大鼠脊髓横断性损伤胶质细胞凋亡实验研究

为证实大鼠脊髓损伤后胶质细胞凋亡的存在及其随时间变化的规律,采用TUNEL法标记凋亡细胞,并用透射电镜加以证实。结果提示,胶质细胞损伤后凋亡出现于4h,高峰在损伤后1周。持续3周以上,提示骨髓损伤胶质细胞同坏死一样,亦是细胞死亡的重要形式。     

大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡的实验研究

目的:研究细胞凋亡在急性脊髓损伤中的作用.方法:以大鼠脊髓压迫性损伤的动物模型,应用透射电镜,HE染色,原位缺口末端标记(TUNFEL)观察急性脊髓损伤后神经细胞的死亡形式.结果:急性脊髓损伤后2 h电镜清晰观察到神经细胞凋亡的形态变化,HE染色和TUNEL显示急性脊髓损伤后6 h和8 h凋亡阳性细胞达高峰.结论:细胞凋亡为急性脊髓损伤后神经细胞的主要死亡形式,也是加重脊髓损伤的一个因素.     

慢性压迫性脊髓损伤神经细胞的变化

①目的观察在慢性压迫性脊髓损伤时，脊髓的一般组织病理变化及脊髓内神经元和神经胶质细胞的凋亡情况。②方法健康家免16只，随机分为3组：A组为正常对照组；B组为手术对照组；C组为慢性压迫组。采用慢性泛影葡胺胶囊逐级压迫建立慢性脊髓压迫动物模型，造成家兔第2腰髓节段的慢性压迫。用Nissl染色法观察脊髓的一般组织病理学变化，用原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡情况。③结果C组在Nissl染色下白质中神经胶质细胞增生，以后索最明显；灰质中神经元尼氏体淡染或消失，神经元萎缩、脱失，以Ⅸ板层最明显。TUNEL标记的阳性细胞为神经胶质细胞，白质中各索均有，以后索和外侧索明显。灰质中标记细胞主要存在于Ⅰ，Ⅱ板层，压迫区明显，其相邻的首尾端次之。A，B两组的表现正常。④结论慢性压迫性脊髓损伤是导致脊髓一般组织发生病理变化及神经细胞凋亡的重要原因。     

急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及其意义

目的：研究急性脊髓损伤后神经细胞凋亡的分布特点及其意义。方法：Wistar雌性大白鼠54只，使用改良Allen法制作急性脊髓损伤模型，分别于术后1、4、8、24、72h及7、14、21天处死取材。应用苏木精-伊红染色及凋亡细胞原位末端标记(TUNEL)法对脊髓组织进行标记。结果：损伤后4h，在损伤段及邻近段可见末端标记的阳性神经细胞，损伤段灰质中阳性细胞数24h达高峰，白质中阳性胶质细胞数量72h达高峰。相邻节段阳性细胞数量在72h达高峰。灰质中神经元及胶质细胞均有阳性表达，但以胶质细胞为主。结论：脊髓损伤后神经细胞凋亡是继发损伤期的重要病理变化，并有其时相和空间分布特点。     

大网膜移植抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的实验研究

目的 探讨脊髓损伤（SCI)后神经细胞凋亡的发生机制和伤后立即行大网膜脊髓移植是否对神经细胞凋亡具有抑制作用。方法 制作程控电磁吸铁棒下落打击脊髓损伤模型,运用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记（TUNEL）方法检测细胞凋亡,分别观察SCI后1d、2d、7d组与伤后即刻施行大网膜移植组（存活7d）的细胞凋亡。结果 脊髓灰质区在伤后1d、、2d时TUNEL阳性细胞数最多;脊髓白质区在伤后1d时TUNEL阳性细胞数最多,伤后7d出现第2次高峰;伤后大网膜脊髓移植的TUNEL阳性细胞数较7d明显降低。结论 SCI后白质区和灰质区存在不同演变过程的神经细胞凋亡,SCI后即刻大网膜脊髓移植对细胞凋亡有抑制作用。     

大鼠脊髓全横断后相关部位的BDNF表达

目的 探讨大鼠脊髓全横断损伤后相关部位（大脑皮质、横断脊髓上端、下端和比目鱼肌）脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA的表达变化．方法 首先建立正常对照组和实验组模型，其中实验组又依照大鼠全横断脊髓损伤术后1、3、7、14d不同观察时间点分为4个亚组，分别抽提横断脊髓上端及其相连的大脑皮质、横断脊髓下端和比目鱼肌组织中总RNA，用RT-PCR技术检测BDNFmRNA的表达，以β-actin为参照确定各时相BDNFmRNA的相对水平．结果（1）大鼠脊髓全横断损伤后，BDNFmRNA在大脑皮质、脊髓横断上、下端和肌肉中均有表达，且在正常对照组中大脑皮质的BDNFmRNA表达少于脊髓横断上、下端（P〈0．05）；（2）手术后14d时肌肉组织中BDNFmRNA的表达较手术后1d和3d组均有明显增加（P〈0．05）。说明大鼠脊髓全横断损伤14d时，脊髓下端相连的骨骼肌组织中的BDNFmRNA表达上调．结论BDNF在骨骼肌表达增加，提示BDNF可能参与维持骨骼肌的功能，或者转运入脊髓下端对下位运动神经元发挥营养作用．     

羟基红花黄色素A对急性脊髓损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：观察羟基红花黄色素A（HSYA）对急性脊髓损伤（ASCI）模型大鼠神经细胞凋亡的影响。方法30只SD大鼠随机分为空白对照组、损伤对照组和HSYA治疗组,每组10只。采用Allens’s打击法建立急性脊髓损伤大鼠模型,分别于术后1、7、14天观察各组大鼠行为学评分,术后14天通过免疫组化方法观察脊髓损伤部位神经细胞caspase-3 p20、Bcl-2和Bax表达。结果HSYA治疗组与损伤对照组大鼠下肢功能均有恢复（P〈0.05）,且HSYA治疗组恢复更明显（P〈0.05）;与损伤对照组比较,HSYA治疗组caspsase-3p20阳性细胞数表达明显减少（P〈0.05）,Bcl-2阳性细胞显著增加（P〈0.05）,Bax阳性细胞明显减少（P〈0.05）。结论 HSYA对急性脊髓损伤模型大鼠神经细胞凋亡有明显抑制作用,从而减少脊髓损伤部位继发性损伤,促进功能恢复。     

白藜芦醇对脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡的抑制作用

目的:研究脊髓损伤后管饲白藜芦醇对大鼠脊髓神经细胞凋亡的影响。方法:将96只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分成4组,假手术组、损伤组、甲基强的松龙组、白藜芦醇组,根据Allen法造模,术后即刻按100mg/kg管饲白藜芦醇或甲基强的松龙;TUNEL法检测脊髓损伤后8h,1d,3d及7d凋亡细胞数变化,并与甲基强的松龙组对比。结果:脊髓损伤后,白藜芦醇组与损伤组细胞凋亡情况相比具有显著性差异(P<0.01),而白藜芦醇组与甲基强的松龙组间相比无显著性差异(P>0.05),但前者要略优于后者(损伤后1d,P<0.05),这显示白藜芦醇与甲基强的松龙作用相似。结论:白藜芦醇经过管饲后能明显抑制神经细胞的凋亡,发挥了神经细胞保护作用,这与腹腔注射途径一致。     

慢性压迫性脊髓损伤神经细胞的变化

目的：观察在慢性压迫性脊髓损伤时，脊髓的一般组织病理变化及脊髓内神经元和神经胶质细胞的凋亡情况。方法：健康家兔16只，随机分为3组：A组为正常对照组；B组为手术对照组；C组为慢性压迫组。采用慢性泛影葡胺胶囊逐级压迫建立慢性脊髓压迫动物模型，造成家兔第2腰髓节段的慢性压迫。用Nissl染色法观察脊髓的一般组织病理学变化，用原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡情况。结果：C组在Nissl染色下白质中神经胶质细胞增生，以后索最明显；灰质中神经元尼氏体淡染或消失，神经元萎缩。灰质中标记细胞主要存在于Ⅰ，Ⅱ板层，压迫区明显，其相邻的首尾端次之。A,B两组的表现正常。结论：慢性压迫性脊髓损伤是导致脊髓一般组织发生病理变化及神经细胞凋亡的重要原因。     

大白鼠闭合笥脑损伤后神经细胞的凋亡

目的：本实验在改良前脑局部闭合性脑硬膜外占位性颅脑损伤的创伤性模型基础上研究神经元细胞凋亡。方法：５６例Ｗｉｓｔａｒ大白鼠，采用球囊注水在脑硬膜外造成占位及持续时间不同所形成的分级脑外伤，饲养２ｄ后脑标本的位末端标记（ＴＵＮＥＬ）法进行 ＰＣＤ生细胞的检测，结果：４０只存活鼠中，实验组损伤周围有ＴＵＮＥＬ阳性细胞的表达，在对侧及未损伤区几乎无表达。本实验造成脑损伤的机制中除直接受压区的坏死外受损主     

部分背根切断激发脊髓Ⅱ板层细胞凋亡

目的为了解部分背根切断后脊髓可塑性中是否涉及脊髓内胶质细胞和神经元细胞凋亡.方法采用DNA原位末端标记-TUNEL法染色,检测部分背根切断后脊髓细胞凋亡.结果在部分背根切断后脊髓的手术侧和非手术侧均见部分TUNEL阳性反应的胶质细胞和神经元,且手术侧的Ⅱ板层凋亡细胞数较非手术侧多(P＜0.05).结论背根切断不仅导致手术侧胶质细胞和神经元凋亡细胞数量明显增加,而且对非手术侧也有影响.     

脊髓缺血再灌注损伤中神经细胞凋亡的研究

目的 :探讨脊髓缺血再灌注损伤后细胞死亡方式。方法 :制作脊髓缺血再灌注损伤模型后 ,采用电镜和荧光染色方法检测脊髓神经细胞的死亡方式。结果 :电镜观察发现脊髓缺血再灌注损伤 4h后各个时间点均可检测到凋亡细胞。在荧光显微镜下缺血再灌注 4h后各时间点均可见到凋亡及坏死的神经细胞 ,其中以凋亡细胞为主 ,再灌注 2 4 h最多。结论 :脊髓缺血再灌注损伤后细胞死亡以凋亡为主     

环孢霉素A对损伤大鼠脊髓BCL-XL表达的影响

目的探讨环孢霉素A（CSA）对全横断损伤大鼠脊髓BCL-XL表达的影响.方法将成年SD大鼠分脊髓T9全横断（SCT）组和SCT后给予CSA处理组（每组13只动物）,CSA处理后7 d处死动物.其中每组5只用免疫组化染色确定BCL-XL在脊髓的定位分布.另8只动物用RT-PCR技术确定BCL-XL在损伤脊髓的表达变化.结果与SCT组比较（0.74±0.08）,CSA处理导致BCL-XL在损伤脊髓的表达（0.85±0.11）明显上调（P〈0.05）;免疫组化染色显示BCL-XL主要分布在脊髓灰质神经元.结论 CSA能有效上调损伤脊髓BCL-XL的表达,提示CSA发挥免疫抑制作用可能与BCL-XL的调节有关.     

部分背根切断对脊髓中央管上皮细胞凋亡的影响

目的：探讨部分背根切断与脊髓中央管上皮细胞凋亡的关系。方法：采用DNA原位末端标记-TUNEL法染色。结果：部分背根切断后3d，中央管上皮出现大量细胞凋亡，10d时凋亡细胞又明显减少，但总细胞数术后两组无明显差异。结论：部分背根切断可致脊髓中央管上皮细胞凋亡，且随损伤时间延长凋亡细胞数有明显减少，提示细胞凋亡可能在损伤的间接影响下发生，且同时伴有细胞增殖。     

大鼠脊髓全横断后TrkA和NGF在运动皮质的免疫组化研究

目的 探讨脊髓全横断后神经营养因子及相应受体在运动皮质内的分布规律，为临床应用神经生长因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法 用免疫组化方法和图像分析技术检测脊髓全横断后不同时相运动皮质内，神经生长因子(NGF)及其高亲和性受体TrkA的表达和分布。结果 各组运动皮质中TrkA和NGF阳性神经元主要分布在第5层；脊髓全横断3d后，运动皮质内TrkA表达上调，损伤后7d到达高峰，21d回到正常水平；NGF表达在损伤后7d上调，峰值出现在损伤后7d，21d回到正常水平。结论 NGF表达增高迟于TrkA，提示在损伤早期给予外源性NGF可能有利于受损的皮质脊髓束神经元的存活与再生．     

红花黄素对大鼠脊髓损伤局部SOD、MDA和细胞凋亡的影响

目的:探讨红花黄素对大鼠脊髓损伤的保护作用。方法:将30只SD大鼠用改良Allen法制备脊髓损伤(SCI)模型后随机均分为2组,红花黄素组腹腔注射红花黄素40 mg/kg,对照组注射等体积生理盐水,共14 d。第1、2、34、7、d取损伤的脊髓组织测定其SOD、MDA含量,观测细胞凋亡情况,采用改良BBB评分法进行行为学评分。结果:与对照组比较,红花黄素组SCI后各时间点SOD活性均显著增高,MDA含量显著降低;细胞凋亡数明显减少2,周后BBB评分明显增高(P均<0.05)。结论:红花黄素能抑制大鼠脊髓损伤局部自由基生成、脂质过氧化和细胞凋亡,对大鼠脊髓损伤有保护作用。     

选择性COX-2抑制剂对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响相关性实验研究

目的:在建立大鼠脊髓损伤模型基础上,不同时间点观察选择性COX-2抑制剂对脊髓胶质细胞,神经元凋亡的影响,以期为临床急性脊髓损伤的治疗提供理论依据。方法:健康成年大鼠72只,随机分为两组,其中单纯损伤组(单纯打击损伤)36只,COX-2组(手术加COX-2)36只。脊髓损伤动物模型的制备:用自制A1len打击器2 5gcm致伤力撞击脊髓,制成脊髓损伤动物模型。COX-2组每天肌注帕瑞昔布(5 mg/Kg)直至处死,单纯损伤组仍每天肌注生理盐水0.5 ml直至处死。常规制成脊髓切片,给于Bcl-2检测,TUNEL原位末端标记,检测大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的情况。结果:Bcl-2蛋白检测:在脊髓损伤后的第1天,脊髓组织即开始较高表达Bcl-2蛋白。单纯损伤组Bcl-2高峰发生在损伤后3天,而COX-2组伤后l天达到高峰,此时Bcl-2蛋白不仅表达在神经细胞中,更多的在胶质细胞中大量表达,且此状态一直维持到伤后14天才开始下降,伤后2l天仅少量表达;(P<0.05)。TUNEL原位标记检测:单纯损伤组24小时已山现不少阳性细胞,以胶质细胞为主,3～8天达到高峰,此后逐渐回落,但2l天时仍有阳性细胞,应用帕瑞昔布治疗后,凋亡细胞明显减少(P<0.05)。结论:本研究证明,选择性COX-2抑制剂在脊髓损伤中通过改善微循环,促进Bcl-2蛋白的表达,清除氧自由基,抗氧化作用能够抑制脊髓损伤早期神经细胞和胶质细胞的凋亡,从而减轻脊髓继发性损伤,促进脊髓神经功能的恢复。所以SCI后早期应用选择性COX-2抑制剂配合其它药物阻止神经细胞和胶质细胞的凋亡可能有助于减轻SCI的损害程度,促进脊髓神经功能的恢复,为SCI的治疗提供一个新的途径。     

NGF和BDNF在脊髓全横断后大鼠运动皮质的表达和分布

目的：探讨脊髓全横断后神经营养因子在运动皮质内的分布规律，为临床应用神经生长因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法：用免疫组化方法和图像分析技术检测脊髓全横断后不同时相运动皮质内，神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达和分布。结果：各组的运动皮质中NGF和BDNF阳性神经元主要分布在第Ⅴ层；脊髓全横断后NGF和BDNF的表达均增高，NGF的表达高峰在脊髓全横断后7天，21天回到正常水平；BDNF表达在脊髓横断后21天到达高峰，28天回至正常水平。结论：脊髓损伤后大鼠运动皮质内NGF表达上调早于BDNF。     

大鼠坐骨神经挤压伤后血清SOD，MDA变化及脊髓神经细胞凋亡初步观察

目的研究坐骨神经挤压伤后血清SOD,MDA表达变化和细胞凋亡的规律及三者之间的关系。方法成年sD大鼠36只随机分为神经挤压组和假手术组。1,2,3周每组分别处死6只大鼠,用硫代巴比妥酸（thiobarbituricacid,TBA）法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶（xanthineoxidase,XO）法测定SOD,TUNEL法标记凋亡细胞,计算凋亡指数。结果①与假手术组相比,7d,14d大鼠血清中SOD含量下降,MDA含量升高,组间比较,差异均有显著性（P〈0．05）,7d达峰值,以后SOD逐渐上升,MDA逐渐下降。21d假手术组与手术组比较,差异无显著性（P〉0．05）;②手术组7d,14d大鼠脊髓神经细胞凋亡率比假手术组大鼠相应部位的神经细胞凋亡率增加,组间比较,差异有显著性（P〈0．05）。到21d与假手术组比较,差异无显著性（P〉0．05）;③神经细胞凋亡率与SOD活性呈负相关（r〈0,P〈0．05）,与MDA含量呈正相关（r〉0,P〈0．05）。结论坐骨神经挤压伤后血清SOD,MDA含量变化与脊髓神经细胞凋亡发生发展有关,氧化损伤可能是诱发细胞凋亡的机制之一。     

神经再生素对新生大鼠脊髓细胞凋亡的影响

目的：观察神经再生素对新生大鼠脊髓细胞凋亡的影响。方法：将新生SD大鼠一侧坐骨神经切断后，用无菌止血海绵包裹断离的神经近侧端，海绵内加入神经再生素，术后3、6、12h用TUNEL法在光镜下检测L4－L5脊髓细胞凋亡情况，分别以神经生长因子和生理盐水作为阳性和阴性对照。结果：新生大鼠在坐骨神经切断后脊髓细胞出现大量凋亡，神经再生素组凋亡细胞数量较生理盐水组显著减少（P＜0．01）；神经再生素组与神经生长因子组之间凋亡细胞数量的差别无显著性意义（P＞0．05）。结论：神经再生素对受损的神经组织细胞有保护作用。