A－LAK细胞与LAK细胞体外增殖及抗肿瘤作用的比较

本实验观察了Ａ－ＬＡＫ细胞的体外扩增及其抗肿瘤作用，并与ＬＡＫ细胞进行了比较。结果表明，Ａ－ＬＡＫ细胞在短期内大量扩增，在培养第７天时达到增殖高峰，Ａ－ＬＡＫ细胞增加１２．０２倍，而ＬＡＫ细胞增加２．６９倍，培养３周后Ａ－ＬＡＫ细胞增加５３．５０倍，而ＬＡＫ细胞仅增加４．４５倍。１８小时ＬＤＨ－Ｌ释放试验表明，Ａ－ＬＡＫ细胞对Ａｎｉｐ９７３和Ｋ５６２细胞均显示较高的杀伤活性，与ＬＡＫ细胞相比有显著差异（Ｐ＜０．０５）。通过ＦＡＣＳ细胞表型分析显示，Ａ－ＬＡＫ细胞大量表达ＣＤ１６、ＣＤ５６抗原，提示Ａ－ＬＡＫ细胞可能来源于ＬＧＬ－ＮＫ细胞群。     

脐血LAK细胞的制备及其生物活性的测定

目的 寻找新的高效杀伤活性的细胞,探讨脐血单个核细胞作为ＬＡＫ细胞前体细胞的可行性和意义。方法 分离的脐血单个核细胞,分别用ＩＬ－２和ＩＬ－２＋ＩＮＦα诱导ＬＡＫ细胞,并于培养后ｄ２,４,７,１１,１４分别测其细胞扩增数量和对Ｋ５６２细胞的杀伤活性。结果 于培养后ｄ１１时,脐血单个核细胞的扩增倍数最高,两组分别为培养前的２０倍和２５倍。其对Ｋ５６２的杀伤活性分别对对照培养前的２．７倍和３．５倍。结     

rIL－2激活的小鼠粘附性LAK细胞抗瘤活性和扩增的研究

小鼠脾脏淋巴细胞在体外ｒＩＬ－２培养下，可粘附到塑料板或玻璃瓶上，在除去非粘附性淋巴细胞后，粘附性ＬＡＫ细胞（Ａ－ＬＡＫ）在ｒＩＬ－２存在的条件下，４天内可迅速扩增３６倍，与ＬＡＫ细胞抗瘤活性相比，Ａ－ＬＡＫ细胞抗瘤活性明显增强，培养２０天后其抗瘤活性仍可达３３％，从形态学分析，Ａ－ＬＡＫ细胞主要由大颗粒淋巴细胞组成。     

LAK细胞的分离,诱导及其生物学特性的观察

本文报告由健康人外周血制备ＬＡＫ细胞，体外经ｒＩＬ－２诱导、培养、扩增及其细胞形态学的情况。结果表明：ＬＡＫ细胞培养１￣３天数目未见明显增加，从第４天起逐渐扩增；第１５天可达增殖高峰，增加约１６倍左右；培养３￣５天后细胞逐渐变大，表面不光滑，有指状突起，伸出伪足，细胞内染色质变粗糙，可见有丝核分裂。     

rIL—2激活的小鼠粘附性LAK细胞抗瘤活性和扩增的研究

小鼠脾脏淋巴细胞在体外ｒＩＬ－２培养下，可粘附到塑料板或玻璃瓶上，在除去非粘附性淋巴细胞后，粘附性ＬＡＫ细胞在ｒＩＬ－２条件下，４天内可迅速扩增３６倍，与ＬＡＫ细胞抗瘤活性相比，Ａ－ＬＡＫ细胞抗瘤活性明显增强，培养２０天后其抗瘤活性仍可达３３％，从形态学分析，Ａ－ＬＡＫ细胞主要由大颗粒淋巴细胞组成。     

妇科恶性肿瘤患者CD3AK细胞与LAK细胞体外增殖能力动态观察

采用ＣＤ３ＭＡｎ＋ＩＬ－２联合刺激泊制备妇科恶性肿瘤患者ＣＤ３ＡＫ细胞，体外动态观察ＣＤ３ＡＫ细胞的形态特征及增死去工与ＬＡＫ细胞进行比较。结果显示：１．ＣＤ３ＡＫ细胞与ＬＡＫ细胞在体外分别经ＣＤ３ＭＡｂ＋ＩＬ－２和ＩＬ－２刺激后，细胞体积增大，继之变为不规则形；２．ＣＤ３ＡＫ细胞培养第１周增殖倍数为２．８９，至第４周增殖倍数达１０９．３７倍，均显著高于同期培养的ＬＡＫ细胞的增殖倍数３．ＣＤ３ＡＫ     

CD3AK细胞和LAK细胞的表型测定

用抗ＣＤ＿３抗体和低剂量ＩＬ－２以及单独用高剂量ＩＬ－２分别诱生正常鼠、免疫鼠脾细胞为ＣＤ＿３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞。用间接免疫荧光法和微云细胞毒实验两种方法测定培养４ｄ和９ｄ的细胞表型。结果：正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ和ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率均高于诱生前正常鼠脾细胞（Ｐ＜０．０１）。正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ细胞中，ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。免疫鼠ＣＤ＿３ＡＫ与正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ的表型相似，而免疫鼠ＬＡＫ细胞的ＣＤ＿８阳性细胞率显著增加，明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。     

LAK细胞活性与体外培养时间关系的研究

本文报告了以引产胎儿胸腺细胞为淋巴细胞来源，用ＩＬ－２激活后ＬＡＫ活性与培养时间的关系，经多次重复实验证明，ＭＴＴ法是简单，易行，准确可靠的检验ＬＡＫ活性的方法之一，在我们实验室的培养条件之下，ＬＡＫ活性最高时间是在培养４～８天之间，此间ＬＡＫ活性比培养前增加８５．７～１１４．３％，是收获ＬＡＫ细胞的最佳时间，两周后ＬＡＫ活性衰减很快，因此，作者认为，ＬＡＫ细胞培养时间不宜超过两周。     

四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用的比较

比较四种不同组织来源ＬＡＫ细胞折体外扩增及抗肿瘤作用。方法：选用脐带血制备ＬＡＫ细胞，并与临床常用的外周血，胎脾及胸腺ＬＡＫ细胞在体外扩增及抗肿瘤作用方面比较。结果；脐带血的扩增能力显高于其余３种ＬＡＫ细胞，每份脐带血ＬＡＫ细胞总数可增殖至２．５×１０＾１０，抗肿瘤活性以脐带血ＬＡＫ对ＳＭＭＣ－７２２１肝癌细胞出现最早，活性最强，明显强于其余三；对Ｋ５６２的１样伤作用仍属脐带血ＬＡＫ阳强；而胸     

自体LAK高效扩增法的建立及活性诱导实验

目的建立体外高效扩增自体ＬＡＫ细胞方法，并测定诱导扩增的ＬＡＫ细胞是否具有杀瘤细胞作用及表型变化。②方法取２８例不同类型的肿瘤病人外周静脉血液，经密度梯度离心获取ＬＡＫ细胞前体，以白细胞介素２（ＩＬ－２）作为诱导剂，应用独特的液相三步扩增方法扩增自体ＬＡＫ细胞。分别用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）法，测定细胞表型和对肿瘤细胞的杀伤活性，并与对照组细胞进行比较。③结果以该法诱导扩增４～１２ｄ，细胞数量增加１２０倍，对Ｋ５６２和Ｒａｊｉ细胞杀伤活性最高达６１．７％和４０．１％（效∶靶＝５０∶１），与对照组细胞比较，差异有极显著性（ｔ＝４．５～４．７，Ｐ＜０．０１）。自体ＬＡＫ细胞具有成熟Ｔ细胞表型特点（ＣＤ３和ＣＤ８）。④结论此法可扩增出高数量和高效杀肿瘤细胞活性的自体ＬＡＫ细胞，并可推广临床应用     

LAK细胞及其冻融液,培养上清液对肿瘤细胞的杀伤作用

目的研究ＬＡＫ细胞的活性诱导和杀伤机制。方法用ＭＴＴ法检测不同培养时间的ＬＡＫ细胞、ＬＡＫ细胞冻融液及培养上清液对肿瘤细胞杀伤作用的相关性以及对肿瘤的杀伤作用。方法加入终浓度为１ｍｇ／Ｌ的放线菌素Ｄ以阻断检测过程中肿瘤增殖对实验结果影响。结果①ＬＡＫ细胞冻融液和培养上清液的杀伤活性与ＬＡＫ细胞活性呈正相关（ｒ分别为０．９９６和０．９９９，直线相关性ｔ检验Ｐ＜０．００１和０．００５）；②动态杀伤分析显示，ＬＡＫ细胞动态杀伤活性与ＬＡＫ细胞冻融液、培养上清液之间不呈直线性相关（ｒ分别为０．８４７，０．７９９，Ｐ值均＞０．０５），而ＬＡＫ细胞冻融液和培养上清液间则呈显著直线相关（ｒ为０．９６９，Ｐ＜０．０１）。这表明ＬＡＫ细胞对肿瘤细胞的杀伤方式为快速杀伤，而ＬＡＫ细胞冻融液和培养上清液对肿瘤细胞的杀伤方式则为慢杀伤，ＬＡＫ细胞杀伤活性明显高于ＬＡＫ细胞冻融液。结论ＬＡＫ细胞活性诱导与胞浆内细胞毒因子表达有关；ＬＡＫ细胞可能通过释放细胞毒因子对肿瘤细胞起直接杀伤作用；ＬＡＫ细胞通过与肿瘤细胞直接接触释放杀伤介质，而导致肿瘤细胞凋亡，是其高效、快速杀伤肿瘤细胞的作用机制。     

脐血LAK细胞生物学特性影响因素的研究

采集２３名产妇的脐带血和８名正常成人的外周血制备ＬＡＫ细胞，随机分为４组，在培养第３，５，７，１４天，分别利用ＭＴＴ法和＾１２５Ｉ－ＵｄＲ释放法对４组ＬＡＫ细胞的增殖力和杀伤活性进行了测定，同时用细胞毒方法测定培养７天的ＬＡＫ细胞的免疫表型。结果发现，在不同培养时间，脐血来源的ＬＡＫ细胞增殖力显著高于成人血ＬＡＫ细胞（Ｐ〈０．０５或Ｐ〈０．０１），成人血清组，脐血血清组，红细胞组ＬＡＫ细胞增殖力有     

胎儿LAK细胞治疗18例晚期恶性肿瘤的疗效观察

以人胎脾、胸腺细胞作为ＬＡＫ前体细胞，建立了一套体外大规模扩增、培养、制备ＬＡＫ细胞的生产流程，制备的ＬＡＫ细胞工艺简单，获取量大、活性高，联合应用ＩＬ－２、ＴＮＦ，治疗晚期恶性肿瘤共１８例。结果表明：多数患者自觉症状有改善，生活质量提高，部分患者肿块缩小，白细胞数升高、外周血免疫功能提高。用同种胎儿ＬＡＫ细胞代替肿瘤患者的自身ＬＡＫ细胞作过继性免疫疗法安全可行，可有效地解决ＬＡＫ前体来源困难的问题。     

LAK细胞有效制备方法研究

制备大量的具有显著抗肿瘤活性的ＬＡＫ细胞是确保ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法发挥抗肿瘤作用的前提。本文介绍增强ＬＡＫ活性和ＬＡＫ数量的有效的制备方法。如ＩＬ－２的诱导剂量、不同材料（脾细胞、淋巴结细胞、外周血淋巴细胞、胸腺细胞等）的ＬＡＫ产生的时间动力学及多种ＬＡＫ细胞增强剂的协同应用，从而获得高效价和大数量的ＬＡＫ细胞。     

LAK细胞有效制备方法研究

制备大量的具有显著抗肿瘤活性的ＬＡＫ细胞是确保ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法发挥抗肿瘤作用的前提。本文介绍增强ＬＡＫ活性和ＬＡＫ数量的有效的制备方法。ＩＬ－２的诱导剂量、不同材料（脾细胞、淋巴结细胞、外周血淋巴细胞、胸腺细胞等）的ＬＡＫ产生的时间动力学及多种ＬＡＫ细胞增强剂的协同应用，从而获得高效价和大数量的ＬＡＫ细胞。     

妇科肿瘤患者CD3AK细胞和LAK细胞杀瘤活性比较

为比较ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞的杀瘤特性，观察发妇科肿瘤患者ＣＤ３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞对卵巢癌细胞系的杀伤活性。结果表明；良性肿瘤组ＬＡＫ细胞杀瘤活性高峰在培养第１，２周，显著高于同期培养的ＣＤ３ＡＫ细胞，第３周则较低，而ＣＤ３ＡＫ细胞的杀瘤活性高峰在培养第３，４周，显著高于ＬＡＫ细胞；恶性肿瘤组，ＬＡＫ细胞杀瘤高峰在培养第１周，显著高于同期培养的ＣＤ３ＡＫ细胞，而ＣＤ３ＡＫ细胞杀瘤高峰在培养第     

植物血凝素激活的LAK细胞激活培养条件与其生物学特性关系的研究

将ＰＨＡ和ｒＩＬ ２合理配伍应用于ＬＡＫ细胞的激活培养中，研究了ＰＨＡ ＬＡＫ细胞的增殖、细胞毒活性及表型。结果表明：培养条件中加入适量ＰＨＡ可促进ＰＨＡ ＬＡＫ的增殖（Ｐ＜０．０５），不影响其细胞毒活性。ＰＨＡ／ｒＩＬ ２共同预刺激组于培养第２ｄ细胞数明显下降（３０％～４０％），但其到达增殖高峰的时间、峰值及扩增倍数与同一培养条件下的ＰＨＡ单独预刺激组相比，差别无显著性（均为Ｐ＞０．０５）；但前者对Ｋ５６２和Ｒａｊｉ的杀伤高峰值大于后者（Ｐ＜０．０１）。各组ＰＨＡ ＬＡＫ中有０．６０～０．７７的细胞为ＣＤ３＋Ｔ细胞，但ＰＨＡ ＬＡＫ／ｒＩＬ ２共同预刺激者的ＣＤ３＋、ＣＤ８＋细胞所占比率较ＰＨＡ单独预刺激者为高（Ｐ＜０．０５）。     

T-AK细胞在体外和裸鼠体内抗人膀胱癌细胞株(Fen)的实验研究

用可溶性肿瘤抗原和抗ＣＤ３ 单克隆抗体共同刺激外周单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生ＣＤ＋８ Ｔ 细胞为主的杀瘤细胞,称为Ｔ－ ＡＫ 细胞。与ＬＡＫ细胞、ＣＤ３ － ＡＫ 细胞比较,Ｔ－ ＡＫ细胞扩增快、低依赖ＩＬ－ ２,培养１４ 天细胞数扩增２４ 倍,比ＣＤ３ － ＡＫ细胞高８ 倍,比ＬＡＫ细胞高１５ 倍,并能维持生长２１ 天。Ｔ－ ＡＫ细胞中含ＣＤ＋３ ８９％ ,ＣＤ＋４ ２１ ％ ,ＣＤ＋８ ９５％ ,ＣＤ＋１６ ２２％ ,ＣＤ＋２５ ４１％ ,ＣＤ＋５６ ４７ ％ ,ＣＤ＋３８ ９０ ％ ,它们是ＣＤ＋８ Ｔ细胞为主的异质性细胞群。体外实验结果表明,Ｔ－ ＡＫ细胞对Ｆｅｎ 的明显的杀伤作用,与ＬＡＫ、ＣＤ３ － ＡＫ细胞比较,差异有高度显著性（ Ｐ＜ ０．００１） 。裸鼠体内试验结果显示,对照组及ＬＡＫ组全部、ＣＤ３ － ＡＫ 组１ 只裸鼠长出瘤结节,而Ｔ－ ＡＫ组无一例长出瘤结节且生存期明显长     

LAK细胞对肿瘤细胞杀伤作用的形态学研究

本文报道了用人胚胎中期脾脏和胸腺细胞经人重组ＩＬ－２激活而成的ＬＡＫ细胞与正常人淋巴细胞在形态、活性上的区别。并观察了在体外培养条件下ＬＡＫ细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。     

同种异体LAK细胞治疗28例恶性肿瘤的近期疗效观察

以ＩＬ－２诱导同种异体ＬＡＫ细胞。使用Ａｌｌｏ－ＬＡＫ细胞治疗２８例恶性肿瘤１６２次。Ａｌｌｏ－ＬＡＫ（４．２８－０．４７）×１０＾８治疗一个疗程三周，每周２次。治疗前后检测ＡＬＴ，ＣＫ，Ｃｒ，ＢＵＮ等指标。