生长抑素受体mRNA在颅咽管瘤中的表达及其意义

目的定量分析生长抑素受体2(SSTR2)在颅咽管瘤组织中的表达差异并探讨其临床意义。方法运用定量PCR方法对22例脑挫裂伤组织标本和36例颅咽管瘤组织的SSTR2mRNA进行相对定量检测。结果 SSTR2mRNA在颅咽管瘤组织中相对表达量为0.642±0.022,在对照组中相对表达量为0.242±0.013,差异具有统计学意义(P0.05)。SSTR2mRNA在釉质上皮型(AE)颅咽管瘤中相对表达量为0.811±0.042,在鳞形乳头瘤型(SP)颅咽管瘤中相对表达量为0.467±0.018,二者比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论 SSTR2mRNA在颅咽管瘤中呈高表达,与不同类型有关,提示其可能在颅咽管瘤的癌变过程中发挥重要作用。     

颅咽管瘤微血管超微结构透射电镜及血管内皮生长因子蛋白免疫电镜研究

目的:对颅咽管瘤组织微血管超微结构进行透射电镜观察,并从超微定位水平检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在颅咽管瘤组织中的表达,探讨其意义.方法:用透射电镜技术观察30例颅咽管瘤组织微血管超微结构,采用免疫电镜技术检测22例造釉细胞型颅咽管瘤和8例鳞状乳头型颅咽管瘤VEGF蛋白的表达.结果:透射电镜观察发现颅咽管瘤组织微血管内皮形态不规则,结构不完整,内皮细胞出现囊泡化和“开窗”现象,微血管基底膜不完整.VEGF免疫电镜显示颅咽管瘤金标VEGF颗粒位于肿瘤细胞胞浆.经定量分析发现造釉细胞型颅咽管瘤VEGF蛋白表达(23.18±6.84)高于鳞状乳头型颅咽管瘤(12.75±5.31),差异有显著性(P＜0.01).结论:颅咽管瘤微血管通透性增高可能是颅咽管瘤炎症发生发展的重要机制,肿瘤细胞可分泌VEGF参与血管通透性增加,两种病理类型颅咽管瘤VEGF蛋白表达差异性可能与其不同的肿瘤细胞增殖性和组织炎症有关.     

颅咽管瘤超微结构及Caspase-3蛋白表达的意义

目的:探讨颅咽管瘤超微结构及Caspase-3蛋白的表达和意义。方法:(1)采用Tunel法检测颅咽管瘤及正常脑组织的细胞凋亡情况,并用透射电镜观测颅咽管瘤组织超微结构及细胞凋亡表现;(2)采用免疫组化SP法检测50例颅咽管瘤及10例正常对照脑组织中Caspase-3的表达水平,分析Caspase-3表达的临床意义。结果:(1)Tunel法观察结果示颅咽管瘤组织中典型的凋亡细胞极少,凋亡指数小于1%,其临床意义很小;(2)电镜下釉质上皮型、鳞形上皮型瘤细胞超微结构有差异,而细胞凋亡不典型;(3)Caspase-3在颅咽管瘤中的表达程度强于正常对照脑组织(P=0.001),且Caspase-3的表达和分布与患者年龄、性别、病程、肿瘤大小均无相关性。结论:(1)釉质上皮型颅咽管瘤中核糖体和桥粒数量与星形细胞瘤相似,但没有大量的细胞膜突起和伪足、胶质细丝等,其具有浸润性生长的性质,但不及星形细胞瘤典型,提示釉质上皮型是介于良恶性肿瘤之间的中间型肿瘤;(2)Caspase-3在颅咽管瘤中表达,而在正常脑组织中则不表达;(3)颅咽管瘤中Caspase-3的表达与患者年龄、性别、病程、肿瘤大小等临床特征无统计学意义。     

各型甲状腺肿瘤组织中生长抑素受体的表达

目的 用原位杂交方法 观察生长抑素受体在甲状腺肿瘤组织及癌旁组织中的表达.方法 根据生长抑素受体(SSTR)亚型的基因结构设计两种cDNA探针:针对各型生长抑素受体的寡核苷酸探针以及特异性针对二型生长抑素受体(SSTR2)的寡核苷酸探针序列,并分别与各型甲状腺肿瘤组织及癌旁组织行原位杂交,采用Mias图像分析仪进行灰度分析, mRNA丰度以信号强度x-±s表示,进行t检验.结果 甲状腺髓样癌组织中SSTR的表达明显高于癌周组织(P＜0.05),SSTR2仅在癌组织中有表达.SSTR在甲状腺乳突状癌组织中的表达明显高于癌周组织(P＜0.05),SSTR2在癌组织及癌周组织内均未见有表达.滤泡性腺癌组织SSTR的表达明显高于癌周组织(P＜0.05),癌组织及癌周组织均未见有SSTR2表达.嗜酸性细胞癌组织SSTR的表达明显高于癌周组织(P＜0.05),SSTR2仅在癌组织中有表达.结论 SSTR2仅在MTC及HCC的肿瘤组织中有表达;各型甲状腺肿瘤组织均表达除SSTR2之外的其他几型SSTR中的一种或数种,且肿瘤组织中的表达强度明显高于邻近正常组织.某些靶向生长抑素受体(尤其是特异性靶向SSTR2)的化合物(配体),可能成为甲状腺肿瘤尤其是甲状腺髓样癌和嗜酸性细胞癌的特异性显像剂和靶向治疗载体.     

GHR在颅咽管瘤患者中的表达及临床意义

目的:探讨GHR在颅咽管瘤中的表达及意义.方法:前瞻性观察36例颅咽管瘤患者GHR的表达情况,其中21例釉质上皮型,设为釉质组;15例鳞状乳头型,设为鳞型组;5例对照组脑组织标本取自重型颅脑外伤行内减压术的正常脑组织.采用免疫组化、RT-PCR方法检测颅咽管瘤组织中GHR的表达.结果:与对照组相比,釉质组及鳞型组颅咽管瘤组织中,GHR表达明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);与鳞型组相比,釉质组GHR表达明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:GHR可在颅咽管瘤组织中差异性表达,并可为颅咽管瘤术后替代治疗提供依据.     

食管鳞癌血管生成拟态观察和低氧诱导因子-1α的表达及意义

目的 探讨血管生成拟态(VM)和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在食管鳞癌中的表达及意义.方法收集临床病理资料完整的食管鳞癌254 例,进行PAS-CD34 双重染色,观察食管鳞癌中是否存在VM,并计数微血管密度(MVD).采用免疫组化SP 法检测HIF-1α在食管鳞癌组织中的表达.结果 食管鳞癌中 VM 和HIF-1α表达阳性率分别为33.9%(86/254)、63.4%(161/254),显著高于正常食管黏膜组织(P < 0.01).VM 在低分化食管鳞癌组织中阳性表达[51.9%(42/81)]高于高-中分化组[25.4%(44/173)],Ⅲ～ Ⅳ期VM 阳性率[50.9%(55/108)]高于Ⅰ～Ⅱ期[21.2%(31/146)],VM 在淋巴结转移组中阳性表达 [43.1%(59/137)]高于无淋巴结转移组[23.1%(27/117)],VM 阳性组MVD 值(9.66 ±1.52)低于VM 阴性 组(13.44 ±1.57),两组间差异有统计学意义(P <0.01).Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期HIF-1α阳性率分别为 53.4%(78/146)和76.9%(83/108),HIF-1α在淋巴结转移组中阳性率[78.1%(107/137)]高于无淋巴结转 移组[46.2%(54/117)],HIF-1α阳性组的MVD 值(34.29 ±2.18)高于阴性组(26.49 ±1.85),两组间差异有 统计学意义(P <0.01).VM 与HIF-1α的表达呈正相关(r ＝0.302,P <0.01).结论 食管鳞癌中存在VM,HIF-1α高表达可能促进VM 形成.VM 与HIF-1α高表达可能是食管鳞癌浸润、转移的重要生物学标志.VM 与HIF-1α联合检测对食管鳞癌的进展及预后判断有重要意义.     

肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的影响

目的探讨肝细胞生长因子激活剂的抑制剂-1(hepatocyte growth factor activator inhibitor-1, HAI-1)基因对宫颈癌细胞自噬及凋亡调控的机制。方法对数生长期HeLa细胞分为转染组和对照组,转染组转染HAI-1质粒,对照组细胞正常培养。采用实时荧光定量PCR法检测2组细胞HAI-1 mRNA表达情况,采用AO染色和流式细胞术检测2组细胞自噬情况,采用ELISA检测2组细胞自噬相关因子LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ和Beclin-1蛋白水平,应用流式细胞仪检测2组细胞凋亡率,采用Western blot法检测细胞Bax和Bcl-2蛋白相对表达量。结果转染组细胞HAI-1 mRNA相对表达量(1.57±0.26)、AO细胞荧光强度(52.14±3.88)、LC3-Ⅱ蛋白[(3.42±0.85)μg/L]、Beclin-1蛋白[(14.69±1.96)μg/L]水平、细胞凋亡率[(86.75±6.42)%]、Bax蛋白相对表达量(1.24±0.13)和Bax/Bcl-2(7.75±0.83)高于对照组[0.48±0.09、5.47±0.32、(1.10±0.22)μg/L、(10.12±0.53)μg/L、(12.64±1.33)%、0.25±0.06、0.17±0.05)](P0.05),LC3-Ⅰ蛋白水平[(0.59±0.11)μg/L]、Bcl-2蛋白相对表达量(0.16±0.04)低于对照组[(3.26±0.82)μg/L、1.47±0.15](P0.05)。结论 HAI-1转染通过增加HeLa细胞中LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达,降低LC3-Ⅰ蛋白表达,提高Bax/Bcl-2来调节宫颈癌细胞的自噬和凋亡。     

血小板增强骨髓间充质干细胞促肿瘤转移作用

目的观察血小板作用于人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)后对肿瘤细胞转移的作用。方法体外分离培养人骨髓MSCs及健康人外周血中的血小板;实验分为MSCs组、血小板+MSCs组及肿瘤细胞上清处理血小板+MSCs组(T-血小板+MSCs),分别收集3组培养24 h后的MSCs及培养上清(SGC-7901-CM及MSCs-CM);western blot检测其肿瘤相关成纤维母细胞(CAF)标志蛋白α-SMA及Vimentin的表达;Transwell实验检测骨髓MSCs的迁移能力;流式细胞术检测SGC-7901-CM及MSCs-CM共培养后血小板P选择素的表达水平;建立BALB/c裸鼠尾静脉注射SGC-7901胃癌细胞系转移模型,观察体内肿瘤转移情况。结果 SGC-7901-CM及MSCs-CM处理的血小板P选择素的表达水平[分别为(31.4±1.71)%、(21.37±1.00)%]明显高于对照组[(3.17±0.40)%],差异有统计学意义(t分别为27.85和29.18,P均0.01);血小板+MSCs组及T-血小板+MSCs组α-SMA蛋白[分别为(0.79±0.08)、(0.90±0.06)]及Vimentin蛋白[分别为(0.88±0.01)、(0.96±0.04)]的表达水平均明显高于MSCs组[分别为(0.64±0.02)、(0.75±0.05)],差异有统计学意义(t分别为2.96和6.45,4.73和5.73,P均0.01);血小板+MSCs组及T-血小板+MSCs组迁移细胞数[分别为(340.3±27.7)个、(424.3±17.6)个]明显高于MSCs组[(220.7±19.4)个],差异有统计学意义(t分别为6.14和13.48,P均0.01);体内实验结果表明,血小板+MSCs组转移灶及T-血小板+MSCs组转移灶[分别为(4±2)个、(21±4)个]明显高于MSCs组[(0.33±0.06)个],差异有统计学意义(t分别为3.051和8.857,P均0.01)。结论血小板能促进骨髓MSCs迁移,并能增强骨髓MSCs体内促进肿瘤细胞转移能力。     

利拉鲁肽联合短期胰岛素强化治疗2型糖尿病伴肥胖患者对空腹血糖、胰岛素抵抗指数及炎性反应指标的影响

目的探讨利拉鲁肽联合短期胰岛素强化治疗2型糖尿病伴肥胖患者对空腹血糖、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及炎性反应指标的影响。方法选取2017年2月至2019年3月太原中西医结合医院内科收治的198例初诊为2型糖尿病伴肥胖的患者,男106例,女92例,年龄(53.49±7.09)岁,年龄范围为36~69岁。采用随机数表法将患者随机分为单纯治疗组与联合治疗组,每组99例。单纯治疗组患者给予短期胰岛素强化治疗,联合治疗组患者给予利拉鲁肽联合短期胰岛素强化治疗,比较两组患者治疗前后的血糖相关指标[空腹血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、餐后2 h血糖(2 hPBG)]、胰岛素分泌指数(HOMA-β)、HOMA-IR、炎性反应指标[脂联素、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]及血脂相关指标水平[甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)]的变化。结果结论治疗后,联合治疗组患者的空腹血糖[(6.87±0.72)mmol/L]、HbA1c[(7.06±0.82)%]、2 hPBG[(7.59±0.85)mmol/L]水平均低于单纯治疗组[(7.37±0.81)mmol/L、(7.69±0.74)%、(8.95±0.93)mmol/L];HOMA-β[(85.32±18.62)]高于单纯治疗组[(63.19±12.37)],HOMA-IR[(2.97±0.22)]低于单纯治疗组[(4.32±0.37)];脂联素水平[(1.76±0.16)μg/L]高于单纯治疗组[(1.38±0.14)μg/L],IL-6[(9.34±0.95)ng/L]、TNF-α水平[(29.89±4.32)ng/L]低于单纯治疗组[(12.27±1.33)ng/L、(37.18±4.87)ng/L];甘油三酯[(0.68±0.09)mmol/L]、总胆固醇[(4.48±0.79)mmol/L]、LDL-C[(2.35±0.16)mmol/L]水平低于单纯治疗组[(1.44±0.17)mmol/L、(6.08±0.76)mmol/L、(3.06±0.15)mmol/L],HDL-C水平[(1.72±0.14)mmol/L]高于单纯治疗组[(1.32±0.12)mmol/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论利拉鲁肽联合短期胰岛素强化治疗2型糖尿病伴肥胖患者能够有效控制血糖,减轻患者胰岛素抵抗及炎性反应指标,值得在临床上推广应用。     

骨髓间充质干细胞对脂多糖诱导人肺泡上皮细胞凋亡的影响及旁分泌作用

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人肺泡上皮细胞株A549细胞凋亡的影响和旁分泌作用。方法培养人骨髓MSCs和A549细胞,将A549细胞分为PBS组、PBS+MSCs组、LPS组和LPS+MSCs组,培养12h后采用Annexin V/PI双染色流式细胞仪测定A549细胞凋亡情况,采用MTT法测定细胞增殖情况,采用Western blot法检测A549细胞bcl-2和caspase-3蛋白含量,采用ELISA法测定A549细胞培养液中肝细胞生长因子和角质细胞生长因子水平。结果 LPS组、LPS+MSCs组A549细胞凋亡率[(28.65±4.75)%、(12.73±2.98)%]和培养液中肝细胞生长因子水平[(211.57±21.37)、(702.15±39.53)ng/L]高于PBS组[(2.92±0.38)%、(94.14±8.42)ng/L]和PBS+MSCs组[(2.27±0.43)%、(139.35±18.62)ng/L](P0.05),LPS+MSCs组高于LPS组(P0.05);LPS+MSCs组A549细胞的吸光度(optical density,OD)490值(0.579±0.063)和培养液中角质细胞生长因子水平[(0.594±0.045)ng/L]高于PBS组[0.261±0.027、(0.249±0.023)ng/L]、PBS+MSCs组[0.283±0.042、(0.301±0.032)ng/L]和LPS组[0.298±0.046、(0.310±0.037)ng/L](P0.05);LPS+MSCs组bcl-2蛋白表达(0.97±0.21)高于LPS组(0.54±0.08)与PBS组(0.46±0.09)及PBS+MSCs组(0.63±0.11)(P0.05);LPS组A549细胞caspase-3蛋白表达及(1.26±0.31)高于LPS+MSCs组(0.53±0.14)与PBS组(0.58±0.15)和PBS+MSCs组(0.08±0.00)(P0.05)。结论人骨髓MSCs具有抗LPS诱导的A549细胞凋亡和旁分泌的作用。     

小干扰RNA沉默DEK基因对肝癌HepG_2细胞凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默DEK基因表达对肝癌细胞株HepG_2凋亡的影响及其相关分子机制。方法常规培养人肝癌细胞株HepG_2,分为空白对照组、对照siRNA组和DEK siRNA组。对照siRNA组和DEK siRNA组在Lipofectamine~(TM) 2000脂质体介导下进行对照siRNA表达载体和DEK siRNA表达载体的转染;空白对照组正常培养,不做任何处理。采用实时PCR法检测3组细胞DEK mRNA表达情况,采用Western blot法检测3组细胞DEK蛋白、caspase-3、B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)表达情况,采用流式细胞术观察3组细胞周期和细胞凋亡率。结果转染48h后,DEK siRNA组DEK mRNA(0.420±0.050)和蛋白表达水平(0.311±0.038)及S期细胞比率[(20.713±1.529)%]、G_2/M期细胞比率[(20.030±4.833)%]、Bcl-2蛋白表达水平(0.342±0.061)明显低于空白对照组[0.826±0.052、0.691±0.073、(25.553±2.109)%、(26.560±4.766)%、0.599±0.075]和对照siRNA组[0.776±0.051、0.726±0.061、(24.210±2.463)%、(29.365±4.891)%、0.686±0.079](P0.05),G0/G1期细胞比率[(59.257±4.767)%]、细胞凋亡率[(10.325±0.791)%]、Bax(0.610±0.038)和caspase-3蛋白表达水平(0.716±0.054)高于空白对照组[(47.887±3.753)%、(5.697±0.508)%、0.280±0.059、0.373±0.044]和对照siRNA组[(46.425±3.354)%、(6.547±0.674)%、0.340±0.045、0.321±0.049](P0.05);空白对照组与对照siRNA组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论特异性DEK siRNA可针对性下调HepG_2细胞中DEK基因表达,促进HepG_2细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达、上调caspase-3和Bax表达有关。     

E2F1对食管癌细胞株ECA109生物学功能的影响及机制

目的探讨E2F1对食管癌细胞株生物学功能的影响及其调控机制。方法食管癌细胞株ECA109分为ECA109阴性对照组(对照组)、ECA109空载体组(空载体组)和ECA109-E2F1过表达组(过表达组)。对照组仅行电转染不加入质粒载体,空载体组电转染不携带E2F1基因的质粒载体,过表达组电转染E2F1过表达质粒载体。质粒转染48h后,3组采用荧光倒置显微镜观察绿色荧光的表达情况,采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况,采用PCR检测转录因子E2F1、KB抑制蛋白激酶(I kappa B kinase,IKK)、IKKβ、核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)和survivin mRNA表达情况,采用Western blot法检测E2F1、IKKα、IKKβ、NF-κB、survivin蛋白表达情况。结果过表达组绿色荧光蛋白表现为针尖状,呈强阳性表达,空载体组绿色荧光蛋白表达呈阳性,对照组未见绿色荧光蛋白表达;转染48h后,过表达组G1期细胞比例与空载体组和对照组比较差异无统计学意义(P0.05);过表达组G2期细胞比例[(9.30±4.45)%]和早期凋亡率[(16.50±3.21)%]明显低于空载体组[(18.16±1.25)%、(31.70±5.56)%]和对照组[(17.60±4.42)%、(31.46±2.73)%](P0.05),S期细胞比例[(35.66±2.99)%]明显高于空载体组[(28.86±1.80)%]和对照组[(29.83±1.84)%](P0.05);空载体组与对照组比较差异无统计学意义(P0.05);转染48h后,过表达组E2F1mRNA(1.79±0.18)和蛋白(0.535±0.003)、IKKβmRNA(0.20±0.06)和蛋白(0.394±0.044)、NF-κB mRNA(4.64±0.55)和蛋白(0.043±0.001)、survivin mRNA(2.98±0.20)和蛋白(0.039±0.001)表达水平明显高于对照组[E2F1 mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.217±0.009)、IKKβmRNA和蛋白(1.00±0.00、0.217±0.021)、NF-κB mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.014±0.002)、survivin mRNA和蛋白(1.00±0.00、0.027±0.003)]和空载体组[E2F1mRNA和蛋白(0.95±0.03、0.212±0.020)、IKKβmRNA和蛋白(0.99±0.05、0.188±0.018)、NF-κB mRNA和蛋白(0.99±0.03、0.019±0.001)、survivin mRNA和蛋白(0.95±0.03、0.025±0.002)](P0.05),IKKαmRNA(0.60±0.14)和蛋白(0.614±0.050)表达水平低于对照组(1.00±0.00、0.817±0.055)和空载体组(0.96±0.02、0.733±0.036);对照组与空载体组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 ECA109细胞株中E2F1与survivin存在表达调控关系,E2F1对survivin的表达调控通过激活NF-κB的经典激活通路,导致了survivin的转录激活。     

δ阿片受体对乳腺癌化疗耐药性的影响

目的探讨δ阿片受体(delta opium receptor,DOR)在乳腺癌多药耐药性中的作用。方法乳腺癌MCF-7细胞分为耐药组和对照组,耐药组细胞采用含阿霉素的培养液培养6周,建立耐药细胞株;对照组细胞正常培养。68例乳腺癌患者,其中化疗耐药者45例、化疗敏感者23例,取患者癌旁正常组织为正常对照组,取化疗耐药者和化疗敏感者乳腺癌组织为化疗耐药组和化疗敏感组,采用反转录PCR法检测2组细胞和3组组织中DOR mRNA表达水平,采用Western blot法检测2组细胞和3组组织中DOR蛋白表达水平。采用ELISA法检测化疗耐药组和化疗敏感组P-gp转运蛋白表达水平,分析DOR与P-gp转运蛋白表达的相关性。结果耐药组细胞DOR mRNA和蛋白表达水平[(180.4±9.4)%、(157.2±9.3)%]高于对照组[(100.0±7.2)%、(100.0±10.1)%](P0.05);化疗耐药组组织中DOR mRNA和蛋白表达水平[(269.6±15.8)%、(276.8±14.9)%]高于化疗敏感组[(187.5±12.3)%、(164.6±13.5)%]和正常对照组[(100.0±6.1)%、(100.0±10.5)%](P0.05),化疗敏感组高于正常对照组(P0.05);化疗敏感组DOR和P-gp转运蛋白高表达率(42.2%、24.4%)均明显低于化疗耐药组(78.3%、82.6%)(P0.05),化疗敏感组和化疗耐药组DOR高表达者P-gp转运蛋白高表达率(73.3%)高于DOR低表达者(26.7%)(P0.05);化疗耐药组和化疗敏感组DOR蛋白表达水平与P-gp转运蛋白表达水平呈正相关(r=0.856,P=0.030)。结论 DOR的表达与乳腺癌化疗耐药具有明显相关性,有可能成为重要的化疗耐药预测指标。     

人乳头瘤病毒感染及p53、P16、Cdc2表达与喉癌预后的关系

目的研究人乳头瘤病毒(HPV)感染及p53、P16、Cdc2表达与喉癌预后的关系。方法选择2012年6月至2013年5月在该院保留完整随访资料的喉癌手术切除标本62例,分析HPV感染和p53、P16、Cdc2表达在喉癌组织中的阳性表达情况和预后关系,肿瘤分化程度及分期和喉癌患者复发的关系。结果 HPV感染在喉癌组织中以高危型HPV-16为主,通过2年随访,发现喉癌患者中有50例未复发,12例出现复发。喉癌组织中HPV感染率为19.35%(12/62),在喉癌组织中p53阳性表达率为59.68%(37/62),P16阳性表达率为58.06%(36/62),Cdc2阳性表达率为64.52%(40/62)。HPV感染和p53、P16、Cdc2表达和喉癌的分化程度及临床分期无明显相关性(P0.05),HPV阳性喉癌患者术后复发率[0.00%(0/12)]显著低于无复发患者[24.00%(12/50)],差异有统计学意义(P0.05)。复发组喉癌患者的p53阳性表达率[58.33%(7/12)]和未复发组[60.00%(30/50)],差异无统计学意义(P0.05)。复发组喉癌患者的P16阳性表达率[83.33%(10/12)]显著高于未复发组[52.00%(26/50)],差异有统计学意义(P0.05)。复发组喉癌患者的Cdc2阳性表达率[100.00%(12/12)]显著高于未复发组[56.00%(28/50)],差异也有统计学意义(P0.05)。经Spearman等级相关分析得知,肿瘤分化程度及分期和喉癌患者的复发无明显相关性(P0.05)。结论HPV感染、p53、P16、Cdc2表达和喉癌的预后存在一定关联性。     

过表达SENP2对雌激素作用下HeLa细胞增殖与迁移的影响

目的探讨过表达类泛素修饰蛋白(small ubiquitin-related modifier, SUMO)特异性蛋白酶2(SUMO-specific protease 2, SENP2)蛋白对雌激素作用下的HeLa细胞增殖、迁移的影响和机制。方法 HeLa细胞采用不同浓度雌二醇(estradiol, E_2)作用24 h,采用Western blot法检测SUMO1、SENP2蛋白相对表达量,并选取SUMO1、SENP2相对表达量最高的E_2浓度用于后续实验。将HeLa细胞分为对照组、E_2组、Myc-SENP2组和Myc-SENP2+E_2组,其中对照组细胞正常培养;E_2组细胞加入E_2,终浓度为10~(-6) mol/L;Myc-SENP2组和Myc-SENP2+E_2组细胞采用Myc-SENP2转染,转染后Myc-SENP2组细胞正常培养,Myc-SENP2+E_2组细胞加入E_2,终浓度为10~(-6) mol/L。4组细胞培养24 h后采用Western blot法检测SUMO1蛋白相对表达量,采用EdU细胞增殖实验检测EdU阳性细胞率,采用细胞划痕实验检测细胞迁移距离。48只去胸腺小鼠随机分为4组,每组12只,分别接种对照组、E_2组、Myc-SENP2组和Myc-SENP2+E_2组细胞,比较各组小鼠皮下肿瘤体积和肿瘤质量。结果 E_2组细胞SUMO1蛋白相对表达量(0.79±0.10)、EdU阳性细胞率[(62.39±3.03)%]、细胞迁移距离[(83.20±2.94)μm]大于对照组[0.38±0.26、(37.76±3.49)%、(49.07±3.71)μm]、Myc-SENP2组[0.33±0.13、(25.95±2.39)%、(28.36±1.98)μm]和Myc-SENP2+E_2组[0.45±0.07、(32.68±2.43)%、(52.64±2.38)μm](P0.05),对照组和Myc-SENP2+E_2组大于Myc-SENP2组(P0.05),对照组与Myc-SENP2+E_2组比较差异无统计学意义(P0.05);E_2组小鼠肿瘤体积[(105.50±8.70)mm~3]和肿瘤质量[(0.13±0.02)g]大于对照组[(66.72±7.94)mm~3、(0.07±0.01)g]、Myc-SENP2组[(47.85±7.09)mm~3、(0.05±0.01)g]和Myc-SENP2+E_2组[(72.53±8.63)mm~3、(0.07±0.03)g](P0.05),对照组和Myc-SENP2+E_2组大于Myc-SENP2组(P0.05),对照组与Myc-SENP2+E_2组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论过表达SENP2能诱导HeLa细胞的蛋白质去SUMO化,抑制E_2作用下的细胞增殖和迁移。     

DcR3表达在肝癌细胞凋亡和增殖中的作用研究

目的通过体外试验探讨诱骗受体3(DcR3)对肝癌细胞凋亡和增殖的影响。方法构建DcR3慢病毒载体和慢病毒非特异性载体,转染HepG2细胞株后,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)判断转染效率。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测DcR3蛋白表达水平;并绘制生长曲线检测细胞增殖情况;采用荧光定量PCR (qPCR)方法检测细胞凋亡指标半胱天冬酶-3 (caspase 3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)转录水平变化。结果检测3株肝癌细胞HepG2、MHCC-LM3和MHCC-97H的DcR3蛋白表达水平,发现细胞株HepG2较MHCC-LM3、MHCC-97H中的DcR3蛋白表达水平明显低,差异具有统计学意义(P0.05)。上调HepG2细胞株的DcR3的mRNA水平后,细胞凋亡指标caspase 3和Bax转录水平明显下降,抗凋亡基因Bcl-2转录水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。当培养到第4天时,LV-DcR3组增殖速度[(39.45±3.61)]与LV-NC组[(25.98±5.34)]比较,差异具有统计学意义(P=0.022);当培养到第6天时,LV-DcR3组增殖速度[(65.84±6.16)]较LV-NC组[(33.34±4.55)],差异有统计学意义(P=0.002)。结论DcR3具有促进肝癌细胞增殖和抗凋亡作用,其机制可能与上调抗癌基因Bcl-2的表达有关。     

miR-326靶向MAPK/MEK信号通路抑制食管鳞状细胞癌恶性生物学行为

目的探讨miR-326靶向MAPK/MEK信号通路对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 20例食管鳞状细胞癌患者,取手术切除食管癌组织和癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测miR-326mRNA和MAPK mRNA相对表达量,采用免疫组织化学法检测MAPK蛋白表达。3种食管癌细胞系(KYSE150、EC9706、TE-9)和人正常食管上皮细胞系Het-1A,采用实时荧光定量PCR法检测细胞miR-326 mRNA和MAPK mRNA相对表达量,Western blot法检测细胞MAPK蛋白相对表达量。将对数生长期EC9706细胞随机分为miR-326组、转染对照组和空白对照组,miR-326组和转染对照组分别转染miR-326 mimic和mimic NC,空白对照组细胞不作任何处理,采用Western blot法检测细胞MAPK、p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量,克隆形成试验检测细胞克隆形成率,划痕试验检测细胞划痕闭合率,Transwell小室试验检测细胞侵袭,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,荧光素酶活性检测试剂盒检测细胞荧光素酶活性。结果食管癌组织miR-326 mRNA相对表达量低于癌旁正常组织(P0.05),MAPK mRNA相对表达量高于癌旁正常组织(P0.05)。KYSE150、EC9706和TE-9细胞miR-326 mRNA相对表达量均低于Het-1A细胞(P0.05),MAPK mRNA和MAPK蛋白相对表达量高于Het-1A细胞(P0.05),且EC9706细胞MAPK蛋白相对表达量最高。miR-326组细胞MAPK 3'UTR WT荧光素酶活性(0.53±0.05)明显低于转染对照组(1.22±0.14)(P0.05),MAPK 3'UTR MUT荧光素酶活性(0.86±0.06)与转染对照组(0.91±0.11)比较差异无统计学意义(P0.05)。miR-326组细胞MAPK蛋白相对表达量(0.32±0.15)低于转染对照组(0.88±0.07)和空白对照组(0.91±0.06)(P0.05),细胞克隆形成率[(21.30±0.55)%]、划痕闭合率[(29.47±4.12)%]和侵袭细胞数[(113.86±3.15)个]低于转染对照组[(75.43±0.81)%、(80.52±2.51)%、(427.27±4.25)个]和空白对照组[(79.13±0.65)%、(83.44±1.87)%、(468.10±3.38)个](P0.05),G_0/G_1期细胞比率[(63.15±1.20)%]和细胞凋亡率[(18.54±0.60)%]高于转染对照组[(41.18±0.60)%、(5.28±1.30)%]和空白对照组[(45.11±0.80)%、(4.13±0.90)%],S期和G_2/M期细胞比率及p-MEK、p-ERK1、p-ERK2和p-C-Jun蛋白相对表达量低于转染对照组和空白对照组(P0.05),转染对照组与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 miR-326靶向抑制MAPK/MEK信号通路的激活,影响食管鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。     

咪唑立宾对阿霉素肾病大鼠肾小球nephrin和转化生长因子β_1蛋白表达的影响

目的探讨咪唑立宾对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞相关蛋白nephrin和转化生长因子β_1(transforming growth factorβ_1,TGF-β_1)表达的影响。方法雄性SD大鼠36只,随机分为模型组、干预组和对照组各12只;模型组和干预组大鼠经尾静脉注射阿霉素6.5mg/kg建立阿霉素肾病大鼠模型,对照组注射等量生理盐水;1周后,干预组给予咪唑立宾20mg/(kg·d)灌胃,1次/d,连续8周,对照组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。8周末,检测3组大鼠24h尿蛋白定量及血生化指标,取肾脏组织行组织病理学检查,采用免疫组织化学法检测nephrin和TGF-β_1蛋白阳性表达率,采用Western blot法检测nephrin和TGF-β_1蛋白相对表达量。结果模型组和干预组大鼠24h尿蛋白定量[(334.2±79.8)、(150.8±61.2)mg]、三酰甘油[(4.98±2.23)、(1.78±1.04)mmol/L]和总胆固醇[(6.28±2.89)、(4.99±1.98)mmol/L]水平均高于对照组[(19.4±4.2)mg、(0.28±0.12)mmol/L、(1.54±0.53)mmol/L)(P0.05),血白蛋白水平[(22.80±1.11)、(26.22±1.68)g/L]低于对照组[(32.50±0.78)g/L](P0.05),模型组24h尿蛋白定量和三酰甘油水平高于干预组(P0.05),血白蛋白水平低于干预组(P0.05),总胆固醇水平与干预组比较差异无统计学意义(P0.05);3组血清肌酐水平比较差异无统计学意义(P0.05);模型组肾小球nephrin蛋白阳性表达率和相对表达量(7%、0.11±0.02)低于干预组(24%、0.49±0.06)和对照组(43%、0.79±0.08),干预组低于对照组(P0.05);模型组肾脏TGF-β_1蛋白阳性表达率和相对表达量(94%、1.03±0.08)高于干预组(78%、0.75±0.07)和对照组(45%、0.36±0.04)(P0.05),干预组高于对照组(P0.05)。结论咪唑立宾可增加肾小球nephrin表达,从而减轻足细胞损伤,抑制TGF-β_1表达,减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白的排泄,减轻及延缓肾小球硬化。     

宫颈癌组织及血清血管内皮生长因子C表达及其与淋巴转移的相关性分析

目的探讨血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)在宫颈癌组织和血清中的表达水平,及其与淋巴转移的相关性。方法宫颈癌患者28例为宫颈癌组,其中有淋巴结转移20例,无淋巴结转移8例;颈上皮内瘤变Ⅲ(cervical intraepithelial neoplasiaⅢ,CINⅢ)期患者18例为CINⅢ组;因子宫肌瘤切除子宫患者28例为正常宫颈组。采用ELISA法检测各组血清VEGF-C、VEGF受体-3(VEGF receptor-3,VEGFR-3)水平;免疫组织化学SP法测定组织中VEGF-C、淋巴管内皮透明质酸受体-1(lymphatic endothelial hyaluronic acid receptor-1,LYVE-1)表达情况及微血管密度(microvessel density,MVD)、淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD);Western blot法检测组织中VEGFR-3、LYVE-1蛋白表达情况。结果宫颈癌组血清VEGF-C[(62.19±16.67)ng/L]、VEGFR-3[(6.03±1.00)ng/L]高于正常宫颈组[(30.23±8.97)、(1.12±0.47)ng/L)和CINⅢ组[(33.76±9.41)、(1.81±0.33)ng/L](P<0.05),有淋巴结转移者VEGF-C[(76.54±15.62)ng/L]、VEGFR-3[(8.11±1.68)ng/L]高于无淋巴结转移者[(45.88±12.79)、(4.43±1.05)ng/L],差异均有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组组织中MVD(14.68±2.56)、LVD(13.09±3.01)及VEGF-C、LYVE-1蛋白阳性表达率(67.86%、75.00%)高于正常宫颈组(6.04±1.15、9.58±1.47、28.57%、32.14%)和CINⅢ组(7.15±1.08、10.01±1.34、33.33%、55.56%)(P<0.05),有淋巴结转移者组织中MVD(17.67±2.11)、LVD(15.32±2.07)及VEGF-C、LYVE-1蛋白阳性表达率(87.50%、100.00%)高于无淋巴结转移者(10.83±1.59、11.12±1.98、60.00%、65.00%)(P<0.05);宫颈癌组组织中VEGFR-3(0.732±0.104)、LYVE-1蛋白表达(0.653±0.089)高于正常宫颈组(0.112±0.001、0.395±0.013)和CINⅢ组(0.467±0.045、0.505±0.033)(P<0.01),有淋巴结转移者VEGFR-3、LYVE-1蛋白表达(0.885±0.071、0.756±0.065)高于无淋巴结转移者(0.675±0.064、0.598±0.053)(P<0.05)。结论 VEGF-C在宫颈癌组织及血清中均存在表达升高,与淋巴结转移及淋巴管生成相关,可作为宫颈癌淋巴转移的评估指标。     

微创软通道血肿穿刺引流术治疗中少量基底核区高血压脑出血的效果观察

目的探讨微创软通道血肿穿刺引流术治疗中少量基底核区高血压脑出血与保守治疗基底核区高血压脑出血的效果。方法选取2013年1月至2017年6月滨州市中心医院神经外科收治的164例中少量基底核区高血压脑出血患者,男83例,女81例,年龄(56±8)岁,年龄范围为36~77岁,采用随机数表法将其随机分为传统治疗组与微创治疗组,每组82例。于患者治疗前、治疗后14 d、1个月、3个月及6个月进行神经功能缺损评分(NDS)和日常生活能力评定(ADL);并对微创治疗组和传统治疗组两组患者在14 d、1个月、3个月及6个月时的病死率、有效率及基本痊愈率进行比较。结果治疗前两组患者NDS比较,差异无统计学意义(P>0.05);微创治疗组在治疗后14 d[(21.17±4.97)分]、1个月[(18.38±5.26)分]、3个月[(12.73±3.98)分]、6个月[(8.67±3.46)分]NDS均优于传统治疗组[(28.14±5.82)分、(26.67±5.03)分、(18.15±4.17)分、(13.19±3.54)分],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前两组患者ADL比较,差异无统计学意义(P>0.05);微创治疗组患者在治疗后14 d[(24.34±4.64)分]、1个月[(41.54±4.51)分]、3个月[(80.84±4.36)分]、6个月[(92.29±3.76)分]ADL均优于传统治疗组[(16.26±4.32)分、(20.67±4.63)分、(65.15±4.16)分、(86.86±3.61)分],差异有统计学意义(P<0.05)。微创治疗组患者治疗后14 d基本痊愈率[12.2%(10/82)]、有效率[75.6%(62/82)]、病死率[1.2%(1/82)]均优于传统治疗组[3.7%(3/82)、46.3%(38/82)、4.9%(4/82)]患者;治疗后一个月基本痊愈率[19.5%(16/82)]、有效率[84.1%(69/82)]、病死率[2.4%(2/82)]均优于传统治疗组[9.8%(8/82)、74.4%(61/82)、6.1%(5/82)]患者;治疗后三个月基本痊愈率[26.8%(22/82)]、有效率[92.7%(76/82)]、病死率[2.4%(2/82)]均优于传统治疗组[15.9%(13/82)、82.9%(68/82)、6.1%(5/82)]患者;治疗后六个月基本痊愈率[29.3%(2/82)]、有效率[95.1%(78/82)]、病死率[2.4%(2/82)]均优于传统治疗组[18.3%(5/82)、91.5%(75/82)、6.1%(5/82)]患者;差异均有统计学意义(P<0.05)。结论微创软通道血肿穿刺引流术能简单、快速清除血肿,能明显促进脑出血患者神经功能的恢复,降低患者的病死率,是治疗中少量基底核区脑出血的有效方法。