SCI大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1表达的变化

目的：：观察脊髓全横断损伤对脊髓前角细胞Beclin-1表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠随机分为模型组和假手术组,建立大鼠第2腰髓全横断损伤模型,分别于损伤后6h、1d、3d、7d、14d、21d取3-4腰髓,采用免疫荧光染色法观察大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1的表达情况。结果：与假手术组相比,模型组损伤后各时间点大鼠脊髓前角Beclin-1免疫阳性细胞数明显升高(P＜0.01,P＜0.05）。脊髓损伤后3d脊髓前角细胞Beclin-1免疫阳性细胞数达到高峰,21d最低。结论：Beclin-1可能参与了神经元自噬状态的改变。     

骨髓基质细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的研究骨髓基质细胞（BMSCs）移植对大鼠脊髓损伤（SCI）后神经细胞凋亡的影响,探讨骨髓基质细胞移植治疗脊髓损伤的机制。方法取大鼠股骨和胫骨骨髓培养BMSCs并传代。参照Taoka＇s方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型。脊髓损伤后30min,进行BMSCs或DMEM培养液损伤周围局部四点注射。在术后3、7和14d,应用TUNEL方法检测脊髓损伤周围神经细胞凋亡情况。结果脊髓损伤后,损伤区周围组织内TUNEL阳性细胞数量明显增加,阳性细胞分布于脊髓灰质和白质内,但以白质内神经细胞为主。与DMEM组大鼠相比,移植术后3、7和14d,BMSCs移植显著减少脊髓损伤周围区凋亡的神经细胞数目（P〈0．05）。结论脊髓损伤后,BMSCs移植能够抑制神经细胞凋亡。     

骨髓基质细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的 研究骨髓基质细胞(BMSCs)移植对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的影响,探讨骨髓基质细胞移植治疗脊髓损伤的机制.方法 取大鼠股骨和胫骨骨髓培养BMSCs并传代.参照Taoka's方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型.脊髓损伤后30 min,进行BMSCs或DMEM培养液损伤周围局部四点注射.在术后3、7和14 d,应用TUNEL方法检测脊髓损伤周围神经细胞凋亡情况.结果 脊髓损伤后,损伤区周围组织内TUNEL阳性细胞数量明显增加,阳性细胞分布于脊髓灰质和白质内,但以白质内神经细胞为主.与DMEM组大鼠相比,移植术后3、7和14 d,BMSCs移植显著减少脊髓损伤周围区凋亡的神经细胞数目(P＜0.05).结论 脊髓损伤后,BMSCs移植能够抑制神经细胞凋亡.     

全横断脊髓损伤后不同时相腹角的形态学变化(摘要)

为了解全横断脊髓损伤后不同时相腹角的形态学变化 .将 2 1只ＳＤ大鼠分组制作全横断脊髓损伤模型 (Ｌ1) ,分别于伤后 2 4ｈ ,7ｄ及 2 1ｄ取出Ｌ2 脊髓作连续冰冻切片后苏木精染色 ,观察其腹角的形态学改变并与正常者比较 .结果 :伤后 2 4ｈ及 7ｄ者全横断脊髓相邻上下节段腹角出现大量空泡 ,神经元数明显较正常者减少 (Ｐ <0 0 5) .而伤后 2 1ｄ者空泡消失 ,似有大量胶质细胞增生 .结果表明 :全横断脊髓损伤早期即可致腹角绝大部分神经元丧失而代之以大量空泡 .以后 ,空泡可能被大量增生的胶质细胞所填充 .但伤后 2 1ｄ者神经元数有无改变…     

大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤后脊髓背角感觉神经元超微形态学变化

目的观察大鼠坐骨神经慢性压迫损伤后脊髓背角浅层神经元超微形态变化。方法成年雄性SD大鼠20只,随机分为jE常组和手术组。手术组结扎大鼠左侧坐骨神经建立坐骨神经慢性压迫性损伤fCCI）模型,存术后3、7、14d取与坐骨神经相应的腰4—6节段脊髓,透射电镜观察左侧脊髓背角浅层神经元超微结构并摄片,光镜下苏术素伊红染色对大鼠腰4—6脊髓背角两侧感觉神经元计数。结果坐骨神经损伤后,光镜下损伤侧脊髓背角感觉神经元数量较健侧昆著减少（P〈O．05）,两周时细胞死亡率为23％;电镜下CCI7d和14d绀腰4～6节段脊髓左侧背角浅层神经元出现多种形态变化,以细胞凋亡为主？结论坐骨神经损伤后腰4—6节段脊髓背角神经元tP,现丢失,超微形态上呈现多样性,以细胞凋亡为主。     

微囊化异种嗅球组织移植对脊髓损伤大鼠细胞凋亡及功能恢复的影响

目的 观察微囊化异种嗅球组织细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤后细胞凋亡及功能恢复的影响,探讨其对脊髓继发性损伤的保护作用.方法 横断SD大鼠T10节段脊髓,建立脊髓全横断损伤动物模型.在无菌条件下取家兔双侧嗅球,制备成细胞悬液及微囊化的细胞悬液.实验大鼠随机分为4组:正常组(A组)仅打开椎管,暴露脊髓;损伤组(B组)仅用明胶海绵填塞脊髓损伤腔隙;细胞悬液组(C组)用明胶海绵吸附的兔嗅球组织细胞悬液植入;微囊组(D组)植入明胶海绵吸附的微囊化兔嗅球组织细胞悬液.实验大鼠分别于术后12 h、1 d、3 d、7 d、21 d进行神经功能评分(BBB法)评分评价大鼠运动功能的恢复情况,并行TUNEL染色,观察凋亡细胞的数量及分布变化.结果 A组少见凋亡细胞;B组凋亡细胞最多,并于损伤后1d、7d形成两个高峰;C组凋亡细胞数量较B组有所减少,差别具有显著性(P＜0.05).C组BBB评分较B组明显提高,有显著性差别(P＜0.05);D组凋亡细胞数量较B组明显减少,差别非常显著(P＜0.01),较C组有所减少,差别具有显著性(P＜0.05).D组BBB评分较B组明显提高,差别非常显著(P＜0.01),较C组有所增加,差别具有显著性(P＜0.05).结论 异种嗅球组织细胞悬液移植能够抑制细胞凋亡的发生,能够促进脊髓损伤大鼠的功能恢复,用微囊化异种嗅球组织细胞移植效果更佳.     

脊髓全横断后腹角神经元NT-3的表达

目的研究大鼠脊髓全横断后,NT-3在损伤部位相邻节段脊髓腹角神经元随时间的表达变化,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法体重为250g左右成年SD大鼠48只,随机分为六组。分正常组、假手术组及胸10脊髓节段全横断术后1,3,7,14d组。动物到达存活时间后,应用免疫组织化学SABC法和图像分析技术检测NT-3在脊髓损伤相邻节段腹角的表达和分布。结果正常组的NT-3免疫反应阳性细胞主要分布在腹角的大神经元和少量小神经元。损伤区上段的NT-3免疫反应阳性细胞数,在脊髓腹角的表达,均于术后1d组开始明显增高并达到高峰,术后3d、7d组逐渐回落,术后14d组接近正常水平。而损伤区下段的NT-3免疫反应阳性细胞数,在脊髓腹角的表达均于术后1d组开始明显增高,术后3d组达到高峰,于7d组开始下降,到14d组接近正常水平。结论在脊髓全横断术后,脊髓腹角神经元对NT-3的需求增加,提示NT-3在脊髓修复中起重要作用。     

17β-雌二醇对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的研究17β-雌二醇（E2）对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组（A组）、磷酸盐缓冲液对照组（B组）及E2治疗组（C组）。应用重物打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型（A组仅行椎板切除术），分别于伤后7、14、21及28d，按照改良Tarlov评分法和Rivlin斜板试验观察脊髓功能恢复情况。伤后6、24h和3、7、14、28d分别处死动物取材，HE染色观察病理变化，TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果TUNEL法和流式细胞术检测结果均表明大鼠脊髓损伤后存在细胞凋亡。TUNEL法显示细胞凋亡在伤后3d达高峰，C组伤后24h、3d及7d凋亡细胞比率均显著低于B组（P〈0．01或P〈0．05）；流式细胞术显示细胞凋亡率在伤后7d达高峰，C组细胞凋亡率在24h以后各观察时间点均显著低于B组（P〈0．01或P〈0．05）。14d以后，C组脊髓神经功能恢复显著好于B组（P〈0．01或P〈0．05）。结论E2能减少继发性脊髓损伤后细胞凋亡，促进脊髓功能的恢复。     

大鼠坐骨神经损伤修复术后相应脊髓节段Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡

目的探讨成年大鼠坐骨神经损伤修复术后相应脊髓节段Bcl-2、Bax蛋白表达及神经细胞凋亡为临床治疗周围神经损伤提供实验依据。方法选取健康成年大鼠68只,随机分为正常对照组、假手术组和实验组,分别于术后不同时间取相应脊髓节段做HE染色、TUNEL染色、免疫组化染色,进行脊髓切片形态观察、检测神经细胞的凋亡及脊髓Bcl-2、Bax蛋白表达。结果假手术组术后无阳性变化。实验组术后脊髓前角运动神经元胞体数目减少,1d后可见脊髓内TUNEL阳性细胞,14d后表达至高峰。1d后,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达,14d后达高峰,28d后仍有表达。Bcl-2/Bax值越小,凋亡细胞数量越多。结论大鼠坐骨神经损伤修复术后相应脊髓节段存在神经细胞凋亡,Bcl-2/Bax比值的变化是神经凋亡的重要指标。     

兔寰枢椎前脱位不全脊髓损伤早期细胞凋亡的实验研究

目的制备伴脊髓不全损伤兔寰枢椎前脱位模型,观察模型早期脊髓神经细胞凋亡的变化。方法建立伴脊髓不全损伤兔寰枢椎前脱位模型,采用原位末端转移酶标记技术（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediatednick-end labeling,TUNEL）检测术后6 h、24 h、72 h损伤节段脊髓细胞的形态及数量变化。结果伤后6 h,损伤节段脊髓可见阳性神经细胞大量表达,至24 h损伤段阳性神经细胞达高峰,持续至72 h阳性神经细胞数见下降。各时间点与假手术组比较,损伤段脊髓神经细胞凋亡数均增加（P〈0.05）,凋亡的神经细胞数在24 h较6 h、72 h均更多（P〈0.05）。结论通过手术方式可成功制备寰枢椎前脱位并脊髓损伤模型,在模型寰枢椎可靠固定的前提下（未复位）,脊髓损伤逐渐加重,脊髓损伤后广泛存在细胞凋亡。     

嗅鞘细胞移植后脊髓挫伤大鼠几种神经营养因子的表达变化

目的探讨嗅鞘细胞移植脊髓挫伤大鼠后,在其神经损伤及修复过程中三种神经营养因子（脑源性神经营养因子、神经生长因子、睫状神经营养因子）的表达变化及意义。方法体外分离培养大鼠嗅球嗅鞘细胞。40只健康SD大鼠,雌雄不拘,在移植前一星期使用NYU-撞击机,利用10g-25mm的致伤力,制作T10脊髓挫伤模型。40只脊髓挫伤大鼠随机分为OECs移植组和对照组（注射无血清培养液组）,又根据取材时间不同分为术后1天、7天、14天、21天组。动物处死前进行BBB评分评估后肢运动功能的变化。取手术部位头端和尾端0.5cm脊髓,采用免疫组织细胞化学染色检测技术检测三种神经营养因子（BDNF、CNTF、NGF）在各组脊髓中的表达变化。结果行为学评分随着损伤时间的推移呈小幅度增加,但后肢无运动功能恢复;免疫组织化学检测显示,嗅鞘细胞移植能部分改善大鼠脊髓灰质神经细胞的凋亡程度,延缓白质神经纤维的减少,促进髓鞘的修复与再生。与对照组比较,嗅鞘细胞移植治疗后脊髓组织中三种神经营养因子表达明显增加（P〈0.05）。结论嗅鞘移植能够部分改善脊髓损伤后脊髓组织的病理形态,促进脊髓组织中多种神经营养因子的表达。     

CD44在大鼠脊髓半横断损伤后的表达变化

目的通过观察CD44在大鼠脊髓半横断损伤（hemisection of Spinal Cord Injury,hSCI）位点头尾段的表达,了解它与脊髓损伤的关系。方法免疫组化SP法检测大鼠脊髓半横断损伤后CD44的表达变化情况。制备大鼠脊髓损伤模型。SD大鼠随机分为假手术对照组和脊髓半横断损伤3天、7天和14天组。应用免疫组织化学和图像分析技术检测脊髓组织CD44的表达。结果CD44阳性产物主要定位于细胞外基质,神经元和神经胶质细胞的胞浆中也有分布。损伤后CD44的表达较对照组明显增多﹝P〈0.05﹞。结论脊髓半横断损伤后,表达增加的CD44参与损伤后轴突生长被抑制这一过程。     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤后水通道蛋白-4的影响

目的：探索大鼠嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）移植对大鼠脊髓损伤（spinal cord injurySCI）后水通道蛋白-4（AQP-4）和后肢功能的影响。方法：取Wistar大鼠150只,随机分为正常组（50只）、模型组（50只）、OECs移植组（50只）,模型组和OECs移植组用改良的Allen法制成脊髓损伤模型,造模成功后,其中OECs移植组在损伤处移植嗅鞘细胞,模型组移植DF-12培养液。于术后1、3、7、14、21、28 d进行BBB（Basso-Beattle-Bresnahan）运动功能评分,应用免疫组织化学技术检测脊髓组织AQP-4的表达,并用图像分析仪进行定量分析。结果：术后3~28 d,OECs移植组的BBB评分较模型对照组明显提高,术后第1天,模型组和OECs移植组受损脊髓灰质、白质中AQP-4的表达明显增加;第3天时均达到高峰,但OECs移植组低于模型组（P〈0.05）。第7、14、21、28天,与模型组比较,OECs移植组AQP-4表达也较低（P〈0.01）。结论：OECs移植使脊髓损伤后AQPa表达减少,这可能有利于抑制脊髓水肿、消除脊髓继发性损伤,保存残存正常脊髓组织并促进神经轴突再生,改善其肢体运动功能。     

地塞米松对脊髓损伤后TNF-α和IL-6表达的影响

目的：探讨实验性大鼠脊髓挫伤后,急性期炎症因子：肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）在脊髓内的表达变化以及地塞米松对其表达的影响。方法：采用改良Allen’s法建立大鼠脊髓（T12）损伤模型,90只SD大鼠随机分成正常组（n=6）、SCI组（n=42）和DEX组（n=42,于SCI后15min尾静脉注射DEX30mg/kg）,分别于损伤后1h、3h、6h、12h、24h、36h、48h取材,做常规HE染色和用抗TNF-α和抗IL-6行免疫组织化学方法染色。结果：TNF-α和IL-6在正常大鼠脊髓组织不表达;TNF-α、IL-6在脊髓损伤后1h均有表达,于48小时回落到正常。TNF-α在24h达高峰;IL-6在12h达高峰。地塞米松干预后二者均受到明显抑制。结论：大剂量地塞米松对TNF-α、IL-6有明显的抑制作用。     

大剂量甲基强的松龙联合胶质细胞源神经生长因子治疗急性脊髓损伤对细胞凋亡的影响

目的观察甲基强的松龙（MP）和胶质细胞源神经生长因子（GDNF）联合对大鼠急性脊髓损伤（SCI）后的治疗作用,探讨治疗脊髓损伤的有效方案。方法将大鼠脊髓损伤后,分为单纯脊髓损伤组（A组）、大剂量甲基强的松龙治疗组（B组）、胶质细胞源神经生长因子组（C组）、甲基强的松龙（MP）和胶质细胞源神经生长因子（GDNF）组（D组）,损伤后1、4、7、14、21d对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测（TUNEL）（免疫组化法）以及活性氧表达的测定（流式细胞仪）,采用计算机图像分析技术进行定量分析。结果与对照组相比,MP和GDNF联合治疗显著减轻炎症细胞的浸润和继发损伤的发生。促进了脊髓运动神经轴索的再生和下肢运动功能的恢复（P〈0．05）。结论MP联合GDNF治疗脊髓损伤,对损伤后脊髓结构和功能恢复有明显的促进作用,是治疗脊髓损伤的有效的治疗方案。     

大剂量甲基强的松龙联合MK-801治疗大鼠急性脊髓损伤的实验研究

目的观察大剂量甲基强的松龙（MP）联合MK-801（地卓西平马来酸盐）对大鼠急性脊髓损伤的治疗效果。方法采用Allen的重物坠落法建立大鼠急性脊髓损伤模型,将72只致伤大鼠一次性随机分为4组,每组18只大鼠（其中每组又包括24h、72h、15d三个亚组,每个亚组6只大鼠）。对照组伤后0．5h腹腔注射5mL生理盐水;MP组伤后0．5h腹腔注射甲基强的松龙30mg／kg体重;MK-801组伤后0．5h腹腔注射2．5％MK-801（地卓西平马来酸盐）5mg／kg体重;联合组伤后0．5h腹腔注射甲基强的松龙和MK-801（剂量、浓度同前）。分别在伤后24h、72h、15d处死动物,观察受损部位脊髓的病理形态和细胞凋亡,其中15d组分别于第1、3、5、7、10、15天做Gales评分和斜板试验。结果甲基强的松龙、MK-801及联合组治疗大鼠急性脊髓损伤,在Gales评分、斜板试验及病理形态上、细胞凋亡检测与对照组相比都有很大提高,但三个治疗组在上述方面却处于同一水平。结论甲基强的松龙、MK-801及两药联合对大鼠急性脊髓损伤的治疗作用在目前的实验条件下无明显差异。     

大网膜移植抑制大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的实验研究

目的 探讨脊髓损伤（SCI)后神经细胞凋亡的发生机制和伤后立即行大网膜脊髓移植是否对神经细胞凋亡具有抑制作用。方法 制作程控电磁吸铁棒下落打击脊髓损伤模型,运用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记（TUNEL）方法检测细胞凋亡,分别观察SCI后1d、2d、7d组与伤后即刻施行大网膜移植组（存活7d）的细胞凋亡。结果 脊髓灰质区在伤后1d、、2d时TUNEL阳性细胞数最多;脊髓白质区在伤后1d时TUNEL阳性细胞数最多,伤后7d出现第2次高峰;伤后大网膜脊髓移植的TUNEL阳性细胞数较7d明显降低。结论 SCI后白质区和灰质区存在不同演变过程的神经细胞凋亡,SCI后即刻大网膜脊髓移植对细胞凋亡有抑制作用。     

Experimental study on regeneration of ascending tract after spinal cord injury with predegenerated peripheral nerve graft and NGF infusion

Objective：To explore the effects of predegenerated peripheral nerve graft （PPNG） combined with nerve growth factor （NGF） infusion on ascending sensory tract regeneration after spinal cord injury. Methods： Fifty female SD rats were randomly divided into 5 groups. Group A was treated with PPNG and NGF infusion, group B with PPNG, group C with NGF infusion, group D and group E were blank and normal control, respectively. Horseradish peroxidase-labled （HRP） tracing method was employed to evaluate the regeneration of injured nerves after 8 weeks. The extent of regeneration in and beyond the nerve graft was determined by counting the number of HRP-labeled fibers intersecting imaginary lines perpendicular to the axis of the graft and cord. For the sake of convenience, according to the relation of the PNG and spinal cord, 6 model zones were divided, including caudal of spinal cord, caudal transition zone, caudal zone in graft, rostral zone in graft, rostral transition zone and rostral of spinal cord. Results： On the transverse section of caudal zone in graft, rostral zone in graft, rostral transition zone, the fibers in group A were significantly higher than that in group B and C （P〈0.05）. Conclusion： PPNG combined with NGF may significantly promote the regeneration of ascending long tract after spinal cord injury. The regenerative fibers can penetrate the 2 graft-host interface scars.     

褪黑素对大鼠脊髓损伤后iNOS表达的影响

目的：探讨褪黑素对大鼠脊髓损伤后诱生型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法：采用改良Allen’S撞击法制备脊髓损伤模型;成年SD大鼠110只随机分为假损伤组、损伤组和药物治疗组3组,其中损伤组和药物治疗组各50只,分5个时间点（8小时、24小时、72小时、7天、14天）处死;假损伤组10只,于手术后14天处死,采用HE染色和免疫组化检测脊髓损伤后脊髓组织中iNOS蛋白的表达。结果：与损伤组比较,药物治疗组大鼠损伤后脊髓组织iNOS表达明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：褪黑素可通过抑制iNOS蛋白表达对大鼠脊髓损伤起保护作用。     

实验性大鼠脊髓损伤神经细胞凋亡的研究

目的 探讨脊髓损伤（SCI）后神经细胞凋亡时间和空间的分布规律。方法 制作大鼠程控电磁吸铁棒下落打击脊髓损伤模型,且末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡。结果 脊髓损伤后1～2d灰质区TUNEL阳性细胞数最多,随着时间的延长,TUNEL阳性细胞逐渐减少。白质区伤后1d TUNEL阳性细胞数量多,至伤后2d明显减少,伤后7d白质区又出现高峰,至30d白质和灰质区仅见少量散在的TUNEL阳性细胞。结论 脊髓损伤后存在神经细胞的凋亡,白质区和灰质区细胞凋亡演变过程不同。