑制Bcl-2蛋白表达,促使Bax/Bcl-2比值升高,激活Caspase级联反应从而诱导细胞发生凋亡。进一步研究发现白藜芦醇可以升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位水平,从而通过线粒体途径诱导DU145细胞发生凋亡。因此,白藜芦醇可能通过ROS-线粒体途径诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡。     

白藜芦醇诱导白血病KG-1细胞凋亡及对其细胞周期的影响

目的：探讨白藜芦醇诱导人白血病细胞株KG-1细胞凋亡的作用。方法：以不同浓度的白藜芦醇作用KG-1细胞,用噻唑蓝（MTT）比色法分析细胞生长状态;透射电镜观察KG-1细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术（FMC）测定细胞凋亡率和细胞周期分布。结果：白藜芦醇可明显抑制KG-1细胞增殖（P〈0．05）,与对照组比较,白藜芦醇作用后,KG-1细胞发生S期阻滞（P〈0．01）,且细胞凋亡率增高（P〈0．01）。结论：白藜芦醇能明显抑制KG-1细胞增殖,使细胞周期阻滞在S期。并能进一步诱导其凋亡。     

白藜芦醇抑制HepG2细胞生长和对细胞间隙连接通讯的影响

目的研究白藜芦醇对人肝癌细胞HepG2的生长抑制作用以及对细胞间隙连接通讯（GJIC）的影响。方法利用MTT法观察白藜芦醇对HepG2细胞的生长抑制作用。流式细胞仪检测细胞周期的时相分布，使用荧光探针5＇-CFDA／AM标记细胞．采用荧光漂白后重恢复技术（FRAP）和共聚焦显微镜技术观察白藜芦醇对HepG2细胞间隙连接通讯的影响。结果不同浓度的白藜芦醇处理细胞不同时间后，HepG2细胞的生长增殖明显受到抑制，抑制率最高达92．1％，各处理组间比较均有显著性差异（F=18．532，P〈0．05）；细胞周期分析显示，白藜芦醇能诱导HepG2细胞在S期停滞．抑制细胞DNA的合成并可诱导细胞凋亡：另外，白藜芦醇有恢复HepG2细胞间隙连接通讯的功能，且随浓度增加而增加。结论白藜芦醇可抑制HepG2细胞增殖，使细胞停滞于S期，并能诱导细胞凋亡；白藜芦醇还有恢复HepG2细胞间隙连接通讯功能的作用，提示此作用可能是白藜芦醇抑制HepG2细胞增殖和抗肿瘤作用的机制之一。     

软脂酸对体外原代培养大鼠胰岛细胞凋亡作用的实验研究

目的观察软脂酸诱导体外原代培养胰岛细胞的凋亡,初步探讨软脂酸在2型糖尿病发病中的机制。方法应用分离的体外单层培养SD大鼠胰岛细胞,与不同浓度软脂酸(分别为0、0.125、0.250、0.500mmol/L)共同孵育48h,用放免法测定培养液中胰岛素含量,PI/Hoechst33342双染法荧光显微镜观察胰岛细胞凋亡的形态变化。结果0.250、0.5mmol/L软脂酸可抑制高糖刺激下的胰岛素分泌,促进胰岛细胞的凋亡。结论软脂酸可诱导胰岛细胞凋亡,凋亡程度与游离软脂酸浓度有关。     

体外丹酚酸B改善四环素致脂肪肝的作用及机制初探

目的 建立四环素诱导HepG2细胞药物性脂肪肝模型,研究丹酚酸R对此模型的作用,并初步探讨其机制.方法 采用油红O染色观察细胞内脂质积聚情况,采用GPO＆#183;PAP法三酰甘油试剂盒定量检测细胞内三酰甘油的变化及Real-time PCR检测CD36 mRNA的表达.结果 四环素处理后能够明显增强油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性（P＜0.05）,同时75 μmol/L四环素处理后显著提高CD36 mRNA的表达（p＜0.05）.丹酚酸B能明显改善四环素油酸诱导的HepG2细胞脂肪积聚,且呈剂量依赖性（P＜0.01）;丹酚酸B高剂量组与造模组相比能显著降低CD36 mRNA的表达（p＜0.05）.结论 丹酚酸B能够改善四环素油酸诱导的HepG2细胞脂肪变性,其作用可能与抑制CD36的表达、影响脂肪酸转运有关.     

白藜芦醇对肝脂肪积累的抑制作用及其分子机制

目的研究白藜芦醇对SIRT基因家族表达的影响,探讨白藜芦醇抑制不同条件引起脂肪积累的分子机制。方法分别用高糖、高糖＋白藜芦醇、高脂、高脂＋白藜芦醇的培养基处理肝细胞HL7702,油红O染色法检测细胞内脂肪积累水平;后提取各组蛋白质,Western blotting方法检测不同组间SIRT基因家族各成员的表达情况。结果白藜芦醇能明显降低高脂引起的脂肪积累,对高糖引起的脂肪积累作用不明显;在高脂条件下,白藜芦醇可以促使SIRT1、SIRT3、SIRT4和SIRT5的表达增加,使SIRT7表达降低;在高糖条件下,白藜芦醇可以促使SIRT1、SIRT4、SIRT5和SIRT7的表达增加。结论 SIRT1、SIRT3和SIRT7是白藜芦醇抑制脂肪积累的关键基因。     

氧化性低密度脂蛋白对肝细胞脂肪积累及SIRT1-LXR信号通路的影响

目的探讨氧化性低密度脂蛋白（αLDL）对肝细胞内脂肪积累及SIRT1-LXR信号通路的影响。方法实验分为对照组、高脂（HF）组、αLDL组、HF＋αLDL组和能量限制（CR）组。将HepG2细胞培养于DMEM培养基中,培养48h后用油红O染色法定性观察和测定各组OD值、细胞内脂肪积累,并用RT—PCR法检测各组SIRT1、肝x受体（LXR）及其靶基因ATP结合盒转运蛋白G1（ABCG1）的表达水平。结果与对照组比较,HF组、αLDL组和HF＋αLDL组细胞内脂肪含量均增加（P〈0．05）,CR组脂肪含量下降（P〈0．05）。αLDL组与对照组比较,SIRT1、LXRct和ABCG1mRNA表达均增加,其中SIRT1和LXRα差异有统计学意义：HF组SIRT1和LXRα表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,而ABCG1显著降低（P〈0．05）;HF＋αLDL组LXRα和ABCG1表达均显著降低（P〈0．05）,而SIRT1与对照组比较差异无统计学意义;CR组LXRα和ABCG1表达均显著增加（P〈0．05）,然而SIRT1与对照组比较差异无统计学意义。结论αLDL可能会促进脂肪肝的形成。     

白藜芦醇改善肝细胞脂肪变性的相关调控机制

目的：研究白藜芦醇改善肝细胞脂肪变性的相关调控机制。方法：实验分为对照、白藜芦醇、高脂及高脂＋白藜芦醇组。用逆转录-聚合酶链反应和Western blot检测固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）、叉头框转录因子1（FOXO1）以及去乙酰化酶Sirt1的表达情况,用免疫荧光法检测各组SREBP1的亚细胞定位。结果：与对照组比,高脂组SREBP1表达明显增加（P〈0.05）;高脂＋白藜芦醇组SREBP1表达比高脂组显著减少（P〈0.05）。与对照组比,白藜芦醇组Sirt1、FOXO1表达均明显增加（P〈0.05）;高脂＋白藜芦醇组Sirt1、FOXO1表达比高脂组显著增加（P〈0.05）。免疫荧光结果显示,高脂促进SREBP1从细胞浆移位于细胞核内,使SREBP1转录活性增强。白藜芦醇抑制SREBP1的活性。结论：白藜芦醇可增加Sirt1与FOXO1的表达,抑制SREBP1表达和活性,同时也可改善肝细胞内脂质堆积状态。     

过氧化物酶体增殖激活受体γ或α在改善HepG2细胞糖代谢中的作用

目的：探讨过氧化物酶体增殖激活受体γ（PPAR-γ）或α（PPAR-α）激动剂改善HepG2细胞胰岛素抵抗的机制。方法：体外培养人肝癌细胞系HepG2细胞并用棕榈酸处理造成胰岛素抵抗模型,分别给予或PPAR-γ激动剂吡格列酮或高选择性PPAR-α激动剂WY14643处理,酶法测定葡萄糖的消耗量和糖酵解产物;同时定量PCR测定PPAR-γ、PPAR-α及糖酵解基因的表达变化。结果：吡格列酮增加胰岛素抵抗的HepG2细胞葡萄糖消耗,诱导糖酵解糖相关基因表达上调,促进糖酵解产物生成。WY14643部分改善胰岛素抵抗,对糖酵解相关基因表达及糖酵解产物水平没有显著影响。结论：PPAR-γ激动剂可能通过促进糖酵解改善HepG2细胞的胰岛素抵抗。     

白藜芦醇改善糖尿病大鼠糖脂代谢的作用及机制的初步探讨

目的：研究白藜芦醇对糖尿病大鼠糖脂代谢作用及机制。方法：高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素（STZ,35mg／kg）联合诱导制备糖尿病大鼠模型,并随机分组为正常对照组、模型组、白藜芦醇组和吡格列酮组,每组8只,给予相应的药物治疗8周。实验结束后比较各组空腹血糖值（FBG）、血清总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）及肝糖原含量,检测抗氧化指标超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量的变化;采用Western bolot方法检查肝脏组织中葡萄糖激酶（GCK）,phosphorylated-、total—Akt,phosphorylated-、total—GSK-3G蛋白的表达。HE染色方法观察肝脏组织病理形态。结果：与模型组比较,白藜芦醇能显著改善糖脂代谢,增加肝脏肝糖原含量,Akt的磷酸化水平、葡萄糖激酶的表达增加,并抑制糖尿病大鼠GSK-313的磷酸化水平。HE染色观察,与模型组比较肝脏脂肪变性及损伤明显减轻。结论：白藜芦醇具有明显的调节糖脂代谢的作用,其作用机制与其提高机体抗氧化活性,激活Akt信号通路,改善肝脏病理损伤相关联。     

染料木黄酮对油酸诱导脂肪变HepG2细胞糖脂水平和HMG-CoA还原酶的影响

目的研究染料木黄酮（genistein,Gen）对油酸（oleicacid,OA）诱导的脂肪变HepG2细胞内HMG．CoA还原酶水平以及糖、脂水平的影响。方法将HepG2细胞在含有0～50txmol／L的Gen、0．5mmol／L的OA的培养基内培养24h,收集细胞分别用试剂盒测定3．羟基．3．甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶（HMGR）、胆固醇（Tc）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）的含量;同时,收集培养基上清液,用试剂盒测定葡萄糖消耗量。结果Gen可降低细胞内HMG．CoA还原酶的水平和细胞对葡萄糖的消耗。提高细胞内TC和HDL．C含量。结论Gen能改善OA诱导的脂肪变HepG2细胞内的糖脂代谢情况。     

骨化三醇对脂肪变性肝细胞三酰甘油代谢及细胞因子信号转导抑制因子-3 基因表达的影响

目的 研究骨化三醇对脂肪变肝细胞三酰甘油代谢及细胞因子信号转导抑制因子-3（SOCS-3）基因表达的影响.方法 以油酸（OA）诱导正常人肝细胞LO2脂肪变为模型,按加入骨化三醇浓度的不同（10-8、10-7、10-6 mol/L）分为三个干预组,设空白对照组.干预组先加入不同浓度骨化三醇干预24h,之后加0.2 mmol/L的OA24h.检测细胞内三酰甘油（TG）、上清液谷草转氨酶（AST）含量,采用实时荧光定量PCR检测各组细胞SOCS-3 mRNA的表达,多组间比较采用单因素方差分析进行数据分析.结果 模型组TG[（362.43±22.20）mg/dL]、AST[（5.550.46）U/L]、SOCS-3 mRNA表达（4.61±0.39）均较对照组[（175.78±7.69）mg/dL、（0.63±0.33）U/L、（1.00±0.00）]明显增高（P＜0.01）;干预组TG分别为（286.87±16.01）、（257.16±11.73）、（209.43±27.79）mg/dL,AST分别为（4.98±0.50）、（4.23±0.36）、（3.50±0.48）U/L,SOCS-3 mRNA表达分别为（3.71±0.69）、（2.67±0.70）、（1.31±0.42）,较模型组均有所下降,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.结论 骨化三醇可抑制肝细胞脂肪变,其作用机制可能与骨化三醇抑制SOCS-3的表达有关.