骨髓间充质干细胞移植在肺气肿大鼠模型肺组织内定植研究

目的:观察骨髓间充质干细胞移植在肺气肿大鼠模型肺组织内的定植情况。方法:选择健康SD大鼠34只,按随机数字表法分为MSCs干预组(A组,10只,慢阻肺大鼠,尾静脉输注MSC 1×106个/mL),肺气肿模型组(B组,10只,慢阻肺大鼠,尾静脉输注等体积PBS)及MSC对照组(C组,10只,正常大鼠,尾静脉输注MSCs 1×106个/mL),正常对照组(D组,4只,正常大鼠,尾静脉输注等体积PBS),采用烟熏法复制大鼠肺气肿模型。全骨髓培养法体外培养扩增雄性SD大鼠来源的MSCs,经GFP标记细胞后将其经尾静脉注入肺气肿模型SD大鼠体内,24 h内处死大鼠,取肺组织迅速冰冻切片,共聚焦激光显微镜下观察观察转染GPF的间充质干细胞在大鼠肺内定植情况。结果:成功培养具有分化潜能的骨髓间充质干细胞,MSCs传至第4代时有99.5%表达CD44、99.6%表达CD29等间充质干细胞表面标志,仅有0.4%表达CD34、1.0%表达CD45单核细胞以及造血干细胞表型;成功复制大鼠肺气肿模型,香烟烟雾暴露组(A、B组)平均肺泡间隔为(119.0±26.2)μm,高于对照组(C、D组)的(89.8±17.3)μm,差异有统计学意义(P0.05);平均肺泡数为(173.9±68.3)个/mm2低于对照组的(280.3±104.0)个/mm2,差异有统计学意义(P0.05);显微共聚焦发现MSCs经尾静脉注入大鼠体内24 h后可见A组大鼠肺组织内转染绿色荧光蛋白质粒的MSCs,而B组、C组及D组均未见转染荧光。结论:骨髓间充质干细胞经尾静脉输注入后可在肺气肿模型大鼠肺内定植,为MSCs治疗慢阻肺可能提供理论依据。     

间充质干细胞移植减轻大鼠肺气肿和肺泡壁细胞凋亡机制探讨

目的 研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植在肺气肿大鼠肺泡壁细胞凋亡和肺气肿的发展过程中的作用.方法 36只雌性Lewis大鼠被随机分为正常对照组12只,肺气肿组12只,肺气肿+MSCs移植组12只.处理8周后处死大鼠,评估肺组织形态学;ELISA方法检测肺泡灌洗液(BALF)中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平;Western blot法检测肺组织VEGF和血管内皮细胞生长因子受体-2(VEGF receptor 2,VEGFR2)蛋白表达;TUNEL法评估肺泡壁细胞凋亡指数.结果 在肺气肿组和肺气肿+MSCs移植组可以观察到大鼠肺气肿样改变.肺气肿+MSCs移植组与肺气肿组相比肺气肿样改变减轻.在这两组之间肺平均内衬间隔(MLI)、单位面积平均肺泡数(MAN)、平均肺泡面积(MAA)差异均有统计学意义(均P＜0.05).肺气肿+MSCs移植组肺泡壁细胞凋亡指数低于肺气肿组.肺气肿+MSCs移植组肺泡灌洗液中VEGF水平明显高于肺气肿组,而且肺组织中VEGF与VEGFR2水平也明显高于肺气肿组.结论 MSCs移植肺气肿大鼠,可以通过逆转VEGF和VEGFR2表达减少来减轻肺泡壁细胞凋亡和肺气肿的发生.     

骨髓间充质干细胞移植对抗肺气肿大鼠膈肌细胞凋亡的作用机制

目的研究引起肺气肿大鼠膈肌细胞凋亡的机制和骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对抗膈肌细胞凋亡的作用机制。方法实验分为三组：正常对照组、肺气肿组、肺气肿＋MSCs移植组。检测各组大鼠膈肌重量,膈肌中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力,膈肌细胞凋亡指数（AI）,测定膈肌Bcl～2、Bax蛋白表达。结果肺气肿组与肺气肿＋MSCs移植组大鼠膈肌重量、SOD活力均较对照组显著降低（P〈0．01）,MDA含量、AI、Bax蛋白表达显著升高（P〈0．01）;肺气肿＋MSCs移植纽大鼠膈肌重量、SOD活力、Bcl-2蛋白表达均显著高于肺气肿纽（P〈0．01）,MDA含量、AI、Bax蛋白表达显著低于肺气肿组（P〈0．01）。结论氧化应激水平升高引起肺气肿大鼠膈肌细胞凋亡,骨髓间充质干细胞移植可降低膈肌氧化应激水平从而减少肺气肿大鼠膈肌细胞凋亡。     

骨髓间充质干细胞对肺损伤大鼠的治疗作用

目的:观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠肺损伤的治疗作用.方法:将SD大鼠MSCs用DAPI标记后注入受体大鼠体内.将受体大鼠分为4组:肺损伤组、MSCs治疗组、MSCs对照组和正常对照组.2 wk后观察肺组织结构、植入细胞的变化,同时检测支气管肺泡灌洗液中层黏连蛋白、透明质酸以及肺组织羟脯氨酸含量的变化.结果:MSCs治疗组大鼠肺组织中可见少量DAPI标记的细胞,其中部分细胞表达广谱细胞角蛋白,肺间质增生减轻;支气管肺泡灌洗液中层黏连蛋白、透明质酸及肺组织羟脯氨酸的含量在肺损伤组均有明显升高(P＜0.01),而在MSCs治疗组均有所下降(P＜0.01).结论:MSCs可在损伤的大鼠肺组织中分化为肺泡上皮细胞,降低支气管肺泡灌洗液中层黏连蛋白、透明质酸及肺组织羟脯氨酸的含量,减轻大鼠肺损伤及纤维化的形成.     

重组腺病毒Ad-HGF对烟熏大鼠肺气肿肺组织细胞凋亡的抑制作用

目的通过构建大鼠肺气肿模型,观察携带肝细胞生长因子基因的重组腺病毒（Ad-HGF）对肺组织细胞凋亡的抑制作用。方法40只Wistar大鼠随机分为4组：正常对照组（A组）、肺气肿组（B组）、肺气肿＋Ad～HGF组（C组）和肺气肿＋Ad—GFP组（1）组）;采用烟熏法建立大鼠肺气肿模型。造模成功后,A组正常饲养,B组给予0．5ml生理盐水灌注治疗,C组给予1×10^9 pfu Ad-HGF,D组给予1×10^9 pfuAd-GFP：干预14天后处死各组动物,取D组大鼠部分肺组织作常规冰冻切片,荧光显微镜下观察目的基因的表达;取A、B、C5-组大鼠肺组织制作病理切片,观察并计算平均肺泡面积（MAA）、平均内衬间隔（MLI）、平均肺泡数（MAN）;采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术对大鼠肺实质凋亡细胞的阳性细胞率（AI）进行检测。结果与A组相比,B组、C组大鼠的肺组织都存在不同程度的肺气肿病理改变;Ad—HGF治疗纽MAA和MLI均小于模型组、MAN大于模型组,差异有统计学意义（P〈O．05）;Ad—HGF治疗组肺组织细胞凋亡指数（AI）低于模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论重组腺病毒Ad—HGF对烟熏大鼠肺气肿肺组织细胞凋亡有抑制作用。     

骨髓间充质干细胞移植对肺气肿大鼠的影响

目的:研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对肺气肿大鼠的影响.方法:采用贴壁选择法分离、培养并扩增大鼠MSCs,并以5-溴氮尿嘧啶核苷(Brdu)进行标记.Wistar大鼠30只,随机分为对照组、模型组和移植组,每组10只.模型组和移植组大鼠于气管内注入脂多糖并烟雾暴露,建立肺气肿大鼠模型.然后将培养的MSCs经尾静脉注入到移植组大鼠体内.观察移植后3组大鼠肺病理学改变,免疫组织化学法检测Brdu及上皮细胞特异性标志物细胞角蛋白(CK)的表达情况.结果:模型组和移植组均出现肺气肿病理改变,但后者较前者明显减轻.3组间平均肺泡数(MAN)、肺泡腔与肺总面积比(PAA)差异均有统计学意义(F=482.248,194.474,P均<0.001);移植组MAN高于模型组,但低于正常对照组;PAA低于模型组,但高于正常对照组(P均<0.05).移植组可见Brdu阳性细胞表达,部分Brdu阳性细胞内有CK的表达.对照组和模型组未见Brdu阳性及CK阳性细胞.结论:MSCs移植明显减轻肺气肿大鼠肺部炎症和病理改变,这可能与MSCs在受体肺组织内分化为肺泡上皮细胞有关.     

Caspase抑制剂早期干预对吸烟型肺气肿大鼠肺泡结构保护的实验研究

目的：探讨早期使用Caspase抑制剂z-VAD-fmk对吸烟型肺气肿大鼠肺泡结构保护的机制。方法：30只清洁级SD大鼠平均随机分为对照组（A组）和肺气肿模型组（B组）和z-VAD-fmk干预组（C组）。12周后取肺组织制作石蜡切片,光镜下观察肺泡病理改变。原位缺口末端标记法（TUNEL）检测各组大鼠肺泡隔细胞凋亡指数（apoptosis index,AI）,免疫组化检测肺组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果：12周末光镜显示：B组较C组肺气肿特征性病理改变逐渐加重,A组无肺气肿表现。各组肺泡隔细胞AI,B组与A、C组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。免疫组化显示B组Bax蛋白表达呈强阳性,而Bcl-2蛋白表达相对较弱,与A、C组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：肺气肿形成初期,使用Caspase-3抑制剂z-VAD-fmk可显著上调肺组织中Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白的表达,使肺泡隔细胞凋亡减少,明显减轻肺气肿的病理改变。     

骨髓问充质干细胞对大鼠损伤汗腺的修复性研究

目的探讨皮肤汗腺受损后骨髓间充质干细胞对其的修复效果。方法大鼠骨髓间充质干细胞体外分离、培养、标记。机械损伤大鼠脚掌汗腺,干细胞治疗组于创面周围皮下注入MSCs,对照组注射相同剂量PBS,分别比较两组的创面愈合率及再生上皮的厚度,观察MSCs参与受损汗腺修复的情况。结果7d时干细胞治疗组的创面愈合率及14d时的表皮再生厚度均优于对照组（P〈0．05）;BrdU标记的MSCs参与了损伤汗腺导管部的修复。结论骨髓间充质干细胞有利于创伤皮肤的修复并可能参与损伤汗腺的修复。     

不同海拔大鼠肺气肿模型肺组织caspase-3水平比较

目的 观察不同海拔肺气肿大鼠肺组织caspase-3表达水平,评估低氧对肺组织凋亡的影响.方法 40只Wistar 大鼠随机分为对照组（A组,6只）、中海拔盐水组（B组,6只）、中海拔肺气肿组（C组,8只）、高海拔盐水组（D组,10只）、高海拔肺气肿组（E组,10只）.A、B、C3组大鼠饲养于西宁,海拔2260m.D组和E组饲养于低压氧舱,模拟海拔5500m.B组和D组腹腔注射生理盐水、C组和E组腹腔注射CSE,饲养4周后,采集大鼠右肺组织,免疫组化法检测肺组织caspase-3的表达.结果 与A、B、D3组比较,C组和E组肺实质破坏、部分肺泡破裂及肺泡腔扩大.5组间caspase-3细胞阳性率比较有统计学差异（P＜0.001）.D组高于B组及A组（P ＜0.001）,E组高于C组（P＜0.001）,C组高于B组（P＜0.001）,E组高于D组（P＜0.001）.结论 高原低氧加重了肺气肿大鼠的凋亡表达.     

骨髓间充质干细胞对高氧肺损伤大鼠的治疗作用

【目的】: 观察骨髓间充质干细胞(MSC)对新生大鼠高氧肺损伤的治疗作用?【方法】 贴壁法体外培养扩增大鼠骨髓MSC,利用携带GFP基因的慢病毒液对骨髓MSC进行转染;SD新生大鼠随机分为A?B?C?D?E五组,A,B两组高氧暴露7 d后经尾静脉分别注射(1 × 105 /只和1 × 104 /只)骨髓MSC,C组注射磷酸盐缓冲液(PBS),D?E两组为空气组,分别注射骨髓MSC和PBS,观察骨髓MSC在大鼠肺组织的分布情况?大鼠的体质量增长?肺系数?放射性肺泡计数(RAC)及肺组织的病理改变?【结果】 A?B?D组肺组织中均可见GFP+ 细胞;MSCs干预3?7 d,A,B两组GFP+ 细胞占总细胞数的比例高于D组(31.3 ± 2.6% vs. 11.8 ± 1.3%,A组 vs. D组, 22.7 ± 1.3% vs 11.8 ± 1.3%, B组 vs. D组,P < 0.05);A组治疗第3?7?14天GFP+ 细胞占总细胞数的比例高于B组,P < 0.05;A?B两组治疗后体质量增长加快(66 ± 9 g vs. 48 ± 7 g,A组 vs. C组, P < 0.05),肺系数降低(2.26 ± 0.23% vs. 2.9 ± 0.4%,A组 vs. C组, P < 0.05),RAC值明显增加(9.2 ± 0.7 vs. 7.4 ± 0.4,A组 vs. C组, P < 0.05),肺部炎性反应减轻;A组对高氧肺损伤的治疗作用优于B组,P < 0.05?【结论】 两种剂量的骨髓MSC均可以减轻高氧肺损伤,高剂量组对高氧肺损伤的治疗效果更明显。     

不同时间低压低氧刺激对大鼠肺动脉压力及肺组织的影响

目的 观察不同低压低氧刺激时间对大鼠平均肺动脉压力、肺组织及酪氨酸激酶中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)表达水平的影响。方法 将32只雄性SD大鼠采用抽签法随机分为4组,A组正常海拔环境下饲养21 d;B组持续低压低氧环境(低压低氧舱模拟海拔5 000米高度)21 d,C组每天6 h低压低氧环境持续21 d,D组间断24 h(隔天)低压低氧环境21 d,光照、饮食、饮水等因素相同。利用BL-420S生物信号采集系统,通过右心导管法测量每组大鼠肺动脉压力;HE染色观察每组大鼠肺组织;ELISA方法测定每组大鼠血清中VEGF、PDGF、FGF表达量。结果 ①B、C、D组大鼠平均肺动脉压力较A组升高(P＜0.05),其中B组升高最明显,平均肺动脉压力为(27.4±1.2) mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),其次为D组,平均肺动脉压力为(22.1±1.1) mmHg。②B、C、D组大鼠肺血管周围均可见淋巴细胞浸润,B、D组大鼠肺组织可见炎症细胞及纤维组织引起的局部实变,亦可见局部肺泡过度充气,呈肺气肿表现。③B、C、D组VEGF、PDGF、FGF表达量较A组明显升高(P＜0.05)。结论 间断低压低氧刺激可以诱发大鼠肺动脉压力升高,但是间断低压低氧6 h、间断低压低氧24 h持续21 d的大鼠平均肺动脉压力未达到25 mmHg;间断低压低氧导致肺内炎症细胞浸润增多、肺泡壁结构破坏,进而造成肺实变、肺气肿病变;VEGF、PDGF、FGF等酪氨酸激酶表达量明显升高。     

解脲脲原体感染对大鼠睾丸组织结构及睾酮水平的影响

目的:探讨解脲脲原体(ureaplasma urealyticum,UU)感染对大鼠睾丸组织结构及睾酮水平的影响.方法:清洁级SD大鼠40只随机分为实验组A(术后7 d组,A组)、实验组B(术后14 d组,B组),对照组C(术后7 d组,C组)和对照组D(术后14 d组,D组),每组10只.A、B组膀胱注射0.6 ml UU4型菌株(1×107 CCU/ml),C、D组膀胱注射等体积的UU液体培养基.术后第7天取A和C组、第14天取B和D组大鼠睾丸组织HE染色观察结构,相应时间取4组大鼠睾丸间质液和血浆,采用化学发光法检测睾酮水平.结果:HE染色显示A、B组呈炎症性病理变化,曲细精管生精细胞层次和数量减少,基底膜破坏,炎细胞浸润,成熟精子减少,但B组炎症病变较A组轻,C、D组睾丸结构正常.A、B组血浆睾酮水平均明显低于C、D组(P<0.01),但B组与A组血浆睾酮水平差异无统计学意义(P>0.05).A组睾丸间质液睾酮水平均明显低于B、C和D组(P<0.01),而B、C和D组睾丸间质液睾酮水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论:大鼠感染UU后睾丸组织可出现病理性改变,睾酮分泌功能降低,随时间的延长,睾丸组织结构及睾酮水平逐渐恢复.     

传统肺减容术和肺叶切除后兔肺功能及组织结构的比较

目的对比传统肺减容术(LVRS)和肺叶切除术后阻塞性肺气肿兔的肺功能和组织结构变化.方法40只肺气肿兔随机等分为4组肺气肿组(A组)、传统LVRS组(B组)、肺叶切除组(C组)和假手术组(D组),8周后进行肺功能和肺组织学检查.结果与A组比较,B组和C组的潮气量、0.3 s用力呼气容积(FEV0.3),FEV0.3/FVC(用力肺活量)、PaO2、平均肺泡数和肺泡隔面密度增加,功能残气量、paCO2、肺总容积和肺泡直径降低(P＜0.05),而D组变化不明显(P＞0.05).B组和C组肉眼及光镜下可见肺气肿改善,而D组无明显变化.B组和C组之间上述各指标无显著差异(P＞0.05).结论传统的LVRS和肺叶切除术均可有效改善阻塞性肺气肿兔的肺功能和组织结构.     

纤变灵对口腔粘膜下纤维化大鼠ET-1表达的影响

目的研究纤变灵（XBL）对模型大鼠口腔粘膜下纤维化（OSF）内皮素-1（ET-1）表达的影响。方法将40只大鼠随机分为A（正常对照组）、B（模型对照组）、C（纤变灵组）、D（雷公藤多甙LGTDD组）4组,每组10只,B、C、D组经槟榔提取物（ANE）刺激下制作OSF模型后,B组不作任何处理;C、D组分别以XBL和LGTDD连续灌胃8周。采集口腔颊部粘膜进行ET-1免疫组化检测。结果模型组ET-1的表达明显高于正常对照组（p〈0.01）;药物干预后,纤变灵组ET-1表达明显低于模型组和雷公藤多甙组（P〈0.01）。结论XBL能够降低ET-1在大鼠OSF组织中的表达,这可能是XBL治疗OSF的机理之一。     

高草酸尿和输尿管梗阻对肾实质草酸盐结晶沉积的影响

目的 :探讨高草酸尿和单侧输尿管梗阻 (UUO)对肾实质草酸盐结晶沉积的影响。方法 :取 40只雄性成年Wistar大鼠 ,随机分为四组 ,每组 10只 ,A组为对照组 ,B组为高草酸尿组 ,C组为输尿管梗阻组 ,D组为高草酸尿并输尿管梗阻组。A组和B组给予假手术 ,B组和D组给予 1%乙二醇为饮用水 ,A组和C组给予蒸馏水 ,C组和D组用 4～ 0丝线行左侧输尿管近端结扎。所有大鼠均在术后 2周处死并取左肾 ,行常规H E(苏木素 伊红 )染色检测肾小管间质草酸盐结晶时沉着情况。结果 :B组和D组组织切片肾小管腔内可见明显的草酸盐晶体沉着 ,A组和C组未见有晶体沉着。A组草酸盐结晶沉积情况与B组和D组相比差别均有显著意义 (P <0 0 1) ,B组和D组相比差别也有显著意义 (P <0 0 1)。结论 :高草酸尿可致肾小管间质草酸盐结晶沉着 ,合并梗阻时沉着加重 ;单有梗阻并不能造成草酸盐结晶沉积     

壮骨止痛方提取物对去势骨质疏松症雌鼠血清E_2、BGP水平的影响

目的:观察壮骨止痛方提取物对去势骨质疏松症雌鼠血清雌激素(E2)和骨钙素(BGP)的影响。方法:60只3月龄雌性SD大鼠随机分为正常组(A组)、假手术组(B组)、模型对照组(C组)、壮骨止痛方提取物组(D组)四组,15只/组,除正常组及假手术组外,其余组去势(去卵巢)后建立绝经后骨质疏松症模型大鼠,假手术组则去除卵巢周边相应体积的脂肪。大鼠皆灌胃13周后处死取材,测定血清中E2、BGP的含量并观察股骨头病理组织形态学变化。结果:D组大鼠E2水平明显升高,同时血清BGP的水平降低,与C组比较,有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。病理形态学镜下观察C组骨小梁稀疏、破坏,骨髓腔扩大,骨小梁密度明显下降,A组与B组骨小梁分布均匀,股骨骨小梁密度正常,D组骨小梁密度分布比较均匀,骨小梁密度基本恢复正常。结论:壮骨止痛方提取物不仅能促进雌激素分泌,而且可以通过调节BGP以降低骨转换率,减少骨量丢失,达到抗骨质疏松的目的。     

腹主动脉阻断术后合并脓毒症大鼠肺脏损伤SOD的变化

目的:观察大鼠腹主动脉阻断缺血再灌注后合并脓毒症时肺脏组织的病理改变及肺脏组织中SOD1和SOD2表达的变化.方法:将wistar大鼠40只随机分为4组(为实际造模成功数目,不计死亡动物数):对照组(A组);腹主动脉阻断组(B组);脓毒症组(C组);腹主动脉阻断合并脓毒症组(D组).所有动物均于再灌注后8 h处死,取肺...     

CRTH2受体拮抗剂缓解大鼠哮喘模型气道炎症

目的:通过对大鼠哮喘模型嗜酸性粒细胞(EOS)上DP1/CRTH2受体及细胞因子变化的分析,研究DP1/CRTH2拮抗剂对大鼠哮喘模型气道炎症的影响和机制.方法:40只雄性SD清洁级大鼠,随机分为正常对照组、哮喘组、CRTH2拮抗剂BAYu3405应用组、DP1受体拮抗剂BWA868C应用组,每组10只.用卵白蛋白(OVA)雾化诱喘.放射配体分析其外周血EOS上的PGD_(2)受体;ELISA测定大鼠血中IL-4和IL-5及IFN-γ水平;肺组织病理切片,HE染色镜检.结果:CRTH2拮抗剂BAYu3405应用组大鼠支气管壁EOS浸润显著减少,血清IFN-γ水平显著增高,(IL-4)、IL-5水平显著低于哮喘组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组(P<0.01);在肺泡灌洗液中EOS计数较哮喘组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组显著减少(P<0.01),外周血EOS计数与哮喘组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组相似,较正常对照组显著增加(P<0.01).与正常对照组相比,哮喘组、CRTH2拮抗剂BAYu3405应用组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组外周血EOS上DP总结合和CRTH2受体结合容量显著增加(P<0.01),DP1无显著性差异(P>0.05).结论:CRTH2受体(DP2)拮抗剂能缓解大鼠哮喘模型气道炎症,减少气道中EOS浸润,可能与CRTH2受体拮抗剂能通过拮抗EOS上增高的CRTH2结合容量,降低IL-4、IL-5和增高IFN-γ水平有关,DP1拮抗剂BWA868C对大鼠哮喘模型气道炎症无显著改善作用.