卫氏并殖吸虫成虫重组抗原的表达与鉴定

目的　表达已转化入大肠杆菌的卫氏并殖吸虫成虫抗原 (Pw Ag)基因 ,并评价其应用于免疫学诊断的价值。　方法　用 IPTG诱导表达已亚克隆入表达载体 p RESETB的卫氏并殖吸虫成虫抗原基因 ,以 SDS- PAGE和 Western blot分析鉴定表达产物。　结果　 SDS- PAGE电泳可见 32 ku处有 1条明显的蛋白质带 ,该带只被卫氏并殖吸虫成虫免疫兔、感染犬和病人血清识别。　结论　成功构建重组克隆 Pw Ag,其表达产物具有卫氏并殖吸虫成虫期特异性 ,推测可用于并殖吸虫病的免疫学诊断。     

卫氏并殖吸虫成虫重组抗原的表达与鉴定

目的 表达已转化入大肠杆菌的卫氏并殖吸虫成虫抗原(PwAg)基因，并评价其应用于免疫学诊断的价值。方法 用IPTG诱导表达已亚克隆人表达载体pRESETB的卫氏并殖吸虫成虫抗原基因，以SDS—PAGE和Westernblot分析鉴定表达产物。结果 SDS-PAGE电泳可见32ku处有1条明显的蛋白质带，该带只被卫氏并殖吸虫成虫免疫兔、感染犬和病人血清识别。结论 成功构建重组克隆PwAg，其表达产物具有卫氏并殖吸虫成虫期特异性，推测可用于并殖吸虫病的免疫学诊断。     

卫氏并殖吸虫基因片段的克隆与鉴定

目的从卫氏并殖吸虫成虫cDDA文库中筛选并鉴定可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法采用预吸收成虫抗原免疫兔血清(IRS,多抗)筛选阳性克隆,经PCR扩增后测定其插入片段的大小。序列分析后,对筛选的重组子进行双酶切,亚克隆入表达载体pRESETB,并转化大肠杆菌BL-21细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Westernblotting分析鉴定。结果所筛选的阳性克隆插入片段约800bp。DNA序列分析显示其为编码半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L的基因序列。Pw-2重组子特异性表达产物约为32kDa,可被卫氏并殖吸虫免疫兔血清特异地识别。结论从卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库筛选的重组质粒Pw-2编码属于半胱氨酸蛋白酶族组织蛋白酶L。     

卫氏并殖吸虫成虫的组织化学观察

本文对卫氏并殖吸虫体内16种组化物质的定位和分布进行了观察。研究结果表明:糖原颗粒在虫体内的实质组织中最丰富,特别是在各脏器周围的实质组织中更为显著。蛋白质、RNA和DNA则以生殖器官和卵黄腺内含量最多。脂肪在肠壁和肠内容物中反应最明显,在卵黄腺、卵巢和卵内可见均匀分布的脂滴。MAO主要分布在皮层、皮下、实质组织及肠上皮内;     

卫氏并殖吸虫TPx基因的克隆、表达和免疫学诊断价值

目的免疫筛选卫氏并殖吸虫成虫c DNA表达文库,克隆并表达卫氏并殖吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx),初步评价其免疫诊断价值。方法用卫氏并殖吸虫病患者的混合血清筛选卫氏并殖吸虫成虫λZAP c DNA表达文库,取阳性噬菌体进行克隆、测序和序列比对分析。将TPx基因全长片段和前端截短片段分别克隆至原核表达质粒pET28a (+)中,构建r Pw TPx (全长型)和r Pw TPx1 (截短型)表达载体。构建的重组蛋白经1 mmol/L的异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。使用蛋白抽提剂、溶菌酶和核酸酶裂解表达细菌,用组氨酸标签亲和纯化柱(Ni-NTA树脂)纯化r Pw TPx和r Pw TPx1, SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况。以r Pw TPx、r Pw TPx1和粗抗原作为检测抗原,间接ELISA法检测36份卫氏并殖吸虫病、 15份华支睾吸虫病、 15份日本血吸虫病、 15份片形吸虫病和15份猪囊尾蚴病的患者血清,以及36份健康人血清,评价该重组蛋白的免疫诊断价值。以健康人血清对照组的平均值加上4个标准差作为阳性判断值。所有数据均采用SAS 9.2软件进行统计学分析。结果克隆的卫氏并殖吸虫TPx基因,经原核表达、纯化,获得其可溶性重组蛋白r Pw TPx和r Pw TPx1,相对分子质量(Mr)分别为25 000和22 000。以r Pw TPx作为检测抗原的ELISA检测结果显示,卫氏并殖吸虫病患者、健康者、华支睾吸虫病患者、日本血吸虫病患者、片形吸虫病患者和猪囊尾蚴病患者血清组的吸光度(A450值)分别为0.150±0.092、 0.036±0.014、 0.043±0.019、 0.047±0.013、 0.060±0.022和0.048±0.021。卫氏并殖吸虫病患者血清阳性率为58.3%(21/36), 36份健康人血清、 15份华支睾吸虫病患者血清、 15份日本血吸虫病患者血清、 15份猪囊尾蚴病患者血清均未检出阳性,15份片形吸虫病患者血清假阳性为2/15。以r Pw TPx1作为检测抗原ELISA检测结果则为0.144±0.092、 0.022±0.009、 0.027±0.015、 0.033±0.022、 0.036±0.015和0.032±0.018。卫氏并殖吸虫病患者血清阳性率为88.9%(32/36),健康人血清未检出阳性,15份华支睾吸虫病患者血清仅1份存在交叉反应,15份日本血吸虫病患者血清假阳性为3份,15份片形吸虫病患者和15份猪囊尾蚴病患者血清假阳性均为2份。重组蛋白r Pw TPx的ELISA检测敏感性为58.3%,特异性为97.9%,总符合率为87.1%;r Pw TPx1则分别为88.9%、 91.7%、 90.9%。r Pw TPx1敏感性高于r Pw TPx (P <0.05)。以成虫粗抗原为检测抗原的ELISA检测结果显示,36份健康者血清A450值为0.012,标准差为0.006。敏感性为100%,特异性为83.3%,总符合率为87.9%,与r Pw TPx-ELISA和r Pw TPx1-ELISA检测的总符合率差异无统计学意义(P> 0.05)。结论筛选并克隆了卫氏并殖吸虫TPx基因,表达并纯化全长型和截短型两种重组TPx抗原,构建的全长型和截短型重组TPx抗原作为人体卫氏并殖吸虫病的免疫诊断抗原具有一定的诊断意义。     

卫氏并殖吸虫成虫糖蛋白抗原及其抗体谱研究

免疫学诊断的敏感性不但取决于所用方法的敏感性,而且取决于抗原的纯度和活性。在并殖吸虫病的免疫学诊断中,目前多半用全虫匀浆作为诊断抗原。本研究结果表明,卫氏并殖吸虫成虫主要免疫原性物质仅是全虫匀浆中有限的几个糖蛋白组份,即组份14(0.47)、15(0.49)和16(0.52)。这三个组份的兔免疫血清抗体谱与全虫匀浆的兔免疫血清抗体谐相同。用这些糖蛋白组份代替全虫匀浆作为诊断抗原,可望能节省抗原并提高免疫学诊断的敏感性。这对诊断卫氏并殖吸虫早期感染或轻度感染的病人尤为适宜。     

怡乐村并殖吸虫与卫氏并殖吸虫成虫蛋白的等电聚焦比较分析

首次以等电聚焦电泳方法比较研究了怡乐村并殖吸虫(P.I)与卫氏并殖吸虫(P.W)两种蛋白成分。 结果P.I与P.W蛋白分布大体相同,但在一些带数及浓度分布上有明显差异。 一、怡乐村并殖吸虫电泳带谱考马斯亮蓝染色的普通蛋白总带数47条,包括7对亚带,实际出现带数54条,其中酸性范围(pH3.50～6.55)28条带,亚带     

卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库的单抗筛选

目的　从卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库中筛选并鉴定出可用于免疫诊断和免疫预防的基因克隆。方法　采用预吸收的抗肺吸虫成虫单克隆抗体筛选多次后得到 5个阳性克隆 ,经PCR扩增后测定其插入片段的大小。用辅助噬菌体做体内剪切 ,以抗生素平板筛选含重组质粒的阳性菌落。其中 3个克隆测定其DNA序列 ,用BLAST软件对所得DNA序列进行同源性比较。结果　得到 1,2 ,4三个不同阳性克隆 ,其长度分别为 1783bp、397bp和 1132bp ,分别与卫氏并殖吸虫卵黄铁蛋白 (P wyolkferritin)基因、鞘脂激活蛋白A(DictyosterliumdiscoideumsaposinA)基因和曼氏血吸虫主要卵抗原 (Smmajoreggantigen -P4 0 )基因同源。 结论　本研究首次报道用抗肺吸虫成虫单克隆抗体筛选卫氏并殖吸虫成虫cDNA文库 ,所获克隆1、2、4可能系肺吸虫免疫诊断和预防的相关基因     

三平正并殖吸虫和卫氏并殖吸虫成虫四种同工酶酶谱的比较

三平正并殖吸虫(Euparagonimus cenocopiosusChen(1962)首次发现于广东,陈心陶(1962)根据其成虫的形态将其定为正并殖属,以后又上升为亚科——正并殖亚科。而刘思诚通过生活史的研究,认     

河北省发现卫氏并殖吸虫

河北省属华北平原,分别与内蒙、山西、河南、山东、辽宁接壤,省内生境有山区、草原、湖泊、沿海、森林。1989年4月开展人体寄生虫分布调查,在南部邯郸地区首次发现了卫氏并殖吸虫。一、材料与方法(一)试验血清收集邯郸地区小学血清813份。分别来自该地区的涉县山区与磁县的半山区和水库、河流沿岸的村庄。     

卫氏并殖吸虫的组织化学观察

本文对卫氏并殖吸虫成虫体内16种组化物质的定位和分布进行了研究。结果表明:虫体内的糖原在实质组织中最丰富;G—6—Pase在皮层、皮下层呈中等阳性反应;蛋白质、RNA和DNA以卵巢、卵黄腺或睾丸处含量最多;酚酶仅在卵黄腺和卵壳处有较强的活性;ACPase主要分布在肠上皮及皮层内;AKPase在排泄囊壁、子宫壁、卵巢及睾丸处呈阳性反应;ATPase活性以皮层、皮下层等处最显著;MAO主要分布在皮层、皮下层、实质组织及肠上皮内;SDH和MDH酶活性在肠上皮、皮层及皮下层处最强;中性脂肪以肠管和肠内容物着色反应最明显;Est在虫体的皮下层及肠壁处呈中等阳性反应;脂酶仅在皮层、皮下层等处可见少量酶颗粒存在;AChE活性在皮下层呈中等阳性反应。     

卫氏并殖吸虫和肺并殖吸虫的核型比较

有关肺吸虫的核型研究的最早报导是克氏并殖吸虫,其染色体数目是2n=16,n=8。近来Sakaguchi和Tada以及作者本人对6种肺吸虫的核型作了细胞学研究。这6种肺     

卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫抗原的分析及单克隆抗体识别

本文报道卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫可溶性抗原（ＰｗＭ和ＰｗＡ）ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后银染色及丁应单克隆抗体识别免疫酶染色的结果，银染色显示ＰｗＭ有２２条蛋白带，其中主带有１０条，分子量分别为１２－１３、１４、４０、４１、４２、４８、５６、５７、６３和８０ｋＤ。ＰｗＡ有４１条带，其中主要有２１条，分子量分别为１１－１２、１４、１６－１７、１８、１９、２１－２３、２４－２６、３３、３９、４０、４２、４３－４７     

卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫抗原的分析及单克隆抗体识别

本文报道卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫可溶性抗原（ＰｗＭ和ＰｗＡ）ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后银染色及相应单克隆抗体（ＭｃＡｂ）识别免疫酶染色的结果。银染色显示ＰｗＭ有２２条蛋白带，其中主带有１０条，分子量分别为１２～１３、１４、４０、４１、４２、４８、５６、５７、６３和８０ｋＤ。ＰｗＡ有４１条带，其中主带有２１条，分子量分别为１１～１２、１４、１６～１７、１８、１９、２１～２３、２４～２６、３３、３９、４０、４１、４２、４３～４７、４８、５１、５６、８７、９７和１６０～１６４ｋＤ，另外２条主带分子量在２００ｋＤ以上。针对ＰｗＭ的ＭｃＡｂＧ２Ｂ３与ＰｗＭ反应出现３条蛋白带，分子量分别为４２、４８、６３ｋＤ。针对ＰｗＡ的ＭｃＡｂＡ３Ｄ３与ＰｗＡ反应出现１２条蛋白带，分子量分别为２１～２３、５６、７０、８７、９７、９８、１０４、１２０、１２５、１６０～１６４ｋＤ，另外２条带分子量在２００ｋＤ以上。     

应用卫氏并殖吸虫成虫单克隆抗体检测感染犬循环抗原动态

本研究应用Dot-ELISA方法,以卫氏并殖吸虫(Pw)成虫单克隆抗体A_3D_3(McAbA_3D_3)检测5只实验感染犬吡喹酮治疗前后血清循环抗原(CAg)动态。结果表明,检出CAg最早时间为感染后第4d,至第19d,4只犬CAg检测均为阳性。感染后第101d,其中2只以吡喹酮总量3.2g进行治疗,治疗后短期内CAg滴度明显升高,至治疗后第6d达高峰,1号犬和3号犬分别在治疗后第65d和26dCAg滴度下降为0。2只未治疗感染犬CAg滴度维持于1:160～1:640。治疗后80d剖检2只治疗犬,其肺部均有多个陈旧性虫囊,内多为变性坏死虫卵,未发现虫体。未治疗犬于死后解剖获成虫60条。上述研究结果提示用McAbA_3D_3作Dot-ELISA对犬的Pw活动性感染具有早期诊断和疗效考核价值。