实时荧光PCR法、胶体金法和培养法检测甲鱼中霍乱弧菌

目的优化水产品甲鱼中霍乱弧菌的检测程序,提高甲鱼中霍乱弧菌检出率。方法用实时荧光PCR、常规细菌培养、胶体金法同时对甲鱼中霍乱弧菌进行检测,并用实时荧光PCR法检测标本中霍乱弧菌ctx基因。结果共检测185份甲鱼样品,其中实时荧光PCR法检出28份霍乱弧菌核酸阳性,阳性率为15.14%;6份ctx基因核酸阳性,阳性率21.43%(6/28)。常规细菌培养法分离出2株菌株,一株为O139群霍乱弧菌,一株为小川型霍乱弧菌,用实时荧光PCR检测这两株纯培养菌株或原始标本,霍乱弧菌ctx基因均为阴性;胶体金法未检出阳性标本。结论对于水产品标本,可先用实时荧光PCR法筛检霍乱弧菌,阳性标本再进行传统细菌分离培养,以提高霍乱弧菌菌株的检出率;同时阳性标本进行霍乱弧菌ctx基因核酸检测,如也为阳性,需提高警惕,加强流行病学上的预防控制措施,及时防范霍乱疫情的发生。     

徐州市水产品中霍乱弧菌检索方法的研究

目的:改进水产品中霍乱弧菌检索方法,提高检出率,利与外环境中霍乱弧菌的研究。方法:常规培养法、常规培养改良法、荧光定量PCR与快速胶体金筛查方法。结果:64份水产品用常规检测方法未检出霍乱弧菌;常规培养改良法、荧光定量PCR与快速胶体金筛查方法结合常规改良方法分别从64份水产品中检出4株霍乱弧菌(检出率为6.25%),2株为小川型霍乱弧菌,2株为稻叶型霍乱弧菌;荧光定量PCR筛查出8份O1群霍乱弧菌阳性(检出率为12.50%)、快速胶体金筛查出10份O1群霍乱弧菌阳性(检出率为15.63%),荧光定量PCR和快速胶体金阳性标本均经改良培养法检测,在相同的样品中也分离出上述的4株霍乱弧菌。结论:使用荧光定量PCR或快速胶体金筛检与常规培养改良法相结合,可以提高检出率,检测效率,并获得病原菌,利于对病原菌的进一步分析追踪研究。     

衡阳市2006年水产品霍乱弧菌调查报告

目的：了解衡阳市水产品中霍乱弧菌的污染状况，为进一步预防衡阳市霍乱制订措施提供实验依据。方法：依据《霍乱弧菌手册》（第五版）进行霍乱弧菌分离培养、生化及血清学鉴定。结果：共采集水产品593份，污水36份，从甲鱼肛样中检出2株O139霍乱弧菌，1株稻叶型霍乱弧菌，从甲鱼内脏中检出1株O139群霍乱弧菌。结论：2006年5-10月份衡阳市水产品霍乱弧菌监测，阳性率较低，只检测出4株且均从甲鱼中来，但仍需对外来甲鱼进行监测，预防霍乱在衡阳市发生。     

2005～2007年莱州市外环境水体霍乱弧菌检测情况报告

[目的]了解菜州市外环境水体霍乱弧菌的存在及分布情况,为监督监测和预防霍乱提供科学依据.[方法]对2005～2007年莱州市外环境水体504份按<霍乱防治手册>规定方法进行霍乱弧菌检测.[结果]在外环境水体标本中检出不典型O1群霍乱弧菌2株,非O1、O139群霍乱弧菌145株.[结论]外环境水体存在非O1、O139群霍乱弧菌,应加强霍乱监测工作,避免霍乱疫情的发生.     

一起 O139群霍乱疫情的实验室检测方法探讨

目的寻求适合 O139群霍乱疫情的病原学检测方法,以便为 O139群霍乱疫情的防控提供及时可靠的科学依据。方法用实时荧光定量PCR仪进行 O139群霍乱弧菌的核酸检测、常规分离培养、 O139群霍乱弧菌快速检测（胶体金法）。结果O。群霍乱弧菌的核酸检测阳性结果9份,且从这9份标本中分离到阳性菌株9株,有7份试样第一次增菌液胶体金法呈阳性反应,2份试样经过第二次增菌后胶体金法才呈阳性反应。结论实时荧光定量PCR法和胶体金法作为辅助检测 O139群霍乱弧菌的方法,可以较快得到初步结果,将两种方法与传统的分离培养鉴定相结合,可以保证结果的及时性和准确性。     

微量培养板不同保存时间对霍乱弧菌培养效果的观察

目的：通过用霍乱弧菌不定期地对冰箱内保存的微量培养板进行测试，观察不同保存时间微量板对细菌检测结果的影响，探讨微量板最佳保存时间。方法：采用霍乱弧菌常规培养法与霍乱弧菌微量板培养法怛。平行实验，比较霍乱弧菌最小检出浓度。结果：用两株菌作为测试菌，每月1次共做了6批实验，微量板最长保存时间201d。微量板培养法细菌最小检出浓度为10^0-10^2cfu／ml；常规培养法细菌最小检出浓度为10^1-10^2cfu／ml，两法对霍乱弧菌检测试验结果的敏感性较为一致。保存长达201d的微量板未发现有培养基干裂、杂菌污染及颜色改变，并且也未影响检测结果。结论：微量培养板可以用于霍乱弧菌病原检测，结果证实微量板可在冰箱保存6个月以内使用。     

活自水鱼体表检出O139群霍乱弧菌

目的了解奉贤区海水产品中霍乱弧菌的污染状况，为霍乱防治工作提供实验依据。方法依据《霍乱防治手册》第5版进行霍乱弧菌分离培养、生化及血清学鉴定，同时用PCR方法进行检测。结果从活白水鱼体表检出1株O139剪群霍乱弧菌。结论本次检出的1株O139势群霍乱弧菌为流行株，具有引起流行和大流行的潜力，因此要加强对海水产品的主动监测，预防霍乱的散发和暴发流行。     

活白水鱼体表检出O139群霍乱弧菌

目的 了解奉贤区海水产品中霍乱弧菌的污染状况,为霍乱防治工作提供实验依据.方法 依据<霍乱防治手册第5版进行霍乱弧菌分离培养、生化及血清学鉴定,同时用PCR方法进行检测.结果 从活白水鱼体表检出1株O139剪群霍乱弧菌.结论 本次检出的1株O139剪群霍乱弧菌为流行株,具有引起流行和大流行的潜力,因此要加强对海水产品的主动监测,预防霍乱的散发和暴发流行.     

一株O139霍乱弧菌的分离鉴定及分析

[目的]分析从临床腹泻病人粪便中检出的一株O139霍乱弧菌的生物学特征、血清学性状、肠毒素、抗生素敏感性。[方法]采用中国CDC统一规定的检测方法及霍乱防治手册中的要求进行检测。[结果]该株O139霍乱弧菌生物学特征典型,血清学凝集效价达到1：1280,肠毒素检测为阳性,对大多数抗生素表现为敏感。[结论]我市存在O139群霍乱弧菌引起的腹泻病例,须加强疫情监测。     

2010年湖南省霍乱弧菌病原学特征及溯源分析

目的分析2010年湖南省霍乱弧菌分离株的病原学特征,比较霍乱疫情分离株与常规监测分离株之间的克隆相关性,追溯传染源。方法对疫情与监测分离到的42株霍乱弧菌进行常规生物分型和PCR检测毒力基因,对23株代表株进行药敏试验,对18株代表株通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析,探讨菌株间的相关性。结果 2010年从湖南省霍乱疫情中分离10株霍乱弧菌均为O139群,ctxA阳性率100%。常规监测分离霍乱弧菌32株,其中O1群15株,全部为ctxA阴性株;O139群17株,ctxA阳性率94.11%。23株霍乱弧菌耐药结果显示强力霉素、复方新诺明的耐药率分别为47.83%、56.52%,发现1株对诺氟沙星、环丙沙星耐药。PFGE方法显示有5种脉冲场凝胶电泳图谱,相似率在82%~100%之间,甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与霍乱疫情分离菌株之间高度同源。结论湖南省霍乱弧菌存在紧密相关的流行克隆群;被O139群霍乱弧菌污染的甲鱼很可能是湖南省霍乱疫情发生的主要传染来源,海、水产品的监测是霍乱防控的重点;要密切关注对诺氟沙星、环丙沙星的耐药变化。     

珠江河口水体O1群和O139群霍乱弧菌监测

目的 分析珠江河口水体O1群和O139群霍乱弧菌菌型特征,探讨环境水体监测的方法和疫情监测中的作用.方法 2006年3月至2007年2月,在珠江河口选择24个水样采集点,每月采集一次,进行O1群和O139群霍乱弧菌的分离培养,并利用实时PCR监测样品增菌液中的O1群和O139群霍乱弧菌.采样同时测定气温、水温等气象资料.用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对分离菌株进行分型分析.结果 监测期间共采样862份,霍乱弧菌分离阳性率7.77%,实时PCR阳性率为26.33%.按月的水样检测阳性率与水温变化趋势相似;城区监测点阳性率高于其他区域,在一家海产品批发市场排水口下游检测到产毒O139群菌株;菌株的菌型构成中,分离菌株主要为非产毒株;O1群E1 Tor小川和稻叶型以及O139群菌株的分离无季节变化趋势;PFGE分析75株分离株被分为49种带型,相似性为57.4%～100%,表现出明显的多样性.结论 霍乱弧菌在珠江河口水体中广泛存在,并呈现多样性.水体监测提供产毒菌株的指示,可作为环境危险评价的指标,且能在霍乱弧菌的监测和霍乱疫情预警中发挥作用.     

海宁市霍乱弧菌检出结果分析

[目的]掌握我市外环境中霍乱弧菌的存在状况及预测未来霍乱发病趋势以便采取适当的防病措施。[方法]依据GB15984-1995《霍乱诊断标准及处理原则》和外环境水样标本分离霍乱弧菌程序对不同样品进行检测,并对33份阳性菌株进行噬菌体-生物分型鉴定。[结果]对不同样品进行检测,其中水样579份阳性31份,阳性水源11处。感染确诊病例18例（其中1例为输入病例）,其中O139型2例,稻叶型16例。33份阳性菌株经噬菌体-生物分型,1 f 21株、2 f 2株、1 d 1株、1 e 1株、5k 1株、19k 1株,0139型6株。埃尔托霍乱弧菌中流行株,共计25株,25/27（92.6%）。[结论]海宁市外环境中存在多种霍乱弧菌,并发现在同一水源中同时检出2种不血清型的霍乱弧菌;本次流行仍以稻叶型、O139型霍乱为主;菌株鉴定存在流行株（1f、2f、1d和1e）。未来几年仍有霍乱暴发流行和散发的可能。防控形势非常严峻,必须采取有力措施。     

湖南省2005年-2010年霍乱疫情分离株的毒力基因PCR及PFGE分型分析

目的:了解2005年-2010年湖南省霍乱疫情分离到的O139群霍乱弧菌菌株的病原学特征,研究疫情分离株之间的克隆相关性。方法:采用K-B法进行药敏试验;聚合酶链反应(PCR)检测ctxAB毒力基因;脉冲场凝胶电泳对疫情分离代表株进行PFGE分型分析。结果:33株霍乱弧菌对强力霉素、复方新诺明的耐药率较高,分别为39.39%和75.76%,对环丙沙星、诺氟沙星以及丁胺卡那100%敏感;毒力基因的PCR结果显示为所有疫情分离的O139霍乱弧菌均为产毒株,即霍乱肠毒素基因ctxAB阳性;24株分离自2005年和2010年的7起疫情里的O139霍乱弧菌进行PFGE分型及聚类分析后,共分为3个PFGE带型,所有菌株的带型相似率在83%～100%之间。结论:湖南省2005年-2010年霍乱疫情以O139群为主,引起疫情的全部为产毒株,不同年份不同地区之间霍乱疫情的分离菌株之间存在着紧密相关的流行克隆群,对分离菌株进行耐药性监测和进一步的分子分型分析,有助于霍乱的主动监测和传染来源的追踪。     

湖南省O139群霍乱流行因素和快速评估研究

目的了解湖南省O139群霍乱的流行特点,分析流行因素,探索快速有效的监测评估方法和预防控制措施,为制定科学的防控策略提供依据。方法采用回顾性队列研究、生态学研究和现场流行病学调查研究湖南省O139霍乱的流行特点和高发区的流行因素;评估农村集体聚餐卫生指导和管理预防控制措施的效果。分别采用膜免疫层析法和常规细菌分离培养法对腹泻病人及霍乱病人的密切接触者粪便标本进行O139霍乱弧菌检测,以后者为金标准,计算膜免疫层析法的灵敏度和特异度。结果湖南省1997-2009年共发生48起O139霍乱疫情,报告病例103例,带菌者119例,死亡2例,病死率为1.94%。在局部地区有集中发生趋势。2002-2009年常规监测腹泻病人阳性率为2.47/万,水产品样阳性率为0.57%,疫点监测检测人群阳性率为1.18%,外环境阳性率为3.44%;非疫点地区水体环境中未检测到霍乱弧菌。48起疫情中暴发16起,散发32起,28起疫情与农村集体聚餐有关。2003年9起暴发疫情中参与聚餐人员的O139霍乱弧菌感染率为5.46%,食用聚餐剩菜人员的感染率为9.23%,未食用聚餐食物人员的感染率为0,病人和带菌者分离到的O139霍乱弧菌和甲鱼中菌株的PFGE图谱相同。高发区农村聚餐中使用甲鱼和食品制作生熟不分的比率、人均甲鱼消耗量、甲鱼中O139霍乱弧菌检出率均高于低发区。高发区采取农村集体聚餐卫生指导和管理措施后,农村厨师和就餐人群的卫生习惯改善,未再发现疫情。膜免疫层析法检测病例粪便标本中灵敏度为100%,特异度为95.20%,45份实验室霍乱弧菌培养阳性的甲鱼和外环境标本经二次增菌培养,试纸条检测结果为阴性。结论湖南省1997-2009年的O139霍乱疫情呈低流行水平;O139霍乱疫情的发生主要跟食用被霍乱弧菌污染的水产品特别是甲鱼有关,以农村集体聚餐卫生指导和管理为主的综合性预防控制措施是预防O139霍乱疫情发生的有效措施;膜免疫层析法可适用于各医疗机构的腹泻病门诊患者的快速筛查和评估。     

脉冲场凝胶电泳用于霍乱弧菌分子流行病学研究

目的：从分子生物学基础上了解同一次流行、不同来源的霍乱弧菌之间的遗传相关性，为有效控制传染源提供依据。方法：采用PCR技术对2005年分离的70株霍乱弧菌检测CT基因后，进行PFGE分型研究。结果：分离自患者01、0139群霍乱弧菌均有CT基因，而分离自外环境1株01群稻叶菌株及1株0139菌株CT基因为阴性。所试菌株PFGE分型共呈3大亚类8种带型。结论：霍乱流行期间分离于患者的霍乱弧菌PFGE图谱基本一致，与外环境分离的非流行株在分化关系上较远。     

四川省2005年霍乱分子流行病学特征

目的：分析四川省2005年霍乱弧菌分子特征,以及霍乱暴发疫情分离的菌株与菌株之间,疫情分离的菌株与海、水产品监测分离的霍乱弧菌之间的遗传相关性,查找霍乱传染来源,为预测疫情和制定防治措施提供依据.方法：利用聚合酶链反应（PCR）检测O139群霍乱弧菌特异性编码脂多糖基因（LPS）和霍乱毒力基因（ctxAB）;脉冲场凝胶电泳对菌株进行分子分型,所得结果以BioNumerics V4.0软件UPGMA方法进行聚类分析.结果：所试16株霍乱弧菌14株LPS阳性,为O139群霍乱弧菌;另2株为O1群稻叶型霍乱弧菌.2株稻叶型霍乱弧菌和1株O139群霍乱弧菌ctxAB阴性,其余13株菌均具有ctxAB,为产毒株.对16株菌以NotⅠ酶切后PFGE可分为5个型别.O139群霍乱弧菌优势流行株与从甲鱼分离的O139群霍乱弧菌PFGE型别一致,且同为产毒株.结论：甲鱼等海、水产品被O139群霍乱弧菌污染情况严重,甲鱼中分离的O139群霍乱弧菌与霍乱疫情分离菌株之间高度同源,被污染的甲鱼可能是本年度食源性霍乱暴发的主要传染来源之一,海、水产品的监测是近期霍乱防控的重点.     

实时荧光PCR法快速分离食源性致病菌

目的建立快速的食源性沙门菌和志贺菌检测方法,以提高对该菌的检验速度和准确性,为公共卫生,食源性致病菌监测,突发性群体性食物中毒事件提供技术支持。方法采用实时荧光PCR法和培养法对40份不同类食品进行沙门菌和志贺菌的检测,并对分离的菌株进行血清分型和定量检测,比较两种方法的特异性,灵敏度,准确性。结果采用实时荧光PCR法检测40份样本,其中8份沙门菌核酸阳性,阳性率20%;采用培养法检测这40份样本,4份样品分离出沙门菌,阳性率10%,且4份样品经核酸检测均为阳性,32份核酸阴性样本采用培养法检测,均未分离到沙门菌和志贺菌。结论实时荧光PCR法结合传统分离培养法适宜食品中沙门菌,志贺菌的快速筛查鉴定及食物中毒等突发事件的快速诊断。     

一起农村聚餐所致霍乱暴发调查

目的分析1起霍乱暴发疫情的流行病学特征,为制定防制措施提供科学依据。方法制定统一的病例诊断标准,开展现场流行病学调查并对采集标本进行实验室检测。结果共发生5例病例(1例可能病例,确诊病例3例,健康带菌者1例),罹患率为2.3%,无死亡病例。14日午餐为危险餐次,食用甲鱼或鸡肉者罹患率(4.4%)高于未食用者(0%),但差异无统计学意义(RR=∞,95%CI=0.398～∞);食用木耳酸菜汤对预防发病有一定的保护作用(RR=0,95%CI=0～0.761);从病例的粪便和肛拭子标本分离到O139霍乱弧菌4株;从聚餐点清洗甲鱼的污水排放口水样中分离到O139霍乱弧菌1株。结论本次疫情为感染O139霍乱弧菌引起的霍乱暴发疫情,可疑污染来源为甲鱼,食用酸性食品对预防霍乱发生有一定的保护作用。