雷公藤红素对人肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的影响及机制研究

目的：探讨雷公藤红素对人肝癌MHCC97H细胞侵袭转移的抑制作用及相关机制。方法：应用Transwell技术观察不同浓度（2.5μmol·L^-1、5.0μmol·L^-1、10.0μmol·L^-1）雷公藤红素对MHCC97H细胞侵袭力和迁移力的影响。Westernblot法检测雷公藤红素处理后对C-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路及NF-κB/p65核浆分布变化的影响。结果：雷公藤红素处理后24 h,迁移实验及侵袭实验结果显示,加药组透膜细胞数较对照组明显减少（P〈0.05）。Westerblot结果显示磷酸化JNK表达上调,NF-κB/p65入核减少。结论：雷公藤红素体外具有抑制人肝癌细胞侵袭和转移的作用,其机制可能与活化JNK通路、抑制NF-κBp65入核有关。     

金雀异黄素下调Gli1表达抑制MHCC97H细胞系肝癌干细胞样细胞侵袭

目的:研究金雀异黄素能否和如何抑制肝细胞癌MHCC97H细胞系肝癌干细胞样细胞侵袭。方法:干细胞条件培养基悬浮培养MHCC97H细胞系球形成细胞,作为肝癌干细胞样细胞。不同浓度金雀异黄素处理后,Transwell小室侵袭试验检测体外细胞侵袭能力;Western blot分析Gli1和Snail1蛋白表达。结果:干细胞条件培养基悬浮培养MHCC97H细胞能形成肿瘤球。金雀异黄素(5、10和20μM)作用第3代球形成细胞即肝癌干细胞样细胞72 h降低肿瘤球形成率和细胞侵袭率;呈浓度依赖性。金雀异黄素(5、10和20μM)孵育肝癌干细胞样细胞24 h下调Gli1和Snail1蛋白表达。结论:金雀异黄素可能通过调控Gli1抑制Snail1蛋白表达抑制肝癌干细胞样细胞侵袭。     

CXCR1/CXCR2受体拮抗剂G31P对前列腺癌细胞增殖和转移的抑制作用

目的探讨CXCR1/CXCR2受体拮抗剂G31P体外对人前列腺癌PC-3细胞增殖和转移的抑制作用。方法以不同浓度的G31P作用于人前列腺癌PC-3细胞,采用CCK-8法、ECM基质粘附实验和Transwell小室侵袭实验研究G31P对PC-3细胞生长、粘附和转移的抑制作用。结果 CCK-8法检测结果显示100ng/mL G31P作用1、3、5d可抑制PC-3细胞的增殖,与对照组(0ng/mL)相比差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。1ng/mL和100ng/mL G31P预处理1d的细胞进行ECM基质粘附实验,其细胞粘附率均明显低于0ng/mL组(均P<0.01)。Transwell小室侵袭实验结果显示,0、1和100ng/mL G31P处理组平均每个400倍视野下的穿膜细胞数分别为(35±6)、(33±4)和(25±4)个,其中100ng/mL G31P处理组明显低于同时点的0ng/mL组(P<0.05)。结论 G31P在体外实验中能抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3的增殖、粘附和转移。     

内质网核糖体结合蛋白1表达上调对肝癌细胞迁移与侵袭的影响

目的 探讨内质网核糖体结合蛋白1(RRBP1)在促进肝癌转移中的调控作用.方法 1)分别用生物信息学分析方法与免疫组化实验,分析RRBP1在原发性与转移性肝癌组织中的表达.2)通过转染siRNA下调RRBP1表达后,分别用划痕实验与Transwell迁移实验分析对肝癌细胞运动与迁移能力的影响.3)通过转染siRNA下调...     

二价阳离子对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞黏附、细胞侵袭和细胞转移的影响

目的探讨二价阳离子对人SKOV3卵巢癌细胞株细胞黏附、细胞侵袭和细胞转移的影响。方法将人SKOV3卵巢癌细胞株按常规方法进行培养,待细胞长到80%~90%汇合时用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化、传代。取生长良好的P3或P4代细胞按是否加入二价阳离子分为对照组(不加入二价阳离子)和实验组[加入二价阳离子:Ca2+(2.5、5.01、0.0 mmol·L-1)组和Zn2+(1.01、0.0 mmol·L-1)组]。在光学显微镜下对各组黏附细胞进行计数。在570 nm波长的酶标仪下测定各组侵袭和转移细胞的OD值,以OD值代表细胞侵袭率和细胞转移率。结果 Ca2+对人SKOV3卵巢癌细胞黏附具有抑制作用,作用随药物浓度增加而增强,呈剂量依赖性。Ca2+细胞黏附抑制率范围为10.2%~62.2%,各Ca2+浓度组人SKOV3卵巢癌细胞黏附率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Zn2+浓度在1.0 mmol·L-1时,黏附细胞略有增多,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);在10.0 mmol·L-1时,黏附细胞数量显著降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Ca2+、Zn2+对人S...     

Inhibitory Effect of Recombinant Human Endostatin on Growth and Liver Metastasis of Colon Cancer

目的 探讨重组人血管内皮抑制素(恩度)对小鼠结肠癌生长及肝转移的抑制作用.方法 40只小鼠建立结肠癌肝脏转移模型,随机分为对照组,恩度低浓度组、中浓度组、高浓度组,每组10只.各组给药浓度分别为0 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg、8 mg/kg,于术后第2天腹腔注射给药,1次/d,共10 d.停止给药后2 d观察各组小鼠原发灶的大小、肝转移瘤的数量,检测原发灶的凋亡指数(AI)、肿瘤微血管密度(MVD)和血清VEGF浓度.结果 各组的原发灶的体积平均数分别为1.230 cm3、1.198 cm3、1.125 cm3、0.891 cm3.高浓度组与对照组比较,脾脏种植瘤的体积明显缩小(P＜0.05).高浓度组的转移瘤数量明显少于低浓度组和对照组(P＜0.05),低浓度组和中浓度组之间差异无统计学意义(P＞0.05).高浓度组原发灶的AI高于对照组(P＜0.05).中、高浓度组转移瘤的MVD计数明显低于对照组(P＜0.05).血清VEGF的浓度各实验组均低于对照组(P均＜0.05).结论 重组人血管内皮抑制素能明显抑制结肠癌的生长和肝转移.     

SRC激酶在人乳腺癌细胞对阿霉素耐药及侵袭转移中的作用

目的 探讨SRC激酶抑制剂PP2在乳腺癌细胞对阿霉素（adriamycin, ADM）耐药及侵袭转移过程中的作用。 方法 采用MTT法检测不同浓度ADM对乳腺癌细胞敏感株（MCF-7）和耐药株(MCF-7/ADM)细胞的增殖抑制作用,计算半数抑制浓度（50% inhibitory concentration, IC₅₀）及耐药指数(resistance index, RI);Western blot检测MCF-7和MCF-7/ADM细胞内多药耐药蛋白MDR1、SRC及缝隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达;Transwell和细胞划痕实验检测MCF-7、MCF-7/ADM细胞、不同浓度PP2（1、2、4 μmol/L）预处理MCF-7/ADM 24 h细胞的侵袭和迁移能力;采用标准集落形成分析法观察4 μmol/L PP2预处理对ADM细胞毒性的影响。 结果 ADM对MCF-7的增殖抑制作用大于MCF-7/ADM细胞（P<0.01）;ADM对MCF-7细胞IC₅₀为24.55 μmol/L, 对MCF-7/ADM细胞IC₅₀为770.57 μmol/L,RI为31;与MCF-7细胞比较,MCF-7/ADM细胞MDR1、SRC蛋白表达增高（P<0.01）,且MCF-7/ADM细胞具有更强的侵袭迁移能力（P<0.01）,采用SRC抑制剂后,MCF-7/ADM细胞侵袭转移能力被抑制（P<0.01）,细胞集落形成率下降,即对ADM的敏感性提高（P<0.01）。 结论 人乳腺癌细胞MCF-7在对ADM耐药的过程中伴随着SRC蛋白表达增多, SRC抑制剂可以降低细胞耐药性以及侵袭转移能力。     

JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞侵袭转移的影响

目的研究JAK激酶抑制剂AG490对乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭转移的影响,探讨JAK-STAT3信号转导通路在乳腺癌侵袭转移调控中的作用。方法以乳腺癌细胞MDA-MB-231为研究对象,应用JAK激酶抑制剂AG490处理细胞,用MTT法检测细胞对人工基底膜的粘附能力变化;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和运动实验;Western blot检测细胞中P-STAT3水平。结果JAK激酶抑制剂AG490可使人乳腺癌细胞MDA-MB-231中P-STAT3表达减弱,同时可使细胞粘附、侵袭、迁移能力下降。结论JAK-STAT3信号转导通路参与乳腺癌细胞侵袭转移调控,阻断通路活化可以抑制乳腺癌细胞的侵袭转移。     

全长型SYK对肝细胞癌侵袭和转移的抑制作用

【目的】本研究通过检测肝癌组织中SYK(L)的表达、与临床病理因素的相关性分析、以及细胞学实验等方法,探讨SYK(L)对肝癌侵袭与转移的影响。【方法】采用免疫组织化学方法检测211例肝癌组织及其匹配癌旁肝组织中SYK(L)的表达,分析其与临床病理因素的相关性;细胞学实验检测SYK(L)对肝癌细胞侵袭性的影响;并在临床标本中进一步验证SYK(L)与MMP9蛋白表达的相关性。【结果】211例肝癌组织中SYK(L)表达(41.2%, 87/211)低于癌旁肝组织(92.4%, 195/211) (P < 0.001);肝癌SYK(L)表达与术前AFP水平(P = 0.012)、肿瘤直径(P = 0.034)、卫星结节 (P = 0.015)、血管侵犯(P = 0.003)和细胞分化程度(P = 0.005)相关。Transwell小室侵袭性实验提示SYK(L)可抑制肝癌细胞的侵袭能力,且半定量RT-PCR检测发现SYK(L)可下调MMP9和MMP2 mRNA的表达水平。在211例肝癌组织中,SYK(L)与MMP9表达存在显著负相关(r = - 0.601, P < 0.001)。【结论】肝癌中SYK(L)蛋白表达降低;SYK(L)可能通过抑制肝癌细胞的侵袭与转移,抑制肝癌的发生发展。     

华蟾素注射液对人肝癌肿瘤细胞HepG_2增殖抑制作用观察及其作用机制研究

目的探讨华蟾素注射液对人肝癌肿瘤细胞Hep G2增殖抑制作用观察及其作用机制研究。方法 MTT法测定华蟾素注射液对Hep G2细胞增殖抑制作用,高内涵活细胞成像系统检测华蟾素注射液对Hep G2细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blot蛋白印迹法检测华蟾素注射液凋亡相关蛋白的表达。结果华蟾素注射液不同浓度作用于24h和48h抑制率均明显高于阴性对照组(P0.05),且随着浓度的增加,抑制率越为明显;华蟾素注射液不同浓度作用于48h抑制率明显高于24h抑制率(P0.05);华蟾素注射液不同浓度G0/G1期百分率高于阴性对照组(P0.05),S期细胞百分率低于阴性对照组(P0.05);华蟾素注射液不同浓度凋亡率高于阴性对照组(P0.05);随着华蟾素注射液浓度增加细胞凋亡率增加;随着华蟾素注射液浓度的减少,Bcl-2蛋白表达不断增加,而Bax蛋白表达不断下降。结论华蟾素注射液可明显抑制人肝癌肿瘤细胞Hep G2增殖,阻滞细胞于G0/G1期,可能通过上调bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达相关。     

转录因子CTCF对人肝癌干细胞及细胞增殖的影响

目的 探讨CCCTC结合因子 （CTCF）蛋白对人肝癌细胞 （HepG2）的肿瘤干细胞的影响以及对HepG2和CNE1 （鼻咽癌细胞系）细胞生存能力的影响。方法 构建pEGFP-N1/CTCF、CTCF shRNA和GFP-shRNA质粒,转染至HepG2和CNE1细胞后,以RT-PCR及Western blot 检测CTCF mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测转染CTCF-shRNA质粒后48 h的HepG2细胞中携带表面抗原CD90肿瘤干细胞的比例,以转染GFP-shRNA的HepG2细胞和野生型HepG2细胞为对照。采用MTT方法分别检测转染CTCF过表达重组质粒及CTCF-shRNA质粒后24、48、72 h HepG2和CNE1细胞的生存能力。 结果 pEGFP-N1/CTCF转染后增加HepG2和CNE1细胞中CTCF mRNA和蛋白的表达（与pEGFP-N1相比,P<0.05）,CTCF-shRNA转染则降低表达（GFP-shRNA相比,P<0.05）。流式细胞仪检测结果显示,CD90 +细胞的检出率在转染CTCF-shRNA质粒细胞 〔(1.733 0±0.417 7)%〕高于野生型HepG2细胞 〔(0.575 0±0.062 9)%〕及转染对照GFP-shRNA质粒细胞 〔(0.350 0±0.086 6)%〕 （P<0.05）;MTT实验结果显示CTCF的表达改变对HepG2和CNE1 细胞的生存能力的影响不明显 （P>0.05）。结论 CTCF可抑制人肝癌干细胞生成,对HepG2和CNE1细胞生长无明显影响。     

扶正抑癌方对人结肠癌细胞裸鼠肝转移的影响

目的观察扶正抑癌方抗大肠癌肝转移的作用,并探讨其可能的作用机制。方法将40只BALB/C裸鼠随机分为5组:模型组、中药组、化疗组、防治组、联合组,以5×106个/m l浓度的LoVo细胞悬液0.2 m l接种于裸鼠脾脏,建立大肠癌肝转移模型。后4组分别予扶正抑癌方治疗、5-Fu治疗、扶正抑癌方防治、扶正抑癌方+5-Fu治疗,分别从移植瘤和转移瘤的重量、形态学以及血清癌胚抗原浓度来观察扶正抑癌方的疗效。结果与模型组相比,防治组、联合组、化疗组脾脏接种瘤、肝脏转移瘤重量均减轻(P<0.05),其中联合组低于化疗组(P<0.05);而且联合组、化疗组CEA含量明显降低(P<0.05)。中药组上述指标无显著差异(P>0.05)。结论扶正抑癌方联合5-Fu可以降低模型动物的肝转移发生率,抑制脾脏接种瘤、肝脏转移瘤的生长。     

miR-n282对肝癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的 探究miR-4282对肝癌细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制.方法 qRT-PCR方法检测miR-4282转染至SMMC-7721细胞后表达量的变化.Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞的迁移、侵袭.双荧光素酶检测miR-4282的互作基因,Westernblot和qRT-PCR方法验证基因及蛋白.结果 ...     

三七花总皂苷抑制人乳腺癌细胞侵袭的体外研究

目的:研究三七花总皂苷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭能力的影响并探讨其相关机制。方法:MTT实验检测三七花总皂苷对肿瘤细胞增殖的抑制作用;Transwell小室法进行肿瘤细胞侵袭实验;RT-PCR检测β1-integrin、MMP-2、EGFR mRNA表达的变化;Western blotting检测β1-integrin、EGFR蛋白表达的变化。结果:在浓度为50～200μg/ml时,三七花总皂苷对人乳腺癌细胞的增殖具一定的抑制作用。Transwell小室实验显示,三七花总皂苷在浓度为10、50、100μg/ml均表现出侵袭抑制作用,浓度为50μg/ml侵袭抑制效果最佳,达到32.0%。三七花总皂苷对各浓度组对MDA-MB-231细胞β1-integrin、MMP-2和EGFR基因表达有下调作用(P0.01),一些浓度组对β1-integrin和EGFR蛋白的表达也具下调作用。结论:三七花总皂苷通过下调β1-integrin、EGFR mRNA和蛋白的表达,抑制肿瘤细胞与ECM粘附,降低肿瘤细胞运动能力,从而抑制人乳腺癌细胞的侵袭转移。     

人间充质干细胞对人前列腺癌细胞上皮-间质转化和侵袭能力的影响

目的探讨间充质干细胞（MSCs）对人前列腺癌细胞上皮-间质转化（EMT）和侵袭能力的影响。方法以干扰素γ（IFNγ）预处理的间充质干细胞[MSCs（IFNγ）]的培养上清处理人前列腺癌PC-3细胞,观察PC-3细胞形态的变化,并以划痕实验、Transwell实验检测PC-3细胞的迁移、侵袭能力,使用实时定量聚合酶联反应（qRT-PCR）法检测EMT相关的基因E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的mRNA表达情况。结果与PBS预处理的对照组相比,实验组的PC-3细胞有从上皮的类圆形细胞向间质的梭形细胞转化的趋势;与对照组相比,实验组中E-cadherin mRNA表达下调,而Vimentin及N-cadherin mRNA表达上调（P均〈0.05）;实验组PC-3细胞的迁移和侵袭能力均强于对照组（P〈0.05）。结论 IFNγ预处理的MSCs可促进前列腺癌细胞发生EMT,并使得前列腺癌细胞迁移、侵袭能力增强。     

miR-106a对人结直肠癌SW480细胞增殖和侵袭能力的影响

目的：：研究 microRNA-106a(miR-106a)对低转移性人结直肠癌 SW480细胞增殖和侵袭等恶性生物学行为的影响。方法：采用实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测20对结直肠癌组织及其癌旁组织中 miR-106a的表达,将 miR-106a mimics 转染到 SW480细胞中,用 qRT-PCR法检测 miR-106a的表达水平,并用CCK8实验、克隆形成实验和划痕法检测 SW480细胞的增殖、克隆形成以及体外迁移能力。结果：与癌旁组织相比较,结直肠癌组织中 miR-106 a 的表达水平升高(t=2.05,P=0.047);与mimics control转染组相比,miR-106a mimcs转染组miR-106a的表达水平显著升高(t=13.25,P=0.000),且细胞活力(72 h,t=4.52,P=0.000;96 h,t=6.17,P=0.000)和细胞克隆数明显升高(t=5.69,P=0.005),以及伤口愈合能力升高(48 h,t=5.44,P=0.032)。结论：过表达 miR-106a可显著促进低转移的人结直肠癌SW480细胞增殖和迁移能力,为结直肠癌的治疗提供了潜在的策略。     

青蒿素对BGC-823癌细胞生长 转移及侵袭能力的影响

目的:研究青蒿素对人胃癌细胞株BGC-823的生长、侵袭和趋化运动能力的影响.方法:采用细胞培养,transwell小室法和冲刷实验,观察不同浓度青蒿素对BGC-823细胞株生长侵袭、黏附和趋化运动能力的改变.结果:青蒿素在浓度≥10 μmol/L时可显著抑制BGC-823细胞的生长,并表现出剂量和时间依赖效应(＞2 d,P＜0.01),同时青蒿素可显著降低BGC-823细胞的侵袭、黏附和趋化运动能力(P＜0.01).结论:青蒿素对人胃癌细胞株BGC-823的生长、侵袭和趋化运动能力有显著抑制作用,有可能成为胃癌的临床治疗的一种方法.     

结直肠癌干细胞和微环境对结直肠癌转移的影响

结直肠癌是最常见的癌症之一,过去虽然对早期结直肠癌的治疗已取得了长足进步,但其转移机制尚不清楚,针对结直肠癌的转移尚无有效治疗方法,而远处转移是结直肠癌引起死亡的主要原因。结直肠癌干细胞的存在促进了结直肠癌的发生发展,而基质细胞与结直肠癌细胞发生物质交换,为结直肠癌细胞提供营养物质,因此结直肠癌干细胞与癌细胞所处的微环境对结直肠癌发生远处转移起着至关重要的作用。未来,对结直肠癌干细胞和微环境的深入研究可以预防和治疗结直肠癌的转移,并为发生远处转移的结直肠癌患者的治疗提供新思路。     

shRNA干扰基膜聚糖调控肝癌细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的 本研究旨在探索沉默基膜聚糖(lumican)对肝癌细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制。方法 通过shRNA沉默肝癌细胞HepG2和MHCC97H中的lumican。通过实时定量PCR（qRT-PCR)检测细胞中lumican的mRNA水平,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验分析细胞迁移。蛋白印记检测lumican、MMP-9、VEGF、ERK1、JNK、p-ERK1和p-JNK蛋白水平。结果 肝癌细胞HepG2和MHCC97H中lumican的mRNA水平和蛋白质水平高于正常肝细胞L02 (P<0.01)。HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组mRNA水平和蛋白质水平低于对照组(P<0.01)。与scramble组相比,HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组细胞侵袭和迁移显著降低(P<0.01)。HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组MMP-9和VEGF表达低于scramble组(P<0.01)。与scramble组相比,HepG2和MHCC97H细胞中lumican shRNA组p-ERK1和p-JNK蛋白水平下降(P<0.01)。结论 shRNA干扰lumican通过抑制ERK1/JNK通路激活减弱肝癌细胞侵袭和迁移。