碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素肾损害保护作用的体外实验研究

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对庆大霉素引起的体外培养的大鼠肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法　大鼠肾皮质经研磨、过网、胰蛋白酶消化,进行肾小管上皮细胞的体外培养。经Cytokeratin18抗体进行鉴定后,用庆大霉素建立损伤模型,观察bFGF对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用。结果　①经形态学观察、Cytokeratin18免疫细胞化学方法鉴定;GM组与对照组比较,CAT、Na+,K+ ATP酶活性下降,而NAG活性和MDA升高 (P<0 01),提示肾小管上皮细胞的培养和庆大霉素损伤的建模成功。②bFGF+GM组与GM组比较,各生化和酶学指标差异均有显著性(P<0 01 );而bFGF+GM组与对照组比较,CAT、Na+,K+ ATP酶、NAG酶活性差异无显著性 (P>0. 05 ),但MDA增高差异仍有显著性(P<0 05)。结论　bFGF能保护损伤的肾小管上皮细胞。     

低浓度毒毛旋花子苷元的强心作用及其与心肌细胞膜Na~＋，K~＋-ATP酶的关系

目的:观察低浓度的毒毛旋花子苷原(Strophanthidin,Str)对离体豚鼠心脏是否有强心作用,及其与心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活性的关系。方法:采用Langendorff离体灌流装置经主动脉逆行灌流心脏;八道生理记录仪记录心率(HR),左室内压(LVP)及其最大变化速率(±dP/dt_(max));无机磷法测定心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活性。结果:Str 0.1nmol/L可兴奋Na~+,K~+-ATP酶活性(P<0.05)但不影响心脏的收缩功能,Str 1nmol/L仅能升高+dP/dt_(max)(P<0.05)并兴奋Na~+,K~+-ATP酶活性(P<0.01),Str 10和100 nmol/L可升高LVP和+dP/dt_(max)(P<0.05或P<0.01),对Na~+,K~+-ATP酶活性无明显作用,Str 1-100μmol/L虽能短暂升高LVP和±dp/dt_(max)(P<0.01),但随后出现不规则收缩并使LVP和±dP/dt_(max)降低,其对Na~+,K~+-ATP酶活性则表现为剂量依赖性抑制作用(P<0.01)。结论:高浓度Str的正性肌力作用是通过抑制Na~+,K~+-ATP酶活性实现的,而低浓度Str的强心作用似与Na~+,K~+-ATP酶抑制作用无关。     

维奥欣对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用

目的:探讨维奥欣对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠的脑保护作用及可能的作用机制。方法:70只Wistar大鼠随机分为假手术对照组10只、CIRI组30只和维奥欣组30只,测定再灌注30,60和120min时血清及肺组织一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)和Na~+-K~+-ATP酶活性,观察脑超微结构的变化。结果:脑缺血再灌注期间,CIRI组血清和脑组织中SOD活性、脑组织中Na~+-K~+-AFP酶活性与假手术对照组比较明显下降(P<0.01和P<0.05);NO和MDA浓度显著升高(P<0.01和P<0.05);脑超微结构发生异常改变,维奥欣组上述各指标的异常变化与CIRI组相比明显减轻(P<0.01)。结论:维奥欣对CIRI具有良好的保护作用,其机制可能与提高机体SOD和Na~+-K~+-ATP酶活性、降低NO水平和MDA浓度及减轻氧自由基损伤等有关。     

白藜芦醇对大鼠脊髓急性损伤后继发性损伤的影响

目的:探讨脊髓损伤(SCI)后使用白藜芦醇(resveratrol, Res)对继发性脊髓水肿、受损脊髓组织中乳酸脱氢酶(LDH)与Na~+,K~+-ATP酶活性及早期脂质过氧化反应的影响。方法:采用重物下落撞击法制备成年大鼠的脊髓损伤模型,于损伤后即刻腹腔注射Res(50mg/kg,100mg/kg)或甲基强的松龙(MPSS,100mg/kg),观察给药后1h、24h、48h时Res组受损脊髓组织含水量、LDH与Na~+,K~+-ATP酶活性及MDA水平的变化,同时用电子显微镜观察超微结构的变化,并与MPSS组进行疗效对比。结果:Res显著抑制SCI后继发性水肿,48h最明显(P<0.05),抑制率为11.5％;显著降低LDH活性,24h时最大(P<0.01),抑制率大于40％;明显改善Na~+,K~+-ATP酶活性,以48h最显著(P<0.01),最大改善率在60％以上;显著抑制SCI后MDA产生,48小时为最明显(P<0.01),Res在50mg/kg和100mg/kg的剂量情况下所表现的上述作用比100mg/kg的MPSS更佳,电子显微镜的结果表明,Res和MPSS能有效保护SCI后脊髓组织的超微形态结构的正常性。结论:Res有效抑制脊髓损伤后的水肿和早期受损局部脂质过氧化反应并改善能量代谢系统,因此对脊髓损伤有潜在的治疗作用。     

阿魏酸钠对培养近端肾小管细胞庆大霉素毒性保护机理探讨

目的 研究阿魏酸钠（SF）对庆大霉素（GM）肾毒性的保护作用。方法 采用近端肾小管上皮细胞原代培养技术制作GM损伤模型，观察细胞丙氨酸氯基转换酶（ALT）、过氧化氢酶（Cat)、NAG酶活性，DNA合成，细胞内离子钙浓度以及形态学变化，同时观察SF的保护作用。结果 GM组表现为ALT，Cat酶活性下降，NAG酶活性增加，细胞DNA合成下降，胞内游离钙浓度升高。光镜发现近端小管上皮细胞内有大量空泡变性和溶酶体髓样体形成。给予SE能使上述异常指标明显改善，组织学损害也明显减轻。结论 SF能有效保护GM对肾小管上皮细胞的损害。     

基于cAMP/PKA通路研究当归芍药散提取液对阿霉素诱导IMCD3细胞损伤的保护作用

目的观察当归芍药散(Danggui-Shaoyao-San,DSS)提取液对阿霉素(adramycin,ADR)诱导损伤的内髓集合管(inner medullary collecting duct cell,IMCD3)细胞Na~+,K~+-ATP酶、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)及水通道蛋白-2 (aquaporin 2,AQP2)的影响,从水液平衡的角度探讨其相关的保护机制。方法以IMCD3细胞为研究对象,MTT法观察不同浓度ADR对IMCD3细胞增殖的影响;将细胞分为正常组、模型组、DSS提取液低、中、高剂量组(0.8、1.6、3.2 g·L~(-1))、H-89抑制剂组;ELISA法检测细胞cAMP含量;试剂盒检测Na~+,K~+-ATP酶活性变化;Real-time PCR法检测PKA、CREB、水通道蛋白2(AQP2)mRNA表达;Western blot法检测Na~+,K~+-ATP酶、PKA、CREB、AQP2蛋白表达。结果 ADR对IMCD3细胞的损伤最适浓度为1×10~(-8) mol·L~(-1);不同浓度的DSS提取液均可有效抑制ADR诱导IMCD3细胞损伤,提高Na~+,K~+-ATP酶活性及细胞上清cAMP含量(P<0.05),DSS(1.6、3.2 g·L~(-1))可上调PKA、CREB、AQP2 mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 DSS提取液对ADR诱导IMCD3细胞损伤模型具有一定的保护作用,与提高Na~+,K~+-ATP酶活性、激活cAMP-PKA-CREB通路有关。     

玉郎伞两种黄酮单体对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究从玉郎伞(Yulangsan,YLS)中首次分离的两种黄酮单体对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法建立体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,倒置显微镜下观察加入YLS两种单体的含药血清(10%、5%、2.5%)后,各组缺氧/复氧心肌细胞形态学和搏动频率的变化;以MTT法检测各组细胞的存活率;用ELISA法测定心肌细胞Na+,K+-ATP酶、Ca2+,Mg2+-ATP酶活性及细胞培养上清液中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)活性和丙二醛(MDA)含量。结果与模型组相比,YLS两种单体含药血清的高、中剂量均能明显增加心肌细胞的存活率,增强Na+,K+-ATP酶、Ca2+,Mg2+-ATP酶活性,降低细胞培养上清液LDH、NOS活性、MDA含量,提高T-SOD活性并呈剂量依赖性(P<0.05)。结论两种YLS单体对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与清除自由基、抑制心肌细胞Ca2+超载有关。     

纳洛酮对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤的保护作用

目的 研究纳洛酮对大鼠肾脏缺血-再灌注损伤的保护作用.方法 利用大鼠肾脏缺血-再灌注损伤模型,观察纳洛酮对肾脏缺血-再灌注后血液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及肾组织中Na+-K+-ATP,Ca2+-ATP酶的影响,并观察组织病理学变化.结果 肾脏缺血-再灌注后,MDA含量明显升高,SOD活力明显降低;肾组织Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活力均显著降低.肌肉注射纳洛酮后,MDA显著下降,SOD和Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力均明显升高,肾小管上皮细胞的损伤明显减轻.结论 纳洛酮对肾脏缺血-再灌注损伤有一定的保护作用.     

纳洛酮对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

利用大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型,观察了纳洛酮(NAL)对肾缺血再灌注后血中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及肾组织中Na~ ,K~ —ATP酶和Ca~( )—ATP酶的影响,并观察组织病理学变化。结果显示缺血再灌注后血MDA含量明显升高,SOD活力明显降低,肾组织Na~ ,K~ —ATP酶和Ca~( )—ATP酶活力均显著降低。用NAL(2mg/kg与4mg/kg,ip)后MDA显著下降,SOD和Na~ ,K~ —ATP酶和Ca~( )—ATP酶活力均明显升高。组织病理学检查显示,应用NAL后肾小管上皮细胞的损伤明显减轻。结果提示NAL对肾脏缺血再灌注损伤有一定的保护作用。     

牛磺酸对2型糖尿病大鼠胰腺线粒体氧化应激的影响

目的探讨牛磺酸对糖尿病大鼠胰腺线粒体氧化应激的影响。方法将30只Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组(DM组)和牛磺酸治疗组(Tau组,采用20g.L-1牛磺酸生理盐水溶液治疗,200mg·kg-1),前两组注射等体积的生理盐水溶液。8wk后,测3组大鼠血浆葡萄糖、胰岛素、丙二醛(MDA),胰腺线粒体MDA、Ca2+、超氧化物歧化酶(SOD)及Na+,K+-ATP酶(Na+,K+-ATPase)和Ca2+,Mg2+-ATP酶(Ca2+,Mg2+-ATPase)的活性。结果①DM组大鼠血糖、MDA和胰腺线粒体MDA、Ca2+含量明显高于对照组(P<0.01),而血浆胰岛素水平、SOD、Na+,K+-AT-Pase和Ca2+,Mg2+-ATPase活性明显降低(P<0.05)。②Tau组大鼠血糖、MDA及胰腺线粒体Ca2+、MDA含量较DM组明显降低(P<0.05),血浆胰岛素水平、SOD、Na+,K+-ATPase和Ca2+,Mg2+-ATPase活性明显升高(P<0.05)。结论牛磺酸可减轻2型糖尿病大鼠胰腺线粒体氧化应激水平。     

阿米卡星对肾小管上皮细胞的损伤及热休克蛋白70表达的影响

目的:观察阿米卡星对肾小管上皮细胞的损伤及热休克蛋白70表达的影响。方法:常规培养人肾小管上皮细胞系HK-2细胞,给予阿米卡星(100μg·mL-1)损伤或MnCl2(2μg·mL-1)保护,于24,48,72,96 h时分光光度法测定细胞增殖,乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、N-乙酰-β氨基葡萄糖苷酶(NAG)含量,逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测HSP70 mRNA表达,Western-blot检测HSP70蛋白表达。结果:阿米卡星损伤HK-2细胞后,细胞增殖显著减少,LDH释放量、NAG含量、MDA含量增加显著,SOD活力明显下降,HSP70 mRNA及其蛋白的表达显著增加(与对照组比,P<0.01);给予MnCl2干预后,HK-2细胞的细胞增殖明显有所恢复,LDH释放量、NAG含量、MDA含量有所下降,SOD活力有所增加,HSP70 mRNA及其蛋白的表达有所下降(与损伤组比,P<0.01)。结论:阿米卡星的肾脏毒性与HSP70的表达存在密切的联系。     

Mn2+对庆大霉素导致的人肾小管上皮细胞系损伤的保护作用

目的观察Mn2 对庆大霉素导致的人肾小管上皮细胞系的损伤有保护作用,并探讨其机制。方法用庆大霉素作用于人肾小管上皮细胞系(HK-2),造成肾损伤模型,MTT法检测Mn2 对细胞增殖活力的影响;分光光度法检测Mn2 导致的SOD、LDH活力和NAG酶含量的改变;电镜观察Mn2 作用后HK-2细胞微结构改变。结果Mn2 可使庆大霉素损伤的HK-2细胞增殖活力增加,降低LDH酶活力,减少NAG酶含量,升高SOD酶活性,减轻细胞线粒体肿胀程度和减少溶酶体膜的破裂。结论Mn2 对庆大霉素导致的人肾小管上皮细胞系的损伤有保护作用。其机制可能与减轻细胞氧化损伤、降低线粒体肿胀程度、保护溶酶体的完整性和减少溶酶漏出有关。     

性激素对豚鼠心肌细胞膜Na~+,K~+-ATP酶活力的影响

采用Matsui and Schwartz方法制备Na~+,K~+—ATP酶液,Harry法测定无机磷含量,间接测定心肌细胞膜Na~+,K~+—ATP酶活力,实验结果表明,丙酸睾丸素、已烯雌酚对心肌细胞膜Na~+,K~+—ATP酶活性均有明显的抑制作用。但丙酸睾丸素呈正相关,已烯雌酚呈负相关,说明性腺激素可以使心肌细胞膜上的Na~+,K~+—ATP酶活性降低。     

人参二醇组皂苷减轻庆大霉素性肾损伤机制研究

目的:研究人参二醇组皂苷(PDS)减轻庆大霉素(GM)性肾损伤的机制。方法:建立GM性肾小管细胞损伤模型,以MTT法观察PDS对肾小管细胞增殖的影响,以生化法检测PDS对肾小管细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量和培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量的影响。结果:PDS可促进GM损伤肾小管细胞的增殖,显著降低其MDA和LDH含量,提高SOD活性(P<0.05)。结论:PDS可能通过促进肾小管细胞的增殖和抑制脂质过氧化反应,加快自由基的清除,增加生物膜的稳定性,从而减轻GM性肾小管损伤。     

人参皂苷Rb_1与Rg_1对肾小管细胞缺氧复氧损伤模型的影响

目的:探讨人参皂苷的2种单体成分Rb1、Rg1在肾小管细胞缺氧复氧(HRO)损伤模型中的作用及机制。方法:将大鼠肾小管上皮细胞分为对照组、HRO组、Rb1+HRO组和Rg1+HRO组。除对照组外,其余各组给药同时缺氧复氧培养36h后分别检测肾小管细胞增殖活性、增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达情况、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:人参皂苷Rb1、Rg1可促进HRO性肾小管细胞增殖(P<0.01),增强细胞中PCNA阳性表达(P<0.05),减少肾小管细胞MDA生成及LDH释放,增强SOD活性。结论:人参皂苷Rb1和Rg1对HRO性肾小管细胞损伤模型具有保护作用。     

阿魏酸钠和维拉帕米对庆大霉素肾毒性的保护作用

目的研究中药阿魏酸钠（ＳＦ）和维拉帕米（Ｖｅｒ）对庆大霉素（ＧＭ）肾毒性的保护作用。方法采用原代近端肾小管上皮细胞培养技术制作体外ＧＭ损伤模型，观察细胞丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、过氧化氢酶（Ｃａｔ）、ＮＡＧ酶活性、ＤＮＡ合成，细胞内游离钙浓度以及形态学变化，同时观察ＳＦ、Ｖｅｒ的防治作用。结果ＧＭ组表现为ＡＬＴ、Ｃａｔ活性下降，ＮＡＧ活性增加。同时细胞ＤＮＡ合成下降，细胞内游离钙浓度升高。光镜发现近端小管上皮细胞有大量空泡和溶酶体髓样体形成。给予ＳＦ能使上述异常指标明显改善，组织学损害也明显减轻。Ｖｅｒ仅能保护ＡＬＴ活性和降低细胞内游离钙浓度。结论ＳＦ能有效保护ＧＭ对肾小管上皮细胞的损害。     

In vivo evidences suggesting the role of oxidative stress in pathogenesis of vancomycin-induced nephrotoxicity: protection by erdosteine

The aims of this study were to examine vancomycin (VCM)-induced oxidative stress that promotes production of reactive oxygen species (ROS) and to investigate the role of erdosteine, an expectorant agent, which has also antioxidant properties, on kidney tissue against the possible VCM-induced renal impairment in rats. Rats were divided into three groups: sham, VCM and VCM plus erdosteine. VCM was administrated intraperitoneally (i.p.) with 200mgkg(-1) twice daily for 7 days. Erdosteine was administered orally. VCM administration to control rats significantly increased renal malondialdehyde (MDA) and urinary N-acetyl-beta-d-glucosaminidase (NAG, a marker of renal tubular injury) excretion but decreased superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) activities. Erdosteine administration with VCM injections caused significantly decreased renal MDA and urinary NAG excretion, and increased SOD activity, but not CAT activity in renal tissue when compared with VCM alone. Erdosteine showed histopathological protection against VCM-induced nephrotoxicity. There were a significant dilatation of tubular lumens, extensive epithelial cell vacuolization, atrophy, desquamation, and necrosis in VCM-treated rats more than those of the control and the erdosteine groups. Erdosteine caused a marked reduction in the extent of tubular damage. It is concluded that oxidative tubular damage plays an important role in the VCM-induced nephrotoxicity and the modulation of oxidative stress with erdosteine reduces the VCM-induced kidney damage both at the biochemical and histological levels.     

酸性成纤维细胞生长因子对体外培养肾小管上皮细胞存活与增殖的影响

目的探讨酸性成纤维细胞因子(aFGF)对体外培养的大鼠肾小管上皮细胞生长的影响。方法通过酶消化法获取肾小管上皮细胞。将aFGF(低、中、高浓度)加入培养液中作为实验组,不加aFGF的作为对照组。分别在12、24、48和72h进行细胞计数及形态学观察。结果从大鼠肾成功地获取了肾小管上皮细胞。干预72h内,实验组和对照组的肾小管上皮细胞都有不同程度地增殖,12h内各组无明显区别,24、48、72h实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论aFGF有明显的促进肾小管上皮细胞存活与增殖的作用,存在剂量-效应和时间-效应关系。