Xaf1诱导XIAP-／-成纤维细胞凋亡机制的研究

【目的】利用XIAP-/-成纤维细胞，检测在剔除XIAP的情况下Xaf1诱导细胞凋亡的作用，探索Xaf1诱导细胞凋亡的机制。【方法】Xaf1诱导的XIAP-/-成纤维细胞凋亡由流式细胞DNA含量来表示，免疫荧光显微镜检测XIAP-/-成纤维细胞中Xaf1的亚细胞分布，共转染并细胞周期DNA含量流式细胞术检测Bc12对Xaf1诱导的细胞凋亡的影响．细胞色素C流式细胞术检测Xaf1对细胞色素C释放的调节。【结果】Xaf1与TNFα显著协同诱导XIAP-/-成纤维细胞凋亡，凋亡峰值27％。Bcl2能抑制Xaf1诱导的XIAP-/-成纤维细胞凋亡．凋亡峰值由27％下降至6％。在剔除XIAP的情况下，Xaf1仍可诱导细胞色素C释放，峰值为21％。【结论】Xaf1通过胱冬肽酶非依赖机制释放细胞色素C而诱导肿瘤细胞凋亡。     

Xaf1与TNFα协同诱导细胞凋亡机制的初步探索

[目的]利用Xaf1诱导细胞株,检测Xaf1与一些细胞凋亡激动剂协同诱导肿瘤细胞凋亡的能力,初步探索Xaf1诱导凋亡的机制.[方法]Xaf1与细胞凋亡激动剂协同诱导的细胞凋亡由流式细胞检测DNA含量来表示,免疫荧光显微镜检测法与细胞核浆分离法检测Xaf1诱导细胞中Xaf1与XIAP的亚细胞分布,免疫沉淀法检测Xaf1与XIAP的关联性.[结果]流式细胞术DNA含量检测发现Xaf1与TNFα显著协同诱导细胞凋亡,凋亡峰值为49%,而Xaf1与阿霉素无协同作用,凋亡峰值为27%,免疫荧光显微镜检测及细胞核浆分离法结果显示Xaf1位于细胞核内,而XIAP却位于细胞质.[结论]Xaf1与TNFα显著协同诱导细胞凋亡,其协同机制可能不是解除XIAP对胱冬肽酶活性的抑制.     

Xaf1与TNFα协同诱导细胞凋亡机制的初步探索

 [目的]利用Xaf1诱导细胞株,检测Xaf1与一些细胞凋亡激动剂协同诱导肿瘤细胞凋亡的能力,初步探索Xaf1诱导凋亡的机制.[方法]Xaf1与细胞凋亡激动剂协同诱导的细胞凋亡由流式细胞检测DNA含量来表示,免疫荧光显微镜检测法与细胞核浆分离法检测Xaf1诱导细胞中Xaf1与XIAP的亚细胞分布,免疫沉淀法检测Xaf1与XIAP的关联性.[结果]流式细胞术DNA含量检测发现Xaf1与TNFα显著协同诱导细胞凋亡,凋亡峰值为49%,而Xaf1与阿霉素无协同作用,凋亡峰值为27%,免疫荧光显微镜检测及细胞核浆分离法结果显示Xaf1位于细胞核内,而XIAP却位于细胞质.[结论]Xaf1与TNFα显著协同诱导细胞凋亡,其协同机制可能不是解除XIAP对胱冬肽酶活性的抑制.     

建立doxycycline诱导表达Xaf1的肿瘤细胞株

【目的】为探索XIAP相关因子1（Xaf1）调节肿瘤细胞凋亡的机制，利用基因开关调节系统（Tet-on），拟建立由doxycycline调控表达的Xaf1诱导细胞株。【方法】将pTREHA-Xaf1和pWZL-Hyg质粒用基因转染技术转入稳定表达nTA的Saos-2细胞中。经过hygromycin的抗性筛选，挑出并扩增表达Xaf1的细胞株。在8例实验组中加入doxycycline，和不加doxycycline的8例对照组比较，重复3次实验用免疫印迹法和免疫荧光显微镜检测doxycycline对Xaf1表达的调控。Xaf1诱导的细胞凋亡由流式细胞检测DNA含量来表示。【结果】在30个抗hygromycin的细胞株中，免疫印迹法筛选出5个明显由doxycychne调控诱导表达Xaf1的细胞株，免疫荧光显微镜检测显示doxycycline诱导Xaf1表达于细胞核内。流式细胞检测Xaf1于8h开始诱导Saos细胞凋亡，凋亡率最高约20％，而且不影响细胞周期。【结论】Xaf1-Saos诱导细胞株是研究Xaf1调节肿瘤细胞凋亡机制的良好细胞模型；Xaf1是一种核蛋白，能独立诱导肿瘤细胞凋亡。     

建立doxycycline诱导表达Xaf1的肿瘤细胞株

[目的]为探索XIAP相关因子1(Xaf1)调节肿瘤细胞凋亡的机制,利用基因开关调节系统(Teton),拟建立由doxycycline调控表达的Xaf1诱导细胞株.[方法]将pTREHA-Xaf1和pWZL-Hyg质粒用基因转染技术转入稳定表达rtTA的Saos-2细胞中.经过hygromycin的抗性筛选,挑出并扩增表达Xaf1的细胞株.在8例实验组中加入doxycycline,和不加doxycycline的8例对照组比较,重复3次实验用免疫印迹法和免疫荧光显微镜检测doxycycline对Xaf1表达的调控.Xaf1诱导的细胞凋亡由流式细胞检测DNA含量来表示.[结果]在30个抗hygromycin的细胞株中,免疫印迹法筛选出5个明显由doxycycline调控诱导表达Xaf1的细胞株,免疫荧光显微镜检测显示doxycycline诱导Xaf1表达于细胞核内.流式细胞检测Xaf1于8h开始诱导Saos细胞凋亡,凋亡率最高约20%,而且不影响细胞周期.[结论]Xaf1-Saos诱导细胞株是研究Xaf1调节肿瘤细胞凋亡机制的良好细胞模型;Xaf1是一种核蛋白,能独立诱导肿瘤细胞凋亡.     

凋亡调控因子XIAP对缺氧诱导大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的建立体外培养新生大鼠心肌细胞缺氧模型,用XIAP进行干预,以探讨XIAP能否抑制细胞凋亡。方法培养新生SD大鼠（1～3天龄）心肌细胞至第4天,脂质体介导转染pDsRed2-XIAP、pDsRed2-N1质粒和不转染的心肌细胞分别设为模型组、对照组和空白组。以物理性缺氧（95%N2＋5%CO2）方式培养,在6h、12h用流式细胞仪AnnexinVFITC及原位末端标记法（TUNEL）检测细胞调亡,结果采用统计学SPSS11.5软件包进行单项方差分析。〈0.05,有显著差异。结果①缺氧后经TUNEL检测,各组均有心肌细胞凋亡;②流式细胞仪检测心肌细胞凋亡随缺氧时间延长而增多;③模型组心肌细胞凋亡率较对照组与空白组明显减少（〈0.01）。结论缺氧能诱导心肌细胞凋亡。XIAP能明显减少缺氧诱导鼠心肌细胞的凋亡。     

Xaf1通过胱冬肽酶非依赖机制释放细胞色素C诱导凋亡

[目的]利用基因开关调节Xaf1-Saos诱导细胞株,检测Xaf1对肿瘤坏死因子受体(TNFR)(外源性)以及线粒体(内源性)凋亡信号通路的影响,研究Xaf1诱导肿瘤细胞凋亡的机制.[方法]流式细胞术DNA含量检测Xaf1诱导的细胞凋亡和Bcl2对Xaf1-Saos细胞凋亡的影响,Gel Mobility Shift Assay检测NFkB的DNA结合活性,激酶分析法检测SAPK/JNK激酶的活性,细胞色素C流式细胞术检测Xaf1对细胞色素C释放的调节.[结果]Xaf1与TNFα显著协同诱导细胞凋亡,凋亡峰值49%,Xaf1的表达抑制TNFα介导的NFkB的DNA结合活性(50%)和JNK/SAPK的活性,Xaf1可释放细胞色素C,而且不被胱冬肽酶抑制剂所抑制(Z-VAD).[结论]Xaf1通过胱冬肽酶非依赖机制释放细胞色素C而诱导肿瘤细胞凋亡.     

姜黄素诱导人肺成纤维细胞凋亡的相关分子机制的初步研究

目的 观察姜黄素诱导特发性肺纤维化(IPF)患者肺成纤维细胞凋亡的作用,探讨相关分子机制.方法 体外培养开胸肺活检IPF患者的肺成纤维细胞.采用不同浓度姜黄素(5、10、20及40μmol/L)作用于肺成纤维细胞.MTT法检测姜黄素对肺成纤维细胞增殖的抑制作用,计算细胞抑制率;应用流式细胞术检测细胞凋亡以及凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspage-3)的表达.采用SPSS11.5软件进行统计学分析,多组数据间比较采用单因素方差分析,采用Pearson相关分析进行相关性检验.结果 5～40 μmol/L姜黄素作用于肺成纤维细胞不同时间(6、12、24及48 h)后,对细胞增殖具有明显抑制作用,呈剂量-时间效应关系,抑制率与浓度和时间均呈正相关(r=0.886,r=0.832,P均<0.01).流式细胞术检测到细胞凋亡,5～40 μmol/L姜黄素作用后凋亡率分别为(29.58±2.13)%、(64.36±3.92)%、(72.98±4.42)%和(83.14±2.51)%,与不加姜黄素的阴性对照组(3.84±1.88)%比较,差异均有统计学意义(P<0.01);Caspage-3蛋白表达阳性率分别为(26.24±3.64)%、(44.87±5.31)%、(57.44±4.23)%和(73.65±5.01)%,与不加姜黄素的阴性对照组(4.02±0.62)%比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 姜黄素可能通过激活Caspase-3,诱导IPF患者肺成纤维细胞凋亡.     

MAPK反义寡核苷酸诱导大鼠成纤维细胞凋亡的研究

目的 探讨MAPK反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide，ASO）对大鼠肾成纤维细胞凋亡的影响。方法 脂质体转染法将MAPK反义寡核苷酸导入NRK-49F细胞中，Western—blotting测定细胞内MAPK蛋白的表达。DAPI染色观察细胞形态，流式细胞术检测细胞凋亡比率。结果 MAPKASO降低细胞MAPK蛋白含量；且可促进细胞凋亡，转染细胞出现凋亡特征性改变，凋亡率为35．8％，与其余各组有显著差异（P〈0．05）。结论 MAPK反义寡核苷酸通过阻断信号转导分子MAPK诱导大鼠成纤维细胞细胞凋亡，为防治肾移植术后间质纤维化提供一定的理论依据。     

丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的:探讨丹参酮ⅡA对肝癌细胞中凋亡抑制蛋白XIAP的影响。方法:通过MTT实验、流式细胞术、细胞形态观察检测丹参酮ⅡA对细胞增殖和凋亡的影响,通过蛋白免疫印迹的方法检测丹参酮ⅡA对细胞中凋亡抑制蛋白XIAP、凋亡蛋白caspase-3以及PARP蛋白的影响。结果:MTT、细胞形态结果显示丹参酮ⅡA对SMMC-7721细胞的生长抑制作用成时间和剂量依赖性,免疫印迹结果显示,0.5μg/mL丹参酮ⅡA作用肝癌细胞24 h后,caspase-3前体、凋亡抑制蛋白XIAP表达明显下调,活化的caspase-3、剪切形式的PARP含量显著增加。结论:丹参酮ⅡA下调凋亡抑制蛋白XIAP,活化caspase-3,促进PARP剪切诱导肝癌细胞凋亡。     

鼻咽癌组织中XIAP和Smac/DIABLO的表达及意义

[摘要] 目的 采用组织芯片技术研究鼻咽癌组织中X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）与其拮抗蛋白Smac/DIABLO的表达及其意义。方法 以50例鼻咽癌患者鼻咽部活体组织石蜡标本和20例鼻咽部慢性炎症组织石蜡标本为研究对象,利用组织芯片技术同时采用S-P免疫组织化学方法检测鼻咽癌组织芯片中XIAP和Smac/DIABLO的表达。结果 （1）鼻咽癌中XIAP的阳性表达明显高于鼻咽部慢性炎症组织,差异有统计学意义(P <0.05)。鼻咽癌中Smac/DIABLO的阳性表达均明显低于鼻咽部慢性炎症组织,差异有统计学意义(P <0.05)。（2）Smac/DIABLO在XIAP阳性的鼻咽癌石蜡标本中的阳性表达率低于在XIAP阴性的鼻咽癌石蜡标本中,XIAP和Smac/DIABLO表达均呈明显负相关（P <0.05）。结论 XIAP在鼻咽癌中高表达,Smac/DIABLO在鼻咽癌中低表达,鼻咽癌中XIAP和Smac/DIABLO表达呈负相关。XIAP和Smac/DIABLO可能是鼻咽癌细胞凋亡信号传导网络中的重要一环,其与鼻咽癌的发生、发展密切相关。     

凋亡相关因子XAF-1和XIAP的表达及与膀胱癌复发的相关性研究

目的探讨凋亡抑制蛋白XIAP和XIAP相关因子1(XAF-1)的表达及与膀胱癌复发的相关性。方法以第一次复发的20例膀胱癌患者(复发组)和其对应的20例初发的膀胱癌患者(初发组)为研究对象,对照组为20例复发的膀胱癌患者的正常膀胱组织。采用免疫组化方法(SABC)检测XIAP和XAF-1在初发组、复发组、对照组中的表达水平,分析与膀胱癌进展和复发的关系,同时分析XIAP和XAF-1与肿瘤数目、是否肌层浸润、临床分期及恶性程度分级的相关性。结果在初发组与复发组中XIAP的表达强度与临床分期、恶性程度分级呈正相关(P0.05);即XIAP在不同的临床分期、恶性程度分级的表达强度不同,分期越高,表达强度越强。在初发组与复发组中XAF-1的表达强度与临床分期、恶性程度分级呈负相关(P0.05),即XAF-1在不同的临床分期、恶性程度分级的表达强度不同,分期越高,表达强度越低。XIAP、XAF-1的表达强度在肿瘤数目、是否肌层浸润均无明显相关性(P0.05)。对照组、初发组、复发组XIAP指标与XAF-1指标相关(P0.01),呈负相关,XIAP指标越高,XAF-1指标相对低。结论 XIAP异常高表达和XAF-1异常低表达可能在膀胱癌发病和病情进展中起重要作用,为膀胱癌的治疗和判断预后提供了新思路。     

cIAP-1与XIAP在卵巢癌组织中的表达及其与预后的关系

目的探索细胞凋亡抑制蛋白(cIAP)家族中的cIAP-1、XIAP在卵巢癌组织中的表达及与预后的关系.方法选取2004-2009年在解放军总医院行卵巢癌肿瘤细胞减灭术、术前经过新辅助化疗且术后病理证实为卵巢浆液性癌患者99例,统计发病时是否绝经、新辅助化疗用药、病理分级分期等参数,电话随访无瘤生存期及总生存期,取病理标本石蜡切片行免疫组化,观察cIAP-1与XIAP的表达,并分析其与各参数的关系.结果 cIAP-1的表达水平与卵巢癌分级(P=0.034)、新辅助化疗(P=0.035)具有相关性,而与是否绝经无关(P=0.161);XIAP的表达水平与上述均无明显相关性(分别为P=0.230, P=0.192,P=0.560).cIAP-1高表达与低表达患者总生存期之间差异有统计学意义(P=0.014),而XIAP的表达水平的高低在总生存期上差异无统计学意义(P=0.33);尚未发现cIAP-1和XIAP的表达水平与患者无瘤生存期有显著关系(P=0.091, P=0.181).结论接受新辅助化疗后,患者cIAP-1表达水平与肿瘤分级、总生存期具有相关性,可作为卵巢癌预后检测指标.     

凋亡相关因子XIAP和Caspase-3在胃癌组织中表达及其临床意义

目的 探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)在胃癌组织中表达及其与临床病理特征的相关性.方法 采用免疫组化PV-9000二步法检测70例胃癌组织、30例胃良性病变组织和30例癌旁正常组织中XIAP和Caspase-3蛋白的表达情况.结果 胃癌组织中XIAP的阳性表达率明显高于胃良性病变组织和癌旁正常黏膜组织(P＜0.05).胃癌组织中Caspase-3的阳性率明显低于胃良性病变组织和癌旁正常黏膜组织(P＜0.05),差异有统计学意义(P＜0.05).胃良性病变组织和癌旁正常黏膜组织中XIAP、Caspase-3的阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).XIAP和Caspase-3的蛋白表达呈负相关(P＜0.01),XIAP和Caspase-3的阳性表达率与胃癌患者的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期相关(P＜0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无相关性(P＞0.05).结论 随着胃癌恶性程度的增加,XIAP的表达增高,而Caspase-3的表达降低;XIAP和 Caspase-3可能参与了胃癌的发生发展,是评估胃癌预后的潜在指标.     

抗凋亡蛋白XIAP在急性白血病患者中的表达及临床意义

目的探讨抗凋亡蛋白XIAP在急性白血病中的表达及临床意义。方法采用流式细胞术检测55例AL患者及10例正常对照组抗凋亡蛋白XIAP的表达。结果55例初治AL患者表达抗凋亡蛋白XIAP的阳性细胞率（79．85±2．23）％、平均荧光强度（302．70±5．61）,分别较10例正常对照组的阳性细胞率（3．35±2．80）％、平均荧光强度（58．22±16．82）明显升高（P〈0．01）。40例AL患者诱导化疗缓解后表达的抗凋亡蛋白XIAP阳性细胞率（74．35±2．10）％与初治组比较无明显差异（P〉0．05）,但平均荧光强度（124．13±9．47）较初治组明显下降（P〈0．01）。结论XIAP过度高表达与急性白血病的发病相关,XIAP可作为预后不良的指标。     

X染色体连锁凋亡抑制蛋白的研究进展

X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）是凋亡抑制蛋白（IAPs）家族中的重要一员,其主要由N末端3个杆状病毒IAP重复序列（BIR）和c末端一个锌指结构域组成,其主要通过与caspase相互作用抑制细胞凋亡,此外XIAP还可通过核因子KB途径和参与信号转导途径抑制细胞凋亡。XIAP的正向调节主要是在翻译过程中实现的,而负向调节则主要由Smac、转化生长因子B信号通路中的凋亡相关蛋白、HtrA、XIAP相关因子1凋亡抑制蛋白1等XIAP抑制分子实现。XIAP与肿瘤治疗研究方面,反义寡核苷酸技术、XIAP小分子抑制剂、RNA干扰技术等为治疗肿瘤提供了新的研究方向。     

MTA1和XIAP的表达与前列腺癌转移及预后的关系

目的:探讨MTA1和XIAP蛋白表达与前列腺癌临床病理特征和预后的关系。方法:应用免疫组化技术检测53例前列腺癌（PCa）和20例前列腺增生（BPH）组织中MTA1和XIAP蛋白表达,并结合肿瘤的病理学行为和临床随访资料进行分析。结果:在PCa组织中MTA1和XIAP阳性表达率分别为81.1%、75.5%,均显著高于BPH组织（P<0.05）。MTA1和XIAP表达与肿瘤分化程度、周围淋巴结转移、远处转移、预后密切相关（P<0.05）。MTA1和XIAP蛋白表达呈显著正相关（r=0.369,P=0.004）。结论:MTA1和XIAP蛋白表达与PCa发生、转移和患者生存期密切相关,联合检测可以对PCa的发生、发展、预后及药物治疗提供重要依据。