CD19+CD24hiCD38hi B细胞比例预测肝移植术后急性细胞性排斥反应发生的临床研究

目的分析肝移植术后受者外周血CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞占单个核细胞比例变化情况及其与急性细胞性排斥反应(ACR)之间的关系。 方法回顾性分析2013年12月至2015年12月在浙江大学医学院附属第一医院接受心脏死亡器官捐献肝移植的80例成人受者临床资料，根据术后是否发生ACR，将受者分为ACR组(25例)和非ACR组(55例)。术前、术后各个时间点抽取参加研究者静脉血并分离外周血单个核细胞，加入异硫氰酸荧光素-单克隆鼠抗人CD19抗体、藻红蛋白-单克隆鼠抗人CD24抗体和别藻蓝蛋白-单克隆鼠抗人CD38抗体，流式细胞仪检测各组CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞百分比。采用t检验和单因素方差分析比较正态分布计量资料，采用χ²检验比较计数资料，采用Kaplan-Meier法绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)。P<0.05为差异有统计学意义。 结果ACR组、非ACR组受者术前外周血平均CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞比例分别为(3.13±0.91)%、(3.49±0.83)%，差异无统计学意义(t＝1.636，P>0.05)。ACR组术后发生ACR前外周血平均CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞比例为(1.87±0.70)%。非ACR组受者术后3个月、6个月和1年外周血平均CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞比例分别为(1.64±0.52)%、(1.63±0.56)%和(2.04±1.24)%，术后3、6个月平均值均低于术前和术后1年，差异均有统计学意义(P均<0.05)。ACR组受者发生ACR时外周血平均CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞比例为(0.8±0.5)%，低于发生ACR前的平均水平(t＝5.752，P<0.05)，且低于非ACR组术后3个月、6个月和1年的平均水平(P<0.05)。ACR组受者接受抗排斥反应治疗后，CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞比例也逐渐增加，ACR发生后7 d为(0.84±0.08)%，与ACR发生时相比差异无统计学意义(P>0.05)；而发生30 d后达(1.65±0.18)%，与ACR发生时相比差异有统计学意义(P<0.05)。当截断值为1.015%时，CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞比例预测ACR发生的敏感度和特异度分别为0.786和0.702，ROC曲线下面积为0.775(95%CI: 0.671~0.879，P<0.05)。 结论CD19⁺CD24^hiCD38^hi B细胞比例下降与肝移植术后ACR反应发生有关，并可作为预测ACR发生的细胞标志物。     

宫颈上皮内病变患者人乳头状瘤病毒感染与Th17细胞、Treg细胞及相关细胞因子表达的相关性

目的探讨宫颈上皮内病变（CIN）患者人乳头状瘤病毒（HPV）感染与Th17细胞、Treg细胞及相关细胞因子表达的相关性。 方法选择2017年2月至2018年9月于新疆自治区人民医院就诊的CIN患者共140例进行回顾性分析,根据是否感染HPV分为感染组（86例）和非感染组（54例）,采用免疫组织化学方法比较两组患者T细胞CD3、CD4及CD8水平以及Treg和Th17的表达水平,采用流式细胞技术比较两组患者的外周血T细胞亚群含量（CD3⁺ T细胞、CD4⁺ T细胞、CD8⁺ T细胞的百分比）、Treg细胞和Th17细胞百分含量（CD4⁺CD25⁺ Treg、CD8⁺CD25⁺CD127^-Treg、CD4⁺Foxp3⁺ Treg、CD8⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg和CD4⁺IL17⁺Th17以及Th17/Treg比值）以及相关细胞因子[肿瘤坏死因子（TGF）-β、白细胞介素（IL）-10、IL-17和干扰素（IFN）-γ]含量的差异,应用多因素Logistic回归模型分析CIN患者感染HPV的危险因素。 结果免疫组织化学结果显示,两组患者CIN组织中T细胞CD3、CD4和CD8的表达水平差异无统计学意义,感染组患者CIN组织中T细胞抗-FOX3（Treg）和Th17表达水平显著高于非感染组。流式细胞术检测结果显示两组患者CD3⁺ T细胞、CD4⁺ T细胞、CD8⁺ T细胞百分比差异无统计学意义（t = 0.870、1.509、0.236;P = 0.385、0.133、0.813）,感染组患者CD4⁺CD25⁺ Treg、CD8⁺CD25⁺CD127^—Treg、CD4⁺Foxp3⁺ Treg、CD8⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg、CD4⁺IL17⁺ Th17以及Th17/Treg比值均显著高于非感染组（P均< 0.05）。感染组患者外周血TGF-β、IL-10和L-17均高于非感染组（t =－11.601、－42.251、－40.31,P均< 0.001）,而IFN-γ低于非感染组（t = 10.316、P < 0.001）。多因素Logistic回归分析显示,CD4⁺CD25⁺ Treg（OR = 3.673、P = 0.031）、CD4⁺IL17⁺Th17（OR = 1.974、P = 0.021）和Th17/Treg（OR = 3.585、P = 0.024）均为CIN患者感染HPV的危险因素,IFN-γ（OR = 0.612、P = 0.028）为CIN患者感染HPV的保护因素。 结论CIN患者HPV感染与Treg细胞、Th17细胞及IFN-γ因子存在相关性,HPV感染的CIN患者Treg和Th17细胞增高,IFN-γ降低。     

系统性红斑狼疮患者不同巨细胞病毒感染状态淋巴细胞亚群分析

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者不同巨细胞病毒（CMV）感染状态淋巴细胞亚群的特征，为临床诊断系统性红斑狼疮提供依据。 方法选取2016年6月至2019年6月于南京中医药大学附属张家港医院的SLE住院患者共96例，其中合并巨细胞病毒血症患者18例（巨细胞病毒血症组）、巨细胞病毒病患者50例（巨细胞病毒病组）和无CMV感染者28例（对照组）。获取3组患者的一般资料、常规实验室指标、CMV DNA拷贝数和外周血淋巴细胞亚群计数；并比较CMV感染者的上述指标，分析不同CMV感染状态下淋巴细胞亚群的特征。 结果巨细胞病毒血症组患者和巨细胞病毒病组患者的红细胞沉降率（t =-0.141、P = 0.025，t =-0.194、P = 0.003）CRP水平显著高于对照组（t =-0.563、P = 0.010），巨细胞病毒病组患者CRP（t =-0.854、P = 0.006）、环磷酰胺治疗例数（χ² =-6.139、P = 0.013）、血CMV DNA拷贝数（t =-0.355、P = 0.041）均显著高于巨细胞病毒血症组。巨细胞病毒血症组患者与对照组患者总淋巴细胞计数、CD3⁺ T细胞、CD3⁺CD4⁺ T细胞、CD3⁺CD8⁺ T细胞、CD19⁺ B细胞和CD56⁺CD16⁺ NK细胞计数差异均无统计学意义（P均> 0.05）。巨细胞病毒病患者总淋巴细胞计数（t = 0.933、P < 0.001）、CD3⁺ T细胞（t = 0.177、P = 0.018）、CD3⁺CD4⁺ T细胞（t = 0.207、P < 0.001）、CD3⁺CD8⁺ T细胞（t = 0.169、P < 0.001）和CD19⁺ B细胞（t = 0.320、P = 0.023）显著低于对照组患者。 结论淋巴细胞计数减低（尤其是CD4⁺ T细胞计数减低）常见于SLE患者伴发CMV感染中常见，是系统性红斑狼疮患者CMV感染诊断的潜在生物标记物。     

结肠癌患者外周血CD4+、CD8+细胞PD-1表达水平及其临床意义

目的探讨结肠癌患者外周血CD4⁺、CD8⁺细胞、程序性死亡因子-1(PD-1)表达水平及其临床意义。方法选择2022年8月至2023年8月杭州市肿瘤医院与浙江大学医学院附属浙江医院收治的78例结肠癌患者作为观察组,并选择同期杭州市肿瘤医院与浙江大学医学院附属浙江医院接受体检的70例健康人员作为对照组。比较两组受试者外周血CD4⁺、CD8⁺细胞、PD-1水平,比较观察组不同病理特征患者的外周血CD4⁺、CD8⁺细胞、PD-1水平,采用Pearson相关性分析法分析外周血CD4⁺、CD8⁺细胞、PD-1水平与观察组患者临床病理特征的相关性。结果观察组的外周血CD4⁺细胞低于对照组,CD8⁺细胞、PD-1水平均明显高于对照组(P<0.05);不同肿瘤直径、TNM分期、分化程度、淋巴结转移患者外周血CD4⁺、CD8⁺细胞、PD-...     

剖宫产产妇术后切口感染者血清炎性应激指标与应激激素和免疫应答的相关性

目的探讨剖宫产产妇术后切口感染者血清炎性应激指标与应激激素及免疫应答的相关性。 方法选取2015年12月至2017年12月于重庆市开州区人民医院行剖宫产并发术后切口感染产妇46例作为观察组，选取同期于本院行剖宫产但术后未出现切口感染的产妇116例作为对照组，分别采集两组产妇肘静脉血5 ml，离心后取其上清液，ELISA法检测血清白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-8（IL-8）、血管紧张素Ⅱ（AT-Ⅱ）、皮质醇（Cor）、胰岛素（INS）以及去甲肾上腺素（NE）含量。应用流式细胞仪检测CD16⁺CD25⁺ NK细胞、CD3⁺CD4⁺ T细胞和CD3⁺CD8⁺ T细胞含量；油镜下对免疫黏附促进因子（FEER）、直向肿瘤红细胞花环率（DTER）、免疫黏附抑制因子（FEIR）、肿瘤红细胞花环（ATER）和自然肿瘤红细胞花环率（NTER）计数。 结果观察组产妇血清IL-6、IL-1、IL-8及TNF-α含量均高于对照组，差异均有统计学意义（t = 9.057、6.432、8.746、15.072，P = 0.002、0.005、0.001、0.001）；观察组产妇血清CD16⁺CD25⁺ NK细胞、CD3⁺CD4⁺ T细胞含量低于对照组（t = 3.147、6.382，P = 0.026、0.001），血清CD3⁺CD8⁺ T细胞含量高于对照组（t = 10.453，P = 0.008）；Pearson相关分析显示，观察组产妇血清IL-8、IL-6、IL-1和TNF-α含量和血清CD3⁺CD8⁺ T细胞、FEIR含量呈正相关，与CD16⁺CD25⁺ NK、CD3⁺CD4⁺ T细胞、FEER、DTER、NTER、ATER、AT-Ⅱ、Cor、INS及NE含量呈负相关（P均< 0.05）。 结论剖宫产产妇术后切口感染可引起炎性因子过度分泌，而机体炎症反应的异常激活与应激激素分泌及免疫应答变化密切相关。     

48例成人慢性活动性EB病毒感染的临床特征和外周血淋巴细胞免疫表型

目的探讨成人慢性活动性EB病毒感染（CAEBV）患者的临床特征及外周血淋巴细胞免疫表型。 方法回顾性纳入2017年3月至2019年3月如皋市人民医院收治的48例成人CAEBV感染者,记录患者一般临床资料及EB病毒相关抗体、病毒载量和细胞免疫表型。 结果48例成人CAEBV患者年龄（40.8 ± 14.4）岁,均有发热症状。严重肝功能衰竭、Hermansky-Pudlak综合征（HPS）、中枢神经系统（CNS）病变和间质性肺炎发生率分别为29.2%（14/48）、47.9%（23/48）、12.5%（6/48）和22.9%（11/48）。患者血浆EBV DNA拷贝数中位数为2.9 × 10⁴（5 × 10²～5.8 × 10⁶）拷贝/ml。32例患者完成外周血淋巴细胞免疫表型检测,B细胞、NK细胞、CD4⁺ T细胞、CD8⁺ T细胞水平分别为25 × 10⁹/L（0,19.6 × 10⁹/L）、82.5 × 10⁹/L（54 × 10⁹/L,183 × 10⁹/L）,332.5 × 10⁹/L（178.25 × 10⁹/L,534.25 × 10⁹/L）,302 × 10⁹/L（190 × 10⁹/L,573.5 × 10⁹/L）,53.1%（25/48）患者出现CD4/CD8比值倒置（< 1）。CD38⁺CD8⁺ T细胞百分比中位数为93.2%（49.1%,99.7%）,HLA-DR⁺CD8⁺T细胞百分比的中位数为71.25%（17.1%,97.5%）。 结论成人CAEBV患者的临床特征与其外周血淋巴细胞免疫表型关系密切,B细胞、NK细胞和CD4⁺ T细胞水平多降低。     

EV71感染手足口病患儿T细胞亚群表达

目的分析EV71感染手足口病患儿T细胞亚群的表达。 方法选取2015年10月至2017年10月于惠州市中心人民医院接受治疗的手足口病患儿共302例,其中EV71感染患儿110例,依据EV71感染患儿中枢神经有无被累及分成轻症组（69例）与重症组（41例）,选取同期于本院体检的健康儿童110例作为对照组;流式细胞仪对T淋巴细胞亚群CD3⁺、CD3⁺CD8^－、CD3⁺CD8⁺、CD3⁺CD8^－/CD3⁺CD8⁺、Th1、Th2、Th1/Th2、Tc1、Tc2、Tc1/Tc2、Th17、Tc17、调节性T淋巴细胞（Treg）及Th17/Treg所占比率进行检测,ELISA法检测各组对象血清内转化生长因子-β1（TGF-β1)、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素17A（IL-17A）及γ干扰素（IFN-γ）含量变化。 结果轻症组患儿血清Th1、Th1/Th2、Tc1和Tc1/Tc2所占比率为（9.59 ± 2.15）%、（8.67 ± 2.19）%、（28.82 ± 5.49）%和（56.39 ± 10.48）%,重症组分别为（13.58 ± 2.74）%、（9.45 ± 2.29）%、（40.46 ± 6.37）%和（54.87 ± 9.61）%,均显著高于对照组患儿,差异均有统计学意义（F= 12.159、11.470、13.925、10.542,P = 0.016、0.013、0.008、0.035）;轻症组患儿血清IFN-γ和IL-17A水平分别为（11.32 ± 2.76）pg/ml和（6.38 ± 2.10）pg/ml,重症组分别为（11.38 ± 2.65）pg/ml和（12.59 ± 3.58）pg/ml,均显著高于对照组患儿,差异均有统计学意义（F= 12.590、11.664,P = 0.024、0.019）。 结论EV71感染后手足口患儿机体内Th17/Treg与Th1/Th2比例失衡。     

胃癌患者CD4+CD29+T细胞表达及其临床意义

【摘要】〓目的〓探讨CD4⁺CD29⁺辅助性T细胞在胃癌患者中的表达及其临床意义。方法 收集Ⅰ~Ⅳ期胃癌患者共64例、慢性胃炎患者及健康对照组各60例作为观察对象。采用流式细胞术检测外周血CD4⁺CD29⁺T细胞及其细胞因子γ干扰素(IFN-γ)及白介素4(IL-4)水平;采用ELISA法检测三组的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及癌胚抗原(CEA)的含量;分析以上六者的相关性。结果〓胃癌患者CD4⁺CD29⁺T细胞及IL-4水平显著高于慢性胃炎及健康对照组(P<0.05),而IFN-γ明显低于另外两组(P<0.05),但慢性胃炎与健康对照组上述三项指标无统计学差异。Ⅰ~Ⅳ期胃癌患者CD4⁺CD29⁺T细胞及IL-4呈递增趋势,而IFN-γ呈递减趋势,均表现为Ⅲ与Ⅰ期之间、Ⅳ与Ⅲ期之间均存在显著差异(P<0.05)。胃癌患者ICAM-1、TGF-β1及CEA显著高于慢性胃炎及健康对照组(P<0.05),但慢性胃炎与健康对照组上述三项指标无统计学差异。相关性分析显示CD4⁺CD29⁺T细胞及IL-4两者与ICAM-1、TGF-β1及CEA三者当中任意一者均呈正相关性,而IFN-γ与ICAM-1、TGF-β1及CEA三者当中任意一者均呈负相关性(P<0.05)。结论〓CD4⁺CD29⁺T细胞及IL-4表达增加、IFN-γ表达减少是胃癌患者的一个重要免疫学特征,在早晚期胃癌呈显著差异性表达,且三者与胃癌的血管表达相关因子密切相关。     

手足口病患儿外周血CXC趋化因子配体10表达、T细胞及细胞因子与预后的相关性

目的检测手足口病（HFMD）患儿外周血中的CXC趋化因子配体10（CXCL-10）表达水平、T淋巴细胞亚群及相关细胞因子与HFMD患儿预后的相关性。 方法选取2016年4月至2017年5月徐州市儿童医院收治的HFMD患儿60例为研究对象,根据病情诊断标准分为重症组（10例）和轻症组（50例）;根据随访结果又分为预后良好组（58例）和预后不良组（2例）。选择同期体检正常婴幼儿52例为对照组。采用ELISA法检测两组研究对象外周血CXCL-10表达水平;采用流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群,采用ELISA法检测外周血中白细胞介素-17（IL-17）、IL-22、IL-23以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。 结果重症组患儿外周血CXCL10水平、IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α水平显著高于对照组和轻症组患儿（P均< 0.001）。轻症组患者细胞因子CXCL-10、IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α水平高于对照组（P均< 0.005）。重症组HFMD患儿外周血CD3⁺ T、CD4⁺ T、CD8⁺ T以及CD4⁺/CD8⁺淋巴细胞比例显著低于轻症组患儿和对照组（P均< 0.05）;轻症组患儿外周血CD3⁺ T、CD4⁺ T、CD8⁺ T、CD4⁺/CD8⁺淋巴细胞比例与对照组差异有统计学意义（P均< 0.05）;经Pearson相关系数分析,HFMD患儿外周血CXCL-10表达水平与T淋巴细胞亚群CD3⁺T、CD4⁺ T、CD8⁺ T、CD4⁺/CD8⁺表达水平均负相关（r =－0.609、－0.714、－0.514、－0.524,P = 0.014、0.023、0.001、0.006）,HFMD患儿外周血中IL-17、IL-22、IL-23和TNF-α水平与外周血CXCL-10水平正相关（r = 0.519、0.473、0.418、0.459,P = 0.002、0.006、0.009、0.007）;预后不良组患儿外周血CXCL-10表达水平显著高于预后良好组（t = 2.055、P = 0.044）,外周血CD3⁺ T、CD4⁺ T、CD8⁺ T淋巴细胞比例显著低于预后良好组,差异均有统计学意义（t = 2.508、P = 0.015,t = 3.830、P < 0.001,t = 2.222、P = 0.030）。 结论手足口病患者外周血CXCL-10、T淋巴细胞亚群检测对病情监测及判断预后有重要价值。     

乳腺癌术后化疗不良反应的临床特点

目的探讨分析乳腺癌术后化疗常见的不良反应特点。 方法选取2011年1月至2014年1月经手术治疗后伴有浸润性乳腺癌的68例患者,按照随机数表法分为观察组和对照组。观察组为AC→T方案化疗,对照组为TAC方案化疗。比较两组患者化疗前1 d、化疗后7 d免疫功能、血象及细胞因子变化、化疗后的不良反应及其临床特点。 结果化疗后观察组的CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺/CD8⁺水平明显高于对照组,差异均有统计学意义[（43.22±2.76）% vs（37.32±1.78）%、（42.45±4.32）% vs（34.22±3.26）%、（1.96±0.35）vs（1.43±0.42）,均P<0.000 1],免疫球蛋白IgA、IgG、IgM水平明显低于对照组[（1.25±0.11）g/L vs（2.01±0.26）g/L、（8.21±1.22）g/L vs（11.34±2.33）g/L、（1.24±0.21）g/L vs（1.76±0.34）g/L,均P<0.000 1]。观察组患者的PLT、WBC、IL-4、IL-10水平明显高于对照组,分别为（175±24）×10⁹/L vs（159±25）×10⁹/L、（8.43±2.42）×10⁹/L vs（7.11±1.78）×10⁹/L、（46.32±4.22）U/ml vs（34.21±3.87）U/ml、（34.21±4.21）U/ml vs（25.45±3.87）U/ml（P=0.009、0.013、<0.000 1、<0.000 1）。观察组的中性粒细胞减少与减少性的中性粒细胞发热的不良反应发生率分别为44.12%、26.47%,明显比对照组低（79.41%、64.71%）,差异有统计学意义（χ²=8.967、10.019,P=0.003、0.002）。 结论乳腺癌术后采取不同化疗方案均存在不良反应,然而大多数为Ⅲ度以下的不良反应,并均能耐受,予以有效的处理后不良反应有所好转。     

肾移植受者T细胞亚群绝对计数动态监测对感染的预警作用

目的探讨长期监测T细胞亚群绝对计数水平对肾移植受者术后感染的预警作用。 方法回顾性分析2017年1月至2021年5月在上海交通大学医学院附属瑞金医院26例行肾移植术后新发感染受者临床资料(感染组,感染发生在移植后1～240个月)。选择129例同期肾移植术后无感染、健康受者作为对照组。感染组连续或定期测量外周血T细胞亚群CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋绝对计数,并与对照组检测数据进行比较。根据移植后采样时间将感染组和对照组各分为6个亚组,分析感染亚组与其相应对照亚组之间T细胞亚群绝对计数的差异。正态分布计量资料采用两独立样本t检验和单因素方差分析比较,非正态分布计量资料采用Mann-Whitney U检验比较,计数资料采用χ²检验比较。使用受试者工作特征(ROC)曲线分析T细胞亚群绝对计数在肾移植术后预警感染性疾病的最优值。P<0.05为差异有统计学意义。 结果感染组和对照组受者CD4^＋/CD8^＋比值分别为(1.2±0.5)、(1.3±0.6),差异无统计学意义(t＝0.610,P>0.05)。感染组受者CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋ T细胞绝对计数[(367±212)、(189±117)和(161±92)个/μL]均低于对照组[(1 374±663)、(695±334)和(626±377)个/μL],差异均有统计学意义(t＝14.036、13.541和12.311,P均<0.05)。CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋ T细胞绝对计数在6个感染亚组受者中差异均无统计学意义(P均>0.05)。对照亚组1受者CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋ T细胞绝对计数均低于对照亚组5,差异均有统计学意义(P均<0.05)。CD4^＋、CD8^＋和CD3^＋绝对计数预测肾移植术后感染性疾病最优截断值分别为712、362和255个/μL,敏感度分别为94.6%、92.2%和96.1%,特异度分别为92.3%、96.2%和88.5%。 结论肾移植受者低T细胞亚群绝对计数水平具有预示及预警感染风险的作用。     

Homeostatic Repopulation by CD28−CD8+ T Cells in Alemtuzumab-Depleted Kidney Transplant Recipients Treated With Reduced Immunosuppression

Alemtuzumab (CAMPATH-1H) is a depleting agent introduced recently in transplantation and often used with reduced maintenance immunosuppression. In the current study we investigated the immune response of 13 kidney allograft recipients treated with alemtuzumab followed by weaned immunosuppression with reduced dose of mycophenolate mofetil (MMF) and tacrolimus. Tacrolimus was switched to sirolimus at 6 months and MMF withdrawn at 12 months after transplantation.
We found that after alemtuzumab induction the recovery of CD8⁺ T cells was much faster than that of CD4⁺ T cells. It was complete 6 months posttransplant while CD4⁺ T cells did not fully recover even 15 months posttransplant. Repopulating CD8⁺ T cells were mainly of immunosenescent CD28⁻CD8⁺ phenotype. In a series of in vitro experiments we showed that CD28⁻CD8⁺ T cells might suppress proliferation of CD4⁺ T cells. There were three successfully treated acute rejections during the study (first at +70 day, two others +12 months) that occurred in patients with the lowest level of CD28⁻CD8⁺ T cells.
We hypothesize that expanded CD28⁻CD8⁺ T cells might compete for 'immune space' with CD4⁺ T cells suppressing their proliferation and therefore delaying CD4⁺ T-cells recovery. This delay might be associated with the clinical outcome as CD4⁺ T cells, notably CD4⁺ T effector memory cells, were shown to be associated with rejection.     

New Insights into Mechanisms of Spontaneous Liver Transplant Tolerance: The Role of Foxp3-Expressing CD25+CD4+ Regulatory T Cells

Liver allografts in mice are accepted across MHC barriers without requirement for immunosuppressive therapy. The mechanisms underlying this phenomenon remain largely undefined. In this study, we investigated the role of Foxp3-expressing CD25⁺CD4⁺ regulatory T cells (Treg) in the induction of murine liver transplant tolerance. Foxp3⁺CD25⁺CD4⁺ T cells were increased in liver grafts and recipient spleens from day 5 to day 100 posttransplantation, associated with enhanced CTLA4 and TGF-β expression and IL-4 production. Depletion of recipient CD25⁺CD4⁺ T cells using anti-CD25 mAb (250 μg/day) induced acute liver allograft rejection. This was associated with a decreased ratio of Foxp3⁺ Treg: T effector cells, decreased IL-4 and elevated IL-10 and IL-2 production by graft-infiltrating T cells, and reduced apoptotic activity of graft-infiltrating CD4⁺ and CD8⁺ T cells in anti-CD25-mAb-treated recipients. Thus, the data suggest that Foxp3⁺CD25⁺CD4⁺Treg are involved in spontaneous acceptance of liver allografts in mice. The ratio of Treg to T effector cells appears to determine liver transplant outcome. CTLA4, IL-4, TGF-β and apoptosis of graft-infiltrating T cells are also associated with liver transplant tolerance and may contribute, at least in part, to the mechanisms of Treg-mediated immune regulation in this model.     

Ex Vivo-Expanded Natural CD4+CD25+ Regulatory T Cells Synergize With Host T-Cell Depletion to Promote Long-Term Survival of Allografts

Foxp3⁺CD4⁺CD25⁺ natural regulatory T (nT_reg) cells have been shown in immunodeficient mice to suppress allograft rejection after adoptive cotransfer. We hypothesized that immunotherapy using ex vivo -expanded nT_reg could suppress allograft rejection in wild-type mice. Donor alloantigen (alloAg) specificity of naive splenic nT_reg was enriched in vitro by culturing with anti-CD3/CD28-coated Dynabeads plus bone marrow-derived dendritic cells (BM-DC) in the presence of interleukin (IL)-2 or IL-2 plus transforming growth factor (TGF)-β. On average, 96.2% fresh CD4⁺CD25⁺ nT_reg were intracellular Foxp3⁺. By d+20 in culture, 6.4% nT_reg were Foxp3⁺ following expansion with IL-2 alone, and 14.4% or 19.7% nT_reg were Foxp3⁺ when expanded with IL-2 plus 0.5 or 2.5 ng/mL TGF-β, respectively. In vitro , alloAg-enriched, TGF-β/IL-2-conditioned nT_reg exerted stronger donor alloAg-specific suppression than cells with IL-2 alone in mixed lymphocyte reaction (MLR) assays. In vivo , alloAg-enriched, TGF-β/IL-2-conditioned nT_reg expressed high-level Foxp3 following infusion, effectively overcame acute rejection and induced long-term survival of donor but not third-party heart allografts in peritransplant host T-cell-depleted mice. Long-term surviving allografts were noted to possess Foxp3⁺ graft-infiltrating cells of exogenous and endogenous origins. In conjunction with transient host T-cell depletion, therapeutic use of ex vivo -expanded nT_reg may be a practical means of preventing acute allograft rejection.