转化人胚肌腱细胞的体外培养及生物学特性研究

目的 研究经ｐｔｓＡ５８Ｈ质粒转化的人胚肌腱细胞的生物学特性,探讨细胞生长特性与体外培养条件改变的关系,方法 取人胚肌腱细胞和经ｐｔｓＡ５８Ｈ质粒转化的人胚肌腱细胞,进行体外培养,对细胞进行形态学,超微结构及一般特征的观察。在不同培养条件下进行生长曲线绘制,平板克隆实验和软琼脂培养以及免疫组织化学法胶原染色,结果 在正常培养条件下,人胚肌腱细胞和转经人胚肌腱细胞的生长性状几乎无差异,且冻存复苏并不     

兔肌腱细胞与成纤维细胞生物学特性研究

为了研究在体外培养条件下，肌腱细胞与成纤维细胞的生物特性，按Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ方法作兔肌腱细胞与皮肤成纤维细胞体外培养，观察细胞形态、贴壁时间及延展时间。采用免疫组织化学的方法对细胞合成胶原的类型进行了测定。结果表明：两种细胞未贴壁前均呈圆形，贴壁后呈梭形或多角形。成纤维细胞的贴壁时间、延展时间较肌腱细胞快；贴壁后细胞群体的排列方向，肌腱细胞群体排列趋于一致、规则，成纤维细胞排列呈不规则。肌腱细胞合成Ⅰ型胶原，成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原。根据细胞的贴壁时间、延展时间、排列方向及合成胶原类型，可以区分肌腱细胞及成纤维细胞。     

Fas基因转染对直肠癌细胞生物学行为影响的研究

目的：探讨Fas基因转染对直肠癌细胞生物学行为的影响。方法：以正常人外周血单个核细胞（PBMC）为模板，通过RT－PCR方法扩增出Fas全长cDNA，转染人直肠癌细胞HR－8348，检测Fas基因表达，观察细胞生长状态，采用MTT法观察癌细胞对中1芗反应及细胞存活率。采用H3342释放法检测PBMC对癌细胞的杀伤活性，结果，未转染的HR－8348细胞Fas基因表达为阴性，转染Fas后HR－8348细胞Fas表达阳性，两组细胞形态和生长状态无显差异，分别加入化疗药物5－Fu、卡铂，检测细胞存活率，在相同药物浓度下，两组细胞存活率有显性差异（t=4．73，3．84，P＜0．01）。Fas转染组癌细胞存活率低不转染组，Fas表达阳性癌细胞对5－Fu、卡铂的敏感性增强。PBMC对Fas转染组HR－8348细胞的杀伤活性为56％，对未转染组的杀伤活性为21％，两组有显性差异（X^2＝20．73，P＜0．01），PBMC对Fas阳性癌细胞杀活性明显高于对照组癌细胞。结论：转染Fas可提高癌细胞化疗药的敏感性，增强药物对癌细胞的杀伤作用，并促进机体免疫细胞的杀伤活性。     

足细胞骨架相关蛋白的调节及其在细胞生物学中的作用

肾小球血管上皮细胞,也称足细胞,是一种特殊终末分化细胞。足细胞可分为：细胞体,初级突起,足突。微管和中间丝构成足细胞体和初级突起的支架。微丝则是足突的细胞骨架。微丝在同一个足细胞的相邻足突间形成一个高的拱状袢,在袢的弯曲处,微丝连接于初级突起的中间丝和微管上[1]。     

镁合金AZ31B对兔骨骼肌细胞的生物学行为的影响

目的研究镁合金AZ31B对兔骨骼肌细胞生物学行为的影响。方法采用浸提液培养兔骨骼肌细胞,倒置显微镜观察细胞生长形态,CCK法研究其1、3、5、7 d的细胞增殖活性,荧光染色研究细胞活力,胞内总蛋白测定研究细胞蛋白表达情况。以钛合金浸提液为对照(对照组),设置镁合金浸提液组(镁合金组)及其pH值调节组。结果 3组骨骼肌细胞贴壁良好,随着培养时间的延长,细胞增殖活性逐渐增加,镁合金组细胞毒性为2级,pH值调节组未见细胞毒性,且可以促进骨骼肌细胞的增殖;荧光染色可见镁合金组存在部分细胞红染,提示镁合金组存在部分细胞毒性;蛋白检测提示镁合金组蛋白含量显著下降,pH值调节组蛋白含量则较正常升高。结论镁合金AZ31B对于兔骨骼肌细胞具有良好的生物相容性,且能促进兔骨骼肌细胞的增殖及蛋白含量的增加,为镁合金AZ31B用于骨科置入材料提供了理论支持。     

兔肌腱细胞和成纤维细胞与人工材料体外联合培养的形…

在兔肌腱细胞、成纤维细胞分离培养的基础上，将冻存复苏的传代细胞与碳纤维、涤纶及几丁质三种材料体外联合培养，观察细胞与材料的相容性以及细胞在材料上的生长情况，比较这两种细胞在三种材料上的生长差异。随着时间延长，细胞在奶碳中多根碳纤维上排列无效，包绕碳纤维，且相互衔接。     

自体肌腱细胞介导修复肌腱缺损的实验研究

目的　探讨以自体肌腱细胞为种子细胞的组织工程化肌腱体内形成。方法　取自体肌腱细胞经体外培养、扩增 ,与可吸收生物材料聚羟基乙酸 (polyglycolicacid ,PGA)混合培养形成细胞 生物材料复合物 ,将细胞 生物材料复合物移植于手术缺损的家猪趾浅屈肌腱处 ,并设单纯PGA组作为对照组。术后 6周取材 ,对标本进行大体观察、组织学和生物力学检测和评价再生组织。结果　实验组新生组织在大体、组织学和胶原排列等方面与正常肌腱相似 ,对照组新生组织细胞、胶原排列较为紊乱。生物力学显示其最大拉力、最大应力和弹性模量 ,实验组比对照组分别提高 3 6.1% (t =3 5 6、P <0 .0 5 )、2 7.4%(t =2 94、P <0 .0 5 )和 15 .0 % (t =2 62、P <0 .0 5 )。结论　应用组织工程技术以自体肌腱细胞可以修复肌腱缺损     

全反式维甲酸对肝癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨全反式维甲酸（ATRA)对肝癌细胞生物学影响的途径。方法：通过体外和动物实验的方法，探讨ATRA对肝细胞癌高转移瘤株（Hca-F）体外增殖能力，对人工基底膜粘附能力以及对IV胶原酶分泌能力的影响。结果：ATRA对Hca-F细胞的体外增殖能力，人工基底膜粘附能力，以及对IV胶原酶的分泌均有明显的抑制作用，其抑制能力在一定范围随ATRA浓度成正比。结论：ATRA在多途径对Hca-F细胞生物学行为产生影响。     

三种软骨细胞分离培养方法对细胞骨架的影响比较

目的 比较分离培养人类软骨细胞的3种方法，探讨各种方法的特点及对细胞骨架的影响。方法 分别采用酶消化法、组织贴块法、酶消化结合组织贴块法分离软骨细胞，测量每种方法分离的软骨细胞瓶底汇合形成单层时间，进行比较，以甲苯氨蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组织化学评价细胞的生物特性，并用磁驱动原子力显微镜（MAC mode AFM）对二代细胞表面形态及细胞骨架特性进行检测。结果 MAC mode AFM检测显示，酶消化结合组织贴块法分离软骨细胞表面形态、细胞骨架分布更接近生理状态，甲苯氨蓝、Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示强阳性，进行方差分析及q检验，3种方法分离的软骨细胞瓶底汇合形成单层时间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 酶消化结合组织贴块法细胞分离效率高、生长速度快、细胞骨架特性保持更好、细胞纯度高，在细胞骨架研究中可优先选用。     

体外脂肪细胞培养的实验研究

脂肪细胞属终末细胞,体外培养状态下是否可增殖,多数人持怀疑态度。我们在参考许多国外学者的经验基础上,采用密度梯度法分离脂肪细胞,DMEM 和 F_(12)混合培养基培养,同时加入糖皮质激素、胰岛素和碱性成纤维生长因子等促脂肪生长因子,使脂肪细胞体外培养获得成功。     

体外脂肪细胞培养的实验研究

脂肪细胞属终末细胞，体外培养状态下是否可增殖，多数人持怀疑态度。我们在参考许多国外学者的经验基础上，采用密度梯度法分离脂肪细胞，ＤＭＥＭ和Ｆ＿（１２）混合培养基培养，同时加入糖皮质激素、胰岛素和碱性成纤维生长因子等促脂肪生长因子，使脂肪细胞体外培养获得成功。     

In vitro studies to evaluate the effect of varying culture conditions and IPL fluencies on tenocyte activities

Tendons are dense, fibrous connective tissues which carry out the essential physiological role of transmitting mechanical forces from skeletal muscle to bone. From a clinical perspective, tendinopathy is very common, both within the sporting arena and amongst the sedentary population. Studies have shown that light therapy may stimulate tendon healing, and more recently, intense pulsed light (IPL) has attracted attention as a potential treatment modality for tendinopathy; however, its mechanism of action and effect on the tendon cells (tenocytes) is poorly understood. The present study therefore investigates the influence of IPL on an in vitro bovine tendon model. Tenocytes were irradiated with IPL at different devise settings and under variable culture conditions (e.g. utilising cell culture media with or without the pH indicator dye phenol red), and changes in tenocyte viability and migration were subsequently investigated using Alamar blue and scratch assays, respectively. Our data demonstrated that IPL fluencies of up to 15.9 J/cm² proved harmless to the tenocyte cultures (this was the case using culture media with or without phenol red) and resulted in a significant increase in cell viability under certain culture conditions. Furthermore, IPL treatment of tenocytes did not affect the rate of cell migration. This study demonstrates that irradiation with IPL is not detrimental to the tenocytes and may increase their viability under certain conditions, thus validating our in vitro model. Further studies are required to elucidate the effects of IPL application in the clinical situation.     

The effect of vasopressin on the cytoskeleton of the epithelial cell

Vasopressin (AVP) promotes the fusion of vesicles containing water channels with the apical membrane of receptor cells in the amphibian bladder and mammalian kidney. Fusion is accompanied by depolymerization of the actin cytoskeleton. In this review, we present the evidence for actin depolymerization by AVP in the whole cell, and the application of confocal microscopy and immunogold electron microscopy in localizing depolymerization to the apical region of the receptor cell.     

颈脊髓后方致压三维运动下生物力学分析

目的研究颈黄韧带病变对颈脊髓后方致压,颈脊髓所受压力与致压深度、颈脊柱三维运动的关系,为探讨黄韧带病变所致颈脊髓病的发病机制提供运动学、生物力学依据。方法采用5具新鲜成人尸体颈脊柱标本(C2～C7)通过后方C4～5间骨窗伸入直径9．58 mm的半球形致压物模拟颈椎黄韧带病变时对颈脊髓后方所形成的压迫。实验对颈脊髓由后向前致压,致压深度分别为椎管中矢径的10％～60％、依次增加10％。分别测量各运动位置,不同致压深度下,颈脊膜脊髓后方所受压力。结果 (1)随致压深度的增加颈脊髓脊膜后方所受压力明显加大,两者呈非线性关系。(2)颈脊髓后方致压时,测得颈脊髓脊膜后方所受压力,在前屈后伸运动中,20％～60％各相邻致压深度两两比较,差异有统计学意义(P<0．05);在中立位、左右侧弯、左右旋转运动中运动中 30％～60％各相邻致压深度两两比较,差异有统计学意义(P<0．05);(3)左右侧弯、左右旋转时, 相同致压深度,两侧侧弯、旋转各自比较差异无统计学意义(P>0．05)。予以合并取均数分别命名为侧弯30°位、旋转15°位。(4)在各运动位置,不同致压深度颈脊髓脊膜后方所受压力变化比较, 30％～60％致压深度时,前屈30°位>侧弯30°位>后伸30°位>中立位>旋转15°位。10％～20％致压深度时,侧弯30°位>后伸30°位>前屈30°中立位>旋转15°位。结论颈脊髓后方所受压力与致压深度和颈脊柱运动有着密切联系。所受压力随致压深度增加而增大,深度超出30％临界值后有统计学意义。相同致压深度颈脊髓后方所受压力大小随运动方向不同而改变,前屈后伸运动对颈脊髓的压力影响最大。     

表皮生长因子对肾小球上皮细胞骨架的影响

目的观察阿霉素作用下体外培养的大鼠肾小球上皮细胞(GEC)通透性和细胞骨架变化并研究表皮生长因子(EGF)对它们的作用及可能途径。方法在阿霉素作用GEC24h之前给予和不给予外源性EGF，利用Milllcell—PCF Inserts检测牛血清白蛋白(BSA)滤过量，同时评价GEC细胞活力。细胞免疫荧光法和激光共聚焦显微镜观察和测定细胞骨架分子F-肌动蛋白(actin)、α-辅肌动蛋白(actinin)的表达。结果阿霉素刺激GEC24h后，BSA滤过量明显增加，而F—actin重排率增加，排列紊乱，部分解聚，胞浆内应力纤维明显减少；α-actinin趋向核周聚集。阿霉素诱导前先给予EGF，则BSA滤过量明显减少，细胞骨架恢复正常组装状态,α—actinin在胞浆内均匀分布。但在EGF之前给予EGF受体(EGFR)抑制剂AG1478或磷脂酶C(PLC)1抑制剂U73122，则EGF对阿霉素诱导下GEC的改善效应减弱，而在无EGF的阿霉素诱导之前应用AG1478或U73122，均未产生改变。结论阿霉素诱导了GEC细胞骨架的重排和破坏．致使上皮通透性增高，而EGF可能通过EGF—EGFR—PLCγ这条信号转导途径阻止了阿霉素对GEC细胞骨架的影响，保护了GEC上皮屏障。     

Photoradiation could influence the cytoskeleton organization and inhibit the survival of human hepatoma cells in vitro

Low-power laser therapy has become popular in clinical applications including promoting wound healing and pain relief. However, effects of this photoradiation on human hepatoma cells are rarely studied. Previously, we found 808 nm gallium aluminum arsenide (GaAlAs) continuous wave laser had an inhibitory effect on the proliferation of human hepatoma cell lines HepG2 and J-5 at the energy density of 5.85 and 11.7 J/cm², respectively. The aim of the present study was to evaluate the possible mechanism of action of this photoradiation on HepG2 and J-5 cells. HepG2 and J-5 cells were cultured in 24-well plates for 24 h. After photoradiation by 130 mW 808 nm GaAlAs continuous wave laser for different time intervals (0, 30, 60, 90, 120, 150, and 180 s), Western blot and immunofluorescent staining were used to examine the expression and distribution of histone and cytoskeletal proteins. The cell counts as well as histone and synemin expression of HepG2 and J-5 cells were reduced by photoradiation at the energy density of 5.85 and 11.7 J/cm², respectively. Furthermore, the architecture of cytoskeletons and the distribution of intermediate filament-associated proteins (plectin and synemin) were disorganized by photoradiation. Photoradiation by 808 nm GaAlAs continuous wave laser at the energy density of 5.85 and 7.8 J/cm² inhibited the survival of human hepatoma cell lines. The mechanism might reduce synthesis of histone and synemin. Reduced histone synthesis might further reduce the proliferation rate of these cells. Reduced synemin synthesis might result in the destruction of the cytoskeleton. Therefore, the net effects by this photoradiation were reduced cell survival.     

脐血单核细胞的优化培养

目的 优化脐血单核细胞( UCB-MNCs)的培养方法.方法 采用正交实验方法筛选影响UCB-MNCs培养的各因素,优化培养条件.设立优化组、对照组(UCB-MNCs以1.0×106/L接种于含20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、体积分数为0.10胎牛血清、低糖DMEM培养基)培养.其后检测各组培养细胞增殖及形态学变化;流式细胞仪对各组行免疫表型分析.结果 筛选后优化培养条件为:低糖DMEM培养基中含20 mg/L bFGF、50 μg/L干细胞因子(SCF)、10 μg/L重组人粒细胞生长因子(G-CSF)、培养瓶用层粘连蛋白(LN)包被.原代培养的细胞密度优化组细胞( 108.15±6.90)增殖优于对照组(51.48±12.27),差异有统计学意义(P＜0.01).P3代UCB-MNCs中MSCs含量优化组(94.87％)优于对照组(75.35％),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用正交实验的方法可以筛选出脐血单核细胞的优化培养条件.     

人表皮细胞无血清培养的实验研究

以 IMDM 为基础,补充戴氏无血清培养基血清代用品、表皮生长因子(EGF)、牛垂体提取物(BPE)、乙醇胺(Etha),组成 CSFM 无血清培养系统培养人表皮细胞。动态观察人表皮细胞在该培养体系中的生长增殖过程和特点,用~3H-TdR 掺入法测定人表皮细胞代谢活性,同时观察过氧化氢酶对表皮细胞 DNA 合成的影响。结果表明:人表皮细胞生长良好,增殖稳定,其生长增殖过程和特点与有血清培养方法相近似。透射电镜观察证实有张力原纤维和桥粒结构。过氧化氢酶对表皮细胞的 DNA 合成具有明显的促进作用(P<0.01),呈剂量效应关系。认为本培养体系适用于对表皮细胞生物学特性的精细研究,但仍需进一步改进和提高。