豚鼠形觉剥夺性近视视网膜早基因c-fos的动态表达

目的建立豚鼠形觉剥夺性近视(form-deprivationmyopia,FDM)动物模型,并对豚鼠形觉剥夺性近视形成及恢复过程中视网膜早基因c-fos的动态变化进行观察,研究豚鼠FDM中视网膜信号转导及抑制近视的可能分子机制。方法3周三色豚鼠40只,随机均分为4组:遮盖前组、单眼遮盖1周组、单眼遮盖2周组及去遮盖组。对各组进行视网膜检影和A超测眼轴,分别运用免疫组化和RT-PCR观察各组视网膜c-fos蛋白及mRNA的表达和变化。结果遮盖2周后,遮盖眼较对照眼呈高度相对近视(-8.8 D),视网膜c-fos表达明显下调,双眼屈光度、眼轴和视网膜c-fos的表达差异均有显著性(P<0.05);遮盖2周后,去遮盖1周,去遮盖眼较对照眼呈中度相对近视(-5.9 D),但去遮盖前后屈光度及眼轴差异无显著性(P>0.05),去遮盖眼较对照眼视网膜c-fos的表达明显上调,差异有非常显著性(P<0.01)。结论形觉剥夺能成功诱导豚鼠近视的发生及发展,并抑制视网膜c-fos的表达,而去除形觉剥夺可抑制近视的发展,并诱导视网膜c-fos的表达上调,证明c-fos的表达规律不仅反映外界视觉环境对眼的刺激,并与近视发展规律呈负相关,可能参与视网膜的信号转导和近视的抑制机制。     

腺相关病毒介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞的实验研究

目的比较四种不同血清型腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞(guinea pig scleral fibroblast,GSF)的转染效率及安全性,筛选合适的基因转染载体。方法原代分离培养GSF并鉴定,利用AAV2、AAV5、AAV8、AAV9介导EGFP基因并按不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)10、100、1000、10 000转染GSF,空白对照组加入空白培养基,转染后2 d、3 d、4 d、5 d荧光显微镜下观察GFP表达强度及细胞生长状态,流式细胞术检测细胞转染率及凋亡率,CCK-8法检测细胞活力。结果 AAV感染GSF后2 d各组均可见弱荧光,荧光强度随时间延长及MOI值增大而增强,而AAV9-EGFP组全程弱荧光,空白对照组全程无荧光。转染后5 d,MOI=10 000时各组荧光最强,基因转染率组间整体比较,差异具有统计学意义(P<0.05);组间两两比较,AAV8-EG...     

基因疗法治疗nAMD的相关临床试验及前景展望

新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)是老年人群主要的致盲眼病之一,早发现、早治疗尤为重要。目前,nAMD的治疗主要为抗血管内皮生长因子(VEGF)和激光治疗等对症疗法,这并不能解决nAMD持续性活动的问题,反复治疗增加患者的经济负担,也增加了眼压升高、炎症反应等并发症的发生。近年来,基因疗法的广泛应用为nAMD的治...     

基质金属蛋白酶抑制剂-2基因转染豚鼠形觉剥夺性近视模型生物学和巩膜形态学改变

目的观察基质金属蛋白酶抑制剂2（TIMP2）基因转染豚鼠形觉剥夺性近视模型屈光度、眼轴变化及后极部巩膜形态学改变,探讨外源性TIMP2基因对形觉剥夺性近视的治疗作用。方法实验研究。4周龄健康豚鼠60只,随机分成TIMP2组、空质粒组、生理盐水组和对照组,每组15只。右眼为剥夺眼,采用半透明眼罩遮盖诱导轴性近视,左眼不予处理。选取TIMP2组豚鼠左眼作为自身对照组。TIMP2组、空质粒组、生理盐水组形觉剥夺后15 d于右眼脉络膜上腔分别注射转染TIMP2基因的脂质体、转染空质粒的脂质体和生理盐水。在注药后2、7、14 d各组进行双眼屈光度、眼轴检测。然后处死豚鼠分离出巩膜。采用光镜观察巩膜的厚度,成纤维细胞的密度及细胞外基质的变化。采用透射电镜观察胶原纤维的排列、直径大小及细胞外基质的变化。对数据进行两因素方差分析及q检验。结果注药后2、7、14 d TIMP2组右眼屈光度分别为（-0.4±0.5）D、（+0.9±0.6）D和（+1.2±0.6）D,与空质粒组、生理盐水组和对照组比较,在注药后14 d差异有统计学意义（q=5.78、5.34、6.07,P<0.05）。而与自身对照组比较,在第2、7、14天差异均有统计学意义（q=13.09、9.72、6.93,P<0.05）;注药后2、7、14 d TIMP2组眼轴分别为（7.78±0.04）mm、（7.69±0.03）mm、（7.65±0.03）mm,其中第7、14天TIMP2组与其他3个实验组差异有统计学意义（q7=5.51、4.43、4.82,q14=5.36、4.78、5.16;P<0.05）。TIMP2组注药后2、7、14 d右眼胶原纤维平均直径分别为（49.7±6.8）nm、（71.3±6.0）nm和（97.8±10.4）nm,与其他3组比较在第7、14天差异均有统计学意义（q7=30.70、12.30、12.20,q14=21.80、21.50、21.20;P<0.05）,与自身对照组比较只在第2天差异有统计学意义（q=14.40,P<0.05）。结论TIMP2基因转染豚鼠形觉剥夺性近视模型,有促进巩膜胶原纤维直径增大、抑制眼轴变长的作用,近视屈光度下降。TIMP2基因对于豚鼠形觉剥夺性近视模型形态学和生物学改变有一定的抑制效应。