HMGI高表达促进单核细胞PDGF-B链基因转录

血管内皮细胞与循环血细胞 ,如单核细胞之间的相互作用 ,在动脉粥样硬化等重要心血管疾病发生和发展过程中具有极其重要的意义。众多的动脉粥样硬化相关因素也同时作用于这些细胞。我们曾发现高迁移率蛋白Ⅰ (ＨＭＧⅠ )能促进ＥＣＶ30 4细胞核转录因子ＮＦ -κＢ与ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游切应力反应元件 (ＳＳＲＥ)的结合。目的 :观察在整体细胞水平 ,ＨＭＧＩ对单核细胞系Ｕ937细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因转录的影响及蛋白激酶Ｃ磷酸化的调节作用。方法 :( 1 )利用ＰＣＲ技术和ＤＮＡ重组技术构建正义和反义ＨＭＧＩ表达载体 ;( 2 )脂质体法将…     

PDGF-B链基因上游序列中与HMGI结合 A-T丰富区的初步分离和鉴定

一些动脉粥样硬化相关致病因素可诱导内皮细胞和单核细胞中血小板源生长因子 -Ｂ链 (ＰＤＧＦ -Ｂ)基因表达 ,这一过程涉及众多反式作用因子和基因上游调控序列之间的相互作用。染色体结合蛋白———高迁移率蛋白Ⅰ (ＨＭＧＩ)可通过与ＤＮＡ上的Ａ -Ｔ丰富区结合 ,影响多种基因的转录。目的 :分离和鉴定ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游序列中与ＨＭＧＩ结合的Ａ -Ｔ丰富区 ,并初步分析其功能。方法 :ＤＮＡ重组技术和凝胶迁移率改变法 (ＥＭＳＡ)。结果 :重组人ＨＭＧＩ蛋白 (ｒＨＭＧＩ)可与ＰＤＧＦ -Ｂ链基因上游序列结合。在 - 1 758/ 4 3ｂ…     

TNFα对血管内皮细胞PDGF-B链基因转录的影响

ＴＮＦα主要由巨噬细胞、Ｔ细胞和ＮＫ细胞产生,是一种在急、慢性炎症过程中均有重要作用的炎症介质。动脉粥样硬化（ＡＳ）是以动脉壁内皮结构、功能损害和平滑肌细胞增殖变化为主的慢性炎症过程。ＡＳ时ＴＮＦα合成增多,且与ＡＳ的严重程度成正比。ＰＤＧＦ是以二聚体（ＡＡ,ＢＢ和ＡＢ）形式存在的促分裂剂。其中,ＰＤＧＦ－Ｂ链由ＰＤＧＦ－Ｂ链基因编码,该基因ｍＲＮＡ在ＡＳ血管内皮细胞中表达明显增高。因此,研究在ＴＮＦα作用下,血管内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达调控的分子机制对于阐明动脉粥样硬化的发病机制具有重要…     

AngⅡ、mm-LDL和TNFα对ECV304细胞 PDGF-B链基因转录调控的影响

目的 :从基因转录水平探讨ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因表达的影响。方法 :( 1 )以ＧＡＰＤＨ为内参照 ,用反转录 -多聚酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ)方法检测 1 0 - 6 ｍｏｌ/ＬＡｎｇⅡ、1 0 0 μｇ/ｍＬｍｍ -ＬＤＬ及 2 0 0Ｕ/ｍＬＴＮＦα作用于ＥＣＶ30 4细胞 1 8ｈ后各实验组ＰＤＧＦ -Ｂ链基因ｍＲＮＡ水平 ,分别为对照组的 1 5倍、2 0倍和 1 3倍 ,提示ＡｎｇⅡ、ｍｍ -ＬＤＬ及ＴＮＦα在转录水平对ＥＣＶ30 4细胞ＰＤＧＦ -Ｂ链基因的表达有促进作用。 ( 2 )构建一系列含人ＰＤＧＦ -Ｂ链基…     

PDGF-B链基因表达的调控及其在常见心血管疾病中的意义

血小板源生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＰＤＧＦ）是机体普遍存在的促分裂剂,系由两种肽链（Ａ链、Ｂ链）组成的同型或异型二聚体。依不同的细胞来源,有３种形式：ＰＤＧＦ－ＡＡ,ＰＤＧＦ－ＡＢ和ＰＤＧＦ－ＢＢ。ＰＤＧＦ－Ａ链和－Ｂ链分别由ＰＤＧＦ－Ａ链基因和－Ｂ链基因编码。ＰＤＧＦ－Ｂ链主要由内皮细胞和巨噬细胞产生,其基因表达调控异常与常见心血管疾病的发生发展存在着密切关系,内皮细胞功能紊乱日益受到重视,而内皮细胞仅表达Ｂ链,本文就其表达调控,尤其是转录调控的研究进…     

缺氧对肺动脉内皮细胞PDGF基因及PDGF—B链蛋白表面的影响

应用核酸杂交和定量免疫细胞化学分析技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子ＰＤＧＦ基因及ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达的影响。结果，缺氧能明显增强肺动脉内皮ＰＤＧＦ－Ｂ细胞边ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ－Ａ链ｍＲＮＡ表达水平无明显改变。免疫细胞化学定量分析与证实ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白染色比正常对照明显增强，与ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达的改变基本一致。提示缺氧可以刺激肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ的表达。ＰＤＦＧ在     

5‘上游序列对TNFα诱导内皮细胞血小板源生长因子—B链基因…

目的和方法：为探讨人血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）－Ｂ链基因５‘上游序列在ＴＮＦα诱导内皮细胞该基因转录中的调控作用,本研究将构建的一系列含人ＰＤＧＦ－Ｂ链基因不同上游序列荧光素酶报告基因质粒,与内参照质粒ｐＳＶ－β－Ｇａｌ共转染培养的人脐静脉内皮细胞,分别检测了不同浓度和不同持续时间ＴＮＦα作用下转染内皮细胞荧光素酶比活性,观察了５’上游序列的定向删切对ＴＮＦα诱导内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链基因转录的     

缺氧对肺动脉内皮细胞PDGF基因及PDGF－B链蛋白表达的影响

应用核酸杂交和定量免疫细胞化学分析技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子ＰＤＧＦ基因及ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白表达的影响。结果表明，缺氧能明显增强肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ＿Ｂ链ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ－Ａ链ｍＲＮＡ表达水平无明显改变。免疫细胞化学定量分析也证实ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白染色比正常对照明显增强，与ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达的改变基本一致。提示缺氧可以刺激肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ的表达。ＰＤＦＧ在缺氧引起的肺动脉高压血管构形改建中可能具有重要作用。     

缺氧促进猪肺动脉内皮细胞sis／PDGF—B链基因的表达

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｓｌｏｔ－ｂｌｏｔ杂交技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）基因表达的影响，结果表明，缺氧能明显中肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ－Ｂ链ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ－Ａ链ｍＲＮＡ表达无明显影响，提示缺氧可能是体内刺激肺动脉内皮细胞ｓｉｓ／ＰＤＧＦ－Ｂ链基因表达的因素之一，通过肺动脉平滑机细胞增生和收缩，在肺动脉高压血管改建中可能具有重要作用。     

TNFα、oxLDL对单核细胞玻璃粘连蛋白mRNA表达的影响 及其可能的信号转导途径

玻璃粘连蛋白 (ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ)含有精氨酸 -甘氨酸 -天门冬氨酸 (ＰＧＤ)序列和肝素结合区。单核细胞表面的玻璃粘连蛋白是血管内皮细胞表面β3整合素族的配基之一 ,二者的结合能够促进血液循环中的单核细胞和内皮细胞的粘附。一些致动脉粥样硬化因素作用血管内皮细胞的同时 ,也作用于单核细胞 ,使其表面的玻璃粘连蛋白表达增高 ,从而成为动脉粥样硬化早期单核细胞与病变部位动脉内皮细胞粘附异常增强的机制之一。目的 :是观察单核细胞株Ｕ937细胞在ＴＮＦα、ｏｘＬＤＬ及蛋白激酶Ｃ抑制剂Ｈ - 7、Ｃａｌｐｈｏｓｔｉｎ和丝裂素活…     

缺氧促进猪肺动脉内皮细胞sis／PDGF－B链基因的表达

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｓｌｏｔ一ｂｌｏｔ杂交技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）基因表达的影响。结果表明，缺氧能明显增加肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ一Ｂ链ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ一Ａ链ｍＲＮＡ表达无明显影响。提示缺氧可能是体内刺激肺动脉内皮细胞ｓｉｓ／ＰＤＧＦ一Ｂ链基因表达的因素之一，通过控制肺动脉平滑肌细胞增生和收缩，在肺动脉高压血管改建中可能具有重要作用。     

缺氧内皮细胞介导肺动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子mRNA表达

目的探讨缺氧时肺动脉内皮细胞对肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ自分泌的影响。方法实验分３组：无血清培养组、常氧性内皮细胞条件培养液组及缺氧性内皮细胞条件培养液组。应用原位杂交和图像分析技术检测猪肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达。结果无血清培养的肺动脉平滑肌细胞有ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ弱表达;内皮细胞条件培养液明显增加肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达,两者分别为无血清培养组的１．８倍和１．７倍（Ｐ＜０．０１）,为常氧内皮细胞条件培养液培养组的１．４倍和１．５倍（Ｐ＜０．０１）。结论缺氧时肺动脉内皮细胞可以介导肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ的自分泌,可能在缺氧性肺动脉高压血管构形改建中具有重要作用     

Ox-LDL对内皮细胞粘附分子表达及粘附功能影响的研究

目的 :大量的研究已证明高脂血症是动脉粥样硬化的重要危险因素 ,血脂异常可引起血管内皮细胞和血细胞的功能改变。近年来的研究发现 ,其中氧化低密度脂蛋白(Ｏｘ ＬＤＬ)起主要作用。故尔观测Ｏｘ ＬＤＬ对血管内皮细胞粘附分子ＩＣＡＭ 1、ＶＣＡＭ 1、Ｐ ｓｅｌｅｃｔｉｎ表达和粘附作用的影响。方法 :本研究采用人脐静脉内皮细胞 (ＨＵＶＥＣ)作研究载体 ,采用单核细胞系Ｕ937细胞观测Ｏｘ ＬＤＬ对内皮细胞 (ＥＣ)粘附功能的影响 ,采用免疫组化ＡＢＣ法和ＥＬＩＳＡ二种方法观测Ｏｘ ＬＤＬ(10 0 μｇ/ｍｌ和 2 0 0 μｇ/ｍｌ二种浓度 …     

含人PDGF—B链基因不同上游序列报告基因的构建和表达

本研究构建了含人ＰＤＧＦＢ链基因不同上游序列的荧光素酶报告基因ｐＳＩＳ－１７５８／＋４３Ｌｕｃ和ｐＳＩＳ－４０２／＋４３Ｌｕｃ，经与ｐＳＶβＧａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅＣｏｎｔｒｏｌＶｅｃｔｏｒ共转染血管内皮细胞后，测定了基础水平和ＴＮＦα作用下细胞裂解液中的荧光素酶和β半乳糖苷酶活性。结果表明：在ＴＮＦα作用下，ＰＤＧＦＢ链基因上游序列上调内皮细胞荧光素酶的表达，其主要调控区可能位于－１７５８／－４０３ｂｐ之间。     

血小板源生长因子对培养内皮细胞移行的影响及其与血管内皮细 …

一、材料与方法1 材料与试剂 :人脐静脉内皮细胞 (ＨＵＶＥＣ)株(ＥＣＶ30 4)由武汉大学菌种保存中心提供。ＰＤＧＦ ＢＢ、ＤＭＥＭ/Ｆ12 、胎牛血清 (ＦＢＳ)及青霉素 链霉素均为美国Ｇｉｂｃｏ公司产品。血管内皮细胞生长因子 (ＶＥＧＦ)抗血清为ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品。ＰＤＧＦ ＢＢ、ＳＡＢＣ试剂盒抗血清及二氨基联苯胺(ＤＡＢ)由博士德公司提供。2 血小板源生长因子 (ＰＤＧＦ)对培养ＨＵＶＥＣ移行的影响 :参照Ｇａｊｄｕｓｅｋ等[1] 介绍的方法 ,并加以改进。选用生长良好的ＨＵＶＥＣ悬液 ,调整细胞密度为 2× 10 4 个 /…     

TNF-α对内皮细胞粘附分子NFκB表达的影响

目的 :目前认为动脉粥样硬化 (ＡＳ)是一种炎症性疾病 ,其致病因素多种 ,细胞因子生长因子等在其发病机制中起着重要的作用。因而通过ＴＮＦ α作用于内皮细胞 (ＥＣ)后 ,观察单核细胞对其粘附的变化 ,粘附分子表达以及对调控粘附分子基因的转录因子 (ＮＦκＢ)变化 ,以探讨ＴＮＦ α在ＡＳ发生早期细胞行为中的作用。方法 :人脐静脉内皮细胞和γＴＮＦ α(5ｎｇ/ｍｌ)作用 4ｈ后 ,用细胞计数法测Ｕ937细胞以ＥＣ粘附率 ,用ＥＬＩＳＡ法检测ＥＣ膜上粘附分子ＶＣＡＭ 1、ＩＣＡＭ 1、Ｐ ｓｅｌｅｃｔｉｎ的表达 ,以及采用细胞免疫化学方法测…     

API_(0134)对LDL诱导单核细胞表达PDGF-B、bFGF及平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的和方法：应用免疫细胞化学方法，观察穿心莲成分ＡＰＩ０１３４对轻度氧化低密度脂蛋白（ｍｍＬＤＬ）诱导人血单核细胞表达血小板源生长因子Ｂ链蛋白（ＰＤＧＦ－Ｂ）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的影响；并进行平滑肌细胞（ＳＭＣ）有丝分裂试验，观察ＡＰＩ０１３４作用后的单核细胞条件培养基（ＣＭ）对３Ｈ－ＴｄＲ掺入ＳＭＣＤＮＡ的影响。结果：ｍｍＬＤＬ可显著促进单核细胞表达ＰＤＧＦ－Ｂ和ｂＦＧＦ，ｍｍＬＤＬ作用后的ＣＭ亦可显著增加３Ｈ－ＴｄＲ的掺入量。ｍｍＬＤＬ的上述作用可被不同剂量的ＡＰＩ０１３４和ＡＰＩ０１３４作用后的ＣＭ所抑制。结论：ＡＰＩ０１３４的作用可能是抗动脉粥样硬化的机理之一。     

胶质瘤细胞血小板源生长因子B链的纯合二聚体与其受体基因？…

目的 探讨胶质瘤细胞血小板源生长因子Ｂ链的纯合二聚合（ＰＤＧＦＢＢ）及其受体（ＤＧＦＲ）基因表达和ＰＤＧＦＲ活化汪洋在胶质瘤发生、发展听作用。方法 用原位杂交和免疫组化染色观察了７３例不同级别的人胶质瘤组织标本。结果 ６２例（８４．９％）的肿瘤细胞表达ＰＤＧＦＢｍＲＮＡ,基阳性率和阳性肿瘤细胞含量均随肿瘤恶性程度升高而递增。ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ和这两种受体及其信号传递通路活化标记物酪氨酸磷酸     

胶质瘤细胞血小板源生长因子B链的纯合二聚体自分泌环活性与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系

目的探讨胶质瘤细胞血小板源生长因子Ｂ链的纯合二聚体（ＰＤＧＦＢＢ）自分泌环活性与其细胞增殖和凋亡的关系。方法用原位杂交、原位细胞凋亡检测和免疫组化ＡＢＣ法染色观察了７３例不同级别的胶质瘤组织。结果胶质瘤细胞ＰＤＧＦＢＢ自分泌环活性与其增殖活性呈显著性正相关，两者均随肿瘤恶性程度升高而增强。肿瘤细胞凋亡随肿瘤恶性程度升高而减少，并与肿瘤细胞ＰＤＧＦＢＢ自分泌环活性和增殖活性呈显著性负相关。结论以上指标对评价胶质瘤生物学行为均有参考价值。胶质瘤细胞ＰＤＧＦＢＢ自分泌环活性异常增加可能是刺激肿瘤细胞增殖和抑制其凋亡的重要因素，并在胶质瘤发生及恶性进展过程中起重要作用。     

胶质瘤细胞血小板源生长因子B链的纯合二聚体与其受体基因表达和受体活化水平的研究

目的探讨胶质瘤细胞血小板源生长因子Ｂ链的纯合二聚体（ＰＤＧＦＢＢ）及其受体（ＰＤＧＦＲ）基因表达和ＰＤＧＦＲ活化水平在胶质瘤发生、发展中的作用。方法用原位杂交和免疫组化染色观察了７３例不同级别的人胶质瘤组织标本。结果６２例（８４９％）的肿瘤细胞表达ＰＤＧＦＢｍＲＮＡ，其阳性率和阳性肿瘤细胞含量均随肿瘤恶性程度升高而递增。ＰＤＧＦＲα、ＰＤＧＦＲβ和这两种受体及其信号传递通路活化标记物酪氨酸磷酸化蛋白（ＰＴｙｒ）的阳性率均为１００％。这３种阳性肿瘤细胞密度（个／００５ｍｍ２）彼此间均呈正相关（ｒ＝０８３８～０８９７，Ｐ＜００１），并均随肿瘤恶性程度及肿瘤细胞ＰＤＧＦＢｍＲＮＡ表达水平升高而同步增加，差异均有显著性（Ｐ＜００５～００１）。但各肿瘤组内两种受体阳性肿瘤细胞密度间无显著性差异（Ｐ＞００５）。结论胶质瘤细胞普遍存在ＰＤＧＦＢＢ自分泌环，ＰＤＧＦＲα和ＰＤＧＦＲβ在该自分泌环中均起重要作用，该自分泌环活性异常增加可能对ＰＤＧＦＢＢ及其受体表达有正反馈诱导作用，并可能在胶质瘤发生及恶性进展过程中发挥重要作用。