地塞米松抑制胆管瘢痕成纤维细胞的体外研究

研究地塞米松（DEX）对体外培养的兔胆管瘢痕模型成纤维细胞（MF）中I 型胶原、结缔组织生长因子（CTGF）及第10 号染色体丢失的张力蛋白同源的磷酸酶基因（ PTEN）表达的影响。方法对家兔采用切开再吻合方法复制胆管瘢痕模型并获取MF,经细胞鉴定后对MF 给予不同浓度的DEX（0.00、0.01、0.05 和0.25 mg/ml）干预48 h,活细胞计数法试剂盒测定各组细胞增殖水平;实时聚合酶链反应检测各组细胞I 型胶原、CTGF和PTEN mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞I 型胶原和PTEN 蛋白表达水平。结果在DEX 干预48 h后,MF增殖受抑制,细胞I 型胶原、CTGF mRNA 和蛋白表达下调,PTEN mRNA 和蛋白表达上调（p <0.05）,呈浓度依耐性。结论DEX可能具有抑制胆管瘢痕及良性胆道狭窄形成的作用,其机制之一可能与MF 中I 型胶原、CTGF 及PTEN的调控有关。     

射线对肺成纤维细胞影响的研究进展

放射性肺纤维化是放疗常见的并发症,是效应细胞受到射线照射后的综合反应,以渗出性炎症起病,最终肺成纤维细胞增生。肺成纤维细胞是肺纤维化的主要效应细胞,经放射线刺激后的成纤维细胞过度增殖,凋亡受阻,细胞周期也随之改变。同时,成纤维细胞分泌的转化生长因子β增加,而活化后的转化生长因子β又进一步刺激肺成纤维细胞,促进其增殖。同时一些细胞因子及蛋白进一步刺激成纤维细胞,导致胶原大量沉积,肺泡塌陷及肺间质纤维化。该文主要介绍近年射线对成肺成纤维细胞影响的研究情况。     

猕猴肺成纤维细胞的不同分离培养方法及鉴定比较

目的 比较不同方法提取猕猴肺成纤维细胞的效率及对细胞相关功能的影响,为获得类似人肺成纤维细胞提供有效方法。方法 采用两种猕猴肺成纤维细胞的提取方法,组织块黏附法和胶原酶联合消化+组织黏附法。倒置显微镜观察细胞形态,免疫荧光鉴定猕猴肺成纤维细胞,CCK-8检测细胞活力,流式细胞仪检测肺成纤维细胞标志物α-SMA的表达,凋亡试剂盒检测细胞凋亡,Western blot检测细胞α-SMA蛋白水平表达。结果 组织黏附法贴壁的组织块72 h后可见小而亮的细胞爬出,4～5 d后细胞小范围爬出,呈长梭形;7 d后可见细胞大范围爬出,形成单层细胞,传代后细胞均呈长梭形。用胶原酶联合消化+组织黏附法处理后24 h即可见小而亮的细胞从组织块中爬出,48 h后可见细胞大范围爬出,细胞呈长梭形;4～5 d后可形成单层细胞,传代后的细胞均呈长梭形,用免疫荧光鉴定均表达α-SMA。实验结果显示胶原酶联合消化+组织黏附法提取的肺成纤维细胞的活力明显高于组织黏附法所得细胞活力。TGF-β1刺激肺成纤维细胞后,胶原酶联合消化+组织黏附法提取的细胞增殖更快,α-SMA蛋白表达更高。结论 两种方法均能体外分离出猕猴肺成纤维...     

膜联蛋白A1促进肺成纤维细胞炎症反应及胶原合成的研究

  目的  探讨膜联蛋白A1(Annexin A1)对肺成纤维细胞炎症反应、增殖及胶原沉积的作用。   方法  分离小鼠原代肺成纤维细胞,利用不同浓度的Annexin A1干预肺成纤维细胞24 h或48 h后,检测炎症因子、细胞增殖及胶原沉积表达。将C57/BL6小鼠分为对照组、Annexin A1干预组,每组6~8只。Annexin A1干预组每只小鼠气管滴注1 μg/50 μL Annexin A1重组因子,对照组每只小鼠气道滴注50 μL生理盐水,连续干预7 d后取检。检测肺组织炎症因子、Ⅲ型胶原(Collagen Ⅲ)及气道平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。   结果  与对照组比较,Annexin A1能促进肺成纤维细胞分泌IL-6、IL-8等炎症因子(均P < 0.05),促进成纤维细胞的增殖,Collagen Ⅲ合成和α-SMA表达增加(均P < 0.05)。与对照组小鼠比较,Annexin A1干预组小鼠的肺泡灌洗液细胞总数[(2.91±0.26)×104/mL vs.(7.03±0.48)×104/mL,t=7.432,P=0.008]及中性粒细胞数目明显升高[(0.12±0.04)×104/mL vs. (1.01±0.05)×104/mL,t=13.810,P < 0.001],炎症因子、胶原沉积及平滑肌表达也显著增加(均P < 0.05)。   结论  Annexin A1具有诱导肺成纤维细胞的炎症反应、增殖及胶原沉积作用,提示可能在气道重构发病中起重要作用。      

人牙周膜成纤维细胞的体外培养及其生物学性状

采用组织块原代培养法 ,建立人牙周膜成纤维细胞有限细胞系 ,利用免疫组化方法鉴定其来源 ,观察其生长和形态特性。结果显示 ,所培养的细胞为来自中胚层的非上皮原性、非神经原性、非血管内皮原性的成纤维细胞 ,细胞倍增时间为 45.3 8h,细胞 1 2 h贴壁率为 95.3 %。染色体核型为正常人 2 3对染色体组型 ,倒置显微镜下细胞为长梭形 ,电镜下除胞浆内的各种细胞器 ,可见较多的胶原纤维束和微丝。细胞有突起 ,细胞外见较多的胶原纤维和基质。以上研究证实所培养的人牙周膜成纤维细胞来源可靠 ,可用于进一步的研究工作     

地塞米松对体外培养人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的：研究地塞米松（DEX）对体外培养人牙周膜成纤维（PDLF）细胞增殖的影响,寻找体外培养人PDLF(hPDLF)细胞的优化条件,为牙周组织再生的研究工作奠定基础。方法：体外分离培养的hPDLF细胞随机分为5组,分别用5种含10%胎牛血清的DMEM细胞培养基培养5～8代:①空白对照组（无DEX）;②含5 mg•L^-1DEX;③含10 mg•L^-1 DEX;④含20 mg•L^-1 DEX;⑤含50 mg•L^-1 DEX。以MTT法测定DEX对hPDLF细胞增殖率的影响;采用倒置相差显微镜观察hPDLF细胞在添加不同浓度DEX的胎牛血清培养基中培养后的细胞形态学改变。结果：将hPDLF细胞接种于24孔板后的第3天,细胞出现汇合现象。细胞在孔底呈鳞片状。采用DEX条件DMEM细胞培养液培养,可见 细胞逐渐变成多层,细胞形态变小,突起变钝。MTT法检测结果表明含不同浓度DEX的DMEM培养基中培养的hPDLF细胞数均高于对照组（P<0.05）;不同浓度的DEX对hPDLF细胞增殖均有影响(P<0.05）,且随着浓度增加,hPDLF细胞增殖能力逐渐增高。结论：DEX能使体外培养的hPDLF细胞表现很强的增殖活性。     

CLD鼠肺成纤维细胞的原代培养及生物学行为研究

目的 建立一套可靠的CLD鼠肺成纤维细胞(1ung fibroblasts,LFs)分离、纯化和培养技术,并对其生物学行为进行研究,为高氧致肺间质纤维化体外研究提供平台.方法 足月新生Wister大鼠生后即分别持续吸入85%氧或空气,于7 d、14 d、21 d分别进行鼠肺LFs原代培养.绘制细胞生长曲线、计算细胞分裂指数、流式细胞术检测细胞周期.结果 与空气组相比,高氧组LFs增殖速度增快,处于分裂期的细胞数增多,细胞周期中处于G1期细胞的比率逐渐减少,S期细胞比率增加,且呈时间依赖关系.结论 本方法培养的LFs可用于CLD肺间质纤维化发病机制的体外研究;高氧可诱发LFs细胞周期紊乱,细胞异常增生.     

百草枯对人胚肺成纤维细胞CTGF表达的影响

目的：探讨百草枯中毒对人胚肺成纤维细胞表达结缔组织生长因子（CTGF）的影响,进一步阐明百草枯致中毒性肺纤维化的发病机理。方法：体外培养人胚肺成纤维细胞（MRC-5）,通过ELISA法检测经过百草枯处理后的细胞CTGF的表达情况。结果：正常MRC-5细胞分泌少量CTGF ,经过不同浓度百草枯处理后的人胚肺成纤维细胞48～72h细胞CTGF浓度随时间变化而明显增加（P＜0．05）,在72h CTGF浓度有大幅度的提高。结论：百草枯中毒后人胚肺成纤维细胞表达CTGF明显上调,明显高于正常细胞,提示在百草枯中毒后肺成纤维细胞CTGF表达增加,进而导致肺纤维化。     

人肾间质成纤维细胞的培养与鉴定

目的:探讨体外培养人肾间质成纤维细胞(humanrenalinterstitialfibroblasts,hRIFs)的方法。方法:取人肾乳头组织培养,通过细胞形态、免疫细胞化学染色和右旋缬氨酸选择性培养基培养等手段进行细胞鉴定。结果:培养细胞呈梭形、单个核,表达波形蛋白,在选择性培养基内逐渐死亡。结论:该培养方法能获高纯hRIFs。     

视网膜下液体对人成纤维细胞的刺激作用

观察２３例孔源性视网膜脱离患者视网膜下液体（ＳＲＦ）对培养的人成纤维细胞生长的刺激作用，同时采用￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定了ＳＲＦ对成纤维细胞ＤＮＡ的合成作用。结果表明，所有ＳＲＦ均有刺激成纤维细胞增殖的能力，增殖率为５５．４％～２７７．８％，ＳＲＦ能促进成纤维细胞的ＤＮＡ合成（Ｐ＜０．０５）。ＳＲＦ与视网膜脱离的增殖性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）程度、脱离范围和脱离持续时间呈正相关。     

改构体和野生型aFGF对肠缺血-再灌注损伤保护作用的比较研究

目的：观察外源性给予改构体酸性成纤维细胞生长因子（acid fibroblast growth factor，aFGF）后，大鼠小肠功能指标的变化规律，探讨改构体aFGF对肠缺血-再灌注损伤的影响。方法：以大鼠肠系膜上动脉（SMA）夹闭造成肠缺血-再灌注损伤模型，并将动物随机分为假手术组、生理盐水对照组、改构体aFGF治疗组和野生型aFGF治疗组。除假手术组外，其余各组动物均于缺血45min后于2、6、12、24h活杀，取血度小腑组织标本，检测血浆中D-乳酸含量度组织中增殖细胞棱抗原（PCNA）的表达特性。结果：血浆D-乳酸变化及HE染色显示，再灌注后6h屏障功能损伤最严重，而改构体aFGF治疗组损伤在伤后24h较生理盐水对照组有所减轻。PCNA的表达趋势与D-乳酸类似。结论：改构体aFGF对肠缺血-再灌注损伤具有一定保护与促修复作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对56例儿科口腔炎的治疗作用

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子对儿科几种常见病因所致口腔炎的治疗作用。方法　ｂＦＧＦ由广州暨南大学生物制品研究所生产，临用时溶于１０ｍｌ 生理盐水，用无菌棉棒涂抹于溃疡表面，每日６ 次。对不合作的患儿，可将药液滴入口内。餐前半小时、饭后半小时应用。结果　治疗组的有效率达９６６７ ％ ，明显高于对照组，两组间相比较差异显著（ Ｐ＜ ０００１） 。结论　ｂＦＧＦ 治疗小儿各种口腔炎具有疗效好、止疼快、修复早的效果。     

THE STUDY ON RELATED GENES IN THE NEOPLASTIC TRANSFORMATION OF IMMORTALIZED HUMAN FETAL TRACHEAL FIBROBLAST CELLS INDUCED BY IRRADIATION

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＬｕｎｇｃａｎｃｅｒｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｌｅａｄｉｎｇｃａｕｓｅｓｏｆｄｅａｔｈｉｎｔｈｅｗｏｒｌｄ．Ｍａｎｙｆａｃｔｏｒｓ，ｓｕｃｈａｓｃｈｅｍｉｃａｌ，ｐｈｙｓｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓｅｔｃ．，ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｔｏｔｈｅ...     

人纤维母细胞条件培养液对CFU－GM生长的影响

采用单个集落、亚融合和全融合的人类纤维母细胞条件培养液（ＨＦ－ＣＭ）对人骨髓细胞ＣＦＵ－ＧＭ生长的影响进行了研究。结果表明，加入同样浓度的ＨＦ－ＣＭ时，亚融合纤维母细胞条件培养液所刺激的ＣＦＵ－ＧＭ产率明显高于全融合及单个集落ＨＦ－ＣＭ所刺激的ＣＦＵ－ＧＭ产率（Ｐ＜０．０５）；在加入不同浓度的亚融合ＨＦ－ＣＭ时，以１０％亚融合ＨＦ－ＣＭ对ＣＦＵ－ＧＭ产率表现出最大的刺激活性。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠动脉血栓形成的影响

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)对大鼠颈总动脉血栓形成的影响。方法 :Wistar大鼠 5 0只 ,随机分成生理盐水组、肝素组、b FGF组 (又分 b FGF1 组、b FGF2 组、b FGF3组 ) ,每组 10只。于大鼠的股静脉分别注射生理盐水 (10 m l/kg)、肝素钠 (12 0 0 U /kg)以及 b FGF大、中、小剂量组分别为 80 0 0 0、4 0 0 0 0、1U /kg,给药后 5min,于动脉内插管下方进行电激 ,直至血压曲线的消失 ,记录电激开始至压力曲线消失的时间 ,即血栓堵塞时间。结果 :肝素组和 b FGF组与生理盐水组比较 ,平均堵塞时间延长 (P <0 .0 1) ;肝素组与各 b FGF组之间比较 ,肝素的平均堵塞时间明显较长 (P <0 .0 1)。结论 :b FGF可以延长大鼠动脉血栓形成的时间 ,并呈现一定的量效关系。     

内皮素在哮喘发病中的作用及地塞米松治疗效应的实验研究

内皮素（ＥＴ）是目前发现的最强的缩血管物质，它同时具有强烈的缩气管效应。为了研究ＥＴ在支气管哮喘发病中的作用，采用雾化吸入卵蛋白复制豚鼠哮喘模型，发现哮喘组发作期支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和血浆中ＥＴ均明显高于对照组［（２２４．８３６±１３５．６７０，１１３．６５３±７１．０４８）ｎｇ／Ｌ，Ｐ〈０．０１］和［（９６．８５０±２７．０１９，２１．２３７±７．６２０）ｎｇ／Ｌ，Ｐ〈０．０１］，且气道     

用甲壳素膜培养的鼠胚脊髓神经元生长形态的扫描电镜研究

目的：在组织培养条件下人工构筑神经组织的组织化构型，以对其生长形态及临床价值进行研究。方法：以甲壳素膜为支持物，做原代大鼠鼠胚脊髓神经组织的体外培养，标本置扫描电子显微镜下观察。结果：甲壳素膜和培养细胞之间有较强的相容性，能使神经元和胶质细胞比较充分地展示出多种组织化结构的形态特点。结论：甲壳素膜的组织相容性和可塑形性将使其在修复神经损伤和神经移植中获得广泛的应用。     

THE EFFECT OF BASIC FIBROBLAST GROWTH FACTOR SLOW-RELEASE MICROCAPSULES ON ANGIOGENESIS IN INFARCTED RABBIT MYOCARDIUM

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮ　　Ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ (ｂＦＧＦ)ｉｓａｎｉｎｔｅｎｓｅｌｙｍｉｔｏｇｅｎｉｃａｓｗｅｌｌａｓａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｓｉｎｇｌｅｃｈａｉｎ 1 7 2ｋＤｐｅｐ ｔｉｄｅ ,ｗｈｉｃｈｉｓｗｉｄｅｌｙｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄｉｎｂｌｏｏｄｖｅｓｓｅｌｓ ,ｃａｒｄｉａｃｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｏｔｈｅｒｏｒｇａｎｓ .ＩｎｖｉｖｏａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆｂＦＧＦｌｅａｄｓｔｏｍｙｏｃａｒｄｉｕｍａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｔｈａｔｈａｓｂｅｅｎｄｅｍｏｎ…     

人皮肤成纤维细胞纤连蛋白的纯化及其N-糖链结构

研究人皮肤成纤维细胞纤连蛋白及其片段 Ｎ－糖链结构。用明胶－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ亲和柱纯化培养的人皮肤成纤维细胞所分泌的纤连蛋白（Ｆｎ），用胰糜蛋白酶限制性水解，获得明胶结合片段和肝素结合片段；用肼化的凝集素与经过碘酸氧化后的辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）缩合的方法制备 ４种 ＨＲＰ－凝集素（Ｃｏｎ Ａ， ＤＳＡ，ＷＧＡ，ＬＣＡ）探针，用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法检测明胶结合片段（Ｍｒ４３ × １０３）、肝素结合片段（Ｍｒ３０ ×１０３，２５ ×ｌ０３）在切除唾液酸及平分型 Ｎ－乙酰氨基葡萄糖（ＧＩｃＮＡｃ）前后的 Ｎ－糖链结构。结果： Ｆｎ的 Ｎ－糖链主要存在于 Ｍｒ分别为４３ × １０３、３０ ×１０３、２５ ×１０３的３个片段上，其结构为二、三（主要是Ｃ２Ｃ２６）或四天线的复杂型糖链；糖链末端连有唾液酸（ＳＡ）；都含有核心岩藻糖（ｃ－Ｆｕｃ；平分型 ＧｌｃＮＡｃ只存在于 ４３ × １０３片段所连的糖链中，而且很可能与 Ｃ—Ｆｕｃ共同存在于二天线或Ｃ２Ｃ２６三天线精链上；Ｆｎ的糖链中不含有Ｎ－乙酰乳糖胺重复顺序。结论：在Ｆｎ不同片段上均含有复杂型Ｎ糖链，并存在核心岩藻糖结构，平分型ＧｌｃＮＡｃ只存在于４３ ×１０３片段上。