人肝癌SMMC-7721细胞受体介导内吞高密度脂蛋白-2的逆向胞饮作用

荧光素异硫氰酸酯标记高密度脂蛋白－２保持天然高密度脂蛋白－２的生物活性。人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞与荧光标记无载脂蛋白Ｅ－高密度脂蛋白－２在３７℃培养３ｈ左右，细胞结合与内吞的荧光强度分别为１３．５±０．８和９．２±０．５（±ｓ土）。细胞进一步在３７℃培养２ｈ细胞释放的三氯醋酸沉淀和三氯醋酸可溶性荧光强度分别为５．１±０．４和０．６７±０．１７．４℃培养２ｈ，细胞释放三氯醋酸沉淀荧光强度为０．４１±０．１６。结果提示：①细胞内吞高密度脂蛋白－２没有经过溶酶体分解途径；②细胞释放高密度脂蛋白－２载脂蛋白是一种取决于温度的逆向胞饮机制。     

人肝癌SMMC-7721细胞受体介导内吞高密度脂蛋白-2的逆向胞饮作用

荧光素异硫氰酸酯标记高密度脂蛋白-2保持天然高密度脂蛋白-2的生物活性。人肝癌SMMC-7721细胞与荧光标记无载脂蛋白E-高密度脂蛋白-2在37℃培养3h左右,细胞结合与内吞的荧光强度分别为13.5±0.8和9.2±0.5(±s土)。细胞进一步在37℃培养2h细胞释放的三氯醋酸沉淀和三氯醋酸可溶性荧光强度分别为5.1±0.4和0.67±0.17.4℃培养2h,细胞释放三氯醋酸沉淀荧光强度为0.41±0.16。结果提示:①细胞内吞高密度脂蛋白-2没有经过溶酶体分解途径;②细胞释放高密度脂蛋白-2载脂蛋白是一种取决于温度的逆向胞饮机制。     

PEG10基因对FAK介导的肝癌CAM-DR耐药模型中PI3K/Akt通路的影响

目的研究化疗药物顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、阿霉素(ADM)对PEG10基因稳定表达细胞LO2中FAK介导的肝癌CAM-DR耐药模型中PI3K/Akt通路的影响。方法选择PEG10基因稳定表达LO2细胞株,并构建细胞黏附介导的耐药LO2细胞模型(LO2/CAM-DR细胞),采用不同剂量的顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、阿霉素(ADM)作用LO2细胞、LO2/CAM-DR细胞,以及用FAK抑制剂预先干预的LO2/CAM-DR细胞,采用MTT法检测细胞存活率,比较各细胞组中药物的IC50及RI。Western blotting法检测药物作用后细胞中PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达水平;RT-PCR法检测药物处理后细胞中PI3K mRNA水平。结果 LO2细胞、LO2/CAM-DR细胞,以及用FAK抑制剂预先干预的LO2/CAM-DR细胞的存活率均与药物浓度呈负相关,LO2/CAM-DR细胞对药物的敏感性降低,各药作用后IC50均高于LO2细胞,DPP、5-FU和ADM的RI分别为1.345、2.551和2.643。采用FAK抑制剂预先干预的LO2/CAM-DR细胞对药物的敏感性高于LO2/CAM-DR细胞,差异有统计学意义(P0.05),与LO2细胞相比,差异无统计学意义(P0.05)。Western blotting检测结果:药物作用后LO2/CAM-DR细胞PI3K、p-AKT的表达水平均高于LO2细胞,差异有统计学意义(P0.05),采用FAK抑制剂干预后,PI3K、p-AKT的表达水平下降,PI3K mRNA也下降。结论化疗药物与FAK抑制剂的联合使用可以提高化疗药物对肝癌耐药细胞的杀伤作用,下调FAK介导的肝癌CAM-DR耐药模型中PI3K/Akt通路。     

PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞系HepG2中SP细胞的影响

[目的]探讨PI3K/Akt信号通路对肝癌细胞系HepG2中肿瘤干细胞比例及干细胞特性的影响.[方法]使用PI3K/Akt通路抑制剂处理HepG2细胞后,使用流式技术分析HepG2细胞系中的侧群（SP）细胞的变化.软琼脂克隆形成实验检测PI3K/Akt抑制剂对HepG2细胞中SP细胞和非SP细胞成克隆能力的影响.[结果]HepG2细胞中存在SP细胞,经过LY294002处理后,SP细胞比例下降.LY294002可以显著降低SP细胞的软琼脂成克隆能力,对非SP细胞的软琼脂成克隆能力影响不明显.[结论]HepG2细胞中的SP细胞具有干细胞特性,PI3K/Akt信号通路对HepG2细胞中SP细胞的维持起重要作用,抑制PI3K/Akt信号通路后HepG2细胞中的SP细胞比例明显减低,并能显著抑制SP细胞的增殖速度、软琼脂成克隆能力,增加SP细胞对化疗药物的敏感性,为更加深入地了解肝癌干细胞的特性以及探索针对肿瘤干细胞的治疗提供理论依据.     

熊果酸诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的：观察熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制及诱导其凋亡作用。方法：MTT法检测5、10、20、30、40、50μmol/L UA对SMMC-7721细胞生长的抑制作用,吖啶橙（AO）荧光染色、电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：UA能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性。35.2μmol/L UA作用SMMC-7721细胞48小时后AO染色,荧光显微镜下可见细胞出现体积缩小,核碎裂,染色质凝集等凋亡形态改变;电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变,细胞核染色质出现边聚和中聚,细胞内部分线粒体肿胀;SMMC-7721细胞凋亡率为（67.91±5.24）%,与对照组（2.95±0.56）%比较差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：UA通过诱导SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长。     

茜草蒽醌对SMMC-7721肝癌细胞的抑制作用及分子机制

目的探讨茜草提取物蒽醌单体对人SMMC-7721肝癌细胞的抑制作用及分子机制。方法将茜草蒽醌作用于体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞，采用MTY法检测其对肝癌细胞生长的抑制作用，应用TRAP-PAGE银染半定量法和RT—PCR半定量法检测端粒酶活性及端粒酶亚单位即端粒酶相关蛋白1（TP1）基因、端粒酶RNA（hTR）基因、端粒酶催化亚单位（hTERT）基因变化。结果茜草蒽醌能抑制肝癌细胞的生长，呈现与浓度、时间的依赖趋势；降低端粒酶活性，使hTERT基因的表达量明显下降（P〈0．01），而hTR、TP1基因的表达无显著变化（P〉0．05）。结论茜草蒽醌能显著抑制肝癌细胞的生长并抑制端粒酶的活性，可能与其下调hTERT基因的表达有关。     

VEGF促进肝癌SMMC-7721细胞侵袭性的自分泌机制

目的:探讨促血管内皮生长因子(VEGF)对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭力以及对该细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响,初步研究VEGF对肿瘤侵袭和转移的影响及可能的作用机制.方法:使用VEGF体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,通过细胞体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变,再分别使用30μg/L、10μg/LVEGF培养人肝癌SMMC-7721细胞,以正常培养人肝癌SMMC-7721细胞为空白对照组.使用半定量RT-PCR和Western blot法对3组细胞中MMP-9的mRNA和蛋白表达水平进行分析.结果:细胞体外侵袭实验显示,外加VEGF培养后,细胞侵袭力明显增强(P0.01);MMP-9mRNA和蛋白的表达在外加VEGF组中要明显高于空白对照组(0.479±0.025,0.665±0.024vs 0.315±0.022;0.521±0.026,0.662±0.026vs 0.366±0.025,均P<0.01),且高浓度和低浓度组之间也有明显差别.结论:肝癌SMMC-7721细胞系中存在有自分泌机制,VEGF可通过自分泌机制上调肝癌细胞的MMP-9表达,进而促进肿瘤的浸润转移.     

肝癌细胞中PI3K信号通路对骨桥蛋白表达的影响

目的研究磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）信号通路在肝癌细胞骨桥蛋白（OPN）表达调控中的作用。方法体外培养高转移性人肝癌细胞株HCCLM3,分为对照组、P13K特异性抑制剂LY294002浓度5、10、20μmol／L组,处理6h后,采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术检测OPNmRNA表达的变化。结果LY294002可使肝癌细胞HCCLM3的OPNmRNA的表达下降,且这种抑制作用随着LY294002浓度增大而增大（P〈0．01）,呈现剂量依赖性关系。结论LY294002可以抑制肝癌细胞株HCCLM3中OPN的表达,肝癌细胞OPN的表达调控受P13K信号通路调控。     

中药抗癌灵诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制研究

目的 探讨复方中药抗癌灵对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响.方法 肝癌SMMC-7721细胞,以含100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素、10% FBS的RPMI 1640培养液,在37℃、5%CO2的培养箱中培养,细胞生长至对数增殖期,更换含0、10、20、40 ml/L 抗癌灵新鲜培养液,用DDP(25 mg/L)为阳性对照组,药物作用时间均为48 h.采用MTT法检测细胞抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达.结果 与正常对照组相比,抗癌灵各浓度组细胞抑制率显著升高(P＜0.001),细胞凋亡率明显上升(P＜0.01),Caspase-3 mRNA表达显著上升(P＜0.05,P＜0.01),Survivin mRNA表达明显下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 复方中药抗癌灵具有诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调caspase-3和下调survivin基因表达有关.     

金雀异黄素诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的 探讨金雀异黄素(Genistein,Gen)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡调控的作用.方法将Gen分为5.0、10.0、20.0 μg/ml 三个浓度处理组和对照组(未加金雀异黄素),作用SMMC-7721细胞不同时间后,透射电镜观察细胞超微结构变化;免疫组化法检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,Gen处理组可使细胞核内异染色质呈块状凝集、胞质内线粒体肿胀空化,随着作用浓度增加,细胞核呈固缩状,核内异染色质趋边凝集,细胞质空化明显;免疫组化显示,随着Gen浓度增加,Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,并呈剂量依赖性(P＜0.01).结论 金雀异黄素可以诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡.上调Bax蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达可能是其诱导细胞凋亡的作用机制.     

天南星提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制的实验研究

目的研究中药天南星提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其生化机制。方法用MTT法、DNA凝胶电泳及流式细胞术等对经天南星提取物作用后培养的人肝癌SMMC-7721细胞进行观察分析。并用Westernblot检测了细胞内Caspase-3的表达。结果从2mg/ml(P<0.05)到8mg/ml(P<0.01)三组不同浓度的天南星提取物溶液均有不同程度抑瘤作用,4、8mg/ml的浓度具有明显地诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用,天南星提取物作用后,Westernblotting法和DNA梯状电泳法检测到SMMC-7721细胞内caspase-3不同程度的表达增高及发生的DNA片断化现象;流式细胞检测显示在4、8mg/ml浓度下出现了典型的二倍体峰。结论提示天南星提取物有诱导SMMC-7721细胞程序性死亡的作用,其生化机制可能是通过激活特定的传导通路caspase途径实现的。     

姜黄素通过活化PI3K/Akt信号通路逆转肝癌耐药细胞株Bel7402/ADR的耐药性

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的活化在姜黄素逆转肝癌耐药细胞株Bel7402/ADR耐药中的作用。方法采用阿霉素药物浓度递增法诱导建立肝癌耐药细胞株Bel7402/ADR;MTT法检测Bel7402/ADR细胞对阿霉素的敏感性,姜黄素对Bel7402/ADR细胞活性的影响及姜黄素对Bel7402/ADR细胞耐药逆转的作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western印迹法检测Bel7402和Bel7402/ADR细胞株中PI3K/AKT蛋白的表达水平;构建Bel7402/ADR皮下瘤模型,考察姜黄素对肿瘤生长的影响,最后通过检测小鼠体重及观察小鼠主要脏器的病理切片分析药物的在体毒性。结果 Bel7402/ADR细胞对阿霉素的半数抑制浓度(IC50)值为(1514.6±12.6)μg/ml,耐药倍数为24.3;姜黄素对Bel7402和Bel7402/ADR细胞活性均具有一定的抑制作用,IC50值分别为:(95.8±3.9)μg/ml和(101.4±3.1)μg/ml;5、10μg/ml姜黄素为Bel7402/ADR细胞无毒剂量,对Bel7402/ADR细胞的耐药逆转倍数分别为:1.97和3.51倍,并诱导细胞凋亡。姜黄素可以诱导细胞中PI3K/Akt蛋白表达水平的降低,并随着姜黄素的浓度升高而降低;姜黄素联合阿霉素可以有效抑制肿瘤生长,并表现很低的在体毒性。结论姜黄素在体和离体上可以显著逆转Bel7402/ADR的耐药性,并表现出很好的抗肿瘤效果,姜黄素的耐药逆转机制可能是抑制PI3K/Akt信号通路活化,下调PI3K/Akt蛋白表达,降低细胞对阿霉素的耐受性。     

PI3K/Akt信号转导通路与脑缺血后细胞凋亡

细胞凋亡为脑缺血时细胞死亡的重要形式之一.磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine kinase,Akt)为重要的细胞存活信号通路,c-Jun氨基端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)为重要的促进细胞凋亡信号通路.这两大通路转导信号的动态平衡维持着生理状态下的细胞生存与凋亡.脑缺血刺激打破了这一生理平衡,导致大量神经细胞凋亡.多种确切的神经保护因素都与增强细胞存活信号的放大或抑制凋亡信号的放大有关,从而维持这2个通路信号的平衡.     

PI3K/AKT信号通路与辐射抵抗机制的研究概况

辐射抵抗的三个主要机制为内在辐射敏感性、肿瘤细胞增殖和乏氧。磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路是肿瘤细胞的存活通路之一,该通路的激活与辐射抵抗密切相关。该文就PI3K/AKT信号通路与辐射抵抗机制作一综述。     

刺五加皂甙对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响

目的研究刺五加皂甙(ASS)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用。方法体外培养人肝癌SMMC-7721细胞，用浓度0.25、0．5、1．0mg／ml的刺五加皂甙作用细胞，于12、24、48h后，用苏木素-伊红(HE)染色法及电镜技术观察凋亡细胞的形态，用琼脂糖电泳显示DNA凋亡梯带。结果ASS不促进肝癌细胞的调亡，且随着剂量和时间的增加诱发凋亡程度增高。结论ASS抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖，诱导细胞凋亡，对指导临床药物治疗肝癌具有重要的意义。     

PTEN/PI3K/AKT通路缓解糖尿病视网膜病变的机制

目的研究第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)/磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路在缓解糖尿病视网膜病变中的价值与机制。方法 SD大鼠50只,随机抽取10只作为空白对照组,其余40只建立糖尿病视网膜病变大鼠模型纳入模型组。采用免疫荧光法与Western印迹法测定视网膜PTEN表达变化情况;免疫荧光法与Western印迹法测定大鼠视网膜上p-AKT与B细胞淋巴瘤(Bcl)-2分布与表达,并采用Western印迹法测定视网膜磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸(PIP3)依赖性激酶(p-PDK)1、胞质细胞色素(Cyt)C、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达,采用酶联免疫吸附试验测定PIP3表达,采用TUNEL测定视网膜细胞凋亡发生情况,记录并比较各组大鼠外核层(ONL)厚度。结果模型组大鼠建模后PTEN表达逐渐上调,并在建模后3 d达到峰值,后呈下降趋势,并在7 d恢复至正常(P0.05);空白对照组视神经元凋亡细胞未检出阳性结果,建模后第1天,在模型大鼠ONL发现凋亡细胞,第2天、第3天视神经元凋亡细胞数量显著增加,但在第7天ONL明显减少;与安慰剂组比较,bpV各剂量组p-AKT、p-PDK1、p-BAD、Bcl-2表达均显著升高,胞质CytC、Caspase-3表达均显著上调且bpV 4 000 ng/kg组bpV 400 ng/kg组bpV 40 ng/kg组(P0.05)。结论 PTEN参与糖尿病视网膜病变后感光器细胞凋亡过程,为病变模型大鼠视网膜注射PTEN特异性抑制剂,可直接激活PI3K/AKT信号通路,对线粒体通路的活化产生抑制,从而抑制视网膜神经元凋亡,缓解糖尿病视网膜病变进一步发展。     

丹参酮ⅡA对肝癌SMMC-7721细胞COX-2表达的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对肝癌SMMC-7721细胞生长和凋亡的影响及其作用机制．方法:体外培养肝癌SMMC-7721细胞株,经丹参酮ⅡA(终浓度0．5 mg／L)作用后,采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,透射电镜观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学SABC法检测COX-2蛋白表达,放射免疫法检测前列腺素E2(PGE2)含量．结果:丹参酮ⅡA对肝癌细胞的生长有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性．以0．5 mg／L作用终浓度抑制作用最明显,其48 h的抑制率为 69．3％,与对照组相比差异有显著性(P<0．01)．电镜下观察,丹参酮ⅡA作用后肝癌细胞表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡特征性的形态改变．5 mg/ L丹参酮ⅡA作用后,随时间的延长,凋亡率逐渐升高,48 h达到高峰,随后逐渐下降(24,48, 72 h凋亡率分别为7．45％±0．33％、6．59％± 0．45％、4．78％±1．05％),与对照组比较,各处理组都有显著性差异(均P<0．01),丹参酮作用组肝癌细胞COX-2表达明显减少,其培养液中 PGE2的产生量下降,与对照组相比差异均有显著性(P<0．01)．结论:丹参酮ⅡA可能是通过下调COX-2 mRNA的表达水平发挥其对肝癌细胞生长抑制及促进凋亡作用．     

韦荣氏球菌调节结直肠癌细胞PI3K通路的分子机制研究

目的探讨结直肠癌小鼠结直肠中的韦荣氏球菌Veillonellaparvula对结直肠癌细胞的影响。方法 AOM/DSS诱导C57BL/6小鼠形成结直肠癌后,收集结直肠内容物并涂布于LB平板进行培养。挑取平板上的单克隆菌落进行摇菌培养,取韦荣氏球菌Veillonellaparvula菌液上清处理结直肠癌细胞HT-29,微量滴定板法检测其活力;质谱分析上清中的蛋白质并进行纯化。用纯化的蛋白处理结直肠癌细胞HT-29,检测其活力和相关通路。结果取结直肠癌小鼠结直肠中的韦荣氏球菌Veillonellaparvula培养上清处理HT-29细胞,细胞活力显著增强(P0.05)。收集Veillonellaparvula培养上清作质谱分析,评分大于150的分泌蛋白有12个,分别是RIW09983.1、EQC65645.1、WP_004692917.1、SNU97803.1、EQC64312.1、SNU98422.1、PKZ92195.1、EQC65720.1、WP_174892117.1、WP_060919644.1、KXB83763.1和EQC67766.1。将上述蛋白纯化后以10μg/ml的浓度处理结直肠癌细胞HT-29后,其中EQC65720.1能够显著增强结直肠癌细胞HT-29的活力(P0.05)。同时,将EQC65720.1(GroEL)以10μg/ml的浓度处理结直肠癌细胞SW620、COLO 205、HCT 116、LoVo、RKO、SW480、CT26.WT和LS513,细胞活力均显著增强(P0.05)。用10μg/ml GroEL处理结直肠癌细胞HT-29,JNK、ERK、p-JNK、p-ERK和AKT的表达水平无显著变化(P0.05),p-AKT的表达水平显著增强(P0.05)。加入PI3K/AKT通路抑制剂LY294002后再用GroEL和LY294002同时处理,结直肠癌细胞HT-29的活力无显著变化(P0.05)。结论韦荣氏球菌通过分泌GroEL蛋白激活结直肠癌细胞PI3K/AKT通路,并能促进结直肠癌细胞的活力。     

去甲斑蝥素通过c-Jun氨基末端激酶通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

斑蝥素是从中药斑蝥中提取的一种抗肿瘤活性成分~([1-3]),曾试用于治疗原发性肝癌,能够缓解患者病情~([4-8]).但是斑蝥素的剧烈毒性以及对泌尿系统的严重刺激性限制了其在临床的应用~([9-12]).近年来陆续合成了不良反应少的同类药物,如斑蝥酸钠、羟基斑蝥胺及甲基斑蝥胺等.