阿霉素导致大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

应用免疫组化、电泳及电镜观察方法，探讨阿霉素与心肌细胞凋亡的关系。实验结果提示，阿霉素引起心肌细胞凋亡的严重程度与其每次注射的剂量有关，凋亡细胞多呈灶状分布，在坏死灶及其周边多见。     

金樱子对阿霉素诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨金樱子对大鼠阿霉素诱导心肌细胞凋亡的保护作用。方法SD大鼠随机分为空白对照组、阿霉素组模型组和金樱子干预组。模型组采用阿霉素（15mg／kg）分6次隔日腹腔注射,金樱子组按1～5g／kg体重给予金樱子灌胃,空白对照组仅给予等体积生理盐水。采用缺口末端标记法检N,b肌凋亡细胞,比色法检测Caspase-3的活性改变,荧光探针法检测活性氧（Reactiveoxygenspecies,ROS）的产生。Westernblot检测bcl-2和bax蛋白的表达。结果与模型组相比,金樱子能有效降低心肌细胞凋亡和Caspase-3的活性,并能降低细胞内ROS的产生。bcl-2和bax在正常心肌细胞中均有表达,阿霉素模型组bcl-2表达显著降低,bax表达上调,bcl-2／bax比率下降;金樱子可明显增加bcl-2／bax比率。结论金樱子能在一定程度上抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制ROS产生,降低Caspase-3活性,上调bcl-2／bax比率有关。     

促红细胞生成素对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的预防作用研究

目的:研究促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)预防阿霉素(Doxorubicin,DOX)诱导的心肌细胞凋亡的作用.方法:原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为空白对照组、模型对照组及不同浓度(6.25、25、100 IU/ml)EPO预处理组,各组预处理24 h后加人5 μg/ml的DOX.24 h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率,甲基噻唑基四唑(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达.结果:与空白对照组相比模型对照组细胞活力明显减低,凋亡率显著增高.不同浓度EPO预处理的心肌细胞活力较模型对照组显著增高,细胞凋亡率显著降低,并且凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达增高,凋亡蛋白Bax的表达降低.结论:EPO对DOX诱导的心肌细胞的损伤具有预防作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax有关.     

胡黄连苷Ⅱ减轻阿霉素诱发H9C2心肌细胞损伤的潜在机制研究

目的 研究胡黄连苷Ⅱ(Pic)减轻阿霉素(Dox)诱发H9C2心肌细胞损伤的潜在机制。方法 采用Dox(1μmol/L)处理H9C2心肌细胞24 h以构建Dox诱发心肌损伤的细胞模型。采用CCK-8法检测不同浓度Pic对细胞活性的影响,以确定Pic最佳的干预浓度。将细胞汇合度达到60%～70%的H9C2心肌细胞随机分为对照组(Con组)、阿霉素组(Dox组)和治疗组(Dox+Pic组)。采用乳酸脱氢酶(LDH)水平评价Dox对细胞的损伤;采用膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)染色和TUNEL染色评估细胞凋亡率;使用JC-1染色判定Dox和Pic对H9C2心肌细胞线粒体膜电位(MMP)的影响;通过Western blot检测各组凋亡相关蛋白(BAX、BCL2、C-caspase-3)的表达情况;使用去乙酰化酶沉默信息调节因子1(SIRT1)选择性抑制剂(SIRT1-IN-1)研究Pic是否通过调控SIRT1来发挥对Dox处理细胞的保护作用。结果 Dox能明显降低H9C2心肌细胞活性,而Pic则可抑制这一过程,与Con组比较,Dox+Pic组细胞...     

艾塞那肽减轻阿霉素引起的心肌细胞凋亡

目的:探讨艾塞那肽是否对阿霉素引起的心肌细胞凋亡具有保护作用。方法:将体外培养的H9c2细胞分为空白组(单纯DMEM培养基)、阿霉素组(加入10μM阿霉素)、艾塞那肽组(阿霉素刺激前0.5h给予30nM艾塞那肽预处理)后继续培养24h。TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用MTT法检测各组细胞的活性、酶标仪检测活性氧(ROS)水平、Caspase3、Caspase 9活性及线粒体膜电位(△Ψm),实时荧光定量PCR检测Bcl-2/Bax mRNA水平比值。结果:与空白组相比,阿霉素组细胞凋亡程度显著增加(流式细胞检测法:P<0.01;TUNEL法:P<0.01),H9c2心肌细胞活性(P<0.01),△Ψm(P<0.01)及Bcl-2/Bax比值(P<0.01)均显著降低,而细胞内ROS水平(P<0.01)及Caspase3、Caspase9活性(均为P<0.01)均显著增加。给予艾塞那肽预处理后能逆转上述变化,细胞凋亡程度显著下降(流式细胞检测法:P<0.01;TUNEL法:P<0.05),H9c2心肌细胞活性(P<0.05),△Ψm(P<0.01)及Bcl-2/Bax比值(P<0.01)均显著增加,细胞内ROS水平(P<0.05)及Caspase3、Caspase9(均为P<0.05)活性均显著降低。结论:艾塞那肽可能通过降低细胞内ROS水平,增加△Ψm,增加Bcl-2/Bax比值来改善阿霉素诱导的心肌细胞凋亡,发挥抗凋亡效应。     

阿霉素对心肌细胞损伤的实验研究

目的 研究阿霉素对体外培养乳鼠心肌细胞的损伤作用.方法 采用MTT法观察阿霉素对乳鼠心肌细胞活性的影响;通过检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量,观察阿霉素作用下的乳鼠心肌细胞的坏死程度;采用流式细胞仪检测阿霉素诱发的心肌细胞凋亡百分率.结果 (1)MTT实验发现:阿霉素浓度在0.3～10.0 μg/ml均能抑制心肌细胞活性并成剂量依赖性;(2)细胞心肌酶谱检测到LDH释放量与阿霉素浓度呈正相关;(3)流式细胞仪发现心肌细胞凋亡率与阿霉素浓度有相关性.结论 一定浓度的阿霉素对心肌细胞有毒性作用,可致心肌细胞损伤,表现为心肌细胞坏死和凋亡发生率增加.     

阿霉素诱导肺癌细胞凋亡的实验研究

目的：建立培养肺癌细胞凋亡模型。方法：人肺癌细胞A549在含20μmol/L阿霉素培养液中培养4h,换用普通培养液培养,在不同时间点收集漂浮细胞,检测漂浮细胞计数,锥虫蓝排斥实验,吖啶橙染色,电镜观察,DNA电泳,流式细胞仪分析。结果：处理的A549细胞形态学表现为锥虫蓝拒染,细胞皱缩变形,细胞膜完整,部分呈泡状突起,细胞核染色质浓聚、边集或碎裂,凋亡小体形成。细胞DNA电泳见梯状电泳带,流式细胞仪检测发现凋亡峰出现,符合凋亡细胞特征。凋亡细胞主要存在于漂浮细胞中,最多出现于改用普通培养液培养10-12h。结论：阿霉素可以诱导A549肺癌细胞发生凋亡。     

Vit C,Trolox对阿霉素损伤鼠培养心肌细胞的作用

在原代培养的大鼠心肌细胞受阿霉素损伤的模型上,观察到合适浓度的维生素C(Vit C)能显著减少受损心肌细胞乳酸脱氢酶释放、减少细胞内丙二醛的形成,并改善细胞超微结构的变化,显示其具有抑制脂质过氧化,保护心肌细胞的作用.该作用与Vit c浓度密切相关,高浓度时反而加重细胞损伤.维生素E的水溶性类似物Trelox则没有上述作用。     

降钙素基因相关肽对阿霉素心肌细胞毒性的影响

目的：观察降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对阿霉纱所致心肌细胞毒性作用的影响。方法：采用原代培养乳鼠心肌细胞，以１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ阿霉素造成急性心肌细胞毒性模型，ＣＧＲＰ作用浓度为１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ，测定培养基中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性及心肌细胞内丙二醛（ＭＤＡ），钙和镁含量，结果：阿霉素引起心肌细胞ＬＤＨ漏出明显增加，细胞内ＭＤＡ，钙含量水平明显升高，镁含量水平明显降低，阿霉素所致心肌细胞ＬＤＨ     

醛固酮对新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 观察醛固酮对新生大鼠心肌细胞凋亡影响并探讨其机制.方法 取新生大鼠心肌细胞培养36 h后,加入不同浓度醛固酮(0.01～10.0 μrmol/L).分别用吖啶橙(AO)荧光染色法和流式细胞术检测心肌细胞凋亡.用免疫组化法测定心肌细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 醛固酮加入细胞24 h后,随着其浓度的增高,凋亡细胞所占比例逐渐增加,Bax表达逐渐增强,Bcl-2表达减弱,Bcl-2/Bax比值下降,与对照组相比,差异有显著性意义(P＜0.05).结论 醛固酮明显促进心肌细胞的凋亡,且具有浓度依赖性,这可能与醛固酮能下调Bcl-2蛋白表达及上调Bax蛋白表达有关.     

重组bcl-xL腺病毒对心肌细胞凋亡的影响

[目的]探讨转染人类抗凋亡基因bcl-xL能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性,评价它对心肌细胞的抗凋亡作用.[方法]体外培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立模拟心肌缺氧模型;将携带人类bcl-xL基因的重组腺病毒感染心肌细胞;免疫细胞化学染色法分析bcl-xL蛋白的表达;TUNEL法检测凋亡指数;荧光显微镜下观察心肌细胞表达绿色荧光蛋白,用Hoechst33342染色观察细胞核的形态变化.[结果]转染rAd-bcl-xL/s的心肌细胞表达bcl-xL蛋白阳性单位(PU)(17.84±3.42)明显高于正常对照组(11.02±2.56)与rAd-bcl-xL/as转染组(8.53±2.25)(P＜0.01);缺氧诱导后心肌细胞凋亡指数为(45.67±8.47)%,而转染rAd-bcl-xL/s后的细胞凋亡指数减少至(9.42±2.48)%,有显著性差异(P＜0.01),未见典型的凋亡小体.[结论]腺病毒介导的bcl-xL基因能高效转染心肌细胞,并表达目的基因;外源性bcl-xL基因对体外培养的心肌细胞具有抗凋亡作用,能够提高心肌细胞对缺氧的耐受性,促进损伤心肌的恢复.     

异丙酚对大鼠心肌细胞氧化损伤时血红素加氧酶-1表达的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠心肌细胞氧化损伤时血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响.方法 培养1周的乳鼠心肌细胞按9×10~4/ml接种在96孔培养板上,每孔0.1 ml,随机分为8组,每组6孔:对照组(C组)、H_2O_2组(H组)、低剂量异丙酚组(LP组)、中剂量异丙酚组(MP组)、高剂量异丙酚组(HP)、低剂量异丙酚+抑制剂组(LP+I组)、中剂量异丙酚+抑制剂组(MP+I组)、高剂量异丙酚+抑制剂组(HP+I组).抑制剂采用ZnPP IX.各组于孵育6 h后,测定心肌细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、线粒体、Caspase-3的活性及HO-1 mRNA表达.结果 与C组比较.其余各组心肌细胞MDA含量上升、SOD含量及线粒体活性降低;H组心肌细胞Caspase-3活性升高、HO-1 mR-NA表达上调;不同剂量异丙酚组心肌细胞HO-1 mRNA表达上调;不同剂量异丙酚组经ZnPP Ⅸ处理后心肌细胞Caspase-3活性升高,均P<0.05或P<0.01.与H组比较,不同剂量异丙酚组心肌细胞MDA含量降低、SOD活性升高、线粒体活性升高,MP组和HP组心肌细胞Caspase-3活性降低、细胞HO-1 mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01).与相应剂量异丙酚组比较,经ZnPP IX处理后心肌细胞MDA含量升高、SOD活性降低、线粒体活性降低、HO-1 mRNA 表达下调,MP+I、HP+I组心肌细胞Caspase-3活性增高(P<0.05或P<0.01).结论 异丙酚可通过上调HO-1的表-达而减轻H_2O_2导致的心肌细胞损伤.     

4-HPR联合阿霉素对人膀胱癌细胞株体外生长的影响

目的:观察4-羟苯维胺脂(4-HPR)联合阿霉素对人源性膀胱移行细胞癌细胞株T24的生长抑制和凋亡诱导作用,探讨两者是否存在协同作用。方法:采用MTT法评价4-HPR、阿霉素对T24细胞毒作用,应用流式细胞仪检测4-HPR、阿霉素或两者联合应用时对T24细胞生长抑制率。结果:4-HPR具有诱导T24细胞凋亡的作用,4-HPR与阿霉素联合用药有明显生长抑制和凋亡诱导的协同作用。结论:4-HPR对T24细胞的凋亡作用存在浓度和时间依赖性,与阿霉素联合用药能缩短抑瘤效果的作用时间,减少阿霉素的用量。     

阿霉素可通过MAPK信号转导通路促进成骨肉瘤细胞凋亡

目的: 探讨阿霉素在适宜的加药浓度、作用时间下诱导成骨肉瘤细胞凋亡的分子机制.方法: 首先通过FCM,MTT等方法探讨引起成骨肉瘤细胞凋亡的最佳药物作用浓度及时间;在此条件下应用不同信号转导通路的抑制剂观察导致细胞凋亡的可能通路;最后应用Western-Blotting来检测在成骨肉瘤细胞凋亡过程中相关信号分子的表达水平及磷酸化水平的变化.结果: 0.4 mg/L阿霉素作用成骨肉瘤细胞12 h即可引起细胞凋亡,并呈时间依赖性;用p38的抑制剂SB203580和MEK4/7的抑制剂U0126可明显抑制细胞的凋亡;Western Blotting检测发现阿霉素作用于细胞后,MAPK家族成员JNK、ERK和p38等各激酶的表达水平未发生明显变化,但JNK,p38的磷酸化水平提高了ERK的磷酸化水平有所下降;用Western Blotting检测到阿霉素作用后p53蛋白的表达水平有提高.结论: 阿霉素可导致成骨肉瘤细胞凋亡,而且此凋亡过程与MAPK通路有关.     

蜂毒素对豚鼠心肌细胞内游离钙浓度的影响

目的测定蜂毒素引起的豚鼠心肌细胞内游离钙浓度变化。方法分离成年豚鼠心肌细胞，以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ为荧光试剂，测定蜂毒素引起的心肌细胞内钙浓度变化。结果蜂毒素３．５×１０－１３ｍｏｌ／Ｌ，使心肌细胞内钙浓度增加，维拉帕米（１０－６ｍｏｌ／Ｌ作用５ｍｉｎ），未明显拮抗蜂毒素引起的细胞内钙增加。结论蜂毒素可促进细胞内钙浓度增加，可能与维拉帕米所阻断的钙通道无关。     

新藤黄酸联合阿霉素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的研究

目的研究新藤黄酸(gambogenic acid,GNA)与阿霉素(adriamycin,ADM)联合作用对人乳腺癌细胞MCF-7的影响。方法体外培养人乳腺癌细胞MCF-7细胞株,采用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态变化;4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)细胞核染色实验观察GNA与ADM单独与联合作用对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响;膜联蛋白Ⅴ(annexinⅤ,AV)-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染流式细胞仪检测给药后乳腺癌细胞MCF-7凋亡率。结果 MTT检测结果显示,在GNA浓度为0.125~4μmol/L和ADM浓度在0.5~16μmol/L范围内,人乳腺癌细胞MCF-7的细胞存活率随GNA和ADM剂量增加而降低,且联合用药组细胞存活率低于单独用药组。倒置显微镜和荧光显微镜下,与对照组比较,细胞明显缩圆变小,染色细胞核破碎,呈现凋亡状态,而联合用药组凋亡细胞数量明显高于单独用药组。AV-FITC/PI双染经流式细胞仪检测发现,GNA与ADM单独和联合作用均诱导MCF-7细胞凋亡,与单独用药组比较,联合用药组细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论 GNA与ADM单独和联合作用均能诱导人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡,且两者联合作用可产生协同效应,其作用机制可能与诱导细胞凋亡相关。     

肝动脉微球化疗药灌注增加区域性药物吸收的实验研究

作者对比研究了大鼠肝动脉灌注阿霉素与明胶微球加阿霉素对肝脏药物吸收的＊响。实验证明：直径６０μｍ的微球选择性栓塞肝窦前小动脉，栓塞远端血管内血流缓慢或停滞，使肝细胞对药物的吸收时间相对延长，降解和排泄减慢，在局部产生区域性高浓度，同时减轻药物毒副作用。故认为，肝动脉灌注微球可明显增加同时应用化疗药的组织吸收，增强局部化疗效果。     

盐酸阿霉素对大鼠心损伤的分子机制研究

目的　研究盐酸阿霉素对大鼠心肌损伤的分子机制。方法　将雄性SD大鼠 40只随机分成 4组 (每组 10只 ) :对照组 ,盐酸阿霉素低剂量组 (10mg·kg-1) ,盐酸阿霉素中剂量组 (2 0mg·kg-1) ,盐酸阿霉素高剂量组(4 0mg·kg-1) ,对后 3组分别一次性腹腔注射不同剂量的盐酸阿霉素 ,制备大鼠心肌损伤模型。采用硫代巴比妥酸(TBA)荧光分光光度法测定大鼠血清脂质过氧化产物丙二醛含量。并分别测定铜—锌超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的酶活性 ;运用RT PCR方法分析相关基因的表达。结果　盐酸阿霉素中、高剂量组大鼠血清中丙二醛含量高于对照组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1) ;实验组铜—锌超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的酶活性均较对照组降低 ,其基因表达随盐酸阿霉素剂量的增加而不同程度的下调。结论　抗氧化酶基因表达的改变可能是盐酸阿霉素导致心肌损伤的分子机制之一