云南省通海县蚊虫2株乙型脑炎病毒的分离鉴定北大核心CSCD

目的了解云南省通海县蚊虫携带的乙型脑炎病毒(JEV)情况、分子特征及基因分型。方法2015年7月在云南省玉溪市通海县采用诱蚊灯在调查点通宵捕捉蚊虫,蚊虫研磨后分别接种BHK-21和C6/36细胞进行病毒分离,使用黄病毒属特异引物进行初步鉴定,使用乙型脑炎病毒E基因特异引物进行RT-PCR扩增及测序,使用Megalign、Genedoc、Mega7等软件进行序列分析。结果共捕获三带喙库蚊、中华按蚊、致倦库蚊和骚扰阿蚊2300只,其中三带喙库蚊为优势蚊种(78%)。分46批进行病毒分离,获得2株阳性分离物,接种BHK-21细胞96h,引起细胞病变。使用黄病毒属特异引物和乙型脑炎病毒E基因特异引物扩增均为阳性。序列分析结果显示,2株新分离乙型脑炎病毒与疫苗株SA14-14-2在E基因存在12个氨基酸差异位点,在8个与乙脑病毒毒力相关的位点上存在6个差异位点。E基因遗传进化分析显示,2株新分离病毒与基因Ⅰ型乙型脑炎病毒位于同一进化分支,核苷酸和氨基酸同源性分别为91.8%~99.1%和98.0%~100%。遗传进化分析显示,其与云南2016年蚊虫中分离的乙脑病毒株JEV/mosq/YN/2016亲缘关系较近,核苷酸和氨基酸同源性分别为99.1%和99.8%。结论云南省通海县分离的2株病毒鉴定为基因Ⅰ型乙型脑炎病毒,其与云南省近年来流行的毒株遗传进化关系较近。2毒株的E基因上与毒力相关的关键位点中有2个位点发生突变,结构域Ⅲ的关键抗原未发生改变,因此SA14-14-2减毒疫苗株仍可用于该地区人群的免疫接种,以预防乙型脑炎的发生和流行。     

首次从云南蚊虫分离到辛德毕斯病毒及其鉴定

目的了解云南省虫媒病毒的存在和流行情况。方法2005年8月,在云南省勐海县采集蚊虫,蚊虫标本经研磨后,上清液接种BHK21细胞以分离病毒,用间接免疫荧光试验和RT-PCR等方法进行鉴定,并对病毒的分子生物学特征进行分析。结果采集到蚊虫标本9400只,其中分离到一株对BHK-21细胞能产生明显细胞病变的病毒(MX10)。该病毒经间接免疫荧光试验提示为甲病毒。用甲病毒属特异引物和Sindbis病毒E1基因特异引物对MX10病毒的RT-PCR扩增为阳性,经核酸序列测定分析证实该序列与Sindbis病毒泰国分离株(AF492770)同源性最高,为90.0%;与1987年分离自云南发热患者的YN87448株和1991年新疆按蚊分离株XJ-160的同源性分别为73.1%和72.0%。结论本次从勐海县蚊虫分离到的MX10病毒株为Sindbis病毒,并可能是Sindbis病毒的新亚型或新株系。     

西藏地区几株虫媒病毒的分离与初步鉴定

对西藏亚西和之那地区采集的蜱，鸟，鼠和家畜血标本用ＢＨＫ１３细胞和１－３日龄乳小白鼠进行了病毒分离，共获得了１７株病毒，对其中两株（Ｔ２０６６，Ｔ２０７６）病毒进行了初步鉴定，包括电镜形态观察，理化，生物学和免疫学性质试验。在９种已知的虫媒病毒及其标准免疫血清（ＳＩＮ，ＣＨＩＫ，ＭＡＫ，ＥＥＥ，ＭＶＥ，ＪＢＥ，ＴＢＥ，ＹＦ－１７Ｄ，ＨＦＲＳ）和分离毒株的交互间接免疫荧光试验中，未发现血清学反应，用     

四川省猪源盖塔病毒的分离鉴定及遗传进化分析

目的 对检测到的疑似盖塔病毒进行分离鉴定和全基因序列遗传进化分析。方法 从四川某猪场1例混合感染猪繁殖与呼吸综合征的仔猪血液中,进行RT-RCR检测,检测到GETV阳性。对样品进行无菌处理后,接种至BHK21细胞,连续传代培养,通过细胞病变、蚀斑纯化、RT-RCR扩增和全基因序列测定鉴定细胞培养物。结果 我们成功分离到四川首株猪盖塔病毒,并将其命名为SC201807;对该病毒全基因扩增测序并进行序列分析,发现SC201807与GenBank中上传的35株GETV序列相似性为99.0%~96.1%,E2序列高度保守仅在E310(天冬氨酸→谷氨酸)发生突变。全基因组核苷酸以及E2氨基酸序列遗传进化分析显示SC201807株与中国猪源HNJZ-S2及日本蚊源15-I-752、15-I-1105、14-I-605-C2、14-I-605-C1、12IH26亲缘关系最近,处于同一进化分支。结论 SC201807株扩充了猪源GETV的感染谱,对其致病性、感染和传播机制、环境微生物学及公共卫生等相关研究提供素材。     

江西省高安市两株汉城病毒分离鉴定及全基因组序列分析

目的 对2021年江西省高安市采集的鼠肺样本进行肾综合征出血热汉坦病毒分离鉴定及全基因组序列进行分析.方法 采用Vero-E6细胞分离肾综合征出血热汉坦病毒,采用实时荧光RT-PCR法和直接免疫荧光法对分离株进行鉴定,采用高通量测序技术对分离株进行全基因组测序,采用CLC、MEGA7.0等软件对基因组序列进行分析.结果...     

河南省南阳地区黄牛狂犬病病毒的分离和鉴定

应用鼠脑传代,从具有神经症状的病牛脑组织中分离获得5株病毒,经电子显微镜观察呈典型弹状病毒样粒子。用抗狂犬病毒CVS(狂大病毒1型代表株)免疫血清作ELISA检测及小鼠中和试验,证明分离株病毒为狂大病毒。用狂犬病相关病毒Lagos bat(狂犬病毒2型)、Mokola(狂犬病毒3型)和Duvenhage(狂犬病毒4型)免疫血清对分离株病毒作交叉中和试验,结果发现分离株病毒与Duvenhage有较密切的抗原联系,而与Lagos bat及Mokola病毒没有抗原联系。用自制狂犬病毒“核蛋白”单克隆抗体作夹心间接ELISA检测分离株病毒的感染鼠脑均呈阳性反应,5株病毒与CVS及其互相之间没有明显差异。结论认为,由河南省黄牛分离的病毒为狂犬病毒。     

我国甲病毒的分离与鉴定

甲病毒是指披膜病毒科（Togaviridae）甲病毒属（Alphavirus）病毒,是一类以蚊虫等吸血节肢动物为传播媒介,引起人畜疾病的重要病原体。国际病毒分类委员会2009年第9次报告确认目前共发现29种甲病毒,其中有l3种可引起人、畜疾病,至少9种发生过人间流行\自上世纪80年代以来,随着我国虫媒病毒研究的发展,相继分离到多种甲病毒;在人群和动物中检测到多种甲病毒抗体; 并且发现多例甲病毒感染的输入性病例.甲病毒研究在我国虫媒病毒研究领域取得了较大进展。本文就近30年来我国甲病毒研究进展进行综述。     

云南省昭通地区鸟类乙脑病毒分离与鉴定

流行性乙型脑炎是一种自然疫源性疾病、马、骡、驴、猪、牛、绵羊、山羊、骆驼、狗、猫、鸡、鸭以及许多野生动物和鸟类均有感染性,并都可能出现病毒血症。为了查明鸟自然感染病毒情况,于1986年4～5月在历年来候鸟返回北方时路过的昭通与大关交界的     

鸡肉中弯曲杆菌属的分离与鉴定

对从长春地区某一肉鸡屠宰加工厂在9个月期间内抽取的冻鸡肉样品进行弯曲直菌检查,发现38.2%（58/152）的样品为弯曲杆菌属阳性。经API Campy鉴定系统鉴定,其中32.9%(50/152）为空肠弯曲杆菌（C.jejuni）和大砀弯曲杆菌（C.coli）阳性。本次调查结果证实在我国市场上销售的鸡肉中存在弯曲杆功菌属的污染,如果加工不当或加工卫生不良,会对消费者的健康构成潜在的威胁。     

云南牛血液标本中哺乳动物正呼肠孤病毒(YNSZ/V207/2017)的分离鉴定

目的 掌握云南省动物病毒的多样性和传播风险.方法 在云南省师宗县设立10头哨兵牛,定期采血接种细胞进行病毒分离.通过RT-PCR、电镜观察、高通量测序与血清中和试验进行分离病毒的鉴定、全基因组序列获取与流行病学调查.结果 2017年从采集的哨兵牛血液样本中分离出2株蓝舌病病毒、3株帕利亚姆病毒、2株流行性出血病病毒和1...     

病人血清中登革病毒的分离与鉴定

目的应用细胞分离法从登革热病人急性期血清中分离登革热病毒并应用免疫荧光法证实病毒的血清型。C6/36细胞长成单层后接种急性期血清,以5~7天为一代,观察细胞病变;感染后的细胞使用型特异性抗体进行免疫荧光实验证实其血清型。在10份急性期病人血清中,有6份标本成功分离出登革热I型病毒,其结果和RT-PCR等实验方法的结果一致,分离率为60%。     

牛副流感病毒3型的分离鉴定及感染牛抗体消长规律的研究

目的针对黑龙江省近几年夏季奶牛经常发生以高热、气喘和流涎等症状为主的疾病,给畜牧业造成严重经济损失,本文旨在研究其病原因素及感染牛中和抗体的变化趋势。方法本研究采集爆发高热病的牛群中患病牛乳汁和鼻液进行病毒分离,经CPE和扫描电镜观察、理化特性试验、血凝试验、病毒中和试验以及RT-PCR方法鉴定分离的病毒,最后应用病毒中和试验跟踪监测5头典型发病牛中和抗体13个月。结果从病料中分离到一种RNA病毒,能够产生典型的细胞融合样CPE,有囊膜和栅栏样纤突,但是没有血凝性,能够与参考毒株牛副流感病毒3型抗血清发生病毒中和反应,HN基因的序列分析发现与牛副流感病毒3型HN基因同源性最高达99.6%。发病牛中和抗体跟踪监测结果显示康复期抗体效价是急性期的4倍以上,同时可见感染牛的中和抗体效价在6-8个月内能够维持在1：25～1：27,然后开始下降,最后维持在1：22～1：23之间。结论综上所述确定分离毒株是牛副流感病毒3型,进一步证实该病毒是引起本牛群高热病的病因之一,而且感染后中和抗体效价至少在6个月以内能够维持在较高的水平。     

猪源性牛型结核分枝杆菌分离与鉴定

目的2003年底和2004年初来自湖北、湖南、江西、广东等省的供港猪在屠宰时发现一定比例的猪有器官肉芽肿性病变。我们在湖北的J猪汤、M猪场接种牛型结核菌(10,000IU/头)和禽型结核菌素(2,500IU),均发现牛型结核菌素阳性猪。J猪场共接种1,692头猪,其阳性分布为:种猪阳性率为37%(7/19)、育肥猪阳性率为13%(118/941)、中小猪阳性率为3%(18/634)、保育舍仔猪阳率为1%(1/98):M猪场接种8头育肥猪有4头阳性。从J猪场选取94头育肥猪(61头PPD阳性、33头PPD阴性)跟踪到屠宰场观察器官病变,61头阳性猪全部有器官肉芽肿性病变,33头阴性猪2头有器官肉芽肿性病变。取典型病科研磨、2%NaOH处理30min,在改良酸性罗氏培养基上37℃培养28天长出淡黄色、表面干燥、似菜花样、呈颗粒状堆集的菌落。该分离菌在PNB、TCH鉴别培养基上不生长,对链霉素、利福平敏感,对青霉素不敏感,触酶、硝酸盐还原阴性,尿素酶阳性,接种大白兔可分离到抗酸菌。由以上可判定从猪中分离到牛型结核菌。     

福建省人感染高致病性禽流感病毒的分离及灭活病毒抗原的制备

目的从患者呼吸道标本中分离高致病性禽流感病毒(H5N1),摸索病毒灭活条件,用于制备安全和有效的高致病性禽流感病毒灭活抗原。方法鸡胚分离法分离高致病性禽流感病毒,应用甲醛和戊二醛两种灭活剂对分离物进行灭活。用鸡胚培养法进行病毒增殖试验,以确定灭活效果,同时测定灭活病毒的血凝效价。结果应用鸡胚分离法,并用电子显微镜及RT-PCR鉴定,确认从福建省人感染病例中分离出高致病性禽流感病毒。在应用甲醛和戊二醛对病毒进行灭活时,在1‰～5‰终浓度、4℃作用24h的条件下,两者均能完全灭活病毒;灭活病毒的血凝效价随着灭活剂的浓度增高而逐渐下降;灭活病毒随保存时间的延长,其血凝活性逐步下降;应用甲醛灭活后的病毒抗原,其血凝效价可维持更长时间。结论首次分离成功福建省人感染高致病禽流感病毒。应用1‰终浓度的甲醛可使高滴度的病毒完全灭活,并保持较好的血凝活性,适用于大量制备高致病性禽流感病毒灭活抗原。     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定与生物学分析

目的 从四川省某规模化养猪场病死猪肝脏分离到一株奇异变形杆菌,分析其生物学特性,为临床鉴别诊断和治疗提供参考。方法 对分离株进行革兰氏染色、培养特性观察、毒力试验、生化试验、药敏试验以及16S rRNA基因序列分析,并且构建系统进化树。结果 分离株16S rRNA测序结果经BLAST对比分析,其与各株奇异变形杆菌同源性均为98%以上,将分离株与GenBank中其他6株不同来源的变形杆菌与3株不同来源的肠杆菌科细菌进行序列对比分析并且构建系统进化树,证明分离株与猪源奇异变形杆菌(HQ259935.1)的同源性最高,为99.8%;与大肠杆菌,沙门氏菌,克雷伯氏菌的同源性仅为92.1%~93.2%。致病性试验表明分离株对小鼠LD₅₀为1.86×10⁶CFU/只。分离株对氨基糖苷类和β-内酰胺类药物中度敏感,对其他种类药物敏感性较低。结论 分离株经鉴定为猪源奇异变形杆菌,具有较高的耐药性和致病性。     

江苏省禽源空肠弯曲杆菌的分离鉴定及耐药性研究

目的了解江苏省禽源空肠弯曲杆菌的流行情况及耐药特征。方法从江苏徐州、淮安和扬州等7市采集禽肉产品和泄殖腔棉拭子样品共753份,分离细菌,PCR方法鉴定空肠弯曲杆菌后,根据WHO推荐的K-B法测定9大类27种抗生素的敏感性。结果 753份样品共分离出空肠弯曲杆菌207株,分离率为27.5%。药敏结果显示,所有菌株除了对美罗培南、庆大霉素、卡那霉素、氟苯尼考和磷霉素保持高度敏感性,对其它抗生素产生不同程度耐药,对磺胺类、喹诺酮类、β-内酰胺类和四环素类抗生素耐药率最高,其中对甲氧苄氨嘧啶、诺氟沙星、头孢曲松和四环素耐药率分别高达100%、84.02%、80.9%和79.4%,一株分离自徐州的菌株对92.6%的抗生素产生耐受性。测试菌株出现多重耐药现象,优势耐药谱为LIN/CTX/CRO/NOR/CIP/T/TE,菌株耐药类型在40%~60%数量最多,各市菌株耐药类型不一。结论江苏省禽源空肠弯曲杆菌耐药性比较普遍,多重耐药菌株较突出,应严格监管养殖场抗生素的使用及流通阶段食品源空肠弯曲杆菌的监测。     

福建省狂犬病毒街毒株分离鉴定及生物学特性研究

目的 分离福建省狂犬病毒街毒株,了解病毒株的生物学特性。方法 采集疑似狂犬的脑组织,通过细胞培养和乳鼠脑接种分离狂犬病毒,用直接免疫荧光和RT-PCR等方法进行鉴定,并对病毒的分子生物学特性进行研究。结果 从疑似狂犬的脑组织中分离出狂犬病毒,TCID₅₀的测定结果显示,细胞毒滴度不高,病毒株对BHK-21细胞的适应性不强,LD₅₀的测定结果显示,病毒株为狂犬病毒强毒株。结论 从福建省家犬中成功分离到狂犬病毒街毒株,为狂犬病的实验室研究奠定基础。