桑黄菌原生质体的分离与再生研究

目的：研究桑黄菌原生质体分离与再生的条件。方法：研究以菌丝体为材料的不同酶解条件对桑黄菌原生质体产量的影响及不同再生条件对桑黄菌原生质体再生率的影响。结果：在1.5%溶壁酶＋0.5%崩溃酶的混合酶系、酶解温度为30 ℃、菌龄为8 d、蔗糖为酶解渗透压稳定剂、酶解时间为3 h的条件下,桑黄菌原生质体分离产量较高,但兼顾菌丝量和原生质体的再生,较适宜的菌龄为10 d,较适宜的酶解渗透压稳定剂是甘露醇。另外用甘露醇作为培养基渗透压稳定剂、用加桑枝的马铃薯葡萄糖再生培养基进行再生,桑黄菌原生质体再生率较高。结论：在综合考虑桑黄菌原生质体的产量与再生的前提下,获得了使桑黄菌原生质体产量与再生率均较高的试验条件。     

高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生

目的 利用高山红景天组培苗叶片分离得到原生质体,经培养后获得再生植株.方法 研究了外植体前期预处理、外植体大小、酶液配比、酶液中甘露醇浓度等影响原生质分离的相关因素,确定最优分离条件.结果 用于原生质体分离的外植体无需黑暗预培养便可进行原生质体分离,外植体叶片长度大于1.5 cm为宜.获得原生质体的酶液组成为:1.0%纤维素酶Onzuka R-10+0.5%果胶酶Macerozyme R-10+10 mmol/L CaCl2·2H2O+0.1%MES+0.7 mmol/L KH2PO4+0.5 mol/L甘露醇,在25℃条件下酶解4 h,原生质体最高产量为39.43×106个/g鲜质量.原生质体活力为78.6%.原生质体培养基为1/2MS+1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/LZT+0.5 mol/L甘露醇+500 mg/L水解酪蛋白.浅层培养40 d时形成小愈伤组织.愈伤组织在MS+1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA诱导产生不定芽,不定芽转入1/2MS基本培养基可获完整再生植株.结论 本研究为高山红景天多倍体育种提供了科学依据.     

滴水珠组织培养及快速繁殖的实验研究

目的:通过滴水珠组织培养及快速繁殖,解决滴水珠的资源匮乏问题。方法:以滴水珠的叶片及叶柄为外植体,探索滴水珠愈伤组织诱导与增殖的最佳培养基,并对滴水珠愈伤组织的分化、生根诱导及组培苗的移栽进行研究。结果:滴水珠在不同浓度2,4-D与6-BA或KT的培养基上可以较好地诱导出滴水珠的愈伤组织,MS+2.0mg/L6-BA+0.2mg/L 2,4-D是滴水珠愈伤组织最佳诱导和增殖培养基;在含不同浓度NAA与6-BA的MS培养基中,滴水珠能快速生长。结论:本研究初步建立了完整的滴水珠的组织培养体系,具有开发利用潜力。     

泰山四叶参原生质体的分离纯化与初步培养

四叶参(Codonopsis lanceolata Benth.et Hook.F.),又名泰山参、轮叶党参,为泰山“四大名药”之一,据《泰山药物志》记载,四叶参被列为“古有今无之特产”,在泰山,野生四叶参已难觅踪迹.做为珍稀名贵中草药,四叶参含有丰富的多糖、苷类、黄酮等药用成分[1,2],能够补气、通乳、养阴润肺.现...     

高效液相色谱法测定中药滴水珠中麻黄碱的含量

目的　测定中药滴水珠中麻黄碱的含量。方法　采用反相高效液相色谱法 ,以 Phenom enex ODS柱为分析柱 ,甲醇 -水 (加磷酸调 p H至 3.5 ) (6 5∶ 35 )为流动相 ,流速 :0 .6 m l· min- 1 ;检测波长为 2 13nm ,柱温 30℃。结果　在 2 0～ 10 0μg· ml- 1 范围内 ,色谱峰面积与对照品浓度呈良好的线性关系 ,r=0 .999;平均回收率为 :91.2 0 % ,RSD为 :1.2 (n=5 )。结论　该方法简易准确 ,重现性好 ,在本色谱条件及样品处理方法下 ,可以准确测出滴水珠中麻黄碱的含量     

菘蓝叶肉原生质体游离与纯化研究

目的:探讨菘蓝原生质体分离的最佳条件.方法:用纤维素酶和离析酶的混合酶液提取菘蓝无菌苗幼叶原生质体,对影响原生质体提取得率及活力的因素进行分析.结果:适宜菘蓝叶片原生质体游离的条件为:CPW+0.5%PVP+3 mmol/L MES+1.0% Cellulase R-10+0.1% Macerozyme R-10+0.4 mol/L甘露醇,pH 5.6,25 ℃黑暗条件下酶解6 h.在此条件下原生质体产量达1.5×10个/g FW,活力达79.14%,用"过滤-离心-漂浮法"进行纯化,蔗糖浓度21%时纯化效果最好.结论:用混合酶系统处理,能够获得大量有活性的菘蓝原生质体,为建立高效的菘蓝原生质体再生体系及其遗传操作奠定了基础.     

茯苓原生质体制备与再生条件初探

目的研究茯苓原生质体制备及其再生条件。方法采用不同菌龄、酶液浓度、酶解时间、稳渗剂对茯苓原生质体产率及再生条件进行研究。结果不同菌龄、酶液浓度、酶解时间、稳渗剂对茯苓原生质体产率及再生产生不同影响。结论Z10-2原生质体制备时菌丝最适菌龄为72 h,酶液浓度为3%,稳渗剂以0.5 m o l/L的甘露醇为佳。Z10-3原生质体制备时菌丝最适菌龄为56 h,酶液浓度为3%,稳渗剂以0.6 m o l/L的甘露醇为佳。Z10-2和Z10-3原生质体均以甘露醇作稳渗剂再生率较高,其最佳浓度为0.6 m o l/L。在该条件下Z10-2原生质体再生率为7.5×1-0 3,Z10-3为1.3×10-2。     

苦皮藤组织培养与植株再生

目的 研究药用植物苦皮藤组织培养技术，为工厂化育苗及工业化获取苦皮藤次生代谢产物提供行之有效的途径。方法以苦皮藤子叶和胚轴为外植体，采用MS培养基，附加不同的植物激素进行实验。结果MS 2，4-D2mg／L培养基适合愈伤组织诱导；MS 6-BA2mg／L NAA0．2mg／L培养基适合芽的分化,MS 6-BA1mg／L NAA0．2mg／L培养基适合芽的增殖；将芽转至MS MET0．7mg／L IBA0．5mg／L培养基暗培养10d后，转入1／2MS培养基光下培养形成根;试管苗移栽成活率为85％。结论通过诱导愈伤组织途径可以达到快速繁殖的目的;较高浓度的2，4-D对苦皮藤愈伤组织的诱导有利；6-BA对愈伤组织的生长有明显促进作用;多效唑、暗培养对根的分化是必需的。     

喜树茎尖组织培养与植株再生

目的探索喜树的人工快繁。方法以喜树幼苗的茎尖作为外植体，培养在附加不同激素的培养基上。结果以B5培养基附加6～BA 0．2mg／L。，IBA 0．05mg／L和AS(afenine sulfate，10mg／L)对丛生芽的诱导与增值效果最佳，而附加IBA 0．5mg／L，KT 0．1mg／L，和AS 10mg／L的生根效果最佳。试管苗移栽到珍珠岩-土壤(3：7)的基质中生长良好，成活率高达96％。结论为喜树的开发利用提供了一条新途径。     

菱叶红景天组织培养及植株再生

目的:探索菱叶红景天组织培养与植株再生技术并优化体外繁殖体系。方法:采用正交试验设计分别研究外植体种类、植物生长物质种类和浓度对菱叶红景天愈伤组织的诱导、丛生芽的产生以及生根诱导的影响,实验数据进行极差和方差分析。结果:影响菱叶红景天愈伤组织诱导的因素依次为外植体2,4-D6-BA,叶片产生愈伤组织最佳的培养基为MS附加2,4-D 1.5 mg.L-1和6-BA0.5 mg.L-1;影响菱叶红景天丛生芽诱导的因素依次为外植体NAA6-BA,茎段产生丛生芽最佳的培养基为MS附加6-BA1.5 mg.L-1和NAA1.0 mg.L-1;试管苗生根的最佳培养基为1/2MS附加IBA1.0 mg.L-1,生根率可达90%以上,生根试管苗移栽成活率达98%以上。结论:本试验初步建立了菱叶红景天组织培养与植株再生的基本体系。     

渐危药用植物珊瑚菜胚状体途径再生植株的研究

目的:研究离体条件下珊瑚菜种子休眠的原因,建立胚状体途径再生植株的方法。方法:研究离体条件下胚乳因素和外源激素在解除珊瑚菜种子休眠过程中的作用,以及激素浓度对胚性愈伤组织诱导及胚状体再生植株的影响。结果:保留1/3胚乳的珊瑚菜种子萌发率最高,可以达到31%。而TDZ,6-BA,GA3处理不仅对解除珊瑚菜种子休眠的作用不大,同时容易导致出现畸形苗。在附加1.0 mg.L-1 2,4-D的MS培养基上,胚性愈伤的诱导率可以达到57%。将培养20 d左右胚性愈伤组织转入MS培养基上40 d左右就可分化形成子叶期胚状体,然后再继代培养20 d即可得到再生植株。结论:建立一套有效的珊瑚菜再生植株体系。     

半夏块茎腐烂病病原鉴定和药效比较

目的:研究半夏块茎腐烂病的病原和控制该病害的发生,为半夏栽培提供依据。方法:分离鉴定采用柯赫氏法则,菌丝生长条件采用2因子饱和D-最优设计,室内药效比较采用菌丝生长速率法。结果:形态学观察和致病性测定表明,引起半夏块茎腐烂病的病原物为尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum;F.oxysporum菌丝生长的适宜温度为15~30℃,最适温度为21.9℃,适宜pH为6~8,最适pH7.2;室内药效比较表明,70%甲基托布津和58%甲霜灵锰锌对F.oxysporum菌丝生长的抑制效果最好,EC50分别为0.002 7,0.066 2 g.L-1。结论:明确了半夏块茎腐烂病病原,为该病害的防治提供了依据。     

北柴胡花药愈伤组织高效再生体系的建立

以花粉发育处于单核期的北柴胡花药为外植体诱导出愈伤组织,愈伤组织经多次继代培养后,置于20种含不同植物激素的分化培养基上诱导分化。分别在培养21,49 d后,统计每种培养基中分化出苗数,同时观察再生植株生长状况,从中筛选出分化率高,分化速度快,且植株生长状态良好的分化培养基。结果共在19种培养基均可分化出苗,分化率在3%~60%,大部分低于20%。在MS+KT 0.5 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+植物凝胶5 g·L^-1培养基上分化率最高,为60%,其次为MS+ ZT 1.0 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+植物凝胶5 g·L^-1,为58%。另外,针对在分化培养基中未能生根的再生芽,进行了生根培养基筛选。结果显示再生芽在生根培养基MS+蔗糖30 g·L^-1 +植物凝胶5 g·L^-1和1/2 MS+ NAA 0.5 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1 +植物凝胶5 g·L^-1中均可生根,生根率均为100%。由此建立了北柴胡花药愈伤组织高效稳定的再生体系。     

催眠睡茄植株再生体系的建立

目的:建立和优化催眠睡茄植株再生体系。方法:以催眠睡茄的叶片作为外植体,探讨不同植物生长物质对愈伤组织诱导,丛生芽分化以及试管苗生根的影响。结果和结论:愈伤组织诱导的最佳培养基是MS+1.0 mg.L-12,4-D+0.1mg.L-1KT;丛生芽诱导的最优培养基是MS+1.0 mg.L-16-BA+0.1 mg.L-1NAA,试管苗生根诱导最优培养基为1/2MS+0.5 mg.L-1NAA;在珍珠岩-腐殖土(1∶1)的基质中,再生植株室外移栽成活率达到92%。     

青天葵组织培养及植株再生的研究

目的:对青天葵进行组织培养并获得再生植株。方法:考察不同外植体、植物生长调节剂、添加物等对根状茎及再生植株生成的影响。结果:以球茎为外植体效果最好,6-BA2mg·L^-1诱导球茎生成根状茎的效果优于6-BA1mg·L^-1,椰汁、活性炭对根状茎的生长有促进作用。结论:青天葵球茎接种于1/2MS+6-BA2mg·L^-1培养基上,能够诱导出芽,芽接种于添加了10%椰汁和1‰活性炭的培养基中能够生成大量的根状茎,将白色的根状茎接种于1/2MS+1‰活性炭的培养基中能够先形成球茎,并进一步形成再生植株;将绿色的根状茎接种于1/2MS+6-BA2mg·L^-1+NAA2mg·L^-1的培养基上能够直接形成再生植株。     

抱茎苦荬菜的组织培养及植株再生

目的:探讨苦荬菜组织培养和植株再生条件。方法:以苦荬菜叶片为外植体,应用正交设计方法,对愈伤组织的诱导和分化培养基进行优化筛选。结果:最佳的愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 1.5 mg.L^-1+6-BA1.5 mg.L^-1+NAA1.0 mg.L^-1+IBA1.5 mg.L^-1+KT1.5 mg.L^-1,最佳的不定芽诱导培养基为MS+2,4-D 0.2 mg.L^-1+6-BA0.5 mg.L^-1+NAA 0.5 mg.L^-1+IBA 0.5 mg.L^-1+KT0.5 mg.L^-1,不定芽经附加IBA0.1 mg.L-1的1/4 MS培养基生根后移栽成活,获得再生植株。结论:建立了一套有效的苦荬菜组织培养再生体系。     

半夏凝集素蛋白与半夏毒针晶毒性的相关性研究

目的:研究半夏凝集素蛋白与半夏毒针晶毒性的相关性,揭示半夏产生毒性的机制。方法:采用大鼠腹腔炎症模型,以腹腔渗出液中PGE2含量为指标,研究半夏凝集素致炎作用的量-毒、时-毒曲线;采用家兔眼结膜刺激模型,以眼结膜的病理切片观察半夏凝集素与半夏毒针晶刺激性的相关性。结果:半夏凝集素可引起大鼠腹腔渗出液中PGE2、蛋白含量显著提高,呈剂量依赖性;半夏凝集素可显著加重半夏毒针晶对家兔眼结膜的刺激性,且随着半夏凝集浓度的升高,刺激性显著增强,但单给药半夏凝集素对家兔眼结膜无刺激性。结论:半夏凝集素蛋白具强烈的致炎作用。半夏产生强烈炎症刺激的机制是半夏刺入机体,凝集素蛋白随针晶进入机体组织,诱导炎症反应发生而产生刺激性。     

朱砂根的组织培养与植株再生

目的:研究药用植物朱砂根组培快繁技术,为其产业化生产提供科学依据.方法:考察不同基本培养基、植物激素、添加物等对腋芽诱导、增殖及植株再生的影响.结果:以朱砂根带芽茎段为外植体,初代培养腋芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1).腋芽增殖的最佳培养基配方为MS+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+NAA 0.1 mg·L~(-1)+KT 0.5 mg·L~(-1).生根培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg·L~(-1);添加0.2%的活性炭可明显促进根的生长,提高生根率、生根数.最有利于朱砂根无菌苗移栽存活的基质类型为河沙.珍珠岩-蛭石(1:1:1),或蛭石.珍珠岩(1:1),成活率在80%以上.结论:通过腋芽增殖快繁育苗技术可获得完整植株,达到快速繁殖的目的.