用化学发光法测定辣根过氧化物酶几种体系的研究

作者采用四种体系,确定了用化学发光法测定辣根过氧化物酶(HRP)的最佳测定条件和操作步骤。用鲁米诺-H_2O_2(NaOH)可以方便地测定0.05～4pmol HRP,绝对检测限16fmol。用邻苯二酚-H_2O_2(pH6.5)体系可测定0.1～100pmol HRP,绝对检测限3～17fmol。用鲁米诺-H_2O_2-对碘苯酚(pH8.5)体系,可由1分钟时的光强度测定10～50fmol HRP,绝对检测限10fmol。用对羟基联苯代替对碘苯酚,测1或3分钟时的光强度可测定6～40fmol HRP,绝对检测限6.5或3.3fmol.     

化学发光法测定辣根过氧化物酶浓度的实验条件探讨

探讨了对碘苯酚（PIP）增强的鲁米诺—过氧化氢—辣很过氧化物酶（Luminol-H_2O_2-HRP）体系的反应特性,通过正交试验并经方差分析,获得了增强发光酶免疫检测法测定辣根过氧化物酶（HRP）及其标记物的最佳实验条件（缓冲液的pH=8.2,Luminol的浓度5×10~(-4)mol/L,H_2O_2的浓度4×10~(-3)mol/L,PIP的浓度4×10~(-4)mol/L,乙二胺四乙酸的浓度0.25mg/ml,温度25℃.反应时间10min）。在上述最佳条件下检测HRP的浓度,其线性范围为:10~(-9)～10~(-12)g/L,Y=-0.05 1.07X（r=0.96,P<0.01）,最低检出限为 0.2pg（5 amol）。     

应用化学发光自显影技术检测甲型肝炎病毒和人IgM

运用化学发光自显影技术和化学发光酶免疫分析法，可检出15．60pg辣根过氧化物酶；在甲型肝炎病毒和人IgM的免疫测定中，检出限分别为1：128（滴度）和6．4×104（人标准血清稀释倍数），较酶连接免疫吸附测定比色法灵敏4～8倍。     

化学发光法测定辣根过氧化物酶浓度的实验条件探讨

探讨了对碘苯酚增强的鲁米诺－过氧化氢－辣根过氧化物酶体系的反应特性，通过正交试验并经方差分析，获得了增强发光酶免疫检测法测定辣根过氧化物酶及其标记物的最佳实验条件。     

N-酚噻嗪丙磺酸的合成及其对HRP-LuminoI-H2O2化学发光的增强作用

目的:合成和表征N-酚噻嗪丙磺酸,探讨其对HRP-Luminol-H2O2化学发光体系的增强作用.方法:将N-酚噻嗪丙磺酸加入HRP-Luminol-H2O2化学发光体系,记录发光强度和发光持续时间,并用于HRP含量的测定.结果:N-酚噻嗪丙磺酸可使HRP-Luminol-H2O2化学发光体系的发光强度增强,发光持续时...     

N-酚噻嗪丙磺酸的合成及其对HRP-LuminoI-H2O2化学发光的增强作用

目的:合成和表征N-酚噻嗪丙磺酸,探讨其对HRP-Luminol-H2O2化学发光体系的增强作用.方法:将N-酚噻嗪丙磺酸加入HRP-Luminol-H2O2化学发光体系,记录发光强度和发光持续时间,并用于HRP含量的测定.结果:N-酚噻嗪丙磺酸可使HRP-Luminol-H2O2化学发光体系的发光强度增强,发光持续时间达30分钟以上.HRP含量在25-800 pg/mL范围内,酶含量与发光相对强度显示良好的线性关系.结论:N-酚噻嗪丙磺酸可用于酶免疫发光分析.     

用放射自显影方法探讨酪氨酸在小鼠卵巢内的分布

用放射自显影方法观察~3H-酪氨酸在小鼠卵巢内的分布表明,排卵前卵巢内,间质腺摄取酪氨酸最多,各级卵泡则依体积减小而摄取量减少。诱发排卵后,黄体摄取酪氨酸成倍增加,黄体退化则摄取量减少。     

PCR结合核酸分子杂交放射自显影检测HPV16,18实验条件的研究

为建立一种快速、简便、高敏感性和特异性的检测消化道肿瘤组织中ＨＰＶ１６，１８ＤＮＡ序列的方法，用ＰＣＲ扩增ＨＰＶ１６早期区Ｅ６的１２０ｂｐ片段和扩增ＨＰＶ１８Ｅ６、Ｅ７区２６７ｂｐ片段，扩增产物与相应的５′－末端Ｐ３２标记的特异性寡核苷酸探针进行斑点杂交放射性自显影。探讨了影响ＰＣＲ和杂交的关键因素，从中选出较佳的反应条件：即ＰＣＲ退火温度及杂交温度均为５５℃，反应缓冲液镁离子浓度为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，引物浓度各为５０ｐｍｏｌ／１００μｌ，探针浓度各为１．０ｐｍｏｌ／ｍｌ，杂交时间３ｈ，放射性自显影时间２４ｈ。在上述条件下，该方法可检出低至０．０１ｆｇ的ＨＰＶ１６或ＨＰＶ１８质粒ＤＮＡ，ＨＰＶ１６与ＨＰＶ１８之间无交叉反应，为进一步探讨ＨＰＶ与消化道肿瘤的关系奠定了基础。     

噬菌体鉴定食品中沙门菌污染情况调查分析

目的：采用噬菌体裂解法检测本市市区食品中沙门氏菌污染情况。方法抽取413份食品,采用肠杆菌诊断噬菌体,结合生化反应和血清学鉴定结果,检测食品中沙门氏菌污染情况。结果99份食品样本中检测出119株沙门氏菌,检出率24%。结论沙门氏菌危害主要来自肉类食品和禽蛋,噬菌体检测快速、方便、可靠。     

血清中过氧化氢酶活力的化学发光微量分析法

本文设计了一种用化学发光法检测过氧化氢酶活性的方法。其原理是利用H_2O_2与化学发光剂反应,使之发光,用发光仪可检测到其发光值。过氧化氢酶可加强此发光反应,其程度与酶活力呈线性关系。此法方便、快速、且可微量测定。用此法测定了30名健康成人的血清中酶活力,其平均值:323.7±16.5U/ml。     

生物素标记增强化学发光法测定血清中庆大霉素含量

作者采用生物素－亲和素体系及化学发光增强法测定血清中庆大霉素含量。以微晶纤维素－羊抗兔抗体结合兔抗庆大霉素，再由待测庆大霉素与生物素化庆大霉素竞争，分离后沉淀中加入ＨＲＰ－亲和素，洗涤后测化学发光强度。结果测得血清中庆大霉素双对数标准曲线的检出限范围为６３ｎｇ～７８ｎｇ／ｔｕｂｅ，｜ｒ｜＝０．９９１±０．００６，平均回收率为１０３％。     

血培养中猪霍乱沙门氏菌的鉴定与药敏

目的快速对血培养中猪霍乱沙门氏菌进行鉴定以指导临床医师正确使用抗生素,提高治愈率。方法用全自动血培养分析仪进行血培养,对血培养阳性、革兰染色阴性标本同时转种血琼脂、HE琼脂、麦康凯琼脂和SS平板上,采用K-B法检测菌株的药敏情况。结果猪霍乱沙门氏菌在SS平板上形成无色、半透明的菌落,硫化氢和氧化酶试验阴性,沙门氏菌抗血清O7、Hc和H1,5凝集阳性。对氨苄西林,复方新诺明、氯霉素、萘啶酸等耐药;对左氧氟沙星、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦等敏感。结论血培养中猪霍乱沙门氏菌快速、准确的鉴定与药敏结果对提高救治率至关重要。     

分子信标探针技术检测沙门菌invA基因

目的 研究沙门菌的分子信标基因检测方法。方法 在PCR反应体系中加入分子信标探针,探针的5’端标记6-fluorescine(6-FAM),3’端标记4-(dimethylaminophenylazo)benzoic acid (DABCYL),对沙门菌invA基因PCR产物进行荧光检测。结果 肠炎沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、伤寒沙门菌“H”、伤寒沙门菌和肠侵袭型大肠杆菌的荧光值分别为161.6、104.5、85.9、83.1、94.8、46.1,Ax值(样本荧光值-空白对照荧光值)分别为121.3、64.2、45.6、42.8、54.5、5.8,沙门菌的Ax值均大于21,结果阳性,与琼脂糖电泳分析结果一致。结论 分子信标探针技术可以准确、快速、简便进行沙门菌invA基因检测。     

黄芩素的化学发光测定

以黄芩素进行试验 ,建立了黄芩素的化学发光测定法 ,并应用于市售制剂中有效成分的检测 ,RSD=0 .6 5 % (n =10 ) ,回收率为 (98± 3) % (n =6 ) ;本法可用于其它多羟基黄酮化合物的检测 ,检测结果从本质上反映多羟基黄酮化合物生物活性和药理作用的强弱     

一株黏液型沙门菌的鉴定与分析

目的对住院患者血液分离的一株黏液型沙门菌进行多种方法的鉴定及血清凝集试验,以期将该菌准确鉴定到种。方法采用多种鉴定方法,如西门子Micro Scan Walk Away 96 plus全自动细菌鉴定/药敏分析仪,API 20E,VI-TEK MS,16S r RNA测序法对该菌进行鉴定。结果多种鉴定方法结果均为沙门菌属,但血清凝集试验一直为阴性。结合本菌菌落呈黏液型可能凝集反应不典型的特点,采用多次传代恢复到非黏液型菌落后出现凝集反应,最后鉴定为猪霍乱沙门菌。结论黏液型沙门菌表面黏液状的物质会极大的干扰血清凝集试验,可能会导致临床鉴定错误,有条件实验室最好用16S r RNA进行更加准确的菌株鉴定。     

有机氯化物的固定化酶处理技术研究

研究了Ｆｅ３Ｏ４固定辣根过氧化物酶的吸附特性、贮存稳定性,考察了固定化酶浓度、ｐＨ值、Ｈ２Ｏ２浓度对催化氧化反应的影响。对均相与非均相酶处理氯酚的效果进行比较,显示固定化酶处理有机氯化物具有很大的优越性。