单纯疱疹病毒2型感染及其C-erbB2表达与宫颈癌关系的研究

目的　探讨汕头地区宫颈癌的发生与单纯疱疹病毒 2型 (HSV 2 )感染及C erbB2表达的相关性。方法　采用PCR技术及免疫组化SP法检测 84例宫颈癌组织及 13例正常宫颈组织、4 6例尖锐湿疣的HSV 2DNA、HSV 2、C erbB2的表达情况。结果　①宫颈癌组织和尖锐湿疣、正常宫颈组织中的HSV DNA、阳性率分别为 4 8 8%、2 1 7%、15 4 % ,癌组织HSV2 DNA表达明显高于正常宫颈组织和尖锐湿疣 (P <0 0 5 )。②宫颈癌中C erbB2的阳性率为 71 4 % ,明显高于正常宫颈组织 (7 7% ) (P <0 0 1)。结论　汕头地区宫颈癌的发生与较高的HSV 2感染率和C erbB2表达率密切相关 ,两者的共同作用可能是宫颈癌发生发展的重要因素。     

475例单纯疱疹病毒2型基因检测结果分析

目的：了解广州新塘地区疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒2型的感染情况,为临床诊断治疗提供依据。方法采用实时荧光定量RT-PCR方法对我院门诊475例疑似生殖器疱疹患者进行单纯疱疹病毒2型病毒核酸检测。结果（1）在475例疑似生殖器疱疹患者中270例单纯疱疹病毒2型检测阳性,总阳性率为56.84%（270/475）,其中男性154例阳性,阳性率为61.16%（154/256）;女性阳性116例,阳性率为52.97%（116/219）,男女发病率比较二者差异无统计学意义。（2）四个年龄段即＜20岁,20～40岁,41～60岁,＞60岁,它们的阳性率分别为29.63%（8/27）、70.23%（184/262）、46.94%（69/147）、23.08%（9/39）;20～40岁年龄段发病率70.23%,明显高于其他3个年龄段组,组间差异有统计学意义。结论新塘地区单纯疱疹病毒2型感染率为56.84%,20~40岁病毒核酸检出率最高,但感染率无性别差异;实时荧光定量RT-PCR方法在单纯疱疹病毒2型的检测中具有灵敏度高,方便快捷等优点,可对疑似生殖器疱疹患者进行早期正确诊断以避免漏诊及误诊的发生,值得临床应用。     

2型单纯疱疹病毒感染后HaCaT细胞分泌细胞因子的变化研究

目的 探讨2型单纯疱疹病毒(HSV-2)感染后人角质形成细胞分泌细胞因子的状况.方法 采用非洲绿猴肾细胞株VERO细胞进行HSV-2病毒扩增,再以HSV-2感染HaCaT细胞,采用ELISA和荧光实时定量PCR检测感染后24h、48h和72h时IL-10、IFN-γ、TGF-β的分泌和表达情况.结果 经HSV-2感染后HaCaT细胞分泌和表达的IL-10、IFN-γ、TGF-β与对照组相比有统计学差异,并呈时间相关性.结论 在HSV-2感染早期KC参与了免疫反应,其分泌和表达的细胞因子的偏移可能参与了HSV-2的病理机制.     

东莞市男性高危人群单纯疱疹病毒2型血清流行病学研究

目的：了解广东省东莞市男性高危人群单纯疱疹病毒2型感染流行状况及其危险影响因素。方法对278例研究对象在知情同意下接受问卷调查并抽取血清样本,对其单纯疱疹病毒2型血清免疫球蛋白G(IgG)抗体采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测。结果男性高危人群总的血清单纯疱疹病毒2型抗体阳性率37.4%(95%CI,29.4,45.4)。结论流行病学调查结果显示男性高危人群单纯疱疹病毒2型感染率高,未发现其独立影响因子。     

牛膝多糖硫酸酯抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的实验研究

以细胞培养技术对牛膝多糖（Ａｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，Ａｂｐｓ）硫酸酯抗Ⅰ型单纯疱疹病毒药效的实验进行研究。受试药物Ａｂｐｓ硫酸酯（Ａ－５、Ａ－６、Ｂ－３、Ｂ－４、Ｂ－５、Ｃ－６、Ｃ－７、Ｃ－８）和对照药物环胞苷（ＣＣ）、亚膦酰乙酸（ＰＡＡ）按照综合药效指数评价时，排列顺序为Ａ－６（２．１７）＞ＣＣ（２．１１）＞ＰＡＡ（２．０４）＞Ｂ－３（２．０２）＞Ｂ－５（１．９０）＞Ａ－５（１．６０）＞Ｃ－８（１．３８）＞Ｃ－７（１．３２）＞Ｂ－４（０．８４）＞Ｃ－６（０．８０）。由此可见，８种受试的化学合成药牛膝多糖硫酸酯中Ａ－６为抗Ⅰ型单纯疱疹病毒效果较佳新药，本品优于环胞苷和亚膦酰乙酸。     

两种商品化单纯疱疹病毒2型IgG抗体检测试剂盒比较研究

目的比较国产和进口两种商品化单纯疱疹病毒2型IgG抗体检测试剂盒的灵敏度和特异性。方法用两种试剂盒同时对比检测了5个人群的血清样本:性病门诊样本386份,孕妇样本339份,正常体检样本482份,12岁以下儿童样本140份,40岁以上中老年人样本398份,共计1745份。结果两试剂盒对性病门诊人群的阳性符合率为99.03%(102/103),阴性符合率为99.65%(282/283),孕妇人群的阳性符合率为92.86%(26/28),阴性符合率为100%(311/311),正常体检人群的阳性符合率为94.4%(17/18),阴性符合率为100%(464/464),40岁以上中老年人群的阳性符合率为91.7%(22/24),阴性符合率为100%(372/372),12岁以下儿童人群检测均为阴性,符合率为100%。结论国产试剂盒与进口试剂盒的总体阳性符合率为96.53%(167/173),阴性符合率为99.94%(1571/1572),具有较高的灵敏度和特异性,可以满足临床需求。     

应征入伍男性青年单纯疱疹病毒感染状况调查

单纯疱疹病毒(HSV)是所有人类病毒性疾病中最常见的病毒，但在应征人伍体检后复检的男性青年中，HSV-1型和HSV-2型的感染情况，尚未见有关文献报道。为此我们对其进行了HSV血清IgG抗体检测，旨在了解这一特殊群体中HSV的流行情况．以便采取适当预防措施．阻断HSV传播途径。     

单纯疱疹病毒感染与宫颈癌

<正> 我们采集了临床诊断为宫颈癌患者的宫颈病变组织。用ELISA法作了HSV—Ag检测和病理切片检查,以探讨宫颈癌与HSV感染的关系。材料和方法一、标本来源:1990年8月～1991年1月在山西省肿瘤医院妇科门诊,从111例临床诊断为宫颈癌患者     

牛膝多糖硫酸酯抗I型单纯疱疹病毒的实验研究

以细胞培养技术对牛膝多糖（Ａｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，Ａｂｐｓ）硫酸酯抗Ｉ型单纯疱疹病毒药物效的实验进行研究，受试药物Ａｂｐｓ硫酸酯（Ａ－５，Ａ－６，Ｂ－３，Ｂ－４，Ｂ－５，Ｃ－６，Ｃ－７，Ｃ－８）和对照药物环胞苷（ＣＣ），亚膦酰乙酸（ＰＡＡ）按照综合药效指数评价时，排列顺序为Ａ－６（２．１７）〉ＣＣ（２．１１）〉ＰＡＡ（２．０４）〉Ｂ－３（２．０２）〉Ｂ     

中药治疗宫颈单纯疱疹病毒Ⅱ型感染

单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV－2）是女性生殖器炎症中常见的感染病毒。目前采用中药治疗的报道尚属少见。笔者从1996年1～6月与本院妇科合作，前瞻性对经DNA聚合酶链式反应检测（PCR）确诊为宫颈HSV－2感染的病例，采用健脾益气，疏肝清热，利湿止带法，目拟海椿汤治疗34例，初步取得较好疗效，现报道如下。1．临床资料：68例已婚妇女，年龄22～53岁，其中5例早好、2例中妊、1例难免流产。主要临床表现：白带增多48例，其中40例伴有白带颜色改变（黄色、淡绿色），12例伴有臭味。妇科检查宫颈糜烂48例，宫颈正常20例，合并霉菌、滴虫感染5例…     

HSV-2包膜糖蛋白与疫苗的研究进展

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)2型是一种主要引起生殖器疱疹的病原体,它可以在宿主体内终身潜伏并增加人们感染HIV的几率.HSV-2有12个已命名的特异性包膜糖蛋白,它们在病毒的复制和致病中起着至关重要的作用,是细胞免疫和体液免疫的主要靶标,也是预防和治疗HSV-2感染的亚单位疫苗、DNA疫苗或多肽疫苗的候选蛋白.此文综述了HSV-2包膜糖蛋白的特性及以这些糖蛋白为基础的疫苗的研究进展.     

HSV-2包膜糖蛋白与疫苗的研究进展

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)2型是一种主要引起生殖器疱疹的病原体,它可以在宿主体内终身潜伏并增加人们感染HIV的几率.HSV-2有12个已命名的特异性包膜糖蛋白,它们在病毒的复制和致病中起着至关重要的作用,是细胞免疫和体液免疫的主要靶标,也是预防和治疗HSV-2感染的亚单位疫苗、DNA疫苗或多肽疫苗的候选蛋白.此文综述了HSV-2包膜糖蛋白的特性及以这些糖蛋白为基础的疫苗的研究进展.     

响应面法优化MDCK-siat7e细胞培养工艺

目的 以响应面法优化MDCK-siat7e细胞培养条件.方法 以MDCK-siat7e细胞培养的起始氨浓度、乳酸浓度、渗透压和活细胞密度(viable cell density,VCD)为因子,以MDCK-siat7e细胞培养的72 h细胞比生长率、细胞活率、乳酸比生成率和氨比生成率为响应值,采用全因子实验设计和响应面分析来研究这些因子对MDCK-siat7e细胞培养的影响.结果 在MDCK-siat7e细胞培养过程中,对72 h细胞比生长率有显著影响的因子是起始VCD(t=3.43,P＜0.05);对72 h细胞活率有显著影响的因子是起始乳酸浓度(t=4.32,P＜0.05)和氨浓度(t=2.86,P＜0.05);对72 h乳酸比生成率有显著影响的因子是起始乳酸浓度(t=8.92,P＜0.05)、渗透压(t=4.11,P＜0.05)和VCD(t=2.66,P＜0.05),其中乳酸浓度起主要作用;对72 h氨比生成率有显著影响的因子是起始氨浓度(t=2.63,P＜0.05).结论 用响应面法优化MDCK-siat7e细胞培养工艺可对该细胞培养过程中的条件控制起指导作用.     

Ⅰ型单纯疱疹病毒gG基因片段的高效表达、纯化

目的 获得具有优势抗原表位的Ⅰ型单纯疱疹病毒糖蛋白G的表达抗原并纯化鉴定。方法 用PCR技术扩增经分析筛选出的HSVl-gG蛋白中优势抗原决定簇较集中的基因片段。将该段基因克隆至PGEX-4T-2表达载体内，转化大肠杆菌TGl，对重组体进行诱导表达，表达产物主要以可溶性形式存在，使用硫酸铵沉淀后采用Sephamse阴离子交换层析进行纯化。纯化的蛋白抗原包被酶联板分别对抗HSVl-IgM阳性血清和正常人血清标本进行检测。结果 在原核表达载体中成功地克隆了HSVl-gG，电泳分析表明在相对分子质量43．5kD处有HSVl-gG／GST融合蛋白的高效表达，并纯化获得了纯度达90％的表达蛋白。ELISA分析初步证实表达产物具有较好的抗原性和特异性。结论 成功地克隆、表达了高纯度的具有良好免疫原性的HSVl-gG蛋白，为研制高质量的HSV-1免疫学诊断试剂提供了有利条件。     

新生大鼠心肌细胞培养技术

目的探讨新生大鼠心肌细胞的分离、培养方法。方法取1~3 d龄新生大鼠的心室肌细胞,用胶原酶Ⅰ分离心肌细胞,离心收集心肌细胞,差速贴壁法纯化后培养于DMEM培养基。显微镜下鉴定心肌细胞的纯度和形态结构,锥虫蓝染色检查心肌细胞成活率。结果心肌细胞纯度为96%,平均成活率95.43%,并出现同簇细胞的同步跳动。结论该方法简单有效,为研究心肌细胞的人员提供了一种实验手段。     

小鼠肝细胞的简易高效高纯培养及鉴定

目的改进一种简易、高效的乳小鼠肝细胞培养法,并对所培养的细胞进行鉴定。方法原代培养采用改进的组织块贴壁方法,以少量培养基孵育1~2h。传代培养采用0·25%胰蛋白酶消化随后以小牛血清培养为单层细胞。整个过程无需离心。结果成功地用这种简便的方法获得了纯度较高的肝细胞并进行了传代和鉴定。结论使用此方法培养肝细胞简单、高效、快捷,适合大多数实验室培养非大规模肝细胞。     

原代大肠癌细胞分离培养中的影响因素

目的探讨原代大肠癌细胞分离培养中的影响因素。方法采用消化法和贴壁法培养原代大肠癌细胞,观察影响因素。结果原代大肠癌细胞能否培养成功与取材、培养方法及培养液等密切相关。结论标本取材、培养方法等对培养能否成功有重要影响。     

大豆蛋白水解物促进MDCK细胞生长及流感病毒增殖的实验研究

目的  研究大豆蛋白水解物对Madin-Darby犬肾（Madin-Darby canine kidney,MDCK）细胞生长和流感病毒增殖的促进作用。方法  比较MDCK细胞在10%进口胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）-Dulbecco改良Eagle培养基（Dulbecco’s modified Eagle’s medium,DMEM）,10%国产新生牛血清（newborn calf serum,NCS）-DMEM和添加2、4、8 g/L大豆蛋白水解物SHEFF-VAX PLUS PF ACF（PF ACF）的10% 国产NCS -DMEM中的生长情况,以及甲型H7N9流感病毒接种细胞后的血凝素（hemagglutinin,HA）效价。结果  采用培养瓶静置培养时,5种培养体系中的细胞数在第3天达到最高,分别为（8.67±1.54）×106、（4.78±0.64）×106、（10.60±0.23）×106、（9.17±0.51）×106和（4.79±0.19）×106。采用搅拌瓶内微载体培养时,FBS-DMEM、NCS-DMEM和添加2、4 g/L PF ACF的NCS-DMEM中的细胞密度最高可达到（2.56±0.68）×106、（1.74±1.77）×106、（2.20±1.48）×106和（2.50±1.25）×106细胞/ml。流感病毒接种细胞后,FBS-DMEM、NCS-DMEM和添加4 g/L PF ACF的NCS-DMEM中测得的病毒HA效价分别为8.0、3.5和8.0 log2HAU/50 μl。结论  含国产NCS的培养基在添加4 g/L  PF ACF后,MDCK细胞密度和流感病毒产量与含进口FBS的培养基的培养结果相仿,因此,大豆蛋白水解物可作为培养基添加物应用于MDCK细胞培养和流感病毒增殖。     

知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型体外活性研究

目的:对知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的活性进行研究.方法:采用MTT比色法测定知母宁对Vero细胞的毒性作用.采用中性红染色法,以阿昔洛韦为阳性对照药物,考察不同给药方式与不同药物处理时间下知母宁体外抗单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-ⅠSm44)的活性.结果:MTT法测得Vero细胞对知母宁的最大耐受浓度与半数中毒浓度(TC50)分别为0.29与3.66mg*ml-1.不同加药方式下,知母宁与阿昔洛韦均对HSV-ⅠSm44表现出综合抑制作用并能抑制病毒吸附后的复制增殖过程,这些作用总体上随药物浓度升高而增强,其中知母宁抗病毒有效率(ER%)最高达76.42%.知母宁预防HSV-Ⅰ病毒吸附的作用较弱,但其在高浓度(2.08mg*ml-1以上)对HSV-Ⅰ具强的直接杀伤作用,最高ER%值为98.86%.随药物处理时间延长,低浓度知母宁抗HSV-Ⅰ的ER%值递减,2.08mg*ml-1以上知母宁的ER%值变化小.在不同药物处理时间下,知母宁及阿昔洛韦组病毒的感染性均较平行设置的病毒对照组减弱,且知母宁组的感染力较阳性药物组更弱.知母宁组病毒感染力下降值△lgTCID50随处理时间增加而增加.结论:知母宁在体外从多个作用点较强地抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型活性.     

乳鼠心肌成纤维细胞培养方法的改进

目的建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型.方法通过对经典的差速贴壁分离法稍作改进,采用每次贴壁60min、两次差速贴壁分离法收集、培养心肌成纤维细胞.结果形态学观察和免疫细胞化学染色鉴定显示,成功培养心肌成纤维细胞,纯度达95%以上.结论该研究成功建立乳鼠心肌成纤维细胞培养模型,为高纯度心肌成纤维细胞的获得和对其病理生理学的进一步研究打下良好基础.