miR-625靶向HMGA1对食管癌细胞生物学行为的影响及机制

目的分析miR-625靶向高迁移率族蛋白A1(HMGA1)对食管癌细胞生物学行为的影响及机制。方法收集2018年3月—2019年3月经手术切除的食管癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)标本,体外培养食管癌细胞系(KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706)和正常食管上皮细胞HET-1A,采用RT-qPCR检测不同组织和细胞中miR-625的表达。将miR-625 mimic、miR-625 inhibitor转染ECA109细胞,采用CCK-8实验、流式细胞仪、Transwell小室实验和划痕实验检测miR-625对ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移的影响,Western blot检测增殖、侵袭和迁移相关蛋白的表达。经生物信息学软件在线预测miR-625靶基因,通过RT-qPCR、Western blot及双荧光素酶报告基因检测验证靶向关系。同时干预miR-625和HMGA1,检测ECA109细胞增殖、周期、侵袭和迁移。结果 miR-625相对表达量,食管癌组织低于癌旁组织,食管癌细胞系KYSE150、KYSE30、ECA109、EC9706低于正常食管上皮细胞HET-1A(P0.05)。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组miR-625相对表达量、处于G1期细胞比例及p21、E-cadherin表达升高,细胞增殖、侵袭、迁移能力及处于S期细胞比例、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin表达降低(P0.05);miR-625 inhibitor组可逆转上述作用(P0.05)。miR-625与HMGA1 3'端非编码区存在结合位点。与mimic NC组比较,miR-625 mimic组细胞中相对荧光素酶活性和HMGA1表达降低(P0.05)。与pcDNA3.1-HMGA1组比较,miR-625+HMGA1组HMGA1表达及细胞增殖、侵袭、迁移能力降低,处于G1期细胞比例升高(P0.05)。结论 miR-625在食管癌中低表达,miR-625过表达可靶向HMGA1抑制食管癌细胞的增殖、侵袭与迁移。     

长链非编码RNA HOTAIR靶向miR-1对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探究长链非编码RNA (Long non-coding RNA,LncRNA)HOTAIR对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移能力的作用及机制。方法 RT-PCR检测胶质瘤细胞株U87、U251、U118和LN18中HOTAIR的表达水平和shRNA HOTAIR (sh-HOTAIR)转染U251细胞细胞后HOTAIR和miR-1的表达水平。生物信息预测HOTAIR和miR-1的靶向关系,荧光素酶报告实验验证两者靶向关系。将细胞分为Control、sh-HOTAIR、miR-1inhibitor和sh-HOTAIR+inhibitor组,用sh-HOTAIR和miR-1inhibitor分别或同时转染细胞,CCK8检测各组细胞活性,流式检测细胞凋亡,Transwell和划痕实验分别检测细胞侵袭和迁移能力,免疫印迹检测Ki67、Bcl-2、Bax、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的表达。结果 HOTAIR在U251细胞中表达水平最高,因此选择U251细胞进行后续实验;sh-HOTAIR能显著降低U251细胞HOTAIR的表达水平,升高miR-1的表达水平;miR-1mimic能显著降低HOTAIR野生质粒的荧光素酶活性;与Control组比较,sh-HOTAIR组细胞增殖速度、Ki67和Bcl-2表达水平明显降低,细胞凋亡水平和Bax表达水平明显升高;sh-HOTAIR组比较,sh-HOTAIR+inhibitor组细胞增殖速度、Ki67和Bcl-2表达水平明显升高,细胞凋亡水平和Bax表达水平明显降低;同时,sh-HOTAIR组侵袭细胞数与Control组比较明显减少,划痕闭合率明显降低;sh-HOTAIR+inhibitor侵袭细胞与sh-HOTAIR比较显著增多,划痕闭合率明显升高;此外,sh-HOTAIR能显著降低MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平,miR-1inhibitor能显著减弱sh-HOTAIR对MMP-2和MMP-9表达的抑制作用。结论 HOTAIR能通过靶向抑制miR-1的表达促进胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移。     

MicroRNA-664对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究microRNA-664(miR-664)对人脑胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法采用Lipofectamine 2000脂质体法将miR-664模拟剂(miR-664 mimics)、miR-664抑制剂(miR-664 inhibitor)转染至人脑胶质瘤细胞U251中,并设置相应对照组(miR-NC、anti-NC);采用qRT-PCR检测各组细胞中miR-664的表达,MTT法检测各组细胞增殖情况,划痕实验及Tanswell小室法检测各组细胞迁移、侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中核蛋白(Ki67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及MMP-9的表达。结果与miR-NC相比,转染miR-664 mimics后明显上调U251细胞中miR-664的表达,并促进U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著上调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05);与anti-NC相比,转染miR-664 inhibitor后明显下调U251细胞中miR-664的表达,并抑制U251细胞增殖、迁移和侵袭能力,并显著下调细胞中Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达(P 0. 05)。结论 miR-664可能通过上调Ki67、PCNA、MMP-2及MMP-9的表达,促进人脑胶质瘤细胞U251细胞的增殖、迁移和侵袭,可作为潜在的肿瘤标志物。     

miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探究miR-1290对肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法回顾性收集2018年3月至2019年6月海南省人民医院收治的45例患者,取肺腺癌组织及癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测组织中miR-1290的表达。将肺腺癌细胞随机分为对照组、miR-1290 mimic组和miR-1290 inhibitor组,通过脂质体2000试剂盒,分别以无意义序列、miR-1290 mimic、miR-1290 inhibitor转染细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell小室、划痕实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法检测Cyclin D1、p27、基质金属蛋白酶(MMP-2和MMP-9)蛋白的表达。经在线生物信息学和双荧光素酶报告基因检测miR-1290的靶基因,荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测miR-1290靶基因的表达。结果与癌旁组织比较,肺腺癌组织中miR-1290表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组miR-1290表达明显增加,miR-1290 inhibitor组miR-1290表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。培养48 h时,与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显增加,miR-1290 inhibitor组细胞吸光度值、侵袭细胞数及划痕“愈合”率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,miR-1290 mimic组细胞周期蛋白Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显增加、p27蛋白表达明显降低,miR-1290 inhibitor组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白表达量明显降低、p27蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测显示,与对照组比较,共转染INPP4B-WT、miR-1290 mimic细胞中荧光表达量明显降低(P<0.05);与对照组比较,miR-1290 mimic组二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(INPP4B)mRNA和蛋白表达量明显降低,miR-1290 inhibitor组INPP4B mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05)。结论miR-1290在肺腺癌组织中表达上调,miR-1290可能靶向抑制INPP4B水平,促进肺腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

慢病毒介导的赖氨酰氧化酶基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化及转移潜能的影响

目的探讨慢病毒介导的赖氨酰氧化酶(LOX)基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化及转移潜能的影响及其机制。方法采用RT-PCR和Western blot检测人正常子宫内膜KLE细胞和子宫内膜癌Ishikawa细胞中LOX mRNA和蛋白的表达。将Ishikawa细胞随机分为对照组(未转染)、NC组(转染阴性对照慢病毒LV-NC载体)和LOX干扰组(转染慢病毒干扰LV-shRNA-LOX载体)。采用RT-PCR检测细胞中LOX mRNA表达,Western blot检测LOX、E-钙粘附蛋白(E-cadherin)、N-钙粘附素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果与KLE细胞相比,Ishikawa细胞中LOX mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P0.05)。与对照组相比,LOX干扰组细胞中LOX mRNA表达、LOX蛋白、N-cadherin蛋白、Vimentin蛋白、MMP-2蛋白和MMP-9蛋白表达均显著降低(P0.05),细胞侵袭和迁移能力减弱(P0.05),而E-cadherin蛋白表达升高(P0.05);NC组和对照组间以上指标均无显著差异(P0.05)。结论下调LOX表达可通过引起N-cadherin、Vimentin、MMP-2和MMP-9表达下降、E-cadherin表达升高,降低子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化及转移潜能。     

miR-92a通过下调RAB3B表达促进肝癌细胞增殖、迁移的机制分析

目的分析miR-92a通过下调RAB3B表达促进肝癌细胞增殖、迁移的机制。方法将miR-92a mimics及miRNA control分别转染至肝癌细胞SKHep-1,分别设为miR-92a组及miR-92a NC组,未经转染的SKHep-1细胞为对照组。采用荧光素酶报告基因检测miR-92a与RAB3B的靶向关系,利用实时荧光定量PCR(q PT-PCR)分析各组细胞miR-92a与RAB3B的表达水平,MTT法检测细胞增殖情况,划痕实验分析细胞迁移,Western blot检测各蛋白表达水平。结果 RAB3B是miR-92a的下游靶基因。相比较于对照组及miR-92a NC组,miR-92a组细胞miR-92a表达量明显升高,而相应的RAB3B表达量明显降低(P 0. 05)。miR-92a组细胞不同时间细胞增殖数及划痕愈合率均明显高于对照组及miR-92a NC组(P 0. 05)。相比较于对照组及miR-92a NC组细胞,miR-92a组细胞中RAB3B蛋白表达量明显降低(P 0. 05),而Ki67、VEGF、MMP-2及MMP-9蛋白对表达量明显升高(P 0. 05)。结论MiR-92a可通过靶向下调RAB3B表达实现对肝癌细胞增殖及迁移的促进作用,而其作用机制可能与提升Ki67、VEGF、MMP-2及MMP-9蛋白表达有关。     

miR-152对SHI-1细胞增殖、转移及致瘤性的调控机制

目的:探究miR-152对人急性单核细胞白血病细胞系SHI-1增殖、转移及致瘤性的调控机制。方法:将购买的SHI-1细胞系进行miR-152过表达(miR-152 agomir组)或抑制处理(miR-152 antagomir组)并设置阴性对照组(NC组)。应用CCK-8法检测各组细胞活力,划痕愈合实验检测各组细胞迁移能力,Transwell法检测各组细胞侵袭能力,Western blot检测各组细胞Cyclin D1、Caspase-3、MMP-2、TIMP-2、E-cadherin和N-cadherin的表达,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,裸鼠成瘤实验检测各组细胞的致瘤性。结果:与NC组相比,miR-152 agomir组细胞活力显著下降,细胞迁移和侵袭能力均显著下降(P0.05),而miR-152antagomir组的细胞活力以及细胞迁移和侵袭能力均显著上升(P0.05)。与NC组相比,miR-152 agomir组细胞Cyclin D1、MMP-2、N-cadherin蛋白表达均显著下调(P0.05),但Caspase-3、TIMP-2和E-cadherin的表达在上述各组中明显升高;同时,细胞凋亡增强,裸鼠致瘤性降低(P0.05)。miR-152 antagomir组Cyclin D1、MMP-2和N-cadherin被显著诱导,但该组Caspase-3、TIMP-2和E-cadherin的蛋白表达显著下调;同时,细胞凋亡减少,裸鼠致瘤性增强(P0.05)。结论:miR-152能抑制SHI-1细胞系增殖、转移及致瘤的能力,同时诱导细胞凋亡,其机制可能与miR-152调控MMP-2以及TIMP-2等侵袭转移相关因子有关联。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码RNA X失活特异转录物调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨长链非编码RNA X失活特异转录物（lncRNA XIST）通过调控miR-340-5p对卵巢癌细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测卵巢癌组织和细胞系中lncRNA XIST和miR-340-5p表达水平。A2780细胞分为Control组、si-NC组、si-lncRNA XIST组、si-lncRNA XIST+NC inhibitor组、si-lncRNA XIST+miR-340-5p inhibitor组。双荧光素酶实验证实lncRNA XIST和miR-340-5p的调控关系；划痕实验和Transwell法检测迁移和侵袭能力；RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色分析EMT标志蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）的mRNA和蛋白表达。结果 在卵巢癌组织和细胞系中，lncRNA XIST高表达，miR-340-5p低表达（P <0.05）。选择lncRNA XIST表达最高的A2780细胞作为转染对象。lncRNA XIST能够直接靶向下调miR-340-5p表达（P ...     

过表达miR-129-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移 及CDK6、N-cadherin表达的影响

目的:研究过表达miR-129-5对胶质瘤细胞增殖、迁移及细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响。方法:培养胶质瘤U87细胞并分为转染阴性对照mimic的对照组、转染miR-129-5p mimic的miR-129-5p组,采用MTS实验检测增殖活力、划痕实验检测迁移活力、Western blot检测CDK6及N-cadherin的表达量,验证miR-129-5p对CDK6、N-cadherin的靶向调控作用。结果:miR-129-5p组的OD490值(0.78±0.15),明显低于对照组的(1.21±0.34)(P0.05);相对愈合面积(32.39±8.79)%,明显低于对照组的(73.39±17.85)%(P0.05);CDK6的表达量(0.28±0.09)及N-cadherin的表达量(0.34±0.08),明显低于对照组的(0.88±0.18)及(0.67±0.15)(P0.05);生物信息学分析及双荧光素酶报告表明miR-129-5p靶向调控CDK6、N-cadherin基因mRNA 3’UTR。结论:过表达miR-129-5p能够抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移,其机制可能与靶向调控CDK6、N-cadherin有关。     

miR-195-5p过表达对前列腺癌PC3细胞增殖、侵袭的影响

目的探究miR-195-5p过表达对前列腺PC3细胞增殖和侵袭的影响。方法采用miR-195mimic转染前列腺癌PC3细胞,RT-PCR检测miR-195-5p和血管内皮生长因子A(vascular endothelial cell growth factor A,VEGFA)的表达,预测miR-195-5p和VEGFA的靶向关系,采用双荧光素酶实验证明miR-195-5p和VEGFA的靶向关系,利用免疫蛋白印迹检测VEGFA表达情况,CCK8方法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-195 mimic能促进PC3细胞miR-195-5p的表达水平,降低VEGFA的mRNA水平、VEGFA野生质粒的荧光素酶活性、PC3细胞增殖速度和细胞侵袭数,且miR-195-5p有VEGFA的结合位点,pc-VEGFA能升高PC3细胞VEGFA的蛋白表达水平,减弱miR-195 mimic对VEGFA表达的抑制作用,显著促进细胞增殖和侵袭能力,同时减弱miR-195 mimic对细胞增殖和侵袭能力的抑制作用。结论 miR-195-5p通过下调VEGFA的表达以抑制前列腺癌PC3细胞增殖和侵袭能力。     

miR-1调控胃癌细胞SGC-7901迁移能力的实验研究

目的探讨微小RNA-1(miR-1)对胃癌细胞系SGC-7901迁移能力的调控作用。方法脂质体转染寡核苷酸片段NCmimics及miR-1-mimics、NC-inhibitor及miR-1-inhibitor至SGC-7901细胞,定量RT-PCR检测转染后SGC-7901细胞中miR-1的表达水平,Transwell实验观察转染后细胞迁移能力,western blot检测转染后细胞上皮间质转化(EMT)指标。结果miR-1-mimics转染组miR-1的表达水平(900.10±240.40)明显高于NC-mimics转染组(1.01±0.18),差异有统计学意义(t=6.48,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组miR-1的表达水平(0.65±0.04)明显低于NC-inhibitor转染组(1.01±0.14),差异具有统计学意义(t=4.19,P0.05)。miR-1-mimics转染组迁移细胞数量[(362±10)个]明显高于NC-mimics转染组[(112±10)个],差异有统计学意义(t=21.65,P0.01)。miR-1-inhibitor转染组迁移细胞数量[(64±8)个]明显低于NC-inhibitor转染组[(133±14)个],差异有统计学意义(t=17.07,P0.01)。与NC-mimics转染组比较,miR-1-mimics转染组上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)表达减弱(t=19.28,P0.01),神经钙粘蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达增强(t=5.43,P0.01;t=23.14,P0.01);与NC-inhibitor转染组比较,miR-1-inhibitor转染组E-cadherin表达增强(t=6.14,P0.01),N-cadherin和Vimentin表达减弱(t=6.78,P0.01;t=7.94,P0.01)。结论 miR-1过表达可促进胃癌细胞的迁移;miR-1低表达能可抑制胃癌细胞的迁移;miR-1可能通过EMT转化增强胃癌细胞的迁移能力。     

miR-181a靶向RASSF1A促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭

目的探讨miR-181a靶向Ras相关区域家族1(RASSF1A)促进多发性骨髓瘤U266细胞增殖、侵袭的作用。方法收集40例多发性骨髓瘤患者骨髓组织及50例受试者的正常骨髓组织标本;培养多发性骨髓瘤U266细胞,并分为NC mimic组、miR-181a mimic组、NC inhibitor组、miR-181a inhibitor组。采用MTS法检测细胞增殖活力;Transwell试验检测细胞侵袭能力;实时荧光定量PCR检测各组miR-181a的表达水平;western blot检测RASSF1A、cyclinD1、RhoA蛋白的表达水平;荧光素酶报告试验验证miR-181a靶向RASSF1A 3′非翻译区(UTR)。结果实时荧光定量PCR结果显示,多发性骨髓瘤组织中miR-181a的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05);western blot检测结果显示,多发性骨髓瘤组织中cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于正常骨髓组织(P均<0.05),而RASSF1A蛋白的表达量明显低于正常骨髓组织(P<0.05);western blot检测结果还显示,miR-181a mimic组cyclinD1、RhoA蛋白的表达量明显高于NC mimic组(P均<0.05),而miR-181a inhibitor组cyclinD1、RhoA的表达量明显低于NC inhibitor组(0.32±0.07 vs 0.71±0.12,0.39±0.06 vs 0.66±0.10,P均<0.05);Transwell试验结果表明,miR-181a mimic组侵袭细胞数(个)明显高于NC mimic组(38.59±7.41 vs 10.29±2.12,P<0.05),而miR-181a inhibitor组侵袭细胞数(个)明显少于NC inhibitor组(7.28±1.24 vs 11.41±2.76,P<0.05);荧光素酶报告试验结果表明,miR-181a mimic组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力均明显低于NC mimic组(0.81±0.15 vs 1.54±0.26,0.173±0.035 vs 0.291±0.062,P均<0.05),而miR-181a inhibitor组RASSF1A的表达量及RASSF1A 3′UTR荧光素酶报告基因的荧光活力明显高于NC inhibitor组(1.83±0.31 vs 1.25±0.21,0.399±0.067 vs 0.273±0.057,P均<0.05)。结论miR-181a能够促进多发性骨髓瘤U266细胞的增殖、侵袭,并靶向抑制RASSF1A的表达。     

YB-1对卵巢癌细胞EMT标志蛋白表达及黏附能力的影响研究

目的研究Y-box结合蛋白(YB-1)对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)标志蛋白表达及细胞黏附能力的影响。方法在卵巢癌细胞中转染p Genesil-1.1/YB-1 shRNA和p Genesil-1.1/shRNA control,筛选稳定转染的细胞记为YB-1 shRNA组和shRNA-NC组,把没有转染的细胞作为对照组。以Realtime PCR和Western blot方法检测细胞中YB-1表达水平。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)方法分别检测细胞增殖和黏附能力,用Western blot检测EMT标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、神经型钙粘素(N-cadherin)和迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移情况。结果 YB-1 shRNA组细胞中的YB-1表达水平明显低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞增殖率和黏附率低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞中E-cadherin蛋白水平高于对照组和shRNA-NC组,N-cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白水平低于对照组和shRNA-NC组,差异具有统计学意义(P0.05)。YB-1 shRNA组细胞侵袭和迁移数目低于对照组和shRNA-NC组(P0.05)。结论下调YB-1促进卵巢癌细胞E-cadherin表达,抑制N-cadherin表达,抑制细胞EMT,降低细胞黏附、侵袭、迁移能力。     

MiR-451a对前列腺癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的研究miR-451a在人前列腺癌组织中的表达情况,探讨miR-451a是否通过下调LMP7来影响雄激素非依赖性前列腺癌细胞系(DU145)细胞的增殖和侵袭能力。方法收集37例前列腺癌组织标本及40例良性前列腺增生组织标本,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组组织中与前列腺癌相关的miR-451a、miR-28、miR-51、miR-157、miR-48、miR-137、LMP7mRNA的表达情况,Pearson相关分析检验miR-451a表达量与LMP7的相关性;免疫印迹试验(Western blot)分别检测两组LMP7的表达情况。进一步在细胞实验中,通过转染miR-451a mimic和miR-NC至离体培养的DU145细胞中,随后,Western blot检测DU145细胞中血管内皮生长因子(VEGF)、钙粘附蛋白E(E-cadherin)的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶试验验证LMP7是miR-451a的靶基因;紧接着通过转染过表达LMP7的质粒至DU145细胞,检测DU145细胞中相应蛋白的表达情况,划痕试验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况。结果相比于前列腺增生组织,miR-451a在前列腺癌组织中的表达降低(P0.01);而miR-28、miR-51、miR-157、miR-48、miR-137的表达在两组之间无显著差异;前列腺癌组织中LMP7mRNA的表达增加(P0.01);MiR-451a与LMP7 mRNA的表达量呈负相关(r=-0.4708,P0.01)。在体外细胞实验中,相比于miR-NC组,转染miR-451a mimic后,DU145细胞中VEGF、E-cadherin、LMP7的表达减少(P0.05),DU145细胞的迁移侵袭能力下降(P0.01);荧光素酶试验结果显示,miR-451a能够降低LMP7-3'-UTR质粒的荧光素活性(P0.05);转染过表达LMP7质粒后,相比于miR-451+空质粒组,DU145细胞中VEGF和E-cadherin表达增加(P0.05),细胞的迁移侵袭能力得到部分恢复(P0.01)。结论在前列腺癌组织中,miR-451a低表达;MiR-451a通过下调LMP7抑制DU145细胞的迁移和侵袭。     

MiR-17-5p在子宫内膜异位症间质细胞中的表达及其对基质金属蛋白酶-2的影响

目的:探讨miR-17-5p在子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)间质细胞中的表达及其对基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的影响。方法:MiRNA芯片筛选EMs异位子宫内膜组织中差异表达的miRNA,qRT-PCR验证EMs异位、在位子宫内膜组织和子宫肌瘤正常子宫内膜组织(对照组)中miR-17-5p的表达;提取以上各组组织中原代间质细胞,免疫荧光鉴定表面标志物;qRT-PCR和蛋白质印迹法检测各组间质细胞中miR-17-5p和MMP-2的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-17-5p和MMP-2的靶向关系;EMs异位间质细胞中转染miR-17-5p mimic和inhibitor,qRT-PCR、蛋白质印迹法和明胶酶谱法检测MMP-2的表达,克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwel l实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力。结果:EMs异位子宫内膜组织中miR-17-5p、miR-200b、miR-106b、miR-15b、miR-141、miR-22显著下降,miR-202、miR-150、miR-365表达显著上升;与对照组相比,miR-17-5p在EMs异位、在位子宫内膜组织和间质细胞中表达均显著下降(P<0.05),而MMP-2在EMs异位、在位子宫内膜间质细胞中表达均显著升高(P<0.05);与阴性对照组(negative control,NC)相比,过表达miR-17-5p抑制MMP-2的表达并显著抑制细胞克隆形成数,细胞侵袭数及细胞迁移率(P<0.05),敲低miR-17-5p,结果相反。结论:MiR-17-5p在EMs间质细胞中表达下降,抑制miR-17-5p的表达能够促进MMP-2表达升高同时增强细胞增殖、侵袭和迁移能力。     

miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的探究miR-181a-5p对T淋巴细胞白血病(T lymphocytic leukemia, TLL)Jurkat细胞增殖及凋亡的影响。方法采用miR-181a-5p mimic、pc-B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2, BCL-2)不同组合方式转染Jurkat细胞,并将细胞分为Jurkat组、mimic-scramble组、miR-181a mimic组、pc-BCL-2组和mimic+pc-BCL-2组。RT-PCR检测miR-181a-5p的表达及pc-BCL-2 mRNA水平,Western Blot检测BCL-2蛋白表达,CCK8和流式细胞学检测细胞增殖和凋亡情况。结果与mimic-scramble组比较,miR-181a mimic组miR-181a-5p表达水平显著升高,BCL-2 mRNA水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。与Jurkat组比较,miR-181a mimic组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数降低,细胞凋亡率明显升高,pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率降低,差异有统计学意义(P0.01);与miR-181a mimic组比较,mimic+pc-BCL-2组BCL-2蛋白表达量及细胞增殖倍数升高,细胞凋亡率显著下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论 miR-181a-5p通过靶向抑制BCL-2表达以抑制TLL细胞系Jurkat细胞增殖、诱导细胞凋亡。     

lncRNA PCAT19靶向miR-769-5p促进口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨lncRNA PCAT19对口腔鳞癌HSC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法 收集45例口腔鳞癌患者癌组织和癌旁组织，qRT-PCR法检测组织中PCAT19和miR-769-5p表达。体外培养HSC3细胞，转染PCAT19小干扰RNA或miR-769-5p模拟物、或共转染PCAT19小干扰RNA与miR-769-5p抑制剂后，CCK-8法和单克隆实验检测细胞增殖；划痕实验检测细胞迁移；Transwell实验检测细胞侵袭；蛋白质印迹法检测细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验验证PCAT19和miR-769-5p的调控关系。结果 口腔鳞癌组织中PCAT19表达高于癌旁组织，miR-769-5p表达低于癌旁组织（P <0.05）。干扰PCAT19或过表达miR-769-5p后，HSC3细胞OD值、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin蛋白表达降低，E-cadherin蛋白表达升高（P <0.05）。PCAT19靶向负调控miR-769-5p。下调miR-769-5p逆转了干扰PCAT19对HSC3...     

罗哌卡因通过Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87增殖、迁移和侵袭的机制

目的 探讨罗哌卡因通过Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87增殖、迁移和侵袭的机制.方法 采用罗哌卡因细胞培养液培养胃癌细胞NCI-N87,并分为对照组(0μg/mL罗哌卡因)、ROP-L组(160 μg/mL罗哌卡因)、ROP-M组(320μg/mL罗哌卡因)、ROP-H组(640 μg/mL罗哌卡因)、ROP-H+ Licl(640 μg/mL罗哌卡因、Wnt信号激活剂Licl)组.MTIT法检测细胞增殖活性;Transwell小室检测细胞迁移和侵袭的能力变化;Westem blot方法分析基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)、钙黏蛋白(N-cadherin)、Wnt1的蛋白表达水平.结果 与对照组比较,ROP-L组、ROP-M组、ROP-H组胃癌细胞迁移和侵袭数目逐渐降低,增殖活性降低,细胞中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平逐步减少,细胞中E-cadherin蛋白表达水平逐步增加,N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白表达水平逐渐降低(P＜0.05).与ROP-H组比较,ROP-H+ Licl组胃癌细胞迁移数目和侵袭数目升高,MMP-9、MMP-2、N-cadherin、Wnt1、β-catenin蛋白水平升高,E-cadherin蛋白水平降低(P＜0.05).结论 罗哌卡因通过下调Wnt信号通路抑制胃癌细胞NCI-N87的增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT).     

miR-133b通过介导TGF-βR1表达下调对食管癌细胞侵袭、迁移的抑制作用

目的探讨miR-133b通过介导转化生长因子-β受体1(TGF-βR1)表达下调,抑制食管癌细胞侵袭、迁移的作用及机制。方法采用实时荧光定量PCR检测人正常食管上皮细胞和人食管癌OE19、ECA109细胞中miR-133b的表达;构建miR-133b过表达的人食管癌OE19、ECA109细胞;Transwell小室实验观察不同miR-133b表达水平对食管癌OE19、ECA109细胞迁移和侵袭能力的影响;蛋白免疫印迹法检测不同miR-133b表达水平对食管癌OE19、ECA109细胞中TGF-βR1、SMAD3、p-SMAD3、E-cadherin、N-cadherin蛋白水平的影响;双荧光素酶报告基因试验检测miR-133b对TGF-βR1的靶向调控作用。结果成功构建miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞;miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞的侵袭和迁移能力显著降低(P<0.01);miR-133b过表达的食管癌OE19和ECA109细胞中TGF-βR1、p-SMAD3、N-cadherin蛋白水平明显降低(P<0.01),E-cadherin蛋白水平明显升高(P<0.01)。双荧光素酶报告基因试验检测发现miR-133b可靶向调控TGF-βR1的表达。结论 miR-133b通过介导TGF-βR1表达下调,抑制TGF-βR1/SMAD3信号通路活化,抑制人食管癌OE19和ECA109细胞上皮间质转化的发生,抑制食管癌细胞的侵袭和迁移能力。