MiR-551b-3p靶向USP9X对人肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的影响

目的:探讨miR-551b-3p对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的影响及分子机制。方法:将miRNC,miR-551b-3p,anti-miR-NC,anti-miR-551b-3p,si-NC,si-USP9X分别转染至A549中,记为miR-NC组、miR-551b-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-551b-3p组、si-NC组、si-USP9X组;将miR-551b-3p分别与pc DNA和pc DNA-USP9X共转染至A549中,记为miR-551b-3p+pc DNA组、miR-551b-3p+pc DNA-USP9X组。采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测miR-551b-3p和USP9X的表达水平;蛋白质印迹法检测X染色体连锁的泛素特定蛋白水解酶9(ubiquitin-specific peptidase 9 X-linked,USP9X)、 B细胞淋巴瘤/白血病-2 (B-cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)、 Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 related X protein,Bax)的表达;荧光素酶报告实验检测miR-551b-3p和USP9X的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;细胞克隆集落形成实验检测放射敏感性。结果:肺癌组织和肺癌细胞A549中miR-551b-3p表达水平显著降低,USP9X mRNA和蛋白质表达水平显著升高(均P<0.001)。miR-551b-3p靶向调控USP9X,过表达miR-551b-3p和抑制USP9X表达,细胞凋亡率显著升高,Bcl-2表达水平显著降低,Bax表达水平显著升高,细胞的存活曲线明显下移(均P<0.001)。USP9X过表达逆转了miR-551b-3p过表达对肺癌A549细胞凋亡和放射敏感性的作用。结论:过表达miR-551b-3p促进肺癌A549细胞凋亡,增强肺癌细胞放射敏感性,其机制可能与USP9X有关。     

miR-204-3p靶向CYP2E1介导脂多糖诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的探讨miR-204-3p靶向细胞色素P450家族2亚家族E成员1(CYP2E1)介导脂多糖(LPS)诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及细胞凋亡的分子机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,qRT-PCR与Western blot分别检测miR-204-3p、CYP2E1的表达量;实验分组:Con组、LPS组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-204-3p组、LPS+si-NC组、LPS+si-CYP2E1组、LPS+miR-204-3p+pcDNA组、LPS+miR-204-3p+pcDNA-CYP2E1组;ELISA检测IL-6、TNF-α的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-204-3p与CYP2E1的靶向结合关系;Western blot检测Bcl-2、Bax的表达量。结果与Con组比较,LPS组细胞中miR-204-3p的表达水平降低,CYP2E1的表达量升高,IL-6、TNF-α的水平升高,凋亡率和Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-204-3p组IL-6、TNF-α水平降低,凋亡率和Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS+si-NC组比较,LPS+si-CYP2E1组IL-6、TNF-α的水平降低,凋亡率和Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-204-3p能够靶向结合CYP2E1;与LPS+miR-204-3p+pcDNA组比较,LPS+miR-204-3p+pcDNA-CYP2E1组IL-6、TNF-α的水平升高,凋亡率和Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-204-3p过表达可靶向调控CYP2E1的表达从而抑制LPS诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及细胞凋亡。     

miR-15b-5p通过靶向LATS2基因调控 前列腺癌细胞侵袭、迁移以及凋亡的分子机制

目的探讨miR-15b-5p靶向大肿瘤抑制分子(LATS2)基因对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及凋亡的影响及机制。方法将anti-miR-15b-5p及anti-miR-15b-5p+si-LATS2(同时抑制miR-15b-5p和LATS2表达)转染前列腺癌PC-3细胞,48 h后,通过qRT-PCR检测miR-15b-5p mRNA表达,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。双荧光素酶报告系统检测miR-15b-5p与LATS2的靶向关系。Western blotting检测LATS2、β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达。结果 PC-3细胞转染anti-miR-15b-5p后,miR-15b-5p mRNA表达明显降低,细胞侵袭和迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P 0. 05)。miR-15b-5p与LATS2存在靶向关系,抑制LATS2表达后可明显减弱anti-miR-15b-5p对PC-3细胞侵袭、迁移、凋亡及β-catenin、MMP-2和Bax蛋白表达的影响(P 0. 05)。结论抑制miR-15b-5p可明显降低前列腺癌PC-3细胞的侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其机制与靶向LATS2抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

肺炎链球菌通过Wnt信号通路介导肺腺癌细胞A549损伤的机制研究

目的研究肺炎链球菌刺激对肺腺癌细胞A549损伤的影响及作用机制。方法体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,分为对照组和肺炎链球菌R6刺激组。R6刺激组将肺炎链球菌按照1×10~8个/ml的量加入A549细胞中进行刺激,对照组加入等体积的曲古抑素A(TSA)处理作为对照。分别处理8 h、16 h、24 h、32 h,MTT检测处理各时间点A549细胞存活情况;流式细胞仪检测R6刺激24 h后A549细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测R6刺激24 h后炎症因子白介素6(IL-6)、IL-10含量变化;Western-blot检测R6刺激24 h后A549细胞凋亡相关蛋白及Wnt通路蛋白表达。结果 R6刺激显著抑制A549细胞存活,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05),R6刺激24 h对A549细胞存活抑制效果最明显。R6刺激24 h后,A549细胞凋亡率增高,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05)。R6刺激24 h后促炎因子IL-6含量显著增加,抗炎因子IL-10含量明显降低,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05)。Western-blot结果显示R6刺激后,促凋亡因子Bax、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高,抑凋亡因子Bcl-2表达明显下降,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05),Wnt通路蛋白β-catenin、p-GSK-3β表达明显升高,p-β-catenin、GSK-3β表达明显下降,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05)。结论肺炎链球菌刺激会对肺腺癌细胞A549损伤造成损伤,这一过程与Wnt信号通路的激活有关。     

大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究

【目的】探讨大黄素对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的作用及其机制研究。【方法】肺泡上皮细胞A549随机分为对照组、模型组、20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组,对照组细胞常规培养,其余组细胞均经过肺炎链球菌感染,20μg/mL组、40μg/mL组、80μg/mL组、160μg/mL组细胞在感染后24 h分别加入不同浓度的大黄素(20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μg/mL)处理。噻唑蓝(MTT)检测各组A549细胞的增殖;流式细胞术检测凋亡率;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;蛋白质印迹法检测A549细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白水平。【结果】与对照组相比,肺炎链球菌感染的A549细胞增殖活性、Bcl-2、β-catenin、Cyclin D1蛋白水平降低(P<0.05),凋亡率及IL-6、TNF-α、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平增加(P<0.05);不同浓度大黄素促进肺炎链球菌感染的A549细胞增殖(P<0.05),抑制其凋亡(P<0.05),降低IL-6、TNF-α水平(P<0.05),增加Bcl-2蛋白水平(P<0.05),下调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白水平(P<0.05),提高β-catenin、Cyclin D1蛋白水平(P<0.05)。【结论】大黄素可能通过调节Wnt/β-catenin信号通路从而促进肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖,抑制其凋亡。     

微小RNA miR-148b-3p在人胶质瘤细胞中的表达及意义

目的检测微小RNA(microRNA,miR)-148b-3p在人胶质瘤细胞中的表达水平,并探讨其对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响。方法荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测胶质瘤细胞A172和正常星形胶质细胞HA1800中miR-148b-3p的表达水平。合成miR-148b-3p mimics及阴性对照(NC),用Lipofectamine 2000将miR-148b-3p mimics和NC转染至人胶质瘤细胞A172。分别采用噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验、流式细胞术检测转染miR-148b-3p mimics对胶质瘤细胞A172增殖、侵袭及细胞周期的影响。结果 miR-148b-3p在胶质瘤细胞A172中的相对表达量为0.27±0.06,显著低于在正常星形胶质细胞HA1800中的相对表达量1.16±0.21(P0.01)。MTT检测到miR-148b-3p mimics组A172细胞增殖率在转染后显著降低,转染24h、48h及72h后,细胞增殖率分别下降(12.33±0.46)%、(18.35±0.64)%和(30.54±1.22)%。Transwell实验结果显示miR-148b-3p mimics组A172细胞穿膜细胞数为23.1±1.8,显著低于NC组的87.1±4.6(P0.01),miR-148b-3p mimics能够抑制A172细胞的侵袭能力。流式细胞术结果显示miR-148b-3p mimics显著阻滞A172细胞从G0/G1期向S期转换。结论 miR-148b-3p在胶质瘤细胞中低表达,miR-148b-3p在胶质瘤细胞中发挥抑制肿瘤增殖和侵袭的作用。     

Caspase 3与肺炎链球菌引起的肺泡上皮细胞凋亡的关系

目的:通过肺炎链球菌体外感染肺泡上皮细胞探讨凋亡蛋白caspase 3的活性和肺泡上皮细胞凋亡率的变化及凋亡蛋白caspase 3对肺泡上皮细胞凋亡的作用.方法:体外培养肺泡上皮细胞A549,用肺炎链球菌R6体外感染A549,TUNEL法检测A549细胞凋亡,RT-PCT法检测caspase 3基因转录强度,化学荧光测定法检测caspase 3.结果:肺炎链球菌能时间依赖性地诱导A549凋亡;Caspase 3的基因翻译强度与蛋白活性随感染时间延长呈上升趋势,而且与A549细胞凋亡变化同步.结论:Caspase 3在肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡过程中起重要作用.     

华蟾素通过miR-106a-5p/STAT3信号通路调控肺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的研究华蟾素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法以0. 15μg/ml华蟾素处理肺癌A549细胞,qRT-PCR和Western blot检测miR-106a-5p和STAT3表达量,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。转染miR-106a-5p模拟剂(mimic)和STAT3 siRNA至A549细胞中,检测细胞增殖和凋亡。靶基因预测软件预测miR-106a-5p和STAT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-106a-5p抑制剂(inhibitor)和pc DNA-STAT3至A549细胞中,并用0. 15μg/ml华蟾素处理,检测细胞增殖和凋亡。结果华蟾素处理的A549细胞中,miR-106a-5p上调表达,STAT3下调表达,细胞增殖抑制率和凋亡率显著升高。过表达miR-106a-5p和抑制STAT3的表达,均可提高A549细胞增殖抑制率和凋亡率。双荧光素酶报告基因实验证实miR-106a-5p和STAT3的靶向结合关系。抑制miR-106a-5p或过表达STAT3,可逆转华蟾素对A549细胞的增殖的抑制和凋亡的促进作用。结论华蟾素可抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控miR-106a-5p/STAT3信号通路有关,上述结论可为华蟾素治疗肺癌的分子机制提供新依据。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的探讨沉默Bcl-2相关X蛋白(Bax)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法用0 ng/ml、10 ng/ml的TNF-α作用于人A549细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。A549细胞转染Bax小干扰RNA(Bax siRNA)、小干扰RNA阴性对照(siRNA control),RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。细胞分为空白对照组(未转染细胞)、TNF-α组(未转染细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、阴性对照组(转染siRNA control后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、干扰组(转染Bax siRNA后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中p38、磷酸化的p38(p-p38)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的表达。结果 10 ng/ml的TNF-α作用后的细胞中Bax mRNA和蛋白表达水平升高。转染Bax siRNA后细胞中Bax mRNA和蛋白水平均降低。空白对照组、TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞凋亡率依次为:(0.92±0.01)%、(7.94±0.19)%、(7.93±0.17)%、(4.62±0.13)%。TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显高于空白对照组(P0.01)。干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显低于TNF-α组(P0.01)。结论 TNF-α能够诱导肺泡上皮细胞凋亡,而沉默Bax能够部分逆转TNF-α促凋亡作用,作用机制可能与p38信号通路有关。     

miR-103a-3p对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：目的〓探讨miR-103a-3p在人肺癌组织中的表达及对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法：收集南通市肿瘤医院52例肺癌患者手术组织标本,qRT-PCR检测肺癌组织及癌旁组织中miR-103a-3p的表达;采用Lipofecta mineTM 3000 将miR-103a-3p mimic、mimic NC、miR-103a-3p inhibitor及inhibitor NC转染至A549细胞中,qRT-PCR检测miR-103a-3p的转染效率;CCK8实验检测其细胞增殖能力;流式细胞术检测其细胞凋亡能力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力。 结果：miR-103a-3p在肺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织（p＜0.01）;qRT-PCR结果显示,转染miR-103a-3p mimic组细胞中miR-103a-3p的表达水平明显高于mimic NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制;而转染miR-103a-3p inhibitor 组细胞中miR-103a-3p的表达水平低于inhibitor NC组,且细胞增殖、迁移和侵袭能力增强;但细胞凋亡在4组中变化均不明显。 结论：miR-103a-3p在肺癌组织中低表达,miR-103a-3p能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的作用

目的探讨过表达miR-132-3p对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡、侵袭以及迁移的影响。方法通过RT-PCR检测人子宫内膜上皮细胞HEEC和子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平。用Lipofiectamine~(TM)2000将miR-132-3p mimics及NC分别转染子宫内膜癌Ishikawa细胞,分为miR-132-3p mimics组、NC组以及对照组,对照组不做处理。通过CCK8法检测24 h、48 h、72 h后,三组Ishikawa细胞的增殖情况。流式细胞仪检测转染后三组Ishikawa细胞的凋亡情况。Transwell小室检测三组Ishikawa细胞侵袭、迁移情况。Western-blot检测三组Ishikawa细胞B淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、BCL2-Associated X(Bax)、细胞增殖抗原标记物Ki-67(Ki-67)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达水平。结果与人子宫内膜上皮细胞HEEC相比,子宫内膜癌细胞Ishikawa中miR-132-3p的表达水平显著下降。CCK8结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa增殖受到抑制,Ki-67蛋白表达水平显著下降(P0.05)。流式检测结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa的凋亡率显著升高,Bax蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。Transwell结果显示:与对照组和NC组比,miR-132-3p mimics组子宫内膜癌细胞Ishikawa侵袭及迁移能力受到抑制,MMP-2蛋白表达水平显著下降(P0.05)。结论 miR-132-3p在子宫内膜癌细胞Ishikawa中低表达,过表达miR-132-3p能够抑制细胞增殖、侵袭及迁移,并促进细胞凋亡。     

MicroRNA-146b-5p对小鼠骨片来源的间充质干细胞成脂分化能力的影响

目的:探讨MicroRNA-146b-5p(miR-146b-5p)对小鼠骨片来源间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响。方法:从C57BL/6小鼠骨片中分离培养MSC,应用q-PCR检测成脂诱导过程中miR-146b-5p表达量的变化。将miR-146b-5p mimic或inhibitor及其阴性对照转染细胞,应用q-PCR检测转染后细胞中miR-146b-5p的表达量及转染效率;并于转染培养14 d后进行油红染色,应用q-PCR检测成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表达量,Western blot检测PPARγ的表达量。结果:成功分离出小鼠骨片来源的MSC,miR-146b-5p在成脂诱导过程中随诱导天数的增加呈现上升趋势。转染miR-146b-5p mimic可上调miR-146b-5p表达(P0.001),而转染miR-146b-5p inhibitor可显著下调miR-146b-5p表达(P0.01)。培养14 d后油红染色结果表明,转染miR-146b-5p inhibitor可以抑制成脂分化,而转染miR-146b-5p mimic可促进成脂分化。诱导14 d后,与对照组相比,mimic组高表达PPARγ、C/EBPα(P0.01);与诱导组相比,inhibitor组低表达PPARγ、C/EBPα(P0.05)。mimic组PPARγ的表达量升高,而Inhibitor组则相反。结论:miR-146b-5p在小鼠MSC成脂肪分化过程中高表达,并可促进小鼠骨片来源的MSC向脂肪细胞分化。     

LncRNA NEAT1/miR-23b-3p/KLF3 轴调控结直肠癌细胞的生物学功能研究

目的 探究长链非编码核糖核酸（long non-coding RNAs,LncRNAs）NEAT1/miR-23b-3p/KLF3 调控轴对结直肠癌细胞生物学功能的影响。方法 利用癌症基因组图谱（the cancer genome atlas,TCGA）数据库分析结直肠癌组织和癌旁组织NEAT1,miR-23b-3p 和KLF3 表达水平,并计算三者之间的相关性。以结直肠癌细胞系（HT29 细胞）作为实验对象,实验被分为Control 组（空白对照组）、NC 组（空载体组）和si-NEAT1 组（NEAT1 干扰组）。CCK8 检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各组细胞的凋亡、周期情况,Transwell 检测各组细胞的侵袭情况,划痕实验检测各组细胞的迁移情况。在线工具starbase 等预测能与miR-23b-3p 靶向结合的基因,采用人胚胎肾细胞293（humanembryonic kidney cells 293,HEK293）进行双荧光素酶报告基因实验验证。qRT-PCR 检测NC 组、si-NEAT1 组、si-NEAT1+miR-23b-3p inhibitor 组（共转染si-NEAT1 和miR-23b-3p inhibitor）的miR-23b-3p 和KLF3 转录水平,免疫印记法检测以上三组KLF3 蛋白质表达水平。结果 结直肠癌组织NEAT1[5.29（4.55,5.95）], KLF3[4.94（4.62,5.24）] 表达高于癌旁组织[4.79（4.26,5.19）, 4.49（4.24,4.80）],差异有统计学意义（U=6 677, P=0.001;U=28 257.5, P ＜ 0.001),miR-23b-3p 表达低于癌旁组织[9.99（9.49,10.6） vs 10.80（10.62,10.88）],差异有统计学意义（U=2 906, P=0.004）。结直肠癌组织中,NEAT1 和KLF3 表达呈正相关（r =0.26, P ＜ 0.01）,miR-23b-3p 和NEAT1, KLF3 表达量均呈负相关（r=-0.14, P=0.008; r =-0.17, P=0.001）。与对照组相比,si-NEAT1 组使结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力降低,凋亡增加,细胞被阻滞在S 期,结果差异均有统计学意义（均P ＜ 0.05）。starbase 预测miR-23b-3p 靶基因为NEAT1 和KLF3。双荧光素酶报告基因实验也证实miR-23b-3p 分子能互补结合NEAT1 和KLF3 3’UTR。与NC 组相比,si-NEAT1组miR-23b-3p 表达上调,KLF3 转录和蛋白水平下调;与si-NEAT1 组相比,si-NEAT1+miR-23b-3p inhibitor 组miR-23b-3p 表达下调,KLF3 转录和蛋白水平上调。结论 NEAT1 可通过直接靶向HT29 细胞中的miR-23b-3p 上调KLF3 表达,增强结直肠癌细胞的增值、侵袭和迁移等。     

LncRNA NORAD靶向抑制miR-363-3p对多发性骨髓瘤细胞生物学行为的影响及机制

目的:探索长链非编码RNA NORAD(lncRNA NORAD)对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其与微小RNA-363-3p(miR-363-3p)的靶向关系。方法:RT-qPCR检测健康人成骨细胞h FOB1.19和多发性骨髓瘤细胞U266,LP-1,H929中NORAD和miR-363-3p表达。在U266细胞中转染si-NORAD,或共转染si-NORAD和anti-miR-363-3p,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。star Base软件预测结合双荧光素酶报告实验分析NORAD与miR-363-3p的靶向结合。结果:多发性骨髓瘤细胞系U266,LP-1和H929中NORAD表达明显上调(P0.05),miR-363-3p表达显著下调(P0.05)。沉默NOR A D表达显著降低48,72h的U266细胞活性和c yclin D1,CDK4,Bcl-2蛋白水平(P0.05),明显提高细胞凋亡率和cleaved caspase-3,Ba x蛋白表达量(P0.05)。NOR AD靶向调控miR-363-3p表达。抑制miR-363-3p表达逆转沉默NOR AD表达对U266细胞增殖、cyclin D1,CDK4和Bcl-2表达的抑制作用,以及逆转沉默NORAD表达对细胞凋亡、cleaved caspase-3和Bax蛋白表达的促进作用。结论:Lnc RNANOR AD通过靶向miR-363-3p表达影响多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡。     

miR-103a-3p通过调控FEZF1/CDC25A途径影响肝癌细胞的增殖和凋亡

目的探究miR-103a-3p在肝癌细胞的表达及其与锌指蛋白1(FEZF1)/细胞分裂周期25A蛋白(CDC25A)途径的关系。方法体外培养人肝癌Hep G2、BEL-7402细胞,将转染试剂、miR-103a-3p阴性对照质粒、miR-103a-3p mimis质粒分别转染细胞,命名为空白对照组、miR-103a-3p阴性转染组、miR-103a-3p过表达组。实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-103a-3p mRNMA表达;MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆形成试验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞中FEZF1、CDC25A蛋白表达情况;荧光素酶活性检测miR-103a-3p与FEZF1靶向调控关系。结果在Hep G2细胞、BEL-7402细胞中,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组miR-103a-3p mRNA表达显著升高(P0.05)。随着细胞培养时间延长,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率逐渐升高,在同一时间点,与空白对照组、阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组细胞抑制率均升高(P0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,细胞菌落数量显著降低,细胞凋亡率显著升高,G0/G1期DNA含量升高,S期细胞DNA含量下降,FEZF1、CDC25A蛋白表达均降低(P0.05)。荧光素酶活性测定显示,在3'UTR-Wt的细胞中,与阴性转染组相比,miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性显著降低(P0.05);而3'UTR-Mut的细胞中,阴性转染组与miR-103a-3p过表达组荧光素酶活性无显著差异(P0.05)。结论 miR-103a-3p过表达后能够抑制肝癌细胞的增殖,引起细胞周期G0/G1期阻滞,促进其凋亡,其机制可能与靶向调控FEZF1/CDC25A表达有关。     

miR-27a-3p靶向Rnd3对氧糖剥夺/复氧诱导的神经细胞凋亡的影响

目的 探讨miR-27a-3p调控Rho家族GTP酶3(Rnd3)在氧糖剥夺/复氧（OGD/R）神经细胞凋亡中的作用及机制。方法 体外培养大鼠PC12神经细胞，氧糖剥夺2 h后分别复氧3、6、9和12 h，检测各时刻细胞活力、miR-27a-3p和Rnd3 mRNA的表达筛选最适复氧时间点。采用慢病毒分别转染miR-27a-3p Mimic、miR-27a-3p Inhibitor及二者的阴性对照、转染shRnd3及其阴性对照、或共转染shRnd3和miR-27a-3p Inhibitor入细胞后，CCK-8法检测细胞的活力；流式细胞术检测细胞的凋亡率；RT-qPCR检测miR-27a-3p和Rnd3 mRNA的表达；Western blot检测凋亡相关蛋白和Rnd3蛋白的表达；双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a-3p和Rnd3的靶向关系。结果 上调miR-27a-3p提高了细胞活力，降低了细胞的总凋亡率、抑制了促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3(C-caspase-3)、Bax和促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，差异有统计学意义（P <0.05）；下调miR-27...     

miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程研究

目的研究miR-29a-3p是否调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。方法前瞻性选取人喉癌Hep-2细胞,分为对照组、实验组1(miR-29a-3p过表达组)、实验组2(miR-29a-3p抑制组),对照组未进行任何处理,实验组1转染miR-29a-3p模拟剂,实验组2转染miR-29a-3p抑制剂。通过qRT-PCR法检测三组细胞miR-29a-3p及COL1A1基因表达,通过western blotting法检测三组细胞COL1A1蛋白表达。采用双荧光素酶报告基因分析法验证COL1A1是否是miR-29a-3p靶基因。采用MTT比色法检测三组细胞增殖能力,采用流式细胞术检测三组细胞凋亡情况。结果 miR-29a-3p模拟剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达升高,COL1A1表达降低;miR-29a-3p抑制剂转染Hep-2细胞后miR-29a-3p表达降低,COL1A1表达升高。双荧光素酶报告基因分析法证实COL1A1是miR-29a-3p靶基因。miR-29a-3p过表达能抑制Hep-2细胞增殖,增加细胞凋亡;miR-29a-3p抑制表达能增强Hep-2细胞增殖,抑制细胞凋亡。结论 miR-29a-3p调控COL1A1参与喉癌Hep-2细胞增殖及凋亡过程。     

靶向IRF-2基因的siRNA对胰腺腺泡细胞凋亡的机制研究

目的探讨靶向干扰素调节因子2(IRF-2)基因的小干扰RNA(siRNA)对胰腺腺泡细胞凋亡的影响及机制。方法以脂质体Lipofectamine TM2000为载体,参照其转染说明将设计并合成的IRF-2的siRNA转染AR42J细胞,并设置阴性对照siRNA(NC)及空白组(仅加入脂质体)。IRF-2的siRNA及阴性对照siRNA转染AR42J细胞24 h后与雨蛙肽(10-8mol/L)同培养,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率及活性氧族(ROS)含量;Western blotting检测Bcl-2、Bax和p53的蛋白表达。结果转染IRF-2的siRNA的AR42J细胞IRF-2蛋白表达降低,与空白组比较差异具有统计学意义(P0.05)。雨蛙肽可明显诱导AR42J细胞凋亡,诱导ROS产生,上调Bax和p53蛋白表达,下调Bcl-2的蛋白表达,与NC组比较差异具有统计学意义(P0.05),而转染si-IRF-2后可降低由雨蛙肽诱导的AR42J细胞凋亡和ROS产生,下调Bax和p53蛋白表达,上调Bcl-2的蛋白表达,与NC+雨蛙肽组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论靶向IRF-2基因的siRNA可抑制胰腺腺泡细胞凋亡,机制可能与降低细胞内ROS含量及下调Bax、p53表达和上调Bcl-2表达有关。这种抑制可能与增加急性胰腺炎的炎症程度有关。     

沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响

目的:观察沉默miR-21对子宫内膜癌顺铂耐药细胞株Ishikawa/DDP的影响。方法:以Lipofectamine 2000介导miR-21抑制剂转染Ishikawa/DDP细胞株,同时设置阴性组和耐药组。采用反转录PCR检测miR-21、多药耐药基因MDR1、促凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2的表达。采用蛋白印迹法检测多药耐药蛋白P-gp、促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。采用噻唑蓝比色法检测细胞对顺铂的敏感性。采用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:与耐药组和阴性组比较,抑制剂组miR-21,MDR1和Bcl-2mRNA表达显著下调(P0.01),而Bax mRAN表达显著上调(P0.001);抑制剂组P-gp和Bcl-2蛋白表达显著低下调(P0.05),而Bax蛋白表达显著上调(P0.001)。与耐药组和阴性组比较,顺铂对抑制剂组的IC50值显著(P0.001);顺铂对抑制剂组细胞的诱导凋亡率显著增加(P0.001)。结论:沉默miR-21可显著提高Ishikawa/DDP细胞株对顺铂的敏感性,并促进细胞凋亡,其具体机制可能与下调MDR1,P-gp和Bcl-2表达,以及上调Bax表达有关。     

川芎嗪对椎间盘退变髓核细胞的作用机制

目的探讨川芎嗪对椎间盘退变髓核细胞的作用机制。方法选择成年雄性SD大鼠10只,提取并培养椎间盘髓核细胞,随机分为对照组、诱导组、川芎嗪低浓度组、川芎嗪中浓度组、川芎嗪高浓度组,分别加入0. 9%氯化钠注射液、10μg/L的白细胞介素(interleukin,IL)-1β、10μg/L的IL-1β+10μmol/L的川芎嗪、10μg/L的IL-1β+20μmol/L的川芎嗪、10μg/L的IL-1β+50μmol/L的川芎嗪。采用CCK-8检测髓核细胞增殖倍数,流式细胞学检测髓核细胞凋亡率,免疫印迹检测凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3)、髓核细胞外基质蛋白(AGG、COLⅡ和SOX-9)和p65蛋白相对表达水平。结果与对照组比较,诱导组细胞增殖倍数、Bax、AGG、COLⅡ和SOX-9蛋白表达水平减少,细胞凋亡率、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平及磷酸化p65(p-p65)、p-p65/p65水平明显升高,差异有统计学意义(P 0. 05);与诱导组比较,川芎嗪低、中、高浓度组细胞增殖倍数、Bax、AGG、COLⅡ和SOX-9蛋白水平逐渐增高,细胞凋亡率、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平及p-p65、p-p65/p65水平逐渐降低,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论川芎嗪可通过抑制IL-1β诱导的髓核细胞凋亡和p-p65缓解椎间盘退变。