大鼠慢性溃疡性结肠炎模型的建立及操作规范探讨

[目的]建立大鼠慢性溃疡性结肠炎(UC)模型,探讨建立模型的操作规范。[方法]雄性Wistar大鼠,除正常对照(NC)组,其余大鼠用100 mg/kg 2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/50%乙醇溶液建立溃疡性结肠炎急性模型,在造模10 d后,当所有模型大鼠便潜血转为"1+"时,随机抽取模型大鼠观察结肠病理组织学改变,剩余模型大鼠随机分为阳性对照(PC)组、UC组,用5%葡聚糖硫酸钠(DSS)水溶液或生理盐水进行致炎诱导结肠炎复发,造模后观察各组大鼠疾病活动指数(DAI),实验终点期处死观察结肠黏膜损伤指数(CMDI)及病理组织学改变。[结果]与正常对照组比较,慢性溃疡性结肠炎组饮DSS后再次出现结肠炎发作,DAI及CMDI评分明显增高(P<0.05),而阳性对照组逐渐好转;病理组织学改变亦有显著差异。[结论]采用TNBS/乙醇溶液首次致炎,用DSS间断进行诱导复发,可以模拟UC急性期与缓解期交替发作的特点,病理组织学改变与人类相似。     

黄连-厚朴配伍抑制PI3K/Akt信号通路改善TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎研究

目的研究黄连-厚朴配伍对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠及磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路的调控作用。方法利用高通量基因表达数据库获取UC基因表达谱数据,并综合生物信息学分析,预测黄连-厚朴治疗UC的潜在机制。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法建立UC大鼠模型,SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄连(2g/kg)组、厚朴(2g/kg)组、黄连-厚朴配伍(4g/kg)组和柳氮磺胺吡啶(0.4 g/kg)组,每组8只。造模24 h后,各给药组ig相应药物,1次/d,连续6 d,采用试剂盒检测各组大鼠血清中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性;计算并评价各组大鼠结肠质量/长度、脾脏指数和肠黏膜损伤指数(colon macroscopic damage index,CMDI)评分;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠结肠组织病理变化并进行病理损伤评分;采用免疫组化法检测各组大鼠结肠组织PI3K、Akt和剪切型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)表达情况;采用Western blotting法检测各组大鼠结肠组织磷酸化Akt(p-Akt)、B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)和cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果生物信息学预测显示,黄连-厚朴抗UC的潜在靶点有49个,可能与调控生物过程及过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)信号通路、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路和PI3K/Akt信号通路等有关。实验验证结果显示,与模型组比较,各给药组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和MPO活性显著降低(P0.01);结肠质量/长度、脾脏指数、CMDI评分、结肠组织病理损伤评分均显著降低(P0.01);结肠组织PI3K、Akt和cleaved Caspase-3阳性表达显著减少(P0.01);结肠组织中p-Akt/Akt、cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P0.01),其中黄连-厚朴配伍组疗效最佳。结论黄连、厚朴及其配伍能够有效缓解TNBS诱导的UC,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt通路相关,且黄连-厚朴配伍疗效最佳,体现了中药"相使"增效的配伍关系。     

马齿苋对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用

目的:考察马齿苋对溃疡性结肠炎的治疗作用.方法:雄性SD大鼠72只随机分为6组.用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠制备大鼠溃疡性结肠炎模型.马齿苋高(10 g·kg-1)、中(5 g·kg-1)、低(2.5 g· kg-1)剂量组和柳氮磺吡啶组(0.5g·kg-1)从造模后第3天开始灌肠给药,每天1次,连续10 d.观察大鼠结肠组织形态学改变并进行评分,测定结肠组织内髓过氧化物酶(MPO)含量.结果:马齿苋中、高剂量组能够改善溃疡性结肠炎模型大鼠的大便性状,显著改善大鼠结肠组织的病理损害,降低大体形态损伤评分,降低髓过氧化物酶(MPO)含量.结论:马齿苋对溃疡性结肠炎急性期有良好疗效,能够改善溃疡性结肠炎模型大鼠的肠粘膜损伤,减少MPO含量,减轻肠道炎症.     

芍药汤对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜免疫屏障的干预作用

目的:探讨芍药汤对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜免疫屏障的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,美沙拉嗪组(0.067 g·kg~(-1)),芍药汤低、中、高剂量组(1.8,3.6,7.2 g·kg~(-1)),采用TNBS诱导溃疡性结肠炎模型,对应给予生理盐水、美沙拉嗪、芍药汤灌胃治疗7 d,采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理学改变,免疫组化法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肠黏膜中CD4~+T淋巴细胞数量和分泌型免疫球蛋白A(SIg A)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肠黏膜损伤程度评分及病理学评分显著升高(P0.01);CD4~+T淋巴细胞,SIg A蛋白表达显著下降(P0.01);与模型组比较,各给药组大鼠结肠黏膜损伤程度评分及病理学评分显著下降(P0.01),肠黏膜CD4~+T淋巴细胞,SIg A表达明显升高(P0.05,P0.01);与美沙拉嗪组及芍药汤低剂量组比较,芍药汤中、高剂量组肠黏膜损伤程度评分和病理学评分显著下降(P0.01),芍药汤中、高剂量组大鼠肠黏膜中CD4~+T淋巴细胞及SIg A蛋白表达明显升高(P0.05)。结论:芍药汤可通过增加肠黏膜中CD4~+T细胞数量及SIg A分泌的表达,起到减轻肠黏膜损伤,保护肠黏膜免疫屏障功能作用。     

基于网络药理学和分子对接探究黄连、厚朴配伍调控溃疡性结肠炎作用机制＊

目的 采用网络药理学方法，并结合分子对接技术探讨黄连、厚朴配伍治疗溃疡性结肠炎的潜在作用机制。方法 采用TCMSP、OMIM及DisGeNET数据库，筛选黄连、厚朴的主要活性成分、作用靶点及溃疡性结肠炎的作用靶点，并采用Cytoscape 3.7.1软件，构建“药物-活性化学物质-疾病-作用靶点”网络图，借助String数据库平台构建靶点蛋白互作网络。通过DAVID数据库对关键靶点进行GO功能富集以及KEGG信号通路富集分析，并通过Discovery Studio软件对药物活性成分与关键作用靶点进行分子对接验证，进一步采用TNBS诱导UC大鼠模型观察血清以及结肠组织中细胞因子的表达，对网络药理学预测结果进行实验验证。结果 黄连共筛选潜在活性成分的作用靶点179个，厚朴共筛选潜在活性成分的作用靶点53个，疾病作用靶点有851个，获得共同基因71个，黄连配伍厚朴及疾病共同的作用靶点8个，分别为NOS2、SLC6A4、CHEK1、PPARG、PTGS1、PTGS2、ESR1、HSP90AA1。GO和KEGG富集分析综合结果显示黄连、厚朴配伍调控溃疡性结肠炎可能与肿瘤坏死因子（TNF）、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）、缺氧诱导因子1（HIF-1）等信号通路有关。分子对接结果表明，小檗碱、厚朴酚和和厚朴酚与溃疡性结肠炎的NOS2、PTGS2、HSP90AA1等靶点对接吻合度较好。实验验证结果显示，与模型组相比，黄连厚朴配伍组血清TNF-α含量显著下降（P < 0.01）、TGF-β含量显著升高（P < 0.01），同时，其结肠组织中COX2蛋白表达阳性细胞数量明显下降。结论 本研究初步揭示了黄连配伍厚朴多成分、多靶点、多途径治疗溃疡性结肠炎的潜在机制，为进一步机制研究指明了方面，为溃疡性结肠炎临床干预提供了新的可能。     

党参多糖对溃疡性结肠炎大鼠结肠上皮NF-κB信号通路的影响

目的 观察党参多糖对大鼠溃疡性结肠炎的保护作用,并探讨其对结肠上皮NF-KB信号通路的影响.方法 50只雄性Wistar大鼠随机分为5组(每组10只),分别为正常组、模型组、柳氮磺胺嘧啶(SASP)阳性对照组(0.3g/kg)、党参多糖高剂量组(9g/kg)、党参多糖低剂量组(3 g/kg),采用三硝基苯磺酸(TNBS...     

黄连厚朴汤改善溃疡性结肠炎的网络药理学机制分析

目的 基于网络药理学及动物实验,对黄连厚朴汤治疗溃疡性结肠炎（UC）的主要活性成分及其潜在的作用机制进行探讨。方法 运用中药系统药理分析平台（TCMSP）和BATMAN-TCM数据库初步获取黄连厚朴汤的活性成分,结合TCMSP、SwissADME和SwissTargetPrediction平台筛选其中的主要活性成分,并预测其靶点。借助基因表达综合数据库（GEO）检索相关芯片以获得疾病基因。取药物靶点与疾病基因交集,筛选黄连厚朴汤治疗UC的潜在治疗靶点。利用Cytoscape 3.7.2软件构建“药物-活性成分-靶点-疾病”相互作用网络图,同时,将潜在治疗靶点导入DAVID 6.8网站做基因本体（GO）生物学过程（BP）分析以预测相关的生物学过程。最后通过动物实验对主要生物学过程进行验证。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测黄连厚朴汤对小鼠结肠组织炎症因子的影响;使用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测相关凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X的蛋白质（Bax）、Bcl-2、胱天冬蛋白酶-3（Caspase-3）的表达;运用IVIS系统检测活性氧（ROS）在各组小鼠结肠组织的含量。结果 该研究共筛选出黄连厚朴汤19个活性成分,涉及32个UC潜在治疗靶点及158个生物学过程;动物实验结果表明,黄连厚朴汤可以通过抑制炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素-1β（IL-1β）表达、降低凋亡蛋白含量、调控ROS表达以发挥抗UC作用。结论 该研究揭示了网络药理学预测并指导实验设计的合理性,证实黄连厚朴汤可以通过参与免疫炎症、细胞凋亡、ROS等生物过程发挥效用,为黄连厚朴汤治疗UC的机制研究提供依据。     

基于因子分析方法筛选大鼠溃疡性结肠炎的敏感指标

目的 运用因子分析方法探讨三硝基苯磺酸（TNBS） +乙醇诱导的溃疡性结肠炎（UC）的敏感性指标。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、模型组;以TNBS +乙醇诱导UC模型,模型复制5 d后测定大鼠体质量、隐血、稀便情况,计算疾病活动指数（DAI指数）和肠指数;比色法检测结肠组织匀浆上清液髓质过氧化酶（MPO）、丙二醛（MDA）、超氧化物岐化酶（SOD）、一氧化氮（NO）含量;酶联免疫吸附（ELISA）法检测血浆中白介素（IL）-4、IL-18、P-选择素含量。通过因子分析法评价各指标的主成分,并进一步计算出判别标准b值,以确定敏感指标。结果 UC在炎症和氧化方面指标经因子分析后,用主成分提取得到4个成分,特征指数1.382＞1,判别标准b值的排序为DAI指数＞肠指数＞MPO＞肠质量＞MDA。结论 利用因子分析可以指导UC大鼠模型敏感指标的筛选,可选取DAI指数、肠指数、MPO等作为大鼠UC敏感性指标。     

2,4,6-三硝基苯磺酸诱导溃疡性结肠炎大鼠模型的建立及评价

目的建立大鼠2,4,6-三硝基苯磺酸(TBNS)溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型。方法:大鼠经结肠注入不同剂量的2,4,6-三硝基苯磺酸,分别于给药后1、3及7 d处死大鼠取出结肠,肉眼观察后进行组织学切片然后镜下观察。结果:各组大鼠体质量于造模3 d后开始下降,50 mg·kg-1组体质量于7 d后开始出现回升,100 mg·kg-1组和150 mg·kg-1组体质量则没有恢复;造模时间不是影响UC(溃疡性结肠炎)损伤程度的主要因素;病理切片结果表明,50 mg·kg-1组可见炎性细胞浸润,未出现肠腺肿胀及黏膜脱落现象,符合UC(溃疡性结肠炎)的病理特征。结论:TNBS造模7 d内,UC(溃疡性结肠炎)的造模成功与否与给药天数无关,而与剂量密切关联,以50 mg·kg-1的大鼠给药剂量最为合适。     

五色梅对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用

目的:探讨五色梅(WSM)对大鼠实验性溃疡性结肠炎(UC)的治疗作用及其作用机制。方法:48只大鼠完全随机分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶(SASP,0.3 g·kg-1)组、WSM高、中、低剂量组(12,6,3 g·kg-1);采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)复制大鼠溃疡性结肠炎模型;连续给药10 d后,观察UC大鼠结肠黏膜损伤指数(CMDI)、组织病理学评分(HS)、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)水平的变化。结果:模型组CMDI,HS显著高于正常对照组(P0.01);WSM高、中剂量组及SASP组CMDI,HS均显著低于模型组(P0.05,P0.01),而WSM各剂量组与SASP组间无显著性差异;与正常对照组比较,模型组大鼠血清TNF-α,IL-1β水平显著升高(P0.01),IL-4,IL-10水平显著降低(P0.01);与模型组比较,WSM不同剂量组及SASP组血清TNF-α,IL-1β水平均显著降低(P0.05,P0.01);IL-4,IL-10水平显著升高(P0.01)。结论:五色梅有效治疗大鼠溃疡性结肠炎,其机制可能通过调节促炎因子及抗炎因子的平衡而实现。     

黄连-厚朴配伍比例对和厚朴酚、厚朴酚溶出的影响

目的:探讨黄连-厚朴酸碱药对不同配伍比例对和厚朴酚、厚朴酚溶出的影响。方法:采用高效液相色谱法测定黄连-厚朴药对煎煮液中和厚朴酚及厚朴酚的含量。结果:和厚朴酚在黄连∶厚朴=1∶3时溶出最多,厚朴酚在黄连∶厚朴=1∶1时溶出最多,两者总量在黄连∶厚朴1∶1时最高,2∶1时最低。结论:黄连-厚朴不同配伍比例对和厚朴酚及厚朴酚的溶出有影响,可能与黄连中的生物碱有关。     

黄连-厚朴不同配伍对生物碱成分溶出的影响

目的 探讨黄连-厚朴酸碱药对不同配伍剂量对小檗碱类生物碱成分煎出率的影响.方法 采用高效液相色谱法测定黄连-厚朴药对煎煮液中盐酸小檗碱的含量.结果 小檗碱和总生物碱的煎出率随着药对中黄连配伍剂量增大而升高,并且当黄连配伍剂量开始大于厚朴剂量时,生物碱煎出率升高趋势减缓.结论 黄连-厚朴配伍时,黄连:厚朴≥1:1时有利于黄连生物碱成分的溶出.     

配伍对半夏-厚朴药对中相关化学成分溶出的影响研究

目的:研究不同配伍比例对半夏-厚朴药对中厚朴活性成分溶出的影响。方法:建立半夏-厚朴药对指纹图谱,确定34个共有峰及属于厚朴药材的6个活性成分峰和7个未知成分峰;计算厚朴6个活性成分和7个未知成分的变化情况,分析不同配伍比例对13个指标成分的影响。结果:厚朴单煎液与半夏-厚朴药对合煎液中厚朴化学成分的溶出存在差异:在0∶1～1∶0配伍比例范围内,半夏的加入可使厚朴中绿原酸、厚朴酚及成分15、17、27的累计溶出量增加,可使紫丁香苷、木兰花碱、金丝桃苷、和厚朴酚及成分1、3、12、22的累计溶出量减少;在1∶6～4∶3配伍比例范围内,半夏的用量对木兰花碱的溶出影响属误差范围;半夏的加入可使金丝桃苷在1∶6～6∶1、成分1在2∶5～5∶1、成分12在2∶5～6∶1的配伍比例范围内变化百分率减少且具有显著性;半夏的加入可使绿原酸在2∶5～3.5∶3.5、厚朴酚在1∶6～5∶2、成分27在2∶5～6∶1的配伍比例范围内变化百分率增加且具有显著性。结论:半夏的用量对半夏-厚朴药对中厚朴相关成分的溶出有较大影响。     

黄连-厚朴药对配伍的应用数据分析

目的:探讨黄连-厚朴药对配伍在中医方剂中的应用,揭示其配伍规律及指导临床合理用药。方法:从中国中医科学院中医药信息研究所建立的"中国方剂数据库"检索出含黄连-厚朴药对的方剂475首,建立数据库,统计分析药对的配伍比例、主治疾病及疾病所属科属。结果:475首方剂中,黄连-厚朴以1∶1配比出现频次最多,为215次,占总数45.26%;所治疾病科属以内科出现频次最多,为329次,占总数69.26%;普通感冒及流感以1∶1配比出现频次最多,为10次,占用于治疗普通感冒及流感方剂总数50%。结论:运用频次统计等数据分析方法研究中药药对配比及其应用规律,可为指导临床用药提供依据。     

厚朴枳实配伍对大鼠胃动力的影响

目的:考察厚朴枳实配伍及不同煎煮时间对大鼠胃动力的影响。方法:SD大鼠ip左旋精氨酸(L-Arg)6 d建立大鼠胃动力异常模型。胃动力异常大鼠连续5 d分别ig给予厚朴提取物(10 g.kg-1)、厚朴枳实配伍提取物(20 g.kg-1),ip西沙必利(0.004 2 g.kg-1)、观察其对L-Arg所致胃动力异常大鼠胃动力的改善作用。结果:大鼠ip L-Arg造成大鼠胃动力减缓、血浆胃动素减少。厚朴、厚朴枳实配伍提取液能有效抑制L-Arg引起的大鼠胃动力下降(P<0.05)和胃动素的下降(P<0.05),厚朴与阳性药物西沙必利之间无显著性差异,厚朴枳实配伍与厚朴、西沙必利之间有显著性差异(P<0.05)。厚朴、厚朴枳实配伍、西沙必利组的胃残留率分别为(69.3±13.7)%,(60.7±12.9)%,(70.1±12.9)%,;胃动素分别为(85.4±11.2),(93.1±10.4),(86.3±12.4)nmol.L-1。厚朴枳实煎煮90 min较煎煮60,30 min大鼠胃残留率低(P<0.05),胃动素含量高(P<0.05)。煎煮90,60,30 min胃残留率分别为(47.7±12.8)%,(59.8±12.1)%,(62.7±11.8)%;胃动素分别为(102.3±10.6),(92.9±10.1),(89.6±11.2)nmol.L-1。结论:厚朴、厚朴枳实配伍提取液能显著改善L-Arg所致的大鼠胃动力障碍,厚朴枳实配伍后作用要优于单一厚朴。两者配伍以煎煮90 min为宜。     

厚朴药材高效液相指纹谱实验研究

目的:对市场流通的不同产地的厚朴及其代用品、伪品进行高效液相指纹谱(HPLC-FPS)的研究,以求找到不同产地的厚朴及其代用品、伪品的异同点。方法:应用(HPLC-FPS)建立厚朴的指纹图谱。结果:二种正品厚朴的HPLC-FPS具有相似性、特征性,且易与代用品和伪品相区别。结论:建立厚朴HPLC-FPS能为厚朴质量与植物来源的评估提供有用的信息。     

厚朴的不同配伍对其煎剂的pH值及有效成分含量的影响

目的：通过厚 不同配伍,地其煎剂的ＰＨ值有效成分的影响。方法：用不同的ＰＰＨ值溶剂地厚朴的不同配伍进行煎煮后,测春煎剂ＰＨ值及有效成分的含量结果：用０．１ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ溶液提取煎剂中厚朴酚含量显著提高。厚朴的不同配伍对煎剂ＰＨ值也有很大影响。但本实验对含量影响不显著。结论：药物不同配伍对煎剂ＰＨ值有影响,ＰＨ值对有效成分溶出有影响。     

黄连及其与肉桂药对配伍中盐酸小檗碱在大鼠体内的组织分布研究

目的:研究黄连药材提取物及黄连、肉桂药对提取物中盐酸小檗碱在大鼠体内的组织分布特征.方法:灌胃给药,采用HPLC法测定大鼠体内盐酸小檗碱的组织含量,用液-液萃取的方法提取组织样品中的盐酸小檗碱.结果:两种提取物以等剂量灌胃后,相同时间点在组织中,大鼠体内黄连、肉桂药对提取物中盐酸小檗碱的组织含量大于黄连药材提取物中盐酸小檗碱的组织含量.结论:在小肠、大肠、胃、肝、肺、脾、睾丸、心、肾、子宫、胰组织中都能检测到小檗碱,特别是胃肠道系统中的组织浓度较高,表明小檗碱在大鼠体内分布广泛.     

生姜、干姜炮制对厚朴挥发性成分影响比较

目的:探讨生姜、干姜及其炮制同一药物(厚朴)后挥发性成分的差异。方法:采用GC-MS对生姜、干姜、厚朴生品、生姜制厚朴和干姜制厚朴的挥发油类成分及其含量进行测定。结果:干姜中含有的挥发油总量高于生姜,干姜制厚朴挥发油总量也略高于生姜制厚朴;生姜中检测出9种化合物,干姜中检测出38种化合物,有4种化合物为两者共有;厚朴生品中发现16种成分,生姜制厚朴16种成分,干姜制厚朴17种成分,三者共同成分5种,生姜制厚朴和干姜制厚朴中两者共有成分14种,其中4种化合物生姜制姜厚朴相对质量分数高于干姜制姜厚朴,其余成分均为干姜制姜厚朴相对质量分数高于生姜制姜厚朴。结论:干姜和生姜制厚朴的挥发油在成分种类和含量上有一定区别,研究结果将为生姜、干姜的辅料作用差异奠定基础。     

厚朴化学成分研究进展

查阅近20年国内外报道厚朴化学成分的研究文献,系统整理其中报道的各种类型化合物,结果从厚朴和凹叶厚朴中共分离和确定的化学成分共计171种,主要有木脂素、酚酸、苯乙醇苷、生物碱、挥发油、黄酮等化合物和其他类成分,为今后厚朴资源的深入研究开发和利用提供参考。