黄芪多糖对环磷酰胺引起小鼠骨髓抑制后造血功能的修复作用

目的探究黄芪多糖对环磷酰胺诱导的骨髓抑制小鼠骨髓造血功能的修复作用。方法腹腔注射150mg/kg/d环磷酰胺3d,制备小鼠骨髓抑制模型。实验分对照组、模型组、黄芪多糖高（100 mg/kg/d）、低（50mg/kg/d）剂量组。黄芪多糖腹腔注射给药7d,眶静脉取血测外周血血常规,取右侧股骨计数骨髓细胞数,并作股骨切片进行组织病理学检查。结果①与对照组比较,模型组骨髓细胞数明显减少;与模型组比较,黄芪多糖高剂量组骨髓细胞数显著增高,且明显改善骨髓腔组织的形态学变化;②外周血的血常规结果显示,模型组的红细胞、白细胞、淋巴细胞、单核细胞及血小板与正常组比较均被明显抑制,而给予黄芪多糖的高、低剂量组不同程度的改善了外周血象。结论黄芪多糖对环磷酰胺诱导骨髓造血功能抑制有修复作用。     

环磷酰胺对小鼠遗传和生殖毒性影响的研究(1)--对骨髓细胞微核和染色体的影响

目的探讨不同剂量的环磷酰胺对小鼠骨髓细胞微核和染色体的影响。方法骨髓细胞微核试验,40只小鼠随机分为4组,3个实验组分别腹腔注射环磷酰胺10mg/kg、20 mg/kg、40 mg/kg,于染毒后24 h、48 h取小鼠胸骨髓,计数小鼠骨髓细胞微核率;骨髓染色体畸变试验,16只小鼠随机分为实验组和对照组,实验组小鼠腹腔注射环磷酰胺30 mg/kg,连续5 d染毒,第5 d 染毒后6 h取双侧股骨骨髓,计数小鼠染色体畸变率,评价环磷酰胺对小鼠的毒性作用程度。结果小鼠腹腔注射环磷酰胺各剂量组骨髓细胞微核发生率显著高于对照组(P<0．05);染色体畸变率亦高于对照组,且有非常显著性差异(P<0．01)。结论腹腔注射环磷酰胺可诱导小鼠染色体损伤。     

当归补血汤对化疗所致骨髓抑制小鼠的影响

目的 观察当归补血汤方对化疗所致骨髓抑制小鼠的影响.方法 将44只NH小鼠随机分为空白组(n=13)、对照组(n=15)、中药组(n=16).空白组予腹腔注射生理盐水,剂量为150mg/kg;后两组均腹腔注射环磷酰胺150mg/kg复制小鼠骨髓抑制模型,1d后全部经目内眦眼底取血,检测血常规.中药组予当归补血汤10mL/kg 灌胃,2次/d,连续10d.结果 中药组外周血白细胞及血小板较对照组显著升高.结论 当归补血汤明显升高放化疗后骨髓抑制所致的外周血白细胞及血小板的减少.     

益精方对环磷酰胺小鼠少弱精症模型精子凋亡的干预作用

目的 探讨补肾益精、补血活血中药方剂益精方对环磷酰胺小鼠少弱精模型精子凋亡的影响.方法 将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组、小剂量治疗组和大剂量治疗组.按60 mg/kg给对照组小鼠腹腔注射生理盐水,60 mg/kg给模型组、小剂量治疗组、大剂量治疗组小鼠腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续5 d.第6天开始按体重...     

川芎嗪对CVB3感染小鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨川芎嗪对病毒性心肌炎(VM)小鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 将50只BALB/c小鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,每组10只.A组腹腔注射生理盐水0.5 mL;B、C、D、E组均腹腔注射柯萨奇病毒B组(CVB 3)0.5 mL诱导小鼠,建立VM模型.1 d后,A、B组给予腹腔注射生理盐水10 mg·kg-1,1次·d-1,连用7 d;C、D、E组分别腹腔注射盐酸川芎嗪注射液5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、15 mg·kg-1,1次·d-1,均连用7 d;9 d 后处死小鼠.采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡;光镜下观察心肌病理变化;免疫组织化学技术检测各组小鼠心肌细胞中Fas/FasL蛋白的表达.结果 心肌病理变化:A组无病变;心肌病变积分B组明显高于C、D、E组(均P＜0.01);细胞凋亡:与A组比较,B、C、D、E组细胞凋亡指数明显升高(P＜0.01或P＜0.05),与B组比较C、D、E组细胞凋亡指数明显降低(P＜0.01);Fas/FasL蛋白阳性染色指数:B、C、D、E组均显著高于A组(P＜0.01或P＜0.05),C、D、E组显著低于B组(P＜0.01).结论 川芎嗪可通过下调病毒性心肌炎小鼠心肌细胞Fas/FasL蛋白表达,减少心肌细胞凋亡和心肌损伤.     

八珍汤对骨髓抑制小鼠骨髓细胞BaxmRNA的影响

目的:观察八珍汤对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,探讨其造血调控作用机制。方法:将实验小鼠分为正常对照组、模型组和八珍汤低、中、高剂量组,除正常组外,其它四组采用Co60γ照射和注射环磷酰胺复合制备骨髓抑制小鼠模型。造模完成的第2天开始给药,正常对照组和模型组每只小鼠灌胃0.2ml/d的生理盐水;八珍汤低、中、高剂量组分别给予5、10、15mg/kg,给药7d后采用原位杂交技术测定骨髓细胞凋亡相关蛋白BaxmRNA表达的影响。结果:八珍汤各组均能降低骨髓细胞中BaxmRNA的表达,而以中剂量组效果最为显著。结论:八珍汤能拮抗骨髓细胞凋亡、促进骨髓造血功能的恢复。     

胸腺肽降低环磷酰胺诱导的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的初步研究

目的　探讨胸腺肽对遗传损伤的作用。方法　以每天 2 5 0mg kg(高剂量组 )、12 5mg kg(低剂量组 )的胸腺肽连续 10d小鼠腹腔注射给药 ,实验另设以生理盐水 10ml kg代替胸腺肽的阴性对照组 ;于第 9、10两天以 40mg kg剂量腹腔注射染色体断裂剂环磷酰胺 ,环磷酰胺末次注射后 6h处死小鼠 ,检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率。结果　胸腺肽能显著降低环磷酰胺诱导的微核率 ,与阴性对照组相比P均小于 0 0 1,高低两个胸腺肽剂量组及阴性对照组的微核率分别为 (12 5 0± 3 88)‰、(14 75± 3 42 )‰ ,(2 2 5 8± 4 98)‰。结论　胸腺肽具有拮抗或修复环磷酰胺诱导的遗传损伤作用。     

环磷酰胺诱导小鼠免疫功能低下模型建立与评价

目的建立环磷酰胺致免疫低下模型,评价不同剂量环磷酰胺对正常小鼠免疫抑制的作用效果,探究环磷酰胺免疫抑制小鼠的适宜剂量。方法采取不同时间给予正常小鼠腹腔注射不同剂量(40,80,100mg·kg^-1·d^-1)的环磷酰胺,分别建立免疫低下模型,通过免疫脏器指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞、CCK-8法检测淋巴细胞增殖、ELISA法检测血清中IgM的表达水平探讨环磷酰胺对小鼠免疫功能的影响。结果腹腔注射环磷酰胺3个剂量组(40,80,100mg·kg^-1·d^-1)的正常小鼠均能不同程度表现免疫脏器指数下降、单核巨噬细胞吞噬能力降低、淋巴细胞增殖能力及小鼠血清溶血素表达水平低下现象。结论正常小鼠腹腔注射不同浓度的环磷酰胺(40,80,100mg·kg^-1·d^-1),可建立免疫抑制模型,并且连续3d腹腔注射剂量为80mg·kg^-1·d^-1的环磷酰胺可以显著降低小鼠免疫功能,其效果最明显,适用于建立免疫低下模型。     

双向排斥反应联体动物模型的建立

目的 探讨在异基因成年小鼠之间建立联体模型用以研究双向排斥反应。方法 54只雄性C57BL/6(H-2b,C57)小鼠和54只雌性Balb/c(H-2d)小鼠配对分为3组:1组(注射生理盐水)、2组(注射脾细胞+环磷酰胺)、3组(注射脾细胞+环磷酰胺+环孢素A)。于术中经尾静脉注入对方的脾细胞;术前3d和术后1周每日分别腹腔注射环孢素A(30mg·kg·d^-1);术后2d腹腔注射环磷酰胺(150mg/kg)1次。对经以上处理的部分联体小鼠在术后1周后分开,相互植皮。观察联体维持时间,并分别检测其混合淋巴细胞反应和诱导迟发型超敏反应(DTH)。结果 第3组联体时间明显延长;第3组联体小鼠DTH,2、3组显示明显抑制,但3组小鼠抑制程度明显比第2组小鼠深。结论 应用免疫抑制剂,可成功建立双向排斥反应联体动物模型。     

精原干细胞移植受体鼠模型的建立

目的通过对4周龄昆明白小鼠腹腔内单次注射白消安来制作精原干细胞移植受体鼠模型。方法将实验动物分为4组,A、B、C组注射白消安的剂量分别是30 mg/kg4、0 mg/kg5、0 mg/kg体重,D组为对照组。注射后每天记录小鼠的存活情况,注射白消安后的20 d3、0 d4、0 d称量睾丸重量、测定血常规、制作并观察睾丸组织学切片、统计曲细精管的中空率。结果A、B、C、D组的死亡率分别是25.00%3、1.58%、80.00%、0.00%,注射白消安后30 d各组小鼠曲细精管中空率分别是45.25%、75.25%、1.50%、0.00%,白细胞、红细胞、血小板数量等血常规指标均恢复正常。结论腹腔内单次注射30 mg/kg或40 mg/kg剂量的白消安,死亡率较低(25.00%、31.58%),30 d后曲细精管中空率较高(45.25%7、5.25%)、血常规指标恢复正常,适合做精原干细胞移植受体。     

化疗减毒汤对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制的保护作用

目的 研究化疗减毒汤的应用对环磷酰胺造模小鼠外周血中白细胞（WBC）、血红蛋白（HGB）及血小板（PLT）水平的影响。方法 实验小鼠随机分为6组:正常对照组、环磷酰胺骨髓抑制模型组（模型组）、重组人粒细胞集落刺激因子（G-CSF）组及化疗减毒汤大、中、小剂量组(实验大、中、小剂量组)。采用小鼠腹腔注射环磷酰胺建立骨髓抑制模型（40 mg/kg,1次/d,连续10 d),化疗减毒汤组分别灌胃大、中、小剂量化疗减毒汤（原生药40 g/kg、20 g/kg、10 g/kg）,1次/d,连续给药2周,G-CSF组皮下注射G-CSF注射液（每次取血前3 d皮下注射G-CSF 50 μg/kg）,造模后7 d、14 d尾静脉取血检测WBC、HGB、PLT水平。结果 给药7 d后,化疗减毒汤可有效减缓环磷酰胺造模小鼠WBC、HGB、PLT水平的下降（ P<0.05）。造模14 d后,化疗减毒汤小剂量组小鼠血液WBC数量高于模型组（ P<0.05）, 化疗减毒汤大、小剂量组小鼠血液HGB浓度也较模型组升高（ P<0.05）。结论 [HTSS]化疗减毒汤可以促进环磷酰胺造模小鼠外周血中白细胞、血红蛋白及血小板水平的恢复。     

Establishment of a mouse model of cyclophosphamide-induced thrombocytopenia and determination of platelet function in this model]

OBJECTIVE: To establish a mouse model of acute hematopoietic failure and explore the pathological basis of platelet changes in bone marrow suppression. METHODS: An initial large dose of cyclophosphamide (200 mg/kg) was injected through the tail veins of the mice, follow by daily intraperitoneal injection starting on the next day for 7 d. The number and morphology of the cells in the peripheral blood and bone marrow were observed by means of cell counting and smear, respectively, with the platelet aggregation determined using ADP. The coagulation time was measure by turbidimetry. RESULTS: The amount of platelets, erythrocytes, leukocytes and the nucleated cells in mice bone marrow was significantly lowered in the mouse models in comparison with the control mice, and the normal hematopoietic tissues were depressed. The blood platelets in the models were lowered by 49%, an amplitude of declination significantly greater than that occurring in the erythrocytes and leukocytes (by 28% and 25% respectively). Though the mean platelet volume and percent platelet aggregation underwent no obvious changes, the coagulation time was significantly shortened. CONCLUSION: The methods we described for establishing mouse models of hematopoietic failure induced by cyclophosphamide is rapid and highly efficient, and may facilitate ready preparation of mouse models of thrombocytopenia which respond strongly to cyclophosphamide without blood platelets function impairment.     

当归注射液治疗再生障碍性贫血的实验研究

目的 :探讨当归注射液对再生障碍性贫血 (AA)小鼠骨髓造血功能的保护作用。方法 :雌性Balb/c小鼠 ,随机分为 5组。①正常对照组 ,未经特殊处理。②模型对照组 ,经60 Co 6 .0Gyγ 射线亚致死量全身照射 ,4d内由尾静脉输入取自DBA/ 2小鼠的胸腺、淋巴结混合细胞 ,制成AA模型 ,于制模当天给予腹腔注射无菌生理盐水 ,10ml·kg-1·d-1,连续 12d。③当归注射液小剂量组 ,于制模当天即给予当归注射液腹腔注射 2ml·kg-1·d-1,连续 12d。④当归注射液大剂量组 ,予当归注射液 10ml·kg-1·d-1,腹腔注射。⑤丙酸睾丸酮组 ,给予腹腔注射丙酸睾丸酮 10ml·kg-1·d-1。于第 12d每只小鼠称重后 ,采集尾静脉血测外周血白细胞计数 ,后断颈处死小鼠 ,取出双侧尺骨及股骨 ,冲出骨髓单个核细胞 ,计数。并行CD34+ 细胞检测及骨髓超微结构观察。结果 :与正常对照组比较 ,模型对照组造血细胞明显减少 ,骨髓微环境受损。当归注射液大剂量组能明显改善骨髓增生程度 ,修复骨髓微环境。结论 :当归注射液能通过促进骨髓造血细胞增生 ,改善骨髓微环境对AA小鼠进行保护作用。     

环磷酰胺诱发小鼠血小板减少症模型的建立及其血小板功能的测定

目的建立环磷酰胺诱发急性造血功能抑制的动物模型,探讨血小板在骨髓抑制中发生变化的基础和意义。方法采用环磷酰胺首次大剂量200 mg/kg·b.w.尾静脉注射腺磷酸,次日连续7 d以维持剂量30 mg/kg·b.w.腹腔注射。观察其外周血和骨髓液中细胞数量和形态的变化,用光密度法测定ADP诱导的血小板聚集百分率;玻璃毛细管法测定凝血时间,评价血小板功能的改变。结果用该方法诱导小鼠后,其红细胞、白细胞、血小板和骨髓有核细胞计数均明显减少(P<0.01),血象和骨髓象检查显示正常造血组织被抑制,其中血小板的降低最为显著,达到49%。血小板平均血小板体积和血小板聚集百分率未有改变(P>0.01),凝血时间缩短。结论环磷酰胺可以快速、高效诱导小鼠急性造血功能障碍,尤其血小板减少模型发生时间快,反应强度强,而对血小板功能未有影响,其模型结果稳定,发生率较高。     

人参皂苷Rg1拮抗MPTP诱导小鼠黑质中铁增高的作用

目的研究人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)致帕金森病(Parkinson’s disease,PD)小鼠黑质多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性的保护作用及其可能机制。方法 C57BL6小鼠随机分为正常对照组(NS,i.p.)、MPTP组(30 mg/kg×5 d,i.p.)及Rg1(5 mg/kg×8 d,i.p.)预处理组。应用免疫组织化学法、Perls’铁染色、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)以及图像分析等技术观察黑质内多巴胺转运蛋白(dopamine transporter,DAT)免疫反应活性变化、铁染色阳性细胞数的变化和DAT mRNA的表达水平的变化,用高效液相色谱法(HPLC)检测小鼠纹状体内DA及其代谢物二羟基苯乙酸(dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC)和高香草酸(homovanillic acid,HVA)含量。结果与正常对照组相比,MPTP组黑质内铁染色阳性细胞数增高以及纹状体内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量明显减少;与MPTP组相比,Rg1预处理组黑质内铁染色阳性细胞数降低以及纹状体内DA及其代谢产物DOPAC和HVA的含量明显增加(P<0.01)。与正常对照组相比,MPTP组黑质内DAT免疫反应活性和DAT mRNA的表达明显降低(P<0.01);与MPTP组相比,Rg1预处理组黑质内DAT免疫反应活性和DAT mRNA的表达有所增高(P<0.05)。结论 Rg1对MPTP致PD小鼠黑质DA能神经元的损伤具有一定的保护作用,其机制可能与Rg1能通过降低MPTP诱导的铁过多聚积从而拮抗氧化应激反应有关。     

侵袭性肺曲霉病小鼠的凝血功能异常及低分子肝素的治疗作用

目的探讨侵袭性肺曲霉病（IPA）小鼠的凝血功能异常及低分子肝素的治疗作用。方法采用环磷酰胺免疫抑制、烟曲霉孢子悬液滴鼻法构建中性粒细胞减少小鼠IPA模型。（1）凝血功能测定：72只小鼠随机分为正常免疫非接种组（A组）、正常免疫接种组（B组）、免疫抑制非接种组（C组）、模型组（D组）,每组18只。烟曲霉孢子接种量为1.5×10^5个孢子/小鼠,接种后每24 h每组随机取6只小鼠进行出血时间、凝血时间、血小板计数及抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）活性测定,共3次。（2）低分子肝素对IPA小鼠生存时间的影响：118只IPA模型小鼠随机分为模型对照组（E组,n=29）、低分子肝素治疗组（F组,n=30,1 000 IU/kg,背部皮下注射,qd×7 d）、两性霉素B治疗组（G组,n=29,1 mg/kg,腹腔注射,qd×7 d）、低分子肝素加两性霉素B治疗组（H组,n=30）。治疗均从接种后24 h开始。烟曲霉孢子接种量为6×10^5个孢子/小鼠。接种孢子后每天观察生存情况1次,至21 d。结果D组接种烟曲霉孢子后24 h即出现血浆AT-Ⅲ活性降低;48 h后出、凝血时间缩短,血浆AT-Ⅲ活性较24 h时降低;72 h后出现明显的血小板减少,出血时间进一步缩短,凝血时间较48 h延长,但仍低于正常,血浆AT-Ⅲ活性进一步降低;上述各指标变化D组与同时间点其他各组比较均有显著性差异（P〈0.01）,在各时间点A组、B组及C组之间比较均无显著性差异（P均〉0.05）。生存分析结果表明,单独应用低分子肝素未提高IPA小鼠21 d存活率,亦未延长平均生存时间（F组与E组比较,P〉0.05）。联合应用低分子肝素与两性霉素B疗效优于单独应用两性霉素B（G组与E组及F组比较,P均〈0.05;H组与E组及F组比较,P均〈0.01;H组与G组比较,P〈0.05）。结论小鼠发生IPA后可出现凝血功能紊乱,血浆AT-Ⅲ活性可以作为IPA出现凝血功能紊乱的早期监测指标。与单独应用两性霉素B?     

运用益气方调节化疗所致红细胞减少症的作用机理研究

目的:研究中药制剂益气方对环磷酰胺(CY)化疗小鼠红细胞减少症的治疗作用,筛选益气方最佳用药剂量。方法:50只ICR小鼠随机分为模型组、正常对照组、益气方高剂量组、中剂量组、低剂量组。各治疗组小鼠分别灌胃给药,正常对照组与模型组小鼠灌服等容量生理盐水,连续15 d。从第8天起模型组与各治疗组小鼠腹腔注射环磷酰胺80mg/kg,连续3 d,正常对照组小鼠注射等体积生理盐水。检测各组小鼠红细胞膜C3b受体花环率、免疫复合物花环率及红细胞、血红蛋白、血清红细胞集落刺激因子水平,观察益气方对CY化疗小鼠红细胞减少症的治疗作用。结果:①与正常对照组比较,其余各组小鼠体重降低。②与模型组比较,益气方各组小鼠血液中红细胞、血红蛋白含量增加,红细胞膜上C3b受体显著升高,免疫复合物花环率明显降低,红细胞集落刺激因子浓度升高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:益气方可改善化疗所致小鼠红细胞减少症,以益气方中剂量治疗组疗效最佳。     

西酞普兰对小鼠角膜上皮细胞和泪膜功能的影响

目的 研究西酞普兰对小鼠泪膜功能和角膜上皮细胞的影响。方法 选取36 只BABL/c 雄性小鼠随 机分为A、B、C 3 组,A 组：空白对照组（不进行任何处理）;B 组：生理盐水组,以10 mg/kg 腹腔注射生理盐水; C 组：西酞普兰组,以10 mg/kg 腹腔注射西酞普兰。分别在实验第1、4 和7 天时行泪液分泌试验（SIT）、泪膜 破裂时间（BUT）检测,同时于实验第7 天进行角膜荧光素染色（FL）,取眼球做扫描电镜及HE 染色观察角膜 上皮损伤情况。结果 ① 3 组不同时间点的SIT、BUT、FL 有差异（F =9.749、10.427 和6.752,P =0.008、0.019 和0.032）;② 3 组的SIT、BUT、FL 有差异（F =11.234、14.842 和5.337,P =0.002、0.012 和0.029）;③ 3 组的 SIT、BUT、FL 变化趋势有差异（F =16.438、11.753 和16.431,P =0.000、0.001 和0.002）。干预后第7 天,3 组 上皮空泡细胞数比较,差异有统计学意义（F =7.749,P =0.013）。3 组微绒毛数量比较差异无统计学意义（F =0.917, P =0.092）。结论 西酞普兰会损伤小鼠泪膜功能的稳定性,但对角膜上皮细胞无影响。     

血必净对内毒素血症大鼠心肌细胞Toll样受体4表达的影响

目的 研究血必净注射液对内毒素血症大鼠心肌细胞Toll样受体4(TLR4)表达的影响,为临床脓毒症休克的治疗提供理论依据.方法 成年Wistar雄性大鼠80只,随机分为模型组、治疗A组、治疗B组和正常组,每组20只.前3组大鼠腹腔注射内毒素(本研究采用大肠杆菌脂多糖)15 mg/kg,正常组腹腔注射等容量0.9%氯化钠溶液.腹腔注射完毕后即刻,模型组皮下注射0.9 %氯化钠溶液10 mL/kg,治疗A组皮下注射血必净5 mL/kg及0.9%氯化钠溶液5 mL/kg,治疗B组皮下注射血必净10 mL/kg.各组大鼠均在皮下注射后即刻、30 min、2 h、6 h分别随机抽取5只留取相应标本并处死.采用免疫组织化学法检测心肌TLR4表达的变化.结果 皮下注射后2及6 h,模型组的心肌TLR4表达较正常组显著升高(P值均<0.05),治疗A组和治疗B组的心肌TLR4表达也较正常组显著升高,但较模型组显著下降(P值均<0.05);治疗B组皮下注射后6 h的心肌TLR4表达显著低于治疗A组(P<0.05).结论 血必净注射液能有效抑制内毒素所致的心肌细胞炎症信号TLR4表达的激活,减轻心肌的炎性反应.