绿色荧光蛋白转基因小鼠肺癌模型的建立

目的建立绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠肺癌模型,观察诱癌后肺组织细胞GFP的表达情况。方法将60只4～6周龄SPF级BALB/c绿色荧光蛋白转基因小鼠随机分为实验(30 mg/kg二甲基亚硝胺)组(50只)和对照(生理盐水)组(10只),雌雄各半,采用灌胃方式进行染毒,染毒容量为3 ml/kg,每周2次,连续8周。分别于第15、22周,观察小鼠肺组织GFP的表达情况和CK7、CK14表达情况。取肺肿物制成组织碎块移植于2只4～6周龄SPF级BALB/c-nu/nu裸鼠皮下,2周后观察移植瘤的存活与GFP的表达情况。结果本方法可以诱导建立Balb/c小鼠肺癌模型,22周以后肺癌的发生率为100%(16/16),未见其他脏器转移。CK14在肿瘤组织中高表达,而CK7在肿瘤组织中表达阴性。皮下移植瘤与冰冻切片均有较强的GFP表达。结论长期低剂量二乙基亚硝胺染毒可诱导Balb/c绿色荧光蛋白转基因小鼠肺癌形成,且癌细胞保持GFP表达。     

浅谈转基因食品的现状及发展前景

随着生产技术的发展,食品的种类越来越多。传统的农业生产杂交和诱导突变技术可使作为食品资源的微生物、植物和动物具有所需的特性。但是由于遗传上的巨大差异,使杂交受到限制,诱导突变又往往不能获得准确性状,且还有可能同时产生有害突变,转基因技术的产生和发展为解决这些问题提供了新的思路和方法。转基因食品的出现标志着生物技术的发展迎来了辉煌和关键的时期。近年来,转基因食品作为新兴的食品品种被世界越来越多的国家广泛采用和关注。     

SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法的灵敏度和特异性研究

目的:研究SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分(35S基因和NOS基因)方法的灵敏度、特异性和线性关系。方法:使用SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR方法检测不同转基因含量的标准品,并对转基因阳性和阴性样品分别进行扩增,分析扩增曲线和Ct值。结果:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法检出限为0.05%,转基因大豆标准品和阳性样品中检出35S基因和NOS基因成分,阴性样品中未检出35S基因和NOS基因成分。结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测35S和NOS转基因成分方法灵敏度高,特异性较好,标准曲线线性良好。     

SYBR GreenⅠ实时荧光PCR检测食品中转基因成分方法的初步建立

目的：建赢SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法检测食品中转基因成分35S启动子和NOS终止子,并对样品进行检测。方法：以大豆Lectin基因为内源性基因,以转基因食品中常用的花椰菜花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止子（NOS）基因为目标基因,设计并合成3对特异性引物,优化反应条件,使用SYBR GreenⅠ染料实时荧光PCR检测35S启动子和NOS终止子,并做熔解曲线分析。同时利用该方法对胡萝卜、青豆、玉米、马铃薯等实际样品进行检测。结果：运用该方法检测8份样品,有4份检出35S基因和NOS基因成分。结论：SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法能有效检测出35S和NOS两种转基因成分,简便、快速。     

日本发现能灭超级细菌的天然抗生素

日本研究人员近日在《自然-化学生物学》杂志网络版上报告说,他们发现了一种新的天然抗生素,它能杀灭常见抗生素无法对付的超级细菌——耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。     

LYRM1基因绿色荧光蛋白融合载体的构建及表达

[目的]构建LYRM1基因绿色荧光蛋白融合载体,进而观察LYRM1基因编码蛋白在细胞内的定位情况.[方法]运用RT-PCR技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,将其亚克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N2,脂质体转染3T3-L1前体脂肪细胞,激光共聚焦显微镜下观察融合蛋白的表达情况.[结果]PCR、酶切鉴定及测序结果表明重组质粒构建正确.激光共聚焦显微镜下观察到pEGFP-N2转染的细胞中绿色荧光均匀分布于整个细胞,而pEGFP-LYRM1转染的细胞中绿色荧光主要集中在细胞核区域.[结论]成功构建了LYRM1绿色荧光蛋白融合载体,LYRM1编码蛋白在细胞中定位于胞核中.     

日本发现口臭导致牙周病恶化的原因

日本研究人员日前宣布,他们发现口臭导致牙周病恶化的原因。他们指出,治疗口臭将有利于治疗和预防牙周病。     

斑点热群立克次体实时荧光定量PCR检测方法的 建立及应用

摘要:目的　探讨实时荧光定量PCR快速检测斑点热群立克次体标本的应用价值。方法　根据斑点热群立克次体外膜蛋白A（OmpA）基因保守序列设计TaqMan特异性探针和引物,进行实时荧光定量PCR方法学评估,并同时运用该法和普通PCR法对对海南省2012年不明原因发热病人157份血标本进行斑点热群立克次体的检测及结果分析。结果　本研究建立的定量标准曲线循环阈值（Ct值）和模板拷贝数呈良好的线性关系（R2值为0.998）。该法能检出斑点热群立克次体阳性标准品—西伯利亚立克次体（R.sibirica）最小浓度为102 copies/μl,灵敏度比普通PCR高100倍。用该法检测斑点热群立克次体DNA,结果为阳性,检测金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、致泻性大肠埃希菌和副溶血弧菌等其他病原细菌DNA结果均为阴性。采用实时荧光定量PCR法对实验室库存的发热病人血标本DNA进行回顾性检测,结果示阳性2例,检出率为1.2%（2/157）,而普通PCR检测结果均为阴性。结论　实时荧光定量PCR法具有快速、特异和灵敏的优点,在处理突发公共卫生事件中可发挥快速检测的优势,在斑点热诊断中具有重要的临床意义。     

日本开发出可检测多种病原体的DNA芯片

2008年3月19日消息：日本研究人员最近开发出一种DNA（脱氧核糖核酸）芯片，能同时检测出炭疽菌等20种病原体。     

应用荧光分子显现活细胞内的蛋白质和生物化学过程

<正>一种强有力的新型研究工具结合其他标志技术,使研究人员可以同时看到一个活细胞内的两种或两种以上的不同蛋白质,还能区分出蛋白质是新合成的还是老的。这一研究成果已在今年2月的《化学和生     

新一代技术：破解细胞通信的凝胶

一组研究人员结合基因工程,小细胞支架,以及光遗传学的作用原理,研发出了一种“光导凝胶（1ight—guidinghydrogels）”,从而实现了在体内检测细胞表达的荧光蛋白,以及利用光刺激细胞,抑制糖尿病小鼠的高血糖水平。这一最新技术成果公布在2013—10-20的NaturePhotonics上。     

新发现一种能影响神经修复的基因

<正>科学家发现了一种能影响人神经损伤或发生疾病后神经再生的基因。爱丁堡大学的研究人员说,该发现可更好地了解人体神经损伤引起的疾病(如运动神经元疾病和腕管综合症),以及对该疾病的治疗,并可以帮助预测一个人的神经从严重的身体创伤(如发生车祸)恢复过来所需     

液基薄层细胞学及荧光定量聚合酶链反应技术与P16蛋白联合检查在宫颈癌早期诊断的研究

目的研究液基薄层细胞学(TCT)、荧光定量聚合酶链反应技术(FQPCR)、P16蛋白联合检测在宫颈癌早期诊断中的价值,为宫颈癌的早期防治提供参考。方法对2012年10月-2013年10月1 786例宫颈异常女性进行TCT、FQPCR检查,监测人乳头状瘤病毒(HPV)感染情况,检测P16蛋白表达,采用SPSS 17.0进行统计分析。结果 1 786例患者中检测HPV阳性198例,阳性率为11.09%;其中高危型HPV占38.38%、低危型占61.62%;P16蛋白随着CINⅡ级、CINⅢ级、SCC变化表达率逐渐升高,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈异常患者HPV阳性检出率高,P16蛋白表达率随着宫颈病变的加重而提升,FQPCR、TCT、P16联合检查有助于宫颈癌及其癌前病变的筛查。     

日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样基因DNA疫苗的构建及其在真核细胞中的表达

[目的]构建日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样基因(ATP synthase lipid-binding protein-like protein gene of Schistosoma japonicum, SjAslp)核酸疫苗,并观察其在真核细胞中的表达情况.[方法]根据GenBank中SjAslp cDNA全长设计特异性引物,从实验室已构建好的重组质粒pBCSK /SjAslp中扩增出SjAslp cDNA全长,将其克隆入pUCm-T.载体,再亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1( )构建成日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶全基因核酸疫苗(pcDNA3.1( )/SjAslp);经PCR、酶切及测序鉴定后,利用电穿孔将其转染HeLa细胞.采用免疫细胞化学法检测SjAslp在HeLa细胞内的表达情况.[结果]成功构建SjAslp核酸疫苗,免疫细胞化学技术检测其能在HeLa细胞浆内表达.[结论]pcDNA3.1( )/SjAslp核酸疫苗能在真核细胞内表达,为抗日本血吸虫核酸疫苗的研制打下了必要的基础.     

耐链霉素结核分枝杆菌rpsL基因高突变位点43Codon分子信标检测的实验研究

目的选择耐链霉素（STR）结核分枝杆菌rpsL基因主要突变位点密码子43序列设计分子信标探针及扩增体系,并建立运用荧光显微镜及图像分析软件检测荧光结果及定性判断的方法。方法运用软件Beacon designer设计43Codon分子信标探针及建立其扩增体系,采用荧光显微镜观测反应后的荧光信号及图像分析软件定性判断结果。结果包含43Codon rpsL基因聚合酶链反应（PCR）扩增产物条带清晰;通过荧光显微镜观测到标准株及耐STR株PCR产物与分子信标探针杂交后荧光信号区别明显;67株耐STR与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,P〈0.05和P〈0.01的耐STR组检出率为80%。结论分子信标技术是一种具有高灵敏、高特异核酸检测技术;采用荧光显微镜观测荧光信号具有更强的荧光信号识别、放大功能及结果判断更准确等优点。