幽门螺杆菌cagA/CagA分子生物学研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染人数众多,但临床表现各异。大部分感染者终生无症状,但部分感染者会发展为慢性胃炎、十二指肠炎、消化性溃疡、胃癌、粘膜相关胃淋巴瘤。Hp感染之所以有不同结局,在于菌株间存在致病力差异。Hp的致病因子包括菌毛、鞭毛、尿素酶、粘附素、细胞空泡毒素(vacuolization cytotoxin,VacA)、细胞毒素相关基因(cytotoxinassociated gene A,cagA)产物等,一些国家的流行病学研究表明,含细胞毒素相关基因,表达细胞毒素相关抗原A(cytotoxinassociated antigen A,CagA)的Hp菌株感染与十二指肠溃疡和胃癌等严重胃肠疾病发生有关,使cagA/CagA备受各国学者关注。最近,CagA进入宿主细胞后被磷酸化并导致宿主细胞形态改变的报道,为阐明CagA的致病作用和机制提供了契机,使得CagA的功能成为目前Hp研究的热点之一。     

采用竞争性定量PCR检测幽门螺杆菌cagA基因

目的建立竞争性定量 PCR 检测幽门螺杆菌 cagA 基因的方法。方法以重组 PCR 将乳糖操纵子中 Lac 阻抑蛋白特异性结合序列(21bp)重组入 cagA 基因397bp 的片段中构建内参标模援(rfcagA)。体外克隆并表达具有双功能的 GST-LacI 融合蛋白,其一端只有 GST 酶活性,另一端可特异性地与重组内参标模板结合。在定量 PCR 中,以 rfcagA 为内参标模板,pMC3 或 Hp 基因组 cagA 作为竞争性模板,PCR 产物的5′-端标记了生物素,可与包被了亲和素的微孔板结合,只有 rfcagA 的 PCR 产物可与融合蛋白结合而显色。结果 GST 底物的显色程度与样本的 ca-gA 含量呈负相关,当反应体系中的起始模板量为10-10~5拷贝,循环次数小于等于20次。原始模板数以指数方式增长,并建立了原始模板的考贝数与 A_(340)值同的标准曲线。用该方法检测12份已知菌株中的 cagA 含量,8份 cagA 阳性,cagA 基因的拷贝数为6.3×10~(10)-2.14×10~(11)/L,特异性为100%,敏感度达可检出 cagA 基因2倍的差别。结论这是一个特异、敏感及很实用的定量检测 cagA 基因的方法。     

不同地区幽门螺杆菌cagA基因羧基端可变区及其蛋白序列差异分析

目的:比较不同地区H pylori cagA 3'端可变区序列差异及序列的地域特征,分析差异与疾病的相关性.方法:选择本实验室所收集的20例CagA 的PCR产物进行测序,并通过ExPASy-Translation软件推测其氨基酸序列,搜索并收集GenBank中已公布的不同地区3-6个H pyloricagA 3'端可变区序列及其氨基酸序列进行比较分析.结果:cagA蛋白的氨基酸序列可分为具有明显地域特征的东亚型和西方型两类;部分东亚型菌株表现出西方型变异.87.4%的菌株具有3个串联排列的EPIYA基序,8.2%的菌株具有4个或以LEPIYA基序.新发现1条具有区域特征的含有3个氨基酸的序列.cagA蛋白氨基酸序列中的EPIYA数目与临床结果没有相关性.结论:Hpylori cagA基因及其cagA蛋白序列具有明显多态性,可以根据Hpylori cagA 3'端可变区的主要序列差异进行地域分型,cagA 3'端可变区的EPIYA基序的数目与临床结果没有相关性.     

幽-螺杆菌cagA/CagA分子生物学研究进展

幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染人数众多,但临床表现各异.大部分感染者终生无症状,但部分感染者会发展为慢性胃炎、十二指肠炎、消化性溃疡、胃癌、粘膜相关胃淋巴瘤Hp感染之所以有不同结局,在于菌株间存在致病力差异.     

幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因及其表达产物

幽门螺杆菌(Hp)的vacA基因和cagA基因分别表达VacA和CagA蛋白两种毒力因子。两种毒力因子之间有着相互的关联,在Hp引起的胃肠疾病中具有重要作用。Hp感染者的临床发病与Hp的vacA基因型、具有cagA基因Hp以及VacA和CagA蛋白的表达有着密切的关系。     

幽门螺杆菌CagA基因及其与致病性关系的研究进展

自本世纪８０年代初,Ｗａｒｒｅｎ和Ｍａｒｓｈａｌ［１,２］最先从胃炎及胃溃疡患者的胃粘膜活检标本中发现并分离到幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ,ＨＰ）以来,开创了感染与胃部疾病发生有关的新领域。随后,大量研究资料确证ＨＰ与慢性胃炎、消...     

中国幽门螺杆菌cagA克隆和基因序列分析

目的　了解和分析中国幽门螺杆菌（ Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ, Ｈｐ）菌株细胞毒素相关基因Ａ（ｃａｇＡ） 的核苷酸序列特性．方法　从两位患胃溃疡儿童的胃粘膜中分离两株 Ｈｐ 菌株,用ＰＣＲ方法扩增ｃａｇＡ 基因的５○端和３○端的两个片段并作克隆和序列分析．结果　两株中国 Ｈｐ 菌株ｃａｇＡ 基因之间的同源性为９４ ％ ～９５ ％ ． 中国Ｈｐ 菌株与国外菌株相同区段比较,５○端的同源性为８９ ％ ～９２ ％ ,３○端的同源性为６９ ％ ．结论　中国Ｈｐ 菌株与国外Ｈｐ 菌株ｃａｇＡ 基因５○端序列部分区域的同源性较好,可以作为分子检测 Ｈｐ 感染的靶基因序列,而ｃａｇＡ 基因３○端序列部分区域的同源性较差,可以作为Ｈｐ 分子流行病学研究的靶基因序列．     

幽门螺杆菌CagA及VacA基因的研究进展

幽门螺杆菌（Ｈｐ）为革兰染色阴性菌,定植于胃粘膜表面,如果不给予治疗,Ｈｐ感染可持续数十年甚至终生［１,２］．Ｈｐ感染是引起慢性胃炎、十二指肠溃疡和胃溃疡的主要病因,并且是胃癌和胃淋巴瘤发生的一个主要危险因素．然而,感染了Ｈｐ的人群中大约只有１５％的人发生这些疾病,造成上述不同结果的机制尚不十分清楚［３］．感染了Ｈｐ人群的发病,除了与宿主基因易感性和环境因素有关外,还与所感染Ｈｐ菌株的毒力有关［４］．近年随着分子生物学研究技术的发展,发现Ｈｐ菌株在基因水平存在差异．Ｈｐ的某些菌株具有细胞毒素相关…     

镇江地区H pylori的cagA基因及其3′可变区结构的变化

目的:评估镇江地区H pylori临床株的cagA基因阳性率、了解菌株CagA蛋白的可能分型、其羧端可变区EPIYA的数目以及与临床结果之间有无关联.方法:培养分离来自临床胃十二指肠疾病患者的H pvlori,提取基因组DNA,通过PCR方法检测H pylori cagA基因的状况.随机选择不同病种的cagA基因阳性(cagA~ )的PCR产物.通过转化质粒,进行cagA~ PCR产物测序,通过ExPASY-Tranlation软件获得cagA基因相应的CagA蛋白的氨基酸序列.国际标准株NCTC11637的cagA基因以及CagA蛋白序列通过搜索NCBI(www.ncbi.nlm.nih.gov)数据库获得.结果:60株H pylori临床株中,56例为cagA~ ,阳性率达93.3%.20例测序的结果表明,CagA蛋白结构可分为2种类型,19株东亚型和1株西方型.所有19株东亚型均为Yamaoka分型的A型,所有20例菌株的EPIYA的数目均为3个,与临床结果无关联.结论:cagA基因阳性率在不同病种之间无差异.镇江地区H pylori临床株的CagA蛋白的一级结构,与日本、韩国菌株一样,主要为东亚型,其CagA蛋白羧端可变区EPIYA数目均为3个,与临床结果无关联.     

幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因及其表达产物与胃十二指肠疾病的关系

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染是慢性胃炎(chronic gastritis,CG)和消化性溃疡(peptic ulcer,PU)的病因之一。也是胃癌(gastric cancer,GC)的危险因素。Hp的空泡形成毒素基因(vacuolating toxin gene,vacA)型和细胞毒素相关基因(cytotoxin-associated gene,cagA)及其表达产物——空泡形成细     

CagA蛋白序列可变区多态性分析

背景:幽门螺杆菌(H.pylori)与胃十二指肠疾病关系密切。由于菌株之间CagAEPIYA基序数目及其间隔的氨基酸序列的不同,导致H.pylori主要毒力因子CagA蛋白的多态性和毒力差异。目前关于CagA蛋白多态性的研究缺乏系统性。目的:系统了解H.pyloriCagA蛋白序列多态性及其特征。方法:采用生物信息学软件序列比对分析与统计学软件数据加工整理技术相结合的方法,对NCBI、swiss_prot/tremble、DDBJ三大蛋白数据库CagA蛋白的97条全长序列和442条3’端部分序列进行多态性分析。结果:CagA蛋白氨基酸序列长短不等,主要是由可变区的变化引起的,可变区平均大小为(114.2±24.9)个氨基酸。539株H.pylori菌株CagA蛋白可变区EPIYA有14种突变型,占7.8%;EPIYA基序平均重复(3.3±0.7)次,最少1次,最多7次。两个EPIYA基序间的间隔序列主要有7种,其中R3C和R4C中的“FPLKRHDKVDELIKVG”以及R4C中的“TIDDLGGP”是西方株特征序列,R3D中的“KIASAGKGVGGFSGAG”和R4D中的“FPLRRSAAVNDLSKVG”、“TIDFDEAN”是东亚株特征序列。EPIYA及其间隔序列的不同组合构成了CagA可变区的17种不同类型。东亚株EPIYA基序重复次数显著少于西方株,而EPIYA-A、EPIYA-B位点数显著多于西方株。结论:CagA蛋白可变区呈现明显多态性,但有其内在规律;进一步研究CagA蛋白多态性与细菌毒力的关系可能揭示出更多H.pylori致病的分子生物学机制。     

威海地区幽门螺杆菌cagA基因3′端多态性分析

目的研究威海地区幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）临床分离株cagA基因的3′端多态性。方法采用PCR法扩增Hp临床分离株的cagA基因3′端并测序,用DNAStar 5.0软件对其进行编码氨基酸序列的比对分析。结果 63株Hp临床分离株均cagA阳性（cagA＋）,其中93.7%（59/63）为东亚型（EPIYYA-ABD）,6.3%（4/63）为西方型（EPIYYA-ABC）。3.4%（2/59）的东亚型菌株EPIYA-B突变为ESIYA-B,4株西方型型均突变为EPIYT-B。胃癌患者分离株中88.9%（16/18）为东亚型,11.1%（2/18）为西方型;非胃癌分离株中95.6%（43/45）为东亚型,4.4%（2/45）为西方型。2株分离自胃癌患者的西方型Hp EPIYA-A后的第一个氨基酸残基由赖氨酸（K）突变为谷氨酸（E）。结论威海地区Hp cagA基因以东亚型为主,但东、西方亚型Hp的致病性无显著差别,两型都存在cagA基因3′端编码氨基酸序列的改变。     

幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因及其表达产物

幽门螺杆菌（Ｈｐ）的ｖａｃＡ基因和ｃａｇＡ基因分别表达ＶａｃＡ和ＣａｇＡ蛋白两种毒力因子。两种毒力因子之间有着相互的关联，在Ｈｐ引起的胃肠疾病中具有重要作用，Ｈｐ感染的临床发病与Ｈｐ的ｖａｃＡ基因型，具有ｃａｇＡ基因Ｈｐ以及ＶａｃＡ和ＣａｇＡ蛋白的表达有着密切的关系。     

幽门螺杆菌vacA毒性片段与cagA融合基因的构建与表达

目的　构建幽门螺杆菌空泡毒素 (VacA)毒性片段和细胞毒素相关蛋白 (CagA)的融合基因 (vlc) ,在原核细胞中表达 ,为Hp双价融合蛋白候选疫苗的研究提供材料。 方法　用GeneSOEing技术将vacA毒性亚单位片段 (v)与cagA保守片段 (c)用疏水性多肽接头 (Gly4Ser) 3 进行拼接 ,构建融合基因vlc,将vlc定向插入原核表达质粒pQE30 ,经DNA测序分析确认后 ,转化E .coliDH5a ,IPTG诱导表达 ,Westernblot分析其抗原性。结果　DNA序列分析表明融合基因的连接顺序、方向正确 ,有一个碱基发生了无义突变。工程菌诱导后可表达相对分子量为 5 8× 10 3 的融合蛋白 ,与预期分子量一致 ,约占菌体总蛋白的 8%。Westernblot显示融合蛋白具有良好的抗原性。结论　融合基因vlc构建成功 ,表达的融合蛋白具有良好的抗原性 ,有望进一步进行免疫保护性机制的研究和Hp疫苗的制备。     

CagA与幽门螺杆菌致病的相关性研究

本调查了114胃镜受检的Hp感染率，应用血清ELISA技术检测了Hp菌株中CagA闭性数，并对该蛋白与慢性胃病的关系进行了初步分析。结果发现54例中Hp阳性，CagA阳性25例，阳性率46.3%；胃炎、十二指肠溃疡和胃癌组织CagA阳性率分别为27.3%，71.4%和85.7%（P<0.01）。CagA阳性菌株感染胃粘膜的炎症程度、活动度及萎缩、肠化与淋巴滤泡形成数均高于阴性，证实了CagA在Hp致病中的重要作用。     

幽门螺杆菌cagA基因3’端多态性分析及其临床意义

目的探讨幽门螺杆菌（H．pylon）eagA基因3’端多态性及其与临床疾病的相关性。方法收集NCBI网络数据库H．pylorieagA基因全序列95条，eagA基因3’端可变区碱基、氨基酸序列387条，用Vector NTI advance 10软件对已知疾病背景的256条网络数据库eagA氨基酸序列进行多序列比较，分析eagA基因3’端序列特征及其与临床疾病的相关性。结果（1）91条eagA基因全长氨基酸序列之间相同氨基酸百分比为27％，相似性较低；其3’端序列之间差异明显，存在大量氨基酸的插入、缺失、替换外和重复，而5’端序列相对保守。（2）eagA基因3’端氨基酸序列含有六种重复序列，分别命名为C1，C2，C3，C4，C5，C6；其中C3，C4，C6可分为两种类型，东亚型（Cn东）和西方型（Cn西）。大部分（81．86％）eagA基因3’端氨基酸序列基本结构为C1—C2-C1-C3东／C3西-C4东／C西-C5-C1-C6东／C6西。少数菌株eagA基因3’端氨基酸序列长度较长，具有不同的重复序列数目及组合方式，根据其重复序列数目及组合方式不同，可将这少数菌株eagA基因3’端氨基酸序列分为10型，其中1、7、9、10型仅存在于西方来源菌株，2、3、5、8型仅存在于东方来源菌株，4、6型为东西方菌株共有类型。（3）〉4个EPIYA模体的菌株检出率在萎缩性胃炎组（11．90％）与消化性溃疡（PU）组（1．27％）比较差异有统计学意义（P〈’0．05），且含有4个以上EPIYA模体的菌株87．5％是在萎缩性胃炎及胃癌（GU）中检出。含多个EPIYA—C／D位点的菌株在胃癌患者中的检出率（16．67％）显著高于消化性溃疡（5．06％）患者（P〈0．05）。c4数目=3时，GC组（14．81％）与Pu组（2．53％）比较差异有统计学意义（P〈0．05），其余重复序列数目在不同胃十二指肠疾病中无统计学意义（P〉0．05）。第6型菌株在胃癌患者中的检出率（14．81％）显著高于消化性溃疡（2．53％）患者（P〈0．05）。结论（1）且pylori菌株casA基因3’可变区多态性明显，其差异主要由重复序列的种类、数目和组合方式造成。（2）感染〉4个EPIYA模体的CagA＋H.pylori可能与萎缩性胃炎及胃癌有关。（3）含多个EPIYA—C／D位点的CagA＋H.pylori及第6型CagA＋H．pylori可能与胃癌有关。     

幽门螺杆菌毒力因子CagA与动脉粥样硬化

幽门螺杆菌的毒力因子CagA在动脉粥样硬化发病机制中起重要作用,CagA阳性的Hp感染能增加动脉粥样硬化的危险度,并通过抗原模拟、诱导自身免疫反应以及增强全身或动脉局部的炎症反应等途径促进动脉粥样硬化的发生发展。     

不同种族幽门螺杆菌菌株CagA蛋白羧基端结构和生物学功能的差异

目的比较不同种族H.pylori菌株CagA蛋白羧基端结构以及诱导AGS细胞延伸、分泌IL-8能力的差异。方法 PCR扩增CagA3′端可变区DNA序列并进行测序,获得CagA3′端可变区氨基酸序列。以不同H.pylori菌株与AGS细胞孵育,观察AGS延伸细胞的百分数,测定细胞培养上清IL-8含量。结果美籍亚裔和美籍非裔菌株的CagA羧基端氨基酸第3个EPIYA前后的氨基酸序列存在明显差异。不同种族cag PAI+H.pylori导致AGS细胞延伸、分泌IL-8能力无明显差异。cag PAI+H.pylori诱导细胞延伸AGS细胞、分泌IL-8的能力明显大于cag PAI-H.pylori。结论不同种族H.pylori菌株CagA蛋白羧基端结构存在差异。H.py-lori菌株诱导AGS细胞延伸、分泌IL-8的能力与cag PAI有关。     

太原地区不同临床型胃疾患与幽门螺杆菌感染及其毒力相关基因cagA关系的探讨

目的探讨幽门螺杆菌（Hp）感染、cagA^＋-Hp与胃部疾病严重程度的关系。方法胃镜直视下取102例胃粘膜组织并采血,分离血清。应用Hp-ureA-PCR,ELISA,细菌培养3种方法确定Hp感染例数,用PCR检测cagA-Hp基因。结果102例胃疾患病人,确定Hp感染76例,其中57例检测到cagA-Hp基因,检出率为75.00%。各型胃疾患病人cagA检出率分别为：CSG 52.38%（11/21）,CAG 92.31%（12/13）,GU81.82%（18/22）,GC 80.00%（16/20）。结论1）各种胃部疾病均与Hp感染有关,但单纯的Hp感染不足以解释临床结局的多样性;2）cagA^＋-Hp与胃部疾患的严重程度相关,携带有cagA的Hp可能具有较强的致病性,但其具体的致病机理尚需进一步阐明。     

CagA与幽门螺杆菌致病的相关性研究

本文调查了114例胃镜受检者的 Hp 感染率,应用血清 ELISA 技术检测了 Hp 菌株中 CagA 阳性数,并对该蛋白与慢性胃病的关系进行了初步分析。结果发现54例中 Hp 阳性者,CagA 阳性25例;阳性率46.3%;胃炎、十二指肠溃疡和胃癌组织 CagA 阳性率分别为27.3%,71.4%和85.7%(P<0.01)。CagA 阳性菌株感染者胃粘膜的炎症程度、活动度及萎缩、肠化与淋巴滤泡形成数均高于阴性者。证实了 CagA 在 Hp 致病中的重要作用。