电针对脓毒症相关性脑病小鼠海马神经元焦亡的影响

目的:评价电针对脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马神经元焦亡的影响。方法:雄性C57BL/6小鼠90只,8~12周龄,体重22~25 g。采用随机数字表法分为3组( n＝30)：假手术组(Sham组)、SAE组和电针治疗组(EA组)。采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型。EA组于术后2、24、48和72 h时电...     

氢气对脓毒症相关性脑病小鼠海马线粒体动力学的影响

目的评价氢气对脓毒症相关性脑病小鼠海马线粒体动力学的影响。方法清洁级健康雄性C57小鼠224只,体重20～25 g,6～8周龄,采用随机数字表法分为4组(n=56):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H2组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)和脓毒症相关性脑病+氢气组(SAE+H2组)。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症相关性脑病模型。Sham+H2组和SAE+H2组小鼠分别于术后1和6 h时吸入2%氢气1 h。记录术后7 d生存情况。术后24 h时处死小鼠,光镜下观察海马组织CA1区病理学结果;采用荧光分光光度法检测海马组织线粒体膜电位(MMP),采用荧光素-荧光酶发光法检测线粒体ATP含量。分别于术后6、12和24 h时处死小鼠,采用Western blot法测定海马组织线粒体动力相关蛋白1(Drp1)和线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达。结果与Sham组比较,SAE组和SAE+H2组术后7 d生存率下降,海马组织MMP和线粒体ATP含量降低,Drp1表达上调,Mfn2表达下调(P<0.05),海马CA1区病理学损伤明显,Sham+H2组上述指标差异无统计学意义(P&...     

NLRP3在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系

目的评价核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系。方法 SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠24只, 6～8周龄, 体质量18～22 g, 采用随机数字表法分为3组(n=6):假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)和脓毒症相关性脑病+NLRP3抑制剂MCC950组(SAE+MCC950组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。SAE+MCC950组小鼠造模后1 h时腹腔注射MCC950 20 mg/kg, 余组注射等容量生理盐水。造模后1 d时行旷场实验, 记录站立次数和中央区停留时间;造模后2～3 d行新物体识别实验, 记录探索指数。造模后3 d行为学实验结束后, 处死小鼠取脑海马组织, 采用Western blot法检测NLRP3的表达, 采用免疫荧光技术计数NLRP3与小胶质细胞特异性离子钙结合衔接分子1(Iba-1)共表达细胞, 采用ELISA法检测caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量。结果与Sham组比较, SAE组和SAE+MCC950组站立次数减少, 中央区停留时间缩...     

鸢尾素对呼吸机相关性肺损伤大鼠细胞焦亡的影响

目的探讨鸢尾素对呼吸机相关性肺损伤大鼠细胞焦亡的影响。方法健康清洁级雄性SD大鼠36只, 体重200～250 g, 6～8周龄, 采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)、呼吸机相关性肺损伤组(V组)和呼吸机相关性肺损伤+鸢尾素组(V+I组)。V+I组机械通气前尾静脉注射鸢尾素1 μg/kg。机械通气(潮气量40 ml/kg, 通气频率60次/min, 吸呼比设为1∶2, PEEP 0, FiO2 21%)4 h后采集股动脉血样, 进行动脉血气分析, 记录PaO2, 计算氧合指数(OI);收集支气管肺泡灌洗液(BALF), 测定总蛋白浓度, 采用ELISA法测定BALF和血清IL-1β、IL-18浓度。取肺组织, HE染色后行肺损伤评分, 测定肺组织湿重/干重(W/D)比值;分别采用Western blot法和RT-PCR法检测焦亡相关蛋白消皮素D-N端(GSDMD-N)、caspase-1及其mRNA的表达水平。结果与C组比较, V组肺损伤评分和W/D比值升高, PaO2和OI降低, BALF总蛋白浓度、BALF和血清IL-1β、IL-18浓度升高, 肺组织caspase...     

氢对脓毒症相关性脑病小鼠海马A1型星形胶质细胞活化的影响

目的评价氢对脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马A1型星形胶质细胞活化的影响。方法清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠164只, 6～8周龄, 体重20～25 g。采用随机数字表法分为4组(n=41):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H2组)、SAE组和SAE+氢气组(SAE+H2组)。采用盲肠穿孔结扎法制备SAE模型。Sham+H2组和SAE+H2组分别于术后1和6 h时吸入2%氢气1 h。每组取20只小鼠, 观察术后7 d生存率。于术后12 h处死其余小鼠, 取脑组织, 光镜下观察海马CA1区病理学结果, 计算异常神经元比率;TUNEL法确定神经元凋亡率;采用免疫荧光染色法检测海马胶原纤维酸性蛋白(GFAP)与补体C3共表达情况;采用Western blot法测定海马C3表达水平, 采用ELISA法检测海马TNF-α、IL-6、高迁移率族蛋白1(HMGB1)含量;于术后7 d, 每组取6只小鼠行Y迷宫新异臂探索实验。结果与Sham组比较, SAE组术后7 d生存率降低, 海马CA1区异常神经元比率和神经元凋亡率升高, TNF-α、IL-6、HMGB1含量升高, C3表...     

细胞焦亡在结直肠癌中的研究进展

细胞焦亡是一种新的程序性细胞死亡方式, 其特征为依赖于半胱氨酸蛋白酶-1, 并伴有大量促炎性因子的释放。研究结果表明, 细胞焦亡在肿瘤的发生、发展和转移中起重要作用, 它还通过影响免疫细胞浸润影响免疫治疗结果。本综述拟探讨细胞焦亡的分子机制以及细胞焦亡在结直肠癌发生发展、治疗预后中的作用, 为临床结直肠癌的诊疗提供思路。     

HO-1在七氟烷改善小鼠脓毒症相关性脑病中的作用

目的评价血红素氧合酶-1 (HO-1)在七氟烷改善小鼠脓毒症相关性脑病中的作用。方法成年雄性C57BL/6J小鼠136只, 体重20～25 g, 6～8周龄, 采用随机数字表法分为4组(n=34):假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)、脓毒症相关性脑病+七氟烷组(SAE+Sevo组)和脓毒症相关性脑病+七氟烷+HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ组(SAE+Sevo+ZnPPⅨ组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。SAE+Sevo组和SAE+Sevo+ZnPPⅨ组分别于造模成功后立即吸入2%七氟烷-33%氧气2 h, Sham组和SAE组吸入33%氧气2 h。SAE+Sevo+ZnPPⅨ组于造模前30 min时腹腔注射HO-1抑制剂ZnPPⅨ 25 mg/kg。于造模后6、12和24 h时处死6只小鼠, 采用ELISA法检测皮层组织TNF-α、IL-1β、高迁移率族蛋白1(HMGB1)和HO-1水平, 采用Western blot法检测皮层组织HO-1表达。于造模后24 h时处死6只小鼠, 采用TUNEL染色检测皮层细胞凋亡情况, 计算细胞凋亡指数。每组取10只小...     

BNIP3L与脓毒症相关性脑病小鼠海马线粒体功能障碍的关系

目的评价BCL2/腺病毒E1B19 kDa蛋白相互作用蛋白3(BNIP3L)与脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马线粒体功能障碍的关系。方法 SPF级C57BL/6雄性小鼠180只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为4组(n=45):对照组(C组)、假手术组(Sham组)、SAE组和SAE+BNIP3L激动剂卡非佐米组(SC组)。采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症模型。SC组术后2 h腹腔注射卡非佐米2 mg/kg。各组取20只小鼠, 观察7 d生存情况。术后1周时, 取8只生存的小鼠进行水迷宫实验。其余小鼠术后24 h时处死, 取海马组织, 采用免疫荧光法测定海马组织BNIP3L表达, Western blot法测定线粒体BNIP3L表达, 并观察线粒体超微结构。采用荧光素-荧光酶发光法测定线粒体ATP含量, 荧光分光光度法测定线粒体膜电位(MMP)。结果与C组和Sham组比较, SAE组生存率降低, 逃避潜伏期延长, 目标象限停留时间和穿越原平台区域次数减少, 海马线粒体BNIP3L表达下调, MMP和线粒体ATP含量降低(P<0.05), 海马组织BNIP...     

焦亡在泌尿系肿瘤中的作用及进展

细胞焦亡被认为是一种新型的促进炎症细胞死亡程序, 其特征是快速形成膜孔、膜破裂、细胞肿胀, 并释放促炎因子。最近的研究表明, 焦亡在肿瘤的发展中起着重要作用。它可能会改变肿瘤的免疫微环境, 促进肿瘤局部坏死。本文综述了基于焦亡的分子机制、作用以及在泌尿系肿瘤中的潜在治疗意义。     

GSDME启动子甲基化通过细胞焦亡调控乳腺癌细胞化疗敏感性

目的探讨GSDME启动子甲基化通过细胞焦亡调控乳腺癌(breast cancer, BC)细胞化疗敏感性的机制。方法收集经过化疗治疗的54例BC患者组织, 分为化疗耐受组与敏感组。使用多西他赛(docetaxel, DTX)处理BC细胞以建立耐药BC细胞。CCK8检测细胞耐药性。qRT-PCR检测组织与细胞中GSDME的表达。亚硫酸盐测序法检测GSDME启动子甲基化位点的甲基化水平。干预DTX处理的BC细胞中的GSDME的表达水平, qRT-PCR检测细胞中Caspase-1、Caspase-4、IL-1β、IL-18水平, 评估细胞焦亡程度。结果相对于化疗敏感组, GSDME在化疗耐受组中的表达下调(t=6.54,P<0.001)。与MCF-10A细胞相比, MCF-10A/DTX细胞中Caspase-1(t=9.14,P<0.001)、Caspase-4(t=9.35,P<0.001)、IL-1β(t=6.13,P=0.004)、IL-18(t=5.49,P=0.005)水平均下降, 但在MCF-10A/DTX细胞中过表达GSDME后以上指标上调。GSDME启动子...     

消皮素家族介导细胞焦亡在结直肠癌中的研究进展

细胞焦亡是由Gasdermines(GSDMs)介导的一种程序性细胞死亡。GSDMs的N端结构域在质膜上形成孔隙, 使细胞膜破裂和胞内容物释放导致炎性反应, 介导细胞焦亡。细胞焦亡在炎症性疾病及恶性肿瘤中都起着重要作用。随着细胞焦亡的深入研究, 越来越多的研究结果显示细胞焦亡途径能够调控结直肠癌的肿瘤微环境和抗肿瘤免疫, 与结直肠癌的发生发展、治疗预后有着密切的关系。本文通过介绍焦亡的分子机制, 探讨细胞焦亡在结直肠癌发生发展、免疫微环境以及治疗方面的作用, 以期为结直肠癌临床诊疗提供新的见解, 为开发基于细胞焦亡途径的抗结直肠癌治疗靶点提供理论依据。     

细胞焦亡在非酒精性脂肪性肝炎中的研究进展

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)对人类健康造成了巨大威胁。大约25%的NAFLD患者发展为非酒精性脂肪性肝炎(NASH), 对我国造成了十分严重的卫生经济负担。研究人员致力于研究NASH发病的潜在分子机制, 提出新的治疗方法。近期研究表明, 炎症小体和gasdermin-D(GSDMD)介导的炎症性程序性细胞死亡与NASH的发生发展有关。本文就NASH发病机制中细胞焦亡及其相关分子的研究进展作一综述。     

氢对重度烧伤大鼠肺损伤时细胞焦亡的影响

目的评价氢对重度烧伤大鼠肺损伤时细胞焦亡的影响。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠48只, 体质量200～230 g, 6～7周龄, 采用随机数字表法分为4组(n=12):假手术组(SH组)、假手术+氢气组(SH+H2组)、烧伤组(B组)和烧伤+氢气组(B+H2组)。B组和B+H2组制备大鼠背部(约40%全身体表面积)Ⅲ度烧伤模型, SH组和SH+H2组大鼠仅背部脱毛用烫头以皮温接触。于烧伤后1和6 h时, SH+H2组和B+H2组大鼠分别在此环境中吸入2%氢气1 h。于烧伤后12和24 h时处死大鼠取肺组织, HE染色并评估肺损伤病理学评分, 采用ELISA法测定肺组织IL-1和IL-18含量, 采用Western blot法检测肺组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、caspase-1和Gasdermin D蛋白(GSDMD)的表达。结果与SH组比较, B组烧伤后12和24 h时肺损伤病理学评分升高(P<0.05);与B组比较, B+H2组烧伤后12和24 h时肺损伤病理学评分降低(P<0.05);与SH组比较, B组和B+H2组烧伤后12和24 h时肺组织...     

Nrf2信号通路在硫化氢抑制脓毒症相关性脑病小鼠脑组织炎症反应中的作用

目的评价核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路在硫化氢(H2S)抑制脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠脑组织炎症反应中的作用。方法野生型C57BL/6J小鼠54只,Nrf2-/-C57BL/6J小鼠36只,体重20～25 g,采用随机数字表法分为5组(n=18):野生型假手术组(野生型Sham组)、野生型SAE组、野生型SAE+NaHS组、Nrf2-/-SAE组和Nrf2-/-SAE+NaHS组。采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备小鼠SAE模型,于模型制备成功后3 h时腹腔注射NaHS 50 μmol/kg。于CLP后24 h时处死小鼠取脑组织,观察病理学结果,计数存活神经元,计算神经元存活率,采用Western blot法检测NLRP3的表达,采用ELISA法测定TNF-α、IL-1β和IL-6含量,采用流式细胞术检测Iba-1+CD86+、Iba-1+CD206+和Iba-1+细胞百分比。结果与野生型Sham组比较,野生型SAE组脑组织NLRP3表达上调,TNF-α、IL-1β、IL-6含量、Iba-1+CD86+和Iba-1+细胞百分比升高,Iba-1+CD206+细胞百分比和神经元...     

基于RNA-seq的脓毒症相关性脑病小鼠海马转录组分析及竞争性内源性RNA调控网络的构建

目的采用转录组测序技术(RNA-seq)筛选脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马差异表达的长链非编码RNA(lncRNA)及mRNA, 构建竞争性内源性RNA(ceRNA)调控网络。方法清洁级健康雄性C57BL/6小鼠10只, 6～8周龄, 体质量20～25 g, 采用随机数字表法分为2组(n=5):假手术组(Sham组)和脓毒症组(Sepsis组)。Sepsis组采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制备小鼠脓毒症模型, Sham组只开腹不进行盲肠结扎和穿孔。分别于术前1 d及术后3 d时行Morris水迷宫实验和条件恐惧实验检测小鼠认知功能。随后Sham组随机处死3只小鼠, Sepsis组处死认知功能测试最差的3只小鼠, 取海马组织, 通过BGISEQ-500平台行转录组测序, 得到差异表达的mRNA和lncRNA, 测序结果通过深圳华大基因科技服务有限公司提供的Dr.Tom平台行可视化分析, 利用Cytoscape软件构建ceRNA调控网络。结果与Sham组比较, Sepsis组逃避潜伏期延长, 靶向限停留时间百分比和僵直时间百分比降低(P<0.05)。转录组数据分析共获得差异表达的l...     

大鼠机械通气相关性肺损伤时蛋白激酶Cδ与细胞焦亡的关系

目的评价大鼠机械通气相关性肺损伤时蛋白激酶Cδ(PKCδ)与细胞焦亡的关系。方法清洁级健康成年雄性SD大鼠36只,体重200～250 g,采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)、机械通气相关性肺损伤组(VILI组)和PKCδ特异性抑制剂KAI 9803组(K组)。气管插管术后VILI组气管内注射200 μl磷酸缓冲盐溶液,K组气管内注射KAI 9803 200 μg/kg,行机械通气4 h(潮气量40 ml/kg、通气频率60次/min,吸呼比1∶1,吸入氧浓度21%,呼气末正压为0)。于机械通气结束时采集股动脉血样,进行动脉血气分析,记录PaO2。通气结束后麻醉处死大鼠,取肺组织,制备支气管肺泡灌洗液(BALF),光镜下观察肺组织病理学结果并行肺损伤评分,计算肺组织湿重/干重(W/D)比值,采用考马斯亮蓝法测定BALF总蛋白浓度,采用ELISA法测定BALF IL-18和IL-1β浓度,分别采用Western blot法和qRT-PCR法测定肺组织PKCδ、gasdermin D N端片段(GSDMD-N)及其mRNA的表达。结果与C组比较,VILI组和K组肺损伤评分和...     

椎间盘退变相关细胞焦亡基因的生物信息分析与功能鉴定

目的通过生物信息技术筛选与椎间盘退变相关的细胞焦亡基因, 确定其生物学功能和信号通路。方法首先, 从基因表达谱(GEO)数据库中下载GSE147383数据集, 将细胞焦亡基因与该数据集差异表达基因作交集分析, 筛选细胞焦亡差异表达基因。再者, 对获得的细胞焦亡差异表达基因进行基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析。同时, 绘制蛋白质-蛋白质相互作用网络, 筛选获得椎间盘退变细胞焦亡关键基因。其次, 通过受试者工作特征(ROC)曲线来评估关键基因的诊断价值并绘制关键基因线性预测模型。最后, 采用实时荧光定量聚合酶联反应(qRT-PCR)检测椎间盘退变髓核组织中的细胞焦亡相关基因表达水平。组间比较采用t检验。结果本研究共筛选获得8个椎间盘退变相关细胞焦亡基因, 即SR相关和CTD相关因子11(SCAF11)、富含亮氨酸重复结构域蛋白6(NLRP6)、肿瘤蛋白p53(TP53)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶4(CASP4)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、中性粒细胞弹性蛋白酶(ELANE)、常染色体隐形遗传性耳聋59蛋白(DFNB59)和常染色体显性遗传耳聋5蛋白(DFNA...     

乳脂肪球表皮生长因子Ⅷ介导的胞葬与小鼠脓毒症相关性脑病的关系

目的评价乳脂肪球表皮生长因子Ⅷ(MFG-E8)介导的胞葬与小鼠脓毒症相关性脑病的关系。方法清洁级健康雄性C57BL/6小鼠40只, 2～3月龄, 体重18～22 g, 采用随机数字表法分为4组(n=10):假手术组(Sham组)、盲肠结扎穿孔(CLP)组、假手术+PBS组(Sham+PBS组)和CLP+鼠重组MFG-E8组(CLP+rmMFG-E8组)。采用CLP法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。Sham+PBS组、CLP+rmMFG-E8组术后连续5 d于侧脑室分别注射PBS 1 μl、rmMFG-E8 1 μg。术后第6天行新物体识别实验, 第7、8天行条件恐惧实验, 计算小鼠新物体探索时间百分比、辨别指数及条件恐惧僵直反应时间。行为学测试结束后处死小鼠, 提取海马组织, 采用Western blot法检测MFG-E8、Ras相关C3肉毒素底物1的GTP结合蛋白(GTP-Rac1)表达水平, RT-PCR法检测IL-6、TNF-α及IL-1β的mRNA表达水平, TUNEL荧光法确定细胞凋亡率。结果与Sham组比较, CLP组新物体探索时间百分比、辨别指数和僵直反应时间百分比降低, ...     

电针对脓毒症相关性脑病大鼠海马神经元突触损伤的影响

目的:探讨电针对脓毒症相关性脑病大鼠海马神经元突触损伤的影响。方法:健康成年雄性SD大鼠48只,体重250～300 g,采用随机数字表法分为4组( n＝12)：假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)、脓毒症相关性脑病+电针组(SAE+EA组)和脓毒症相关性脑病+假电针组(SAE+SEA组)。...