碱性成纤维细胞生长因子壳聚糖微球的研制

目的　探讨制备壳聚糖微球包裹碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的方法。方法　采用Berthold的沉淀 /凝聚法制备壳聚糖微球 ,用此微球包裹bFGF ,对bFGF壳聚糖微球的大小、形态、含量和体外释药进行研究。结果　空白壳聚糖微球表面光滑 ,粒径范围 1.2～ 3.8μm。载药量约为 4 .6 8× 10 4U/mg ,包封率为 93.7%。体外释放试验显示 ,壳聚糖微球释放bFGF初期释药较快 ,尤其d 1有突释现象 (累计释药度约占 18.6 % ) ,随后bFGF释放速度逐渐变缓 ,d 10累计释放度约5 2 % ,d 2 0约 6 1.5 %。结论　bFGF壳聚糖微球具有较高的包封率和显著的缓释bFGF作用。      

碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对许旺细胞在小肠粘膜下层细胞粘附活性的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）缓释微球对许旺细胞（SC）在小肠粘膜下层（SIS）上的粘附影响。方法运用双酶两步消化法对SC进行体外分离、培养、纯化,将bFGF-PLGA缓释微球（bFGF-PLGA-MS）与SC及SIS进行体外复合培养,并以游离bFGF组及单纯培养液组进行对比,观察bFGF-PLGA缓释微球对SC在SIS上粘附影响。结果运用双酶两步消化的体外原代培养方法获取的雪旺细胞数量较多,细胞纯度可达90%以上。细胞的体外增殖活性良好,细胞增殖周期约为6～7天,培养后2～7天为对数生长期,第7天后进入生长平台期;bFGF缓释微球能持续地促进雪旺细胞在SIS上的粘附、增殖及迁移;细胞增殖周期缩短,细胞能较稳定地保持着良好的活性;提高了细胞增殖指数,并使SIS上的SC持续保持较高的增殖活性;细胞数量与bFGF含量的相关系数为0.988（P=0.02）,表明两者间有明显正相关关系。结论 bFGF-PLGA微球的药物缓释促进了SC在SIS上持续而稳定的粘附,为以SC复合SIS构建人工神经提供了有利条件。     

碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对许旺细胞在小肠粘膜下层增殖活性的影响

目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）缓释微球对许旺细胞（SC）在小肠粘膜下层（SIS）上增殖影响。方法运用双酶两步消化法对 SC 进行体外分离、培养、纯化,将 bFGF-PLGA 缓释微球（bFGF-PLGA-MS）与 SC 及 SIS进行体外复合培养,并以游离 bFGF 组及单纯培养液组进行对比,观察 bFGF-PLGA 缓释微球对 SC 在 SIS 上增殖影响。结果运用双酶两步消化的体外原代培养方法获取的许旺细胞数量较多,细胞纯度可达90%以上。细胞的体外增殖活性良好,细胞增殖周期约为6～7d,培养后2～7d 为对数生长期,第7d 后进入生长平台期; bFGF 缓释微球能持续地促进许旺细胞在 SIS 上的增殖;细胞增殖周期缩短,细胞能较稳定地保持着良好的活性;提高了细胞增殖指数,并使 SIS 上的 SC持续保持较高的增殖活性;细胞数量与 bFGF 含量的相关系数为0.988（P =0.02）,表明两者间有明显正相关关系。结论bFGF-PLGA 微球的药物缓释促进了SC 在SIS 上持续而稳定的增殖,为以SC 复合SIS 构建人工神经提供了有利条件。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞的影响

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年来研究较为热门的生物因子,为具有多种功能的多肽生长因子,能广泛促进来源于中胚层及神经外胚层细胞的增殖,是体内重要的创伤愈合因子之一。bFGF有主动诱导分化和加速生长作用,可以促进牙周膜成纤维细胞的分化和增殖,促进牙周组织的修复和再生。     

碱性成纤维细胞生长因子对肌成纤维细胞的作用及其对创面愈合的影响

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对烧伤创面内肌成纤维细胞转归的影响 ,深入探讨bFGF在组织修复中的作用机制。方法　利用大鼠 30 %深Ⅱ°烫伤模型 ,采用原位杂交与免疫组化方法检测伤后不同时间点创面愈合时组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 (caspase- 3)mRNA和蛋白的表达情况 ,并运用免疫组化法观察α -平滑肌肌动蛋白 (ASMA)、转化细胞生长因子 - β1(TGF -β1)的变化情况 ,并对照观察创面应用外源性bFGF后以上各项指标的变化。 结果　创面组织中 β -平滑肌肌动蛋白的表达早期变化不明显 ,伤后第 7天明显升高并达到高峰 ,随后逐渐减弱。创面外用bFGF ,伤后 7～ 14dASMA的表达明显增强。伤后 3h开始 ,TGF - β1的表达逐渐升高 ,至 14d略有所下降。外有bFGF后TGF - β1的表达明显增加 ,并强于单纯烫伤组。伤区局部加用外源性的bFGF ,caspasemRNA和蛋白的表达规律与单纯烫伤组相似 ,呈现先升高后降低 ,再升高样的变化。但第一次峰值低 ,第二次的峰值高于单纯烫伤组。结论　肌成纤维细胞数量的增加与凋亡过程是创面愈合的重要环节。外源性应用bFGF可能够通过提高TGF - β1的分泌 ,进而协同其他生长因子对肌成纤维细胞形成和凋亡发挥作用 ,最终影响愈合的结局。     

碱性成纤维细胞生长因子浅述

本简要地介绍了近几年来国内碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的研究进展，并推测其研究方向。近几年碱性成纤维细胞生长因子在国内的研究取得了长足的进步，笔回顾了几年来国内献，综述如下。     

复合bFGF缓释微球的制备与性能测定

目的:制备复合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的可降解缓释微球,考察其各项性能,为进一步应用于组织工程奠定基础.方法:采用改良的乳化冷凝法交联制备复合bF-GF的缓释微球,测定微球形态、粒径、载药率和包裹率等,并采用ELISA法考察其体外bFGF的缓释效能.结果:缓释微球平均粒径(12.4±3.6)μm;平均载药率为0.24%,平均包裹率为96.82%.d 1体外释放28.23%,2～5 d时累积释放率达到57.19%,d 7时释放减慢且累计浓度为93.94%.结论:复合bFGF的缓释微球制备工艺简便,性能优良;可在较长时间内持续释放活性bFGF,与组织工程支架的结合应用具有可行性.     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠晚期周围神经再生作用的实验研究

目的探讨外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对晚期周围神经再生的作用.方法50只SD大鼠随机分治疗组、对照组各25只,切断右侧坐骨神经,12周后予以修复,修复术后每日分别给予bFGF和生理盐水,行神经电生理和组织学检查.结果治疗组和对照组修复处远段神经均有不同程度再生,4周时已可见到再生轴突,且治疗组多见.计量分析治疗组运动神经传导速度、神经肌肉动作电位幅值、髓鞘厚度、再生轴突直径和截面积明显优于对照组.治疗组与对照组相比,差异有显著性.结论bFGF能促进晚期周围神经再生.     

碱性成纤维细胞生长因子与心血管疾病

<正>1974年Gospodarowicz首次发现一种能刺激成纤维细胞分裂增殖的因子-成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF),随着研究的不断深入,发现FGF具有促血管内皮细胞(Vascular endothelialcell,VEC)再生、影响血管内膜增生、影响血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖、迁移、促进新生血管生长和血管侧支循环建立等多种生物效应,对疾病发生、发展及疾病的转归有着重要的影响。     

碱性成纤维细胞生长因子缓释膜延缓失神经骨骼肌萎缩的实验研究

目的 探索应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)缓释膜是否能够延缓失神经骨骼肌萎缩的进程.方法 将28只大鼠左后肢制成失神经腓肠肌模型,随机分成2组,每组14只,A组腓肠肌内置入含有bFGF的缓释膜,B组腓肠肌内置入不含bFGF的缓释膜,术后30 d取材,行腓肠肌组织学、肌湿重、肌动蛋白、肌纤维数量直径和纤颤电位波幅测定.结果 A组腓肠肌的肌纤维数量(15.8±3.4)条和直径(16.575 0±3.819 2)μm均较B组的(11.8±3.4)条和(10.675 0±4.6760)μm多和粗(P＜0.05),A组肌肉的湿重(1.690 7±0.422 9)g,肌动蛋白含量(451.124 1±47.131 6)和纤颤电位波幅(0.194 5±0.042 0)μV均较B组的(0.9320±0.0885)g,(378.2125±1.6568),(0.1552±0.0603)μV重、多和大(P＜0.05).结论 bFGF缓释膜可以延缓失神经肌萎缩的进程.     

碱性成纤维细胞生长因子和地塞米松联合诱导骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和地塞米松联合对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化的影响。方法:以第三代BMSCs为实验材料,分别给予10%FBS的DMEM培养基,含80μg/LbFGF的10%FBS的DMEM培养基,含bFGF80μg/L+地塞米松10-8mol/L+β-甘油磷酸钠10mmol/L+维生素C50mg/L的10%FBS的DMEM培养基处理,通过计数BMSCs细胞数评价其增殖能力,同时行碱性磷酸酶(ALP)活性检测及茜红素染色评价其成骨分化的能力。结果:与对照组相比较,bFGF可以显著提高骨髓间充质干细胞的增殖能力,bF-GF和地塞米松联合不仅促进了骨髓间质干细胞的增殖,而且促进碱性磷酸酶的表达和钙结节的形成。结论:bFGF和地塞米松联合促进了骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化。     

FSH和SCF缓释微球体内外释放

目的 分别以FSH和SCF为缓释药物、PLGA为药物载体制备PLGA缓释微球,研究微球体内、外释放过程.方法 采用复乳-溶剂挥发法制备微球,培养法测定其体外释放过程;大鼠后腿肌肉注射微球,测定其体内释放情况.结果 FSH-PLGA微球体外突释率17.2％,可释放28 d,体内可释放17d;FSH-PLGA微球体外突释率8.8％,可释放28 d,体内可释放17d.结论 所制FSH和SCF微球在体内外均可稳定的较长时间的释放药物,验证了FSH和SCF微球的可行性.     

bFGF和硫糖铝局部应用促扩张术方法研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)不同剂量、用药方法对扩张组织的影响.方法以白色家猪为实验动物,采用持续恒压扩张技术,观察不同剂量和不同给药时间,bFGF和硫糖铝对扩张组织的影响及组织结构变化.结果扩张术同时每日2次局部应用bFGF 9AU/cm2 硫糖铝100μg/ml,共7 d,浸于明胶海绵上缓慢持续释放对扩张组织的影响最明显,效果最佳,扩张器内实际注液量、扩张所获得的皮肤净增面积明显增加,皮瓣回缩率降低.表皮细胞层数增多,胶原纤维、弹力纤维、成纤维细胞密度和毛细血管密度显著增高.药量增加效果未随之增加.结论持续恒压扩张术时合用bF-GF 9AU/cm2 硫糖铝100μg/ml,每日2次注药浸入明胶海绵持续缓慢释放效果最佳.     

bFGF对兔骨髓基质细胞VEGF因子表达及细胞生物行为的影响

目的: 观察兔骨髓基质细胞经bFGF刺激后,其VEGF因子表达及细胞生物行为的变化. 方法: 取兔双侧股骨骨髓基质细胞,采用骨髓基质细胞体外培养技术,分别以不同剂量bFGF刺激细胞,并设立空白对照组. 培养5 d后,进行细胞形态(HE染色)、增殖情况(细胞记数法与MTT法)、碱性磷酸酶(改良钙钴法染色)、成骨结节(图像分析)、VEGF阳性细胞率(免疫组化染色)等项目的检测. 结果: 不同剂量组间各项观测指标差异均显著,结果均优于空白对照组. bFGF促进细胞增殖与VEGF表达最佳剂量为1200 kU*L-1. 结论: bFGF能促进骨髓基质细胞增殖,促进VEGF的表达,其剂量与效果间存在明显相关关系. bFGF为1200 kU*L-1时,促进骨髓基质细胞表达VEGF及促进细胞增殖作用同时达到最佳效果.     

成年兔雪旺细胞体外培养增殖和纯化的实验研究

目的探讨从成年大白兔周围神经体外分离、纯化、培养的条件，观察雪旺细胞在体外存活、生长情况，目的在于改进雪旺细胞的体外培养条件，寻找一种较好的获取雪旺细胞的方法。方法利用成年兔发生Wallerian变性的双侧坐骨神经，剪碎至1mm的植块，经改良后反复差速贴附法进行培养，应用b-FGF刺激SC增殖；采用相差显微镜下观察雪旺细胞状态计数和S-100细胞免疫组化染色相结合鉴定；绘制生长曲线，按照细胞倍增时间公式计算其倍增时间。结果采用发生Wallerian变性后的兔双侧坐骨神经，经改良后差速贴壁培养方法能够明显抑制成纤维细胞的生长，但对雪旺细胞的生长影响较小，可获得大量高纯度的雪旺细胞，经S-100蛋白免疫组化鉴定，雪旺细胞纯度达94％以上，细胞数量达1×10^6／mL以上；绘制其生长曲线，并计算得出体外培养的第三代雪旺细胞体外倍增时间为3d；一定浓度的b-FGF和NGF可促进雪旺细胞的增殖。结论①联合采用发生Wallerian变性后的神经、改良差速贴壁培养、b-FGF和NGF促进雪旺细胞增殖是一种较经济、简便、实用的方法，可获得较高纯度的雪旺细胞。②本培养方法能够获得大量高纯度的雪旺细胞，可作为周围神经组织工程实验研究的细胞来源。     

绿茶对体外培养的人乳腺癌细胞和血管内皮细胞bFGF表达的抑制作用

目的 研究绿茶对人乳腺癌细胞及人脐静脉内皮细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及机制。方法 ELISA法检测bFGF的蛋白表达水平；mRNA的水平用：Northern印迹杂交法研究。结果 40μg/mL的绿茶提取物(green tea extract,GTE)或绿茶主要有效成分表没食子儿茶素-3没食子酸（epigallocatechin-3gallste,egcg）①能够抑制人脐静脉内皮细胞及人乳腺癌细胞株细胞内及细胞分泌入条件培养基中bFGF多肽水平，这种抑制作用呈剂量依赖性；②能明显抑制MDA-MB231细胞内的bFGFmRAN表达水平。结论 GTE或EGCG能够在mRNA和蛋白水平抑制乳腺癌细胞及脐静脉内皮细胞的bFGF表达，绿茶可能通过该机制抑制肿瘤新4血管形成。     

bFGF对骨骼肌肌卫星细胞增殖的影响--PCNA免疫组化法的实验研究

目的：试图用致中胚层来源细胞分裂剂—碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)使正常成熟骨骼肌肌卫星细胞从静止状态变成增殖活动。方法：用21只大白鼠腓肠肌为实验材料，随机分3组，每组各7只，A组肌肉内注入bFGF；B组肌肉内注入生理盐水；C组肌肉内不注任何物质。连注14d后，取各组腓肠肌制成HE染色和增殖细胞核抗原(prolifcrate cell nucleus antigen，PCNA)染色切片，最后光镜下观察和对观察相关资料做统计学处理。肌卫星细胞核，HE染色为蓝色，PCNA染色阳性为棕黄色。结果：细胞核数量，A组较B、C两组多；B组较C组多；C组肌肉内几乎未见有PCNA阳性细胞核存在。结论：bFGF可使骨骼肌的肌卫星细胞，由静止变成增殖状态，为解决成体干细胞快速增殖这一难题，提供参考依据。     

碱性成纤维细胞生长因子对间充质干细胞增殖的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及其信号机制。方法:全骨髓贴壁法培养MSCs,流式细胞仪分析其表面MSCs标记(CD45、CD34、CD90、CD29)以及成骨、成脂肪等多向诱导分化潜能,鉴定其特征。MTT法分析不同浓度bFGF对MSCs增殖的影响,确立最佳浓度bFGF诱导MSCs增殖的时间特征,分别以磷脂酰肌醇3-激酶、促分裂素原活化蛋白激酶、磷脂酶C、蛋白激酶C、钙通道和钙泵选择性抑制剂等处理P3MSCs后,观察其对bFGF介导MSCs增殖的影响。结果:培养的MSCs表现CD90、CD29强阳性,具有成骨、成脂肪等多向分化能力;bFGF诱导MSCs增殖呈时间和剂量依赖特征,5.4×10-4mol/L bFGF作用48 h时MSCs增殖达峰值;磷脂酶C阻断剂U73122、钙通道阻断剂和选择性蛋白激酶C阻断剂等明显抑制了bFGF所介导的MSCs增殖效应;尤其是非选择性PKC抑制剂Straurosporine、钙泵选择性抑制剂thapsigargin以及蓝尼定受体抑制剂Ryandoine均抑制bFGF所诱导的MSCs增殖。结论:bFGF通过Ca2+/PKC/Erk1/2途径促进MSCs的增殖。