丹参水溶性成分HPLC指纹图谱指纹对照品对照法的研究

目的　建立HPL C法测定丹参药材水溶性成分的指纹图谱标准,确定指纹对照品对照法的作用,实现丹参药材指纹图谱标准的重现与易控。方法　采用C1 8色谱柱,甲醇- 1.0 %冰醋酸溶液梯度程序洗脱,体积流量为1.0m L /m in。以丹参对照药材制备指纹对照品进行色谱系统适用性试验,考察梯度洗脱程序、流动相酸度以及色谱柱填充剂对指纹图谱重现性的影响。结果　建立的指纹图谱测定系统,对丹参水溶性成分分离良好,选择色谱图中15个特征峰作为指纹峰。将不同产地的10批药材的指纹图谱与同时测定的指纹对照品图谱进行比较,结果即使改变色谱柱填充剂也可以获得一致的相似性评价结论。结论　色谱指纹图谱可以体现药材中多个成分的信息,但色谱系统的变化对指纹图谱的重现性有很大的影响,而且在不同的色谱柱条件下所得的指纹图谱结果不尽相同。因而为了实现指纹图谱标准的重复可控,应同时规定指纹图谱测定的色谱系统适用性条件和指纹对照品。     

黄连HPLC Maxplot指纹图谱的建立

[目的]以高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-PDA)MaxPlot色谱图为基础,建立黄连指纹图谱分析方法。[方法]采用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为Agilent SB-C18(4.6 mm×150 mm,3.5μm);流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸水溶液,线性梯度洗脱;210~400 nm波长下提取Maxplot色谱图。以黄连对照药材随行测定所得MaxPlot色谱图作为黄连的标准对照指纹图谱,通过相似度评价黄连药材质量。[结果]结果显示,PDA MaxPlot模式下黄连指纹图谱共获得11个共有峰,较单一波长345 nm下多1个微量成分峰。12批样品指纹图谱与对照药材随行对照标准指纹图谱相似度达0.994以上。[结论]MaxPlot指纹图谱显著提高了黄连中各类成分检测的灵敏度,有效增加了黄连药材共有峰数量,为该药材多成分的质量控制提供了借鉴。     

中药复方制剂仙灵骨葆胶囊HPLC指纹图谱研究

目的 建立中药复方仙灵骨葆胶囊的HPLC指纹图谱,对市售制剂进行质量控制。方法 采用C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm),以乙腈-水(各含体积分数为0.1%的甲酸)为流动相进行梯度洗脱,流速0.80 mL·min^-1,检测波长270 nm,柱温35 ℃;建立仙灵骨葆胶囊HPLC指纹图谱,运用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件”对28批市售制剂进行相似度评价,通过比对化学分离对照品的保留时间对主要特征峰进行明确化学指认并初步确定组方中药来源。结果 建立的仙灵骨葆胶囊HPLC指纹图谱的专属性、精密度、重现性和稳定性均良好;28批市售制剂的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值在0.952~0.995之间;覆盖该复方六味组方中药的27个主要特征峰得到明确的化学指认、指认峰面积约占总峰面积的70%。结论 上述建立的主要特征峰化学成分明确的HPLC指纹图谱基本全面反映该中药复方制剂中各味组方中药、多成分的整体特征,可以用于市售产品的质量评价。以上工作可为提高仙灵骨葆整体质量控制方法提供实验依据。     

复方金钱草颗粒的指纹图谱

目的:建立复方金钱草颗粒HPLC指纹图谱,科学评价并有效控制其颗粒剂的质量,保证其生产的稳定性。方法:采用ODS-BP色谱柱,流动相乙腈(A)-0.2%磷酸梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,进样量20μL,检测波长350 nm,柱温20℃。采用国家药典委员会"中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件"(2012.130723版)对10批复方金钱草颗粒制剂进行相似度评价,并对处方中4味药材进行相关性分析。结果:以芒果苷为参照峰,初步建立复方金钱草颗粒HPLC指纹图谱,10批制剂的HPLC指纹图谱相似度在0.961~0.997,标示出20个共有色谱峰,其中19个归属到各药材。结论:建立的方法分离效果好,灵敏、准确、简单,可作为复方金钱草颗粒质量评价的方法。     

定量测定与特定指纹图谱分析相结合方法用于抗脑衰胶囊制剂质量评价

目的建立抗脑衰胶囊色谱指纹图谱,并对关键成分进行测定,作为抗脑衰胶囊制剂质量评价的依据。方法采用HPLC法。色谱条件:Kromasil ODS C18柱(250mm×4.6mm,5μm),甲醇-0.6%醋酸水溶液系统梯度洗脱,体积流量0.9mL/min,检测波长280nm,柱温25℃。采用标准曲线法对其中葛根素、黄芩苷、芍药苷进行测定。结果指纹图谱中28个共有吸收峰为抗脑衰胶囊内在物质的指纹特征,方法学考察的精密度、稳定性、重现性试验较好。不同批次抗脑衰胶囊指纹图谱的相似度评价和指标成分有差异。结论定量测定与特定指纹图谱分析相结合方法可作为评价抗脑衰胶囊制剂质量的标准。     

心速宁胶囊的HPLC指纹图谱分析

目的:建立心速宁胶囊的HPLC指纹图谱,为该制剂的质量控制提供参考。方法:采用HPLC,以Welch Xtimate C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分析,流动相乙腈-0.2%甲酸水溶液(含0.2%氨水)梯度洗脱,流速1.0 m L·min~(-1),检测波长254 nm,建立心速宁胶囊HPLC指纹图谱,运用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2004 A版)软件对10批市售制剂进行相似度评价,通过对照品保留时间比较指认指纹图谱的主要特征峰,通过心速宁胶囊组方单味药和复方的HPLC比较,初步分析复方中化学成分的来源和归属。结果:建立的心速宁胶囊HPLC指纹图谱专属性、精密度、重复性和稳定性均良好;共标定了29个共有色谱峰,指认了其中的12个色谱峰;10批市售制剂的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度在0.980~0.998。在该色谱条件下,以黄连、枳实对全方的贡献率最大,二者贡献率均为0.21,半夏和莲子心的贡献率最小,贡献率分别为0.02和0.04。结论:建立的心速宁胶囊HPLC指纹图谱能全面反映其多成分的整体特征,建立的检测方法简便可行,适用于该制剂的质量评价。     

玉屏风散高效液相色谱指纹图谱研究

目的:建立玉屏风散的高效液相色谱指纹图谱。方法:采用HPLC法分析12批玉屏风散样品,确定指纹峰并用对照品随行进行定性和阴性对照随行进行峰归属鉴定,经过中药色谱指纹图谱相似度评价软件确定其对照指纹图谱,并对该方法进行方法学验证。结果:建立了由21个共有峰组成的玉屏风散高效液相色谱指纹图谱,指纹峰具有特征性,鉴定了其中11个主要的指纹峰,并对全部的共有峰进行了峰归属。结论:该文建立了玉屏风散高效液相色谱指纹图谱方法。结果可靠,重复性好,可全面有效地控制玉屏风散的质量。     

复方扶芳藤制剂正丁醇部位HPLC-ELSD指纹图谱研究

目的:建立复方扶芳藤制剂正丁醇部位HPLC-ELSD指纹图谱的检测方法,为该制剂的皂苷类成分指纹图谱质量控制提供新的方法。方法:采用Shim-Pack CLC-ODS色谱柱(6.0 mm×150 mm,5μm),流动相乙腈-水体系,梯度洗脱,流速1mL.min-1,PL-ELS2100型蒸发光散射检测器。选择10批合格样品的HPLC指纹图谱,进行峰位校正,使谱峰匹配,建立复方扶芳藤制剂正丁醇部位对照用HPLC-ELSD指纹图谱共有模式。结果:共标识了19个特征峰,这些特征峰与组方相关中药饮片具有较好的归属性,可以较好地反映制剂中主要皂苷类成分的情况。结论:该指纹图谱可用于复方扶芳藤制剂中皂苷类成分的质量控制。     

复方板蓝根颗粒HPLC指纹图谱研究

目的：建立复方板蓝根颗粒的HPLC指纹图谱的分析方法,用于复方板蓝根颗粒的质量控制。方法：采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm),以甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 mL·min^-1,检测波长254 nm,柱温为25℃,对指纹图谱进行共有峰标定,以R, S-告依春为参照峰计算各共有峰的相对保留时间和峰面积比值,采用2012年版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》软件对10批复方板蓝根颗粒进行相似度评价。结果：复方板蓝根颗粒HPLC指纹图谱分析方法的专属性、精密度、重现性和稳定性均良好;10批复方板蓝根颗粒指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值均> 0.90,相似度良好。结论：所建立的HPLC指纹图谱能够表达复方板蓝根颗粒中多组分的整体特征,为复方板蓝根颗粒的质量控制提供了方法依据。     

复方丹参片指纹图谱及含量测定研究

目的:建立复方丹参片(丹参、三七、冰片)的HPLC指纹图谱,同法同时测定丹参酮ⅡA的含量.方法:采用HPLC法测定不同批次复方丹参片脂溶性成分的指纹图谱及主要成分的含量,并用生成的对照指纹图谱对复方丹参片进行检测.结果:通过对10批复方丹参片的化学成分指纹图谱的分析,以中位数法模拟了复方丹参片的对照指纹图谱,通过"中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版",计算出10批复方丹参片指纹图谱相似度均在0.9以上.结论:该方法准确可靠,重复性好,简单快捷,为更好地控制复方丹参片内在质量提供科学依据.     

对照提取物法测定葛根饮片中5种成分含量

目的:建立对照提取物法测定葛根饮片中5种成分含量的方法,考察对照提取物在中药质量标准中应用的适用性和可行性。方法:Zorbax C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.02%磷酸(25∶75),检测波长250 nm。采用自制葛根对照提取物,测定葛根饮片中的3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、大豆苷元-8-C-芹菜糖-(1→6)葡萄糖苷、大豆苷的含量,并与单一对照品测定法的实验结果进行比较。结果:对照提取物测定法的精密度、稳定性、重复性良好,并且测定结果与单一对照品测定法所得结果一致。2种测定方法所得数据的RSD低于2%。结论:葛根对照提取物可以用于葛根药材的质量控制,该文初步验证了对照提取物在中药应用的可行性。     

丹参多酚酸对照提取物的质量控制

目的:建立丹参多酚酸对照提取物多指标含量测定及指纹图谱的质量控制方法。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.1%甲酸-水溶液为流动相A,0.1%甲酸-乙腈溶液为流动相B,梯度洗脱(0~30 min,20%~21.5%B;30~35 min,21.5%~25%B;35~45 min,25%~40%B;45~50 min,40%~95%B),柱温30℃,流速1 mL·min^-1,检测波长288 nm;采用浓度法测定咖啡酸,丹酚酸E,迷迭香酸,紫草酸,丹酚酸B,丹酚酸Y的相对校正因子,并测定丹参多酚酸对照提取物各指标成分含量,与单体对照品外标法测定结果进行比较;同时建立指纹图谱方法,并对10批次提取物进行相似度评价。结果:咖啡酸,丹酚酸E,迷迭香酸,紫草酸,丹酚酸B,丹酚酸Y在各自的检测质量浓度范围内线性关系良好(r>0.9999),进样精密度RSD在0.1%~1.2%,重复性RSD在1.2%~1.6%,6种成分的加样回收率在82.03%~98.68%,样品溶液在36 h内各成分稳定性良好。经测定各指标成分的相对校正因子分别为咖啡酸(2.92),丹酚酸E(1.10),迷迭香酸(1.61),紫草酸(1.07),丹酚酸B(1.00),丹酚酸Y(0.83)。考察不同方法、浓度、仪器、色谱柱、波长等因素的影响,发现测得的相对校正因子适用性较好。校正因子法测定结果和单体对照品外标法测定结果差异较小。建立了丹参多酚酸对照提取物的HPLC特征指纹图谱,确定了5个共有特征峰,并根据对照品对色谱峰进行确认,10批次提取物指纹图谱相似度较高,质量差异较小。结论:该研究建立的多指标含量测定方法和指纹图谱方法简便、快速、准确性高、重复性好,可用于丹参多酚酸对照提取物的质量控制。     

益母草饮片标准汤剂研究

建立益母草饮片标准汤剂质量评价标准。制备13批不同品质的益母草饮片标准汤剂,对盐酸益母草碱和盐酸水苏碱进行含量测定、计算其转移率、测定出膏率及pH、建立HPLC指纹图谱分析方法。结果 13批益母草饮片标准汤剂中盐酸益母草碱和盐酸水苏碱转移率分别为30.0%~53.4%,67.0%~82.6%,干膏得率12.1%~18.3%,pH 5.87~6.22,并用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A)软件进行指纹图谱分析,确定了12个共有峰,对13批益母草饮片标准汤剂分别进行相似度评价,其相似度均大于0.9。该研究中益母草饮片制备方法规范,指纹图谱相似度高,其方法精密度、稳定性和重复性良好,可为益母草配方颗粒质量控制提供参考。     

双标线性校正结合PDA辅助色谱峰定性用于印度獐牙菜指纹图谱分析

 目的 建立印度獐牙菜指纹图谱,探讨和验证双标线性校正法结合PDA辅助法用于色谱峰定性的可行性。方法 采用HPLC建立印度獐牙菜指纹图谱,使用相似度分析和二维聚类分析进行质量评价,并使用双标线性校正结合PDA辅助法进行色谱峰定性。结果 10批次印度獐牙菜药材选定10个色谱峰作为指纹图谱的共有峰,经化学计量学评价,可对其质量进行初步评价;双标线性校正法预测保留时间的精度优于相对保留时间法;双标线性校正法结合PDA辅助法可更好的对色谱峰进行定性。结论 与相对保留时间法相比,双标线性校正法预测保留时间的准确度更高,色谱柱的适用范围更广。双标线性校正结合PDA对色谱法进行辅助定性可扩大双标线性校正的使用范围。     

双标线性校正法用于一清颗粒的多指标成分定性分析

目的 建立检测清颗粒中8种成分的高效液相色谱法,采用双标线性校正法计算保留时间,考察其准确性和色谱柱的符合率,用于色谱峰定性分析。方法 选用24根不同品牌和型号的C₁₈色谱柱,测定一清颗粒中8种成分的实际保留时间并计算平均值,得到标准保留时间(t_SRT),以峰1表小檗碱和峰8汉黄芩素两个成分作为双标化合物,使用双标线性校正法预测保留时间,并在4根其他品牌和型号的C₁₈色谱柱上进行方法验证。同时,以中间峰盐酸巴马汀为参照物,计算校正因子,用相对保留时间法预测保留时间,比较双标线性校正法和相对保留时间法的优劣。结果 双标线性校正法与相对保留时间法相比,具有更高的保留时间预测正确率和色谱柱符合率,能适用于更多的色谱柱。结论 双标线性校正法能较好地辅助色谱峰定性,在中药多指标成分分析方面有较好的实用价值和应用前景。     

钩藤饮片HPLC指纹图谱研究

目的:建立钩藤饮片的HPLC指纹图谱评价体系,并结合聚类分析判别方法,提高钩藤饮片质量控制标准.方法:流动相乙腈-0.385％乙酸铵-冰乙酸水溶液梯度洗脱,检测波长245 nm.对27批不同商品地钩藤饮片进行测定,以中药色谱指纹图谱相似度评价软件建立了钩藤饮片标准指纹谱,并计算饮片的相似度.结果:方法精密度、重复性与稳定性良好.将钩藤饮片聚类分为五类,确定17个共有峰,80％的样品相似度＞0.87.结论:建立的HPLC指纹图谱和聚类分析方法有助于钩藤饮片质量全面评价体系的建立.     

注射用辛芍(冻干粉针)指纹图谱研究

目的：采用RP-HPLC建立注射用辛芍(冻干粉针)的指纹图谱测定方法。方法：采用Diamonsil C₁₈色谱柱,80%乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温40 ℃,检测波长为230 nm。结果：在相同色谱条件下获得药材、中间体和制剂的各色谱峰分离较好,建立了注射用辛芍的HPLC对照指纹图谱,标注了制剂中的8个共有指纹峰,制剂与药材、中间体的指纹图谱有良好的相关性,10批样品相似度大于0.97,达到指纹图谱的技术要求。结论：该方法准确、重复性好,可作为注射用辛芍(冻干粉针)质量控制的重要依据之一。     

指纹图谱技术在中药制剂研究中的应用

概述了中药指纹图谱技术在中药制剂研究中对于投料药材甄别、炮制工艺优化、监控生产工艺、质量控制等方面的应用,以及制剂谱效结合、指导新药研发方面的应用,展望了指纹图谱技术在中药制剂研究开发应用中的前景。     

���ڶನ�������������Ʒ������ͨ�������Ƽ����ۺ���������

??OBJECTIVE To propose a holistic strategy for quality control of Chinese patent medicines, and establish an HPLC analytical method for Tongzhi Surunjiang preparation according to the strategy. METHODS The strategy contained three steps.The first step was multi-wavelength chromatographic detection.The second step was multivariate analysis for identification and assay. The third step was to establish substitute reference substance method.The preparations were extracted by ultrasound with methanol, chromatography was performed on ODS column with gradient elution with acetonitrile and 0.1%phosphoric acid aqueous solution.The detection wavelengths were set at 270, 350, 410 and 440 nm.The radar chart, HCA heatmap, principal component analysis and cosine similarity were used for data analysis.At last, linear calibration using two reference substances, relative retention time method and PDA spectrum method were used for peak identification, and relative correction factor method was used for quantitative analysis. RESULTS The multi-components determination method and fingerprint analysis met the method validation requirements. Data analysis showed that there were some differences among the samples of different manufacturers. Strong characteristic peaks for classification were gallic acid, chebulinic acid, chebulea fructus, sennae folium, sennae folium and crocin??.CONCLUSION The method is specific, with low cost, and could be used to accurately control the quality of Tongzhi Surunjiang preparation.