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相似文献
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1.
目的 分析旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫排泄分泌蛋白(excretory-secretory proteins,ESPs)作用于小细胞肺癌H446细胞后蛋白组分的变化。方法 制备旋毛虫肌幼虫ESPs,把H446细胞分成实验组和对照组。实验组加入0.85 mg/mL ESPs,对照组加入不含血清的RPMI1640培养基,24 h后收集细胞并提取总蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白后酶解,采用液质联用质谱法(LC-MS/MS)对酶解产物进行鉴定,通过Gene Ontology(GO)分析,对鉴定出的实验组与对照组有差异的蛋白质的细胞组分、分子功能和生物过程进行富集分析。结果 实验组共鉴定出240种蛋白质,其中有204种为已明确鉴定的蛋白质,22 种为未明确鉴定的蛋白质,14 种为假定蛋白质。从已知的204种蛋白质中检索出1种与存在于旋毛形肌幼虫排泄分泌蛋白中且与抗肿瘤相关的蛋白质H2A(histone 2A)。对照组鉴定出233种蛋白质。实验组和对照组重合蛋白质191种,非重合蛋白分别有49种和42种。结论 旋毛虫肌幼虫ESPs作用于H446细胞后,细胞内蛋白组分发生了复杂变化,提示其抗肿瘤作用机制和过程复杂。  相似文献   

2.
目的 筛选非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者血浆外泌体差异蛋白,分析其功能及其生物学过程,为NAFLD患者临床诊断提供参考依据。方法 2020年7月~10月我院诊治的NAFLD患者3例和健康体检者3例,采用串联质谱标签(TMT)标记定量蛋白质组学技术对血浆外泌体蛋白进行鉴定和定量分析,筛选差异蛋白并进行功能富集分析,了解其参与的生物学过程。结果 经外泌体蛋白质组学分析,共鉴定出蛋白质387种,以倍数上调>1.2倍或下调>1.2倍,且P<0.05为标准筛选出差异表达蛋白34种;健康人比,NAFLD患者上调蛋白25种,下调蛋白9种;生物信息学分析结果显示,这些蛋白主要参与了脂质的储存和代谢、免疫反应、纤维素形成等生物学过程,并与胰岛素抵抗、炎症反应、细胞损伤等信号通路密切相关。结论 采用TMT标记定量蛋白质组学技术筛选NAFLD患者差异蛋白可能为其诊治提供指引。  相似文献   

3.
目的 探讨旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响及其作用的可能机制。方法 将H446细胞与0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.6 mg/mL、0.8 mg/mL、1.0 mg/mL、1.2 mg/mL虫体蛋白分别培养并设为实验组,不处理的H446细胞设为对照组,采用噻唑兰(MTT)比色法检测旋毛虫肌幼虫虫体蛋白对H446细胞增殖活性的抑制作用;采用流式细胞术(FCM)检测旋毛虫肌幼虫虫体蛋白诱导H446细胞株凋亡的情况;采用Real-timePCR及Western blot法检测细胞色素C(cytochrome C,Cyt-C)和凋亡蛋白酶活化因子(apoptotic protease activating factor 1,Apaf-1) mRNA及蛋白的表达。结果 MTT比色法结果表明虫体蛋白能够抑制H446细胞增殖活性;流式细胞术结果表明虫体蛋白作用于H446细胞24 h后,有明显的促凋亡作用;Real-timePCR及Western blot法结果显示,与阴性对照组相比,促凋亡基因Cyt-C和Apaf-1表达均上调。结论 旋毛虫肌幼虫虫体蛋白能够抑制H446细胞增殖活性,并诱导细胞凋亡,其作用可能与Cyt-C和Apaf-1表达上调有关。  相似文献   

4.
目的 鉴定能被旋毛虫感染血清识别的新生幼虫蛋白,为抗新生幼虫疫苗筛选候选抗原。方法 从感染旋毛虫的BALB/c小鼠肠道收集成虫,培养后收集新生幼虫,制备新生幼虫可溶性性抗原,通过蛋白质免疫印迹(Western blotting)筛选出能被旋毛虫感染小鼠血清识别的新生幼虫可溶性抗原蛋白带进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)鉴定,并与Uniprot数据库中的旋毛虫数据进行比对,利用生物信息学在线网站分析所鉴定的旋毛虫蛋白的理化性质,使用WEGO在线软件对匹配的蛋白进行基因本体(GO)分类。收集旋毛虫肌幼虫、肠道感染性幼虫(感染后6 h)、成虫(感染后2 d)和新生幼虫等不同发育期的虫体,提取虫体总RNA,反转录为cDNA。qPCR扩增旋毛虫C型凝集素(CTL)、钙网蛋白(CRT)、锌指蛋白(ZFP)和丙酮酸激酶(PK)基因,以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因为内参,以肌幼虫的相对转录水平为对照,比较4个旋毛虫基因在不同发育期的相对转录水平。不同发育期相对转录水平的比较采用单因素方差分析。结果 Western blotting结果显示,新生幼虫可溶性抗原的11条蛋白条带中有4条被...  相似文献   

5.
目的 比较不同肺转移潜能的大鼠肝癌细胞来源外泌体对巨噬细胞转录组的影响。方法 通过转录组测序技术,比较经两株不同肺转移潜能的大鼠肝癌细胞(WB1和WN1)来源外泌体处理的巨噬细胞的转录组差异,筛选差异基因并使用KEGG分析、GO分析和蛋白互作网络分析,探索癌细胞来源外泌体影响巨噬细胞功能促进肺转移的潜在机制。结果 对比高肺转移肝癌细胞WN1和低肺转移肝癌细胞WB1来源外泌体处理的巨噬细胞转录组,存在318个差异表达基因【log2(差异倍数)≥1;P<0.05】,其中上调基因296个,下调基因22个;KEGG分析发现上调差异基因主要富集在PI3K-Akt信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路等炎症分子相关的信号通路和细胞黏附相关的信号通路上;GO分析发现上调差异基因主要富集在血管形成、上皮间质转化和金属肽酶活动等条目中;更进一步的蛋白质相互作用网络分析筛选得到的核心基因Vegfa、Il6和Mmp3等也位于上述富集通路中。结论 巨噬细胞受不同肺转移潜能的大鼠肝癌细胞外泌体处理后,转录组存在显著性差异,高肺转移肝癌细胞来源外泌体可能通过调控巨噬细胞多个信号通路发挥促进肝癌肺转移的作用。  相似文献   

6.
目的 获得保留Ov-ASP-1佐剂活性的功能区。方法 用前期制备的Ov-ASP-1单克隆抗体对Ov-ASP-1的9个肽进行特异性结合,根据肽的结合情况设计功能区ASPPRM,并进行密码子优化、构建原核表达载体后在大肠杆菌中表达。表达产物经 Western印迹鉴定后的用镍柱纯化蛋白,复性完全后对获得的ASPPRM活性蛋白进行生物学特性分析。结果 ASPPRM以包涵体形式表达,分子量为17 kD。将其和OVA共同免疫小鼠后ASPPRM组抗OVA的IgG抗体显著高于OVA组。结论 本研究获得了保留佐剂活性的ASPPRM蛋白,为后续ASPPRM体内的免疫增效作用及Ov-ASP-1佐剂活性功能域的探索奠定基础。  相似文献   

7.
目的 应用定量蛋白质组学方法比较我国利什曼原虫伽师株有毒力和无毒力前鞭毛体蛋白表达的差异。方法 将分离于我国新疆伽师县黑热病患者婴儿利什曼原虫JS5有毒力株前鞭毛体和无毒力株前鞭毛体经酶解后进行液相色谱串联质谱(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)的非标记(Label-free)定量分析,利用MaxQuant软件查库,进行Label-free非标定量(LFQ)分析;每个样品重复3次质谱分析,只有1次有LFQ值的蛋白舍弃。结果 本研究共鉴定蛋白3 994个,有毒力和无毒力株间差异蛋白为298个(差异倍数>1.2或差异倍数<0.83,P<0.05),其中利什曼原虫有毒力株前鞭毛体特有表达蛋白15个,无毒力株前鞭毛体特有表达蛋白23个,二者间表达丰度有显著差异蛋白260个,其中有毒力前鞭毛体表达上调蛋白(高表达)78个,表达下调蛋白(低表达)182个。这些差异表达蛋白中已鉴定功能的蛋白分别涉及糖与脂质代谢、核酸代谢、压力反应、细胞骨架形成、细胞周期与增殖等生物功能。结论 利什曼原虫伽师株有毒力株和无毒力株前鞭毛体蛋白质组的表达存在差异,为筛选和鉴定与利什曼原虫感染相关关键分子奠定了基础。  相似文献   

8.
目的 探讨慢性丙型肝炎(CHC)患者血清和外泌体肝细胞癌中高表达的中长链非编码RNA(long non-coding RNA HEIH,LncRNA-HEIH)水平变化及其临床意义。方法 2017年9月~2020年7月我院诊治的77例CHC患者和同期40例肝细胞癌(HCC)患者,采用定量RT-PCR法检测血清和外泌体LncRNA HEIH水平。CHC患者接受标准抗病毒治疗和肝活检。采用多元Logistic回归分析,应用ROC曲线分析血清和外泌体LncRNA HEIH水平预测肝组织病变的价值。结果 CHC患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平分别为(2.3±0.2)和(3.6±0.6),均显著低于HCC患者【分别为(13.4±2.5)和(8.6±1.5),P<0.05】;53例肝组织炎症G0~G1患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平分别为(2.5±0.3)和(3.9±0.6),显著高于24例肝组织炎症>G2者【分别为(1.9±0.4)和(2.9±0.5),P<0.05】,62例肝纤维化S0~S1患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平分别为(2.6±0.4)和(4.1±0.7),均显著高于15例肝纤维化>S2者【分别为(1.6±0.4)和(2.5±0.5),P<0.05】;59例对抗病毒治疗应答组血清和外泌体LncRNA HEIH水平分别为(2.8±0.4)和(4.1±0.6),均显著高于18例不应答组【分别为(2.1±0.5)和(3.4±0.6),P<0.05】;CHC患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平预测肝组织显著炎症或纤维化的AUC分别为0.764~0.778和0.723~0.736之间,具有一定的临床意义。结论 CHC患者血清和外泌体LncRNA HEIH水平异常,监测它们的变化可能对预测肝组织炎症分级和肝纤维化分期有帮助。  相似文献   

9.
应用基因工程技术对旋毛虫排泄-分泌(ES)抗原进行分子克隆,并对表达蛋白的性质和相应基因进行了分析。人工感染小鼠获得旋毛虫成虫和肌肉内幼虫,新生幼虫由体外培养成虫中收集。用异硫氰酸胍分离虫体DNA和总RNA,Poly(A)mRNA经Oligo-dT层析纯化。用Poly(A)mRNA合成双链cDNA,插入λgtll噬菌体,体外包装  相似文献   

10.
目的 克隆表达旋毛虫钙网蛋白(TsCRT),并对其生物学特性进行鉴定。方法 通过RT-PCR扩增TsCRT基因,构建重组质粒pMD19T-TsCRT,测序正确后亚克隆至表达载体pQE80L,构建重组表达载体pQE80L-TsCRT,转化大肠埃希菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过Western blot、qPCR和免疫荧光试验(IFT)鉴定rTsCRT的反应原性及其在不同虫期的表达与组织定位,通过动物免疫试验观察rTsCRT的免疫原性。结果 成功构建重组表达载体pQE80L-TsCRT,转化DE3后经IPTG诱导表达相对分子质量为47×103的rTsCRT蛋白。用纯化的rTsCRT免疫小鼠3次,血清抗体效价达1∶105。Western blot显示,rTsCRT可被抗rTsCRT血清和旋毛虫感染小鼠血清识别。qPCR检测显示,TsCRT在旋毛虫肌幼虫、肠道感染性幼虫、成虫和新生幼虫期均有转录和表达。IFT试验显示,TsCRT主要定位在旋毛虫的表皮和胚胎中。结论 TsCRT在旋毛虫不同虫期均有表达,重组...  相似文献   

11.
目的 探究旋毛虫感染早期如何诱导肠道病理变化及免疫调节相关细胞因子表达情况。方法 通过苏木素伊红染色方法观察旋毛虫感染BALB/c鼠早期4个关键时间节点肠道病理学变化,采用电化学发光免疫分析法(Meso Scale Discovery,MSD)检测感染早期肠系膜淋巴结相关细胞因子表达情况。结果 肠道病理学结果表明,肠粘膜增厚,嗜酸性粒细胞浸润,数量明显增多。MSD结果显示,感染后6 h肠系膜淋巴结Th1型细胞因子(IL-2)表达水平显著降低,其他细胞因子无显著变化;感染后3 d至6 d,Th1型细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)表达水平均显著升高,呈Th1 / Th2混合型免疫应答。结论 旋毛虫感染后6 h至6 d肠道炎症随感染时间延长加重,感染后6 h Th1型免疫应答受到抑制,随后旋毛虫通过诱导机体产生以Th2型为主的混合型免疫应答,实现旋毛虫在机体内的长期寄生。  相似文献   

12.
旋毛虫DNA疫苗诱导小鼠免疫应答的研究   总被引:4,自引:1,他引:3  
目的 观察旋毛虫DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法 将旋毛虫肌幼虫编码 31kDa抗原结构基因真核表达质粒pcDNA3-TspE1分别用肌肉注射和基因枪免疫BALB/c小鼠 ,免疫血清用旋毛虫肌幼虫冰冻切片及石蜡切片抗原进行IFAT检测 ,并用旋毛虫肌幼虫可溶性抗原进行Westernblot分析。结果 IFAT表明 pcDNA3-TspE1接种BALB/c小鼠后产生的免疫血清与旋毛虫肌幼虫可产生阳性反应 ,在肌幼虫冰冻及石蜡切片上均显示黄绿色荧光。Westernblot检测结果显示 ,pcDNA3-TspE1接种小鼠后产生的免疫血清只能识别旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中的 31kDa抗原组分 ,而 pcDNA3质粒接种小鼠后的血清不能与旋毛虫肌幼虫可溶性抗原发生免疫反应。结论 旋毛虫DNA疫苗 pcDNA3-TspE1能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。  相似文献   

13.
The aim of the study was to examine the influence of free radicals: nitric oxide (NO), hydrogen peroxide (H202) and superoxide anion (O2-) on Trichinella spiralis infection in mice. The studies were performed on two strains of mice: C57BL/6 and BALB/c, which differ in immunological response to T. spiralis infection. Also the influence of AG--inhibitor of inducible nitric oxide synthase (iNOS) administered in the first days after T. spiralis infection (1-5 dpi) on the cytotoxic immune response and on the number of adult parasites as well as the influence of AG administered at the beginning of muscle phase of the T. spiralis infection (16-29 dpi) on the cytotoxic immune response and the number of muscle larvae was studied. Activation of macrophages can cause pathology. Contact of macrophages with antigens stimulates these cells to produce, among others, highly reactive inorganic compounds. There are free radicals: NO, H2O2 and O2-. NO, O2-, and their metabolites are highly toxic for most pathogens, including parasites. However, little is known about their role in the defense against T. spiralis infection. The performed studies have proved, that free radicals play role in the host immune response during both intestinal and muscle phase of T. spiralis infection in mice. In the intestinal phase of the T. spiralis infection cytotoxic immune response is activated in mice peritoneal cavity and in the muscle phase, the local immune response activated in the neighborhood of larvae in muscles appeared as the higher level of free radicals in blood and urine. Administration of AG between 1-5 dpi causes opposite reactions in two different strains of mice. In BALB/c mice AG causes fast expulsion of adult T. spiralis from the intestine but in C57BL/6 mice the expulsion of parasites is slower after AG. However, there are no differences between two strains of mice after treatment with AG between 16 and 29 dpi. AG causes diminution of larvae in muscles of both BALB/c and C57BL/6 mice. Inflammatory response in peritoneal cavity is observed later during the infection in "low responders" (C57BL/6) mice in comparison with "high responders" (BALB/c) mice. Thl like mice (C57BL/6) react stronger to AG treatment than Th2 like mice (BALB/c). It occurs as changes and fluctuations in free radicals levels and the number of peritoneal cells after AG treatment in C57BL/6 mice.Weak or no reaction on AG injections in BALB/c mice is responsible for more stabile and more sufficient defense response of the host to T. spiralis infection.  相似文献   

14.
Trypanosoma vivax is a widespread hemoparasite in tropical areas and is pathogenic to ruminant domestic livestock as well as wild ruminants. The accurate identification of parasites in both hosts and vectors is crucial for epidemiological studies and disease control programs. We describe here the development of molecular markers specific for T. vivax identification. These markers were used to identify mouthpart infections in field-collected tsetse flies from Cameroon. The markers target the genomic sequence of a species-specific antigen from the bloodstream stages. No cross amplification with other trypanosome species was observed, which makes the markers a reliable tool to detect T. vivax infections, both in hosts and vectors. The PCR-amplified sequence contains a (CA)n microsatellite repeat for which 11 different alleles were identified. This microsatellite, which showed high polymorphism, provides a suitable marker for population genetic studies.  相似文献   

15.
Complex and variable glycoconjugates presented by parasitic nematodes during infection are very important in the host-parasite interplay. Predominantly carbohydrate-rich antigens are involved in the stimulation and modulation of the stage-specific immune response of the host. The non-specific innate immune system, however, acts as the first line of host defence against pathogens, before the appearance of antigen-specific responses. The functional entities of the innate system are lectins that recognize the surface ligands of pathogens: mannan-binding lectin (MBL) is a key recognition element involved in binding oligosaccharide structures exposed on microorganisms. In the present study we investigated whether MBL binds to the parasitic nematode Trichinella spiralis (T. spiralis). Since the parasite is coated with mannose-containing glycans, these structures could represent potential ligands for MBL and contribute to activation of the innate immune response of the host. Histochemical staining revealed MBL on the surface and internal organs of T. spiralis muscle larvae. MBL bound in a mannose-inhibitable manner to both crude extracts of T. spiralis muscle larvae and larvae excretory/secretory products. Western blot analyses showed that MBL recognized glycoproteins from all stages of T. spiralis. In vitro complement activation assays suggested that MBL is capable of fixing complement components on T. spiralis crude extract coated plates and activating the complement cascade through the 'lectin pathway'.  相似文献   

16.
目的 寻找诊断旋毛虫病的特异性抗原。方法 应用SDS—PAGE和Western blot对旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中的蛋白组分进行研究。结果 旋毛虫肌幼虫可溶性抗原经SDS—PAGE后显示29条蛋白带,分子量范围在112—12kDa之间,其中65、43、42、31、30、20、17、16kDa为主带。112、110、108、102、97、95、65、63、58、55、53、49、45、43、42kDa蛋白组分与并殖吸虫感染的大鼠及患者血清、华支睾吸虫病、血吸虫病及囊尾蚴病患者血清均具有明显的交叉反应带;24—20kDa蛋白组分只与旋毛虫感染的大鼠、小鼠及患者血清反应,而不与其它寄生虫感染的动物或患者血清、正常大鼠和小鼠及正常人血清发生交叉反应。结论旋毛虫肌幼虫可溶性抗原中24—20kDa蛋白组分为旋毛虫肌幼虫的特异性抗原,可用于旋毛虫病的免疫学诊断及血清流行病学调杏。  相似文献   

17.
旋毛虫肌幼虫排泄分泌物中特异性诊断抗原的研究   总被引:31,自引:5,他引:31       下载免费PDF全文
目的 寻找旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)物中的特异性诊断抗原。 方法 应用SDSPAGE和Western印迹对旋毛虫肌幼虫体外培养18、30h后的ES抗原中的蛋白组分进行研究。 结果 旋毛虫肌幼虫培养18、30h后得到的ES抗原组分大致相同,两种ES抗原中主要蛋白带的分子量为112、110、108、97、53、49、45、42、35、23和16kDa。18hES抗原中的102、97、95和53kDa以及30hES抗原中的53、49、45和43kDa均与并殖吸虫病、华支睾吸虫病、日本血吸虫病及囊尾蚴病患者血清发生明显的交叉反应。ES抗原中的23kDa蛋白组分只与旋毛虫感染的大鼠、小鼠及患者血清反应,而不与上述其它寄生虫感染者、正常大鼠和小鼠及正常人血清发生交叉反应。 结论 旋毛虫肌幼虫ES抗原中的23kDa蛋白组分为旋毛虫肌幼虫的特异性抗原,可用于旋毛虫病的血清学诊断及血清流行病学调查。  相似文献   

18.
The influence of Heligmosomoides polygyrus on infection with Trichinella spiralis was studied in BALB/c mice. Mice coinfected with T. spiralis and previously given H. polygyrus harboured both nematode species till day 34. The number of T. spiralis muscle larvae was greater in mice coinfected with H. polygyrus/T. spiralis or T. spiralis/H. polygyrus than after infection with T. spiralis alone. Infection with H. polygyrus did not enhance eosinophil and IL-5 levels induced by T. spiralis. Additionally, the production of IgG1 specific to L1 T. spiralis was inhibited by co-infection. Changes in the levels of IFN-gamma and IgG2a implicated a disturbance in Th2 cell activation during protective response and resulted in the greater number of T. spiralis muscle larvae in coinfected mice.  相似文献   

19.
目的 比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用。方法 收集人工感染大鼠小肠内的成虫, 经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原。采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原。分别用两种抗原免疫小鼠, 间隔1 周共免疫3 次, 末次免疫后1 周, 每只小鼠攻击感染100 条旋毛虫感染性肌肉幼虫。感染后1 周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力, 感染后5 周检查肌肉幼虫负荷。结果 成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为7955 % 、6225 % 和650 % 。成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是9727 % 、8660 % 和900 % 。结论 实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力, 但后者的免疫原性更强。  相似文献   

20.
人体寄生虫主要分为医学原虫、医学蠕虫和医学节肢动物。在寄生虫与其宿主漫长的共同进化中,要求寄生虫建立一种强大的适应性和一系列复杂的分子机制来逃避、抑制宿主细胞免疫系统的攻击,同时激活宿主细胞协助调控其寄生环境,以最大限度地生存并触发和保持感染。近些年,受哺乳动物外泌体相关研究启发,研究人员发现,外泌体在以上过程中发挥着重要的作用,比如参与调节虫体的毒力、参与虫体的免疫逃逸或免疫抑制、维持寄生虫病的感染和转归。现如今,人体寄生虫领域的外泌体研究取得了一定的成果,本文针对寄生虫源外泌体以及宿主源性外泌体在寄生和感染时发挥的作用及其作用机制进行综述,同时针对外泌体与媒介病毒的研究进展进行简要概述。  相似文献   

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