银杏叶提取物 EGB761 对糖尿病肾病小鼠肾小管损伤及内质网应激的影响

目的探讨银杏叶提取物EGB761对糖尿病肾病(DKD)小鼠肾小管损伤及内质网应激的影响。方法将50只C57BL/6N小鼠随机分为正常组、DKD模型组、DKD+EGB761组(36 mg·kg~(-1))以及DKD+4-苯基丁酸(4-PBA)组(1 g·kg~(-1))。通过高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病小鼠模型,糖尿病模型复制成功并继续高脂饲料喂养8周后检测各组尿蛋白,阳性者给药8周,给药期间观察各组小鼠一般情况。给药8周后检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白(24 h Pro)、空腹血糖(FBG)、肾脏肥大指数;HE染色、Masson染色、PAS染色观察各组小鼠肾脏病理改变;透射电镜观察肾小球及肾小管超微结构;ELLSA法检测各组小鼠肾小管损伤标志物尿β_2-微球蛋白(β_2-MG)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的表达;以免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot)、实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime-PCR)检测肾组织内质网应激标志物GRP78、ATF6的表达。结果与正常组比,DKD模型组精神状态较差、反应迟钝、多饮多食多尿症状明显,Scr、BUN、24 h Pro、FBG、肾脏肥大指数均明显升高(P0.01),肾脏病理损伤加重,尿β_2-MG、RBP4、NGAL明显升高(P0.01),肾组织GRP78、ATF6的表达明显升高(P0.01)。与DKD模型组相比,DKD+EGB761组精神状态、反应情况及多饮多食多尿症状好转,Scr、BUN、24 h Pro、FBG水平均明显降低(P0.01),肾脏肥大指数明显降低(P0.05),肾脏病理损伤明显改善,尿β_2-MG、RBP4、NGAL表达降低(P0.05,P0.01),肾组织GRP78、ATF6蛋白的表达降低(P0.05,P0.01)。结论银杏叶提取物EGB761可以改善DKD小鼠肾功能,减少蛋白尿,减轻肾小管损伤,其作用机制可能与抑制内质网应激相关。     

祛痰通络汤对糖尿病肾病大鼠肾组织内质网应激的影响

目的观察祛痰通络汤对糖尿病肾病大鼠肾组织中内质网应激相关蛋白GRP78,Caspase12的影响。方法高糖高脂饲料联合腹腔注射STZ制备糖尿病肾病模型,随机分为正常对照组、模型组、祛痰通络汤组、四苯基丁酸组,干预8周。观察各组24 h尿蛋白定量、肌酐、肾脏病理学变化;免疫组化和Western blot检测肾组织内质网应激相关蛋白GRP78,Caspase-12的表达。结果经过祛痰通络汤治疗后,大鼠体质量上升,24 h尿蛋白定量、糖化血红蛋白、肌酐下降;病理改变减轻;模型组肾组织的GRP78、Caspase12表达明显升高;祛痰通络汤组GRP78、Caspase-12表达明显降低(均P0.05)。结论糖尿病肾病大鼠肾脏中内质网应激反应明显增强,祛痰通络汤降低内质网应激,可能是其肾脏保护作用的重要机制。     

保肾冲剂对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾组织内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78表达的影响

目的观察保肾冲剂对系膜增生性肾小球肾炎(Ms PGN)大鼠肾脏的保护作用及内质网应激(ERS)相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响,探讨其作用机制。方法将21只雄性SD大鼠随机分为造模组(14只)及空白对照组(7只)。造模组大鼠予尾静脉注射抗大鼠胸腺细胞抗血清(ATS)建立Ms PGN模型,造模成功后再随机分为模型组及中药组,每组7只。中药组给予保肾冲剂药液灌胃,空白对照组和模型组予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃,连续14周。实验结束后,观察比较各组大鼠治疗前后24 h尿蛋白定量(24 h UTP)及血肌酐(Cr)水平变化,并检测大鼠肾组织内GRP78蛋白及基因表达水平情况。结果治疗前中药组及模型组大鼠24 h UTP及Cr水平均明显高于空白对照组(P0.05),治疗后中药组大鼠24 h UTP及Cr水平较模型组均明显降低(P0.05);模型组及中药组大鼠治疗后GRP78蛋白及基因表达水平IOD值均明显高于空白对照组(P0.05),但中药组大鼠治疗后GRP78蛋白及基因表达水平IOD值均低于模型组(P0.05)。结论 Ms PGN大鼠肾脏组织GRP78表达增高,提示ERS可能参与其肾脏损害过程,而中药保肾冲剂对Ms PGN模型大鼠肾脏具有一定的保护作用,可减轻大鼠肾功能损害,降低大鼠24 h UTP及Cr水平,降低GRP78蛋白及基因表达水平,从而起到治疗作用,且抑制ERS相关蛋白GRP78的过度表达可能是其减轻肾功能损害的重要作用机制靶点之一。     

蚯蚓活性组分对内质网应激所致肝细胞凋亡的保护作用研究

该研究旨在探讨蚯蚓活性组分(EWAs)对衣霉素(tunicamycin,TM)诱导内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)所致肝细胞凋亡的保护作用。体外培养L-02细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,分别采用Western和q PCR法检测相关蛋白和mRNA的表达情况。研究发现,TM能够以时间和剂量依赖的方式降低L-02细胞的存活率,与正常组相比,模型组中L-02细胞的凋亡率和ERS相关因子GRP78,PERK,e LF2α,ATF4,CHOP,Bax的mRNA和蛋白水平均显著升高(P0.05,P0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白水平均显著下降(P0.05,P0.01)。与模型组相比,不同浓度的EWAs处理后,L-02细胞的存活率显著增加,细胞凋亡显著减少,ERS相关因子GRP78,PERK,e LF2α,ATF4,CHOP,Bax的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05,P0.01),Bcl-2的mRNA和蛋白水平明显升高(P0.05,P0.01),且呈剂量依赖性。这些结果表明,EWAs对TM诱导L-02细胞ERS所致的肝细胞凋亡具有显著的保护作用,其机制可能与下调ERS相关因子GRP78,PERK,ATF4,e LF2α,CHOP,Bax的表达,减轻L-02细胞的ERS,上调Bcl-2的表达,促进受损细胞增殖有关。     

IgA肾病中肾小球系膜细胞表型转化及肾络宁的防治作用

目的探讨IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞的表型转化及中药复方肾络宁的作用。方法SD大鼠随机分为正常组、模型组、肾络宁组、肾炎康复片组;采用牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素B复合感染的方法建立大鼠IgA肾病模型;常规检测尿红细胞、尿蛋白、血肌酐,光镜、电镜、荧光免疫观察肾组织病理;免疫组织化学染色和计算机图象分析系统观察大鼠肾小球系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达情况。结果模型组肾小球系膜区α-SMA、FN、ICAM-1明显阳性表达(P<0.01),系膜区重度IgA沉积,系膜细胞中度增生,基质增多,毛细血管狭窄,血尿及蛋白尿、血肌酐明显增高;肾络宁及肾炎康复片组α-SMA、FN、ICAM-1表达明显减低(P<0.01),IgA轻度沉积,系膜细胞及基质轻度增多,血尿、蛋白尿及血肌酐明显减低。结论IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞发生表型转化,中药复方肾络宁可明显抑制IgA肾病大鼠肾小球系膜细胞的表型转化,改善临床及病理变化,肾络宁是防治IgA肾病的有效方药。     

黄连对2型糖尿病大鼠胰腺内质网应激PERK/ATF4/CHOP信号通路的影响

目的:观察黄连对2型糖尿病大鼠的炎症因子、血糖、内质网应激信号通路蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)相关蛋白的干预作用。方法:将80只雄性SPF级大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸二甲双胍组、黄连组,每组20只。采用"10周高糖高脂饲料喂养+经腹腔注入低剂量链脲佐菌素(STZ)"方案对非正常组大鼠造模。盐酸二甲双胍组予盐酸二甲双胍0. 2 g·kg~(-1)·d~(-1),黄连组按照剂量为0. 4 g·kg~(-1)·d~(-1)给药,模型组、正常组大鼠均给予同等体积的蒸馏水,每天1次。待灌胃期终止,取血,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠的空腹血糖(FBG),C反应蛋白(CRP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用免疫组化法检测各组大鼠胰腺组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78),CHOP,ATF4蛋白的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠胰腺组织PERK,磷酸化(p)-PERK蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,TNF-α,CRP水平及ATF4,CHOP,GRP78,p-PERK蛋白表达均明显升高(P 0. 05);与模型组比较,黄连组和盐酸二甲双胍组FBG,TNF-α,CRP水平,ATF4,CHOP,GRP78,p-PERK蛋白表达均明显下降(P 0. 05)。结论:黄连能在一定程度上降低大鼠血糖,缓解炎性反应,可抑制质网应激PERK/ATF4/CHOP信号通道,减少CHOP,ATF4,GRP78,p-PERK的表达。     

抗纤灵方对阿霉素肾病大鼠肾纤维化作用机制的研究

目的观察抗纤灵方对阿霉素肾病模型大鼠肾纤维化的作用机制。方法将SD雄性大鼠随机分为7组,每组8只。其中正常组不做处理,假手术组仅于右侧肾切除,注射0.9%NaCl溶液,余下40只SD大鼠均采取右侧肾切除加尾静脉注射阿霉素制备大鼠阿霉素肾病模型。将造模成功后的大鼠分成模型组,科素亚组,抗纤灵低、中、高剂量组,分别给予相应药物共8周。观察大鼠血清肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)表达,HE染色观察肾组织病理。结果抗纤灵方能抑制模型大鼠α-SMA的表达,并减少FN的生成,差异有统计学意义(P0.05);同时降低24 h蛋白尿,降低血清肌酐、尿素氮,改善肾功能,延缓肾纤维化发展,差异有统计学意义(P0.05);随着抗纤灵剂量增加,其抗纤维化效应更明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论抗纤灵方能降低24 h尿蛋白定量,改善肾功能,使肾脏病理组织形态学改善,并且呈剂量效应。其机制可能是通过下调α-SMA的表达,抑制FN的生成,从而改善肾纤维化。     

基于内质网应激探讨淫羊藿苷对TM4细胞损伤的保护作用

目的:基于内质网应激(ERS)探讨淫羊藿苷对D-半乳糖(D-Gal)诱导的小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞损伤的保护作用。方法:将TM4细胞分为正常对照组、模型组及淫羊藿苷低(0.5μmol/L)、高(1.0μmol/L)浓度组。Western blot法检测TM4细胞紧密连接相关蛋白Occludin、Claudin-1及内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1、ATF6表达水平。结果:Western blot结果显示,与正常对照组比较,模型组细胞紧密连接相关蛋白Occludin、Claudin-1及内质网应激相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、p-IRE1、XBP1、ATF6表达显著降低(P0.01),给予淫羊藿苷干预后上述蛋白表达均显著升高(P0.05或P0.01)。结论:淫羊藿苷可减轻D-Gal诱导的TM4细胞损伤,其机制可能与上调内质网应激信号通路有关。     

基于病证结合探讨糖尿病肾病阴虚证大鼠肾损害与自噬的关系＊

目的 观察阴虚证对糖尿病肾病（Diabetic kidney disease，DKD）大鼠肾损害以及自噬变化的影响，探讨DKD阴虚证大鼠肾脏病理损害与自噬之间的关系。方法 通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，随机分为正常组、糖尿病组。12周后将糖尿病组中尿蛋白阳性的大鼠随机均分为DKD组、阴虚组，阴虚组大鼠通过左甲状腺素钠片灌胃法制备DKD阴虚证模型。每日观察大鼠一般情况。第16周处死取材，观察大鼠血肌酐（Serum creatinine，Scr）、血尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）、24 h尿蛋白定量（24-hour urinary protein，24 h Pro）、肾脏病理改变；ELISA法检测阴虚证指标-血清环磷酸腺苷（Cyclic adenosine monophosphate，cAMP）、环磷酸鸟苷（Cyclic guanosinc monophosphate，cGMP）及血清游离甲状腺素（Free Thyroxine 4，fT4）、血清皮质醇（Cortisol，Cort）、雌二醇（Estradiol，E₂）；透射电镜观察大鼠肾脏超微结构及自噬变化；免疫组化、Western Blot、RT-PCR法检测肾组织纤维化指标纤连蛋白（Fibronectin，FN）、平滑肌肌动蛋白（Alpha smooth muscle actin，α-SMA）、自噬相关Beclin-1、LC3-II、P62的蛋白及其mRNA表达。结果 与正常组比较，DKD组出现精神萎靡、多饮多食多尿、毛发粗糙等症状，阴虚客观指标血清fT4、Cort、E₂、cAMP、cAMP/cGMP比值升高、cGMP下降（P < 0.01或P < 0.05），24 h Pro、Scr、BUN升高（P < 0.01），光镜及电镜下肾脏病理损伤加重，肾组织FN、α-SMA、P62的蛋白及mRNA表达均增高（P < 0.05或P < 0.01），LC3-II、Beclin-1的蛋白及mRNA表达均下降（P < 0.05或P < 0.01）；与DKD组相比，阴虚组大鼠死亡率增加，出现急躁易怒、饮食饮水量增加、毛发粗糙无光泽、体质量下降等现象，血清fT4、Cort、E₂、cAMP、cAMP/cGMP比值（P < 0.05或P < 0.01），24 h Pro、Scr、BUN进一步升高（P < 0.01或P < 0.05），cGMP则下降（P < 0.01），同时肾脏病理损伤加重，肾组织FN、α-SMA、P62的蛋白及mRNA表达进一步增高（P < 0.01或P < 0.05），LC3-II、Beclin-1的蛋白及mRNA表达则下降（P < 0.01或P < 0.05）。结论 在病证结合模型下，阴虚证能够加重糖尿病肾病大鼠肾脏病理损伤，可能与抑制肾脏组织的自噬功能有关。     

六味地黄丸对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1-smad通路的影响

目的观察六味地黄丸对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1-smad通路的影响,探讨其治疗糖尿病肾病的作用机制。方法链脲佐菌素腹腔注射法建立大鼠糖尿病肾病模型,将造模成功大鼠随机分为模型组和六味地黄丸组,另设正常对照组。六味地黄丸组大鼠六味地黄丸灌胃,模型组和正常对照组大鼠等剂量生理盐水灌胃,治疗8周。治疗第8周末取材,检测各组大鼠体重、肾系数、血糖、血尿素氮、血肌酐、24h尿蛋白量。HE染色检测各组大鼠肾组织病理改变。Western blot检测大鼠肾组织TβR-Ⅰ、smad2、p-smad2、smad3、p-smad3、α-SMA的改变。结果与模型组相比,六味地黄丸组大鼠体重、肾系数增加,血尿素氮、血肌酐、24h尿蛋白量降低;HE染色发现模型组肾小球体积缩小,见结节样硬化,系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡样变,可见蛋白管型,间质纤维组织增生,六味地黄丸组病变有所改善。Western blot检测发现与正常组相比,模型组大鼠肾组织TβR-Ⅰ、p-smad2、p-smad3、α-SMA表达增加(P0.01),六味地黄丸组大鼠肾组织TβR-Ⅰ、p-smad2、p-smad3、α-SMA表达较模型组降低(P0.05)。结论六味地黄丸可以延缓糖尿病肾病进展,保护肾脏功能。其机制可能与抑制TGF-β1-smad信号通路相关。     

有关“病”与“证”的若干思考

文章拟从中西医对"病"及"证"的基础理论和临床认识差异角度,探讨中西医结合的发展走向"病证结合"的必然,并提出"病—证—方"的科研思路最终将会是中西医结合的根本切入点的结论。     

冠心病阳虚血瘀证动物模型研究进展

中医类的动物模型从无到有,从单纯因素刺激到多因素刺激,从个体上升到基因研究,从不可重复的模型到重复率较高的模型,结果表明中医因素与现代物理化学方法相结合所造的动物模型无疑是未来发展探索的主流。中医类的动物模型应以中医基础理论为根本,继承传统中医经典理论是发展中医的基础与关键,在继承的同时,也应充分吸收现代科技成果,创新思维,运用多学科交叉等更多科学的方法及手段开展研究,可使中医理论得到不断地充实与完善。所以在造模的同时,面临各种挑战:1证的不客观性,故积极探索中医领域中人类未发觉或是容易忽略的异常指标是很有必要的。2证的兼证很多,故要探索如何排除干扰,做针对性更强的动物模型。3少见考虑用内因,不内外因等中医因素作用于动物模型的制作上并且缺乏稳定、可靠、可重复的病证结合的动物模型。     

太阳病证解析

张仲景继承<内经>病因说,撰著<伤寒杂病论>,把由邪风所袭造成的病证命名为中风,因寒气所伤形成的疾病命名为伤寒,因暑热引发的病证命名为中,以及由寒和邪风演化形成的病证分别命名为温病和风温.     

辨证论治慢性肾病

五脏皆有气血阴阳,皆有寒热虚实,肾脏也是如此,辨明虚实消长的情况,往往能消除肾病的各种症状,能促进肾功能的恢复。在临床治疗时应谨守病机,动态求证;扶正祛邪,注重脾胃;中西医结合,优势互补;上下同治,以利邪出;合理饮食、起居,可获佳效。因此,在治疗上应注意:分清邪正多少,扶正与祛邪兼顾;顾护脾胃;调理肺卫;注意药物副作用;三因制宜。在慢性肾病中,本虚标实的观点贯穿始终,但在不同体质患者、不同时间、不同阶段可有虚实轻重的不同,这就要求根据不同情况,准确辨证再予以用药,才能取得良好的治疗效果。总之,正确地把握慢性肾病的病机特点是辨证施治的重要前提。     

多囊卵巢综合征“辨病、辨体、辨证”诊疗思路

多囊卵巢综合征是一种病因复杂、病机多端、病情较顽固的多系统、多环节、多靶点的临床表现高度异质性的女性生殖内分泌疾病,多发病于青春期和育龄期妇女。导师侯丽辉教授从事中医临床、教学、科研三十余载,长期潜心于本病的研究,创新性提出了多囊卵巢综合征中医病因病机为"痰瘀胞宫"新理论,并应用"辨病-辨体-辨证"相结合的诊疗模式进行辨证论治取得了显著疗效,为中医临床系统全面地辨治PCOS提供科学的理论依据并指导临床实践。     

探讨郁证和耳鼻喉科疾病的相关性

郁证有广义和狭义之分,通过对其病因病机的认识和阐述,认为许多耳鼻喉科疾病都可以从郁证的角度进行治疗.随着医学模式的转变,情志因素越来越受到耳鼻喉科医务工作者的重视,而情志因素也是郁证的重要致病因素,由此郁证与耳鼻喉科疾病密切相关,二者的相关性体现了辨证论治的异病同治原则.     

重视异病类证与异病类治的诊疗思维方式

目的：探讨异病类证与异病类治的诊疗思维方式的重要性。方法：基于概述病证结合模式下异病同证同治的概念和特点,提出异病类证与异病类治诊疗思维方式并进行讨论。结果：阐释了异病类证类治与方证相应、同病类证类治的关系。结论：探讨异病类证与异病类治的诊疗思维方式为中医辨证治疗提供理论依据     

冠心病心绞痛的中医辨证论治

冠心病心绞痛,其临床表现与中医心阳不振、气滞血瘀等引起的症状极为相似。因此中医把它归属于“胸痹”、“心痛”、“厥心痛”、“真心痛”等范畴。兹就该病的中医辨证论治分述如下。１　病因病机　　本病多因中老年脏腑功能渐衰,高粱厚味损伤脾胃,或七情内伤所致气滞、血瘀、痰浊内生,使脉络不通,不通则痛而发病〔１〕。《金匮要略·胸痹心痛短气病脉证治》认为：“胸痹”的主要表现为胸中气塞,心痛,短气,其病理关键为胸部的“阳气”极虚所致;故临床上往往表现出本虚标实之病证〔２〕。本虚以脏气亏虚为主;标实以血瘀痰阻为多见…     

辨证论治盆腔炎性疾病疗效的红外热像评估

目的:观察辨证论治女性盆腔炎性疾病(Pelvic inflammatory disease,PID)的临床疗效,并使用红外热像检测对其进行评估。方法:98例PID患者给予辨证论治、中成药口服及中医外治法,采用红外热像仪对所有患者治疗前后进行盆腔红外热像检测,并观察患者的临床疗效及红外疗效。结果:98例患者治疗前盆腔红外温度为(1.88±0.82)℃,治疗后盆腔红外温度为(1.36±0.59)℃,治疗后与治疗前比较,差异具有统计学意义(P0.05)。红外疗效有效率为96.9%,临床疗效有效率为99.0%,两种评估方式比较,差异无统计学意义(P0.05),提示两种评估方法的效能基本一致。结论:红外热像检测具有客观、直观、可量化、对非器质性改变同样敏感等多种优点,其评估效能与常规临床评估相近,可作为PID理想的诊疗评估手段和科研工具。