胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓损伤后神经再生的影响

目的 探讨胚胎脊髓（Fetal spinal cord,FSC）移植联合外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的应用对脊髓损伤后脊髓神经再生的影响。方法 采用大鼠胸段（T8～T11）脊髓左侧半横切损伤模型。移植供体为同种异体妊娠14天的孕鼠,将实验动物分为3组：A组为损伤——FSC移植组;B组为损伤＋FSC移植＋bFGF组;C组为单纯损伤组。术后1～8周每周行综合行为评分（combined behavioral score,CBS）,评定大鼠功能,并取术后8周损伤区脊髓组织0.5cm作嗜银梁色及NF200免疫组织化学检查,分别标记轴突和胶质细胞,进行定量分析,观察神经纤维再生情况。结果 胚胎脊髓移植和外源性bFGF可以防止成鼠脊髓损伤后神经元的萎缩,图像分析发现其作用A、B组组优于C组,可以较好地恢复神经元形态。CBS评分提示大鼠神经功能的恢复也有同样趋势,治疗组统计学分析与对照组间有显著性差异。免疫组织化学检查,术后8周A、B组神经中丝（neurofilament,NF）着色点较C组密集,且没有明显的胶质增生。结论 脊髓损伤后联合应用胚胎脊髓移植和bFGF可以防止神经元的萎缩,并且对神经纤维再生及功能的恢复有促进作用。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

来源于嗅觉系统的嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)具有外周与中枢胶质细胞特性,能够终生促进哺乳动物嗅神经再生。动物实验表明,OECs 移植治疗脊髓损伤能促进受损的运动、呼吸等功能恢复[1],且已在临床用于人类脊髓损伤的治疗。笔者就OECs生物学特性、OECs在脊髓损伤部位的迁移、促进轴索再生、提供神经营养、形成轴索髓鞘、OECs移植治疗脊髓损伤的安全性与可靠性、临床应用等方面的研究进展作一综述。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤临床试验的初步报告

目的：开展嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的临床试验，探讨其对脊髓损伤晚期患者是否有帮助脊髓神经功能恢复的作用。方法：取胚胎溴球，消化成单个溴鞘细胞后，培养2－3周，然后将其移植到脊髓损伤部位的上下处。共治疗23例伤后时间为0．5－8．5年的脊髓损伤患者，其中19例为完全性脊髓损害，4例为不完全性脊髓损害。结果：嗅鞘细胞移植后2周－2个月时随访，23例患者的脊髓功能均有改善，且呈继续改善趋势。结论：嗅鞘细胞移植能帮助脊髓损伤晚期患者的脊髓神经功能恢复。     

脊髓损伤移植治疗的研究进展

脊髓损伤后的修复是一个极具挑战性的课题，组织或细胞移植可能是极具治疗前景的方法之一。脊髓损伤后移植治疗的目的在于;提供适合轴突再生的基质；桥接损伤后形成的缝隙；替代补充死亡的神经细胞；作为基因治疗的载体等几个方面。移植采用的组织和细胞多种多样，目前部分研究已经在动物实验中取得了令人满意的效果。     

神经干细胞缺氧预处理后的内源性保护作用和促红细胞生成素的表达

神经干细胞（neural stem cells，NSCs）是具有自我更新能力和多种分化潜能的细胞。体外培养的NSCs移植治疗中枢神经系统包括脊髓损伤成为近年来研究的热点之一。但细胞受绝对数量和移植后局部微环境所限，使其存活率不高，限制了其修复作用，影响了移植效果。笔者通过体外实验，对大鼠NSCs进行缺氧预处理，观察处理后细胞对伤害性刺激的内源性保护作用，并对其机制进行初步的探讨，为进一步提高NSCs移植治疗效果提供理论依据和指导。     

脊髓损伤的实验性治疗

脊髓损伤后之所以恢复困难，主要原因包括中枢神经系统轴突再生能力极其有限、成年人脊髓的少突胶质细胞不能像神经膜细胞那样在轴突断裂后引导轴突生长并形成髓鞘，以及神经因子分泌不足、轴突再生微环境中存在抑制因素、脊髓损伤后胶质瘢痕和空洞的形成阻止了轴突进入远端等。纵观脊髓损伤实验性治疗的历程，主要集中在药物治疗、神经营养因子治疗、拮抗轴突生长抑制因素，以及细胞或组织移植、组织工程治疗和基因治疗等方面，现分类综述如下。     

少突胶质前体细胞移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响

目的 探讨少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响.方法 采用Allen法制作大鼠T10脊髓损伤模型,亚急性期OPCs移植治疗.通过HE染色、免疫组化染色、髓鞘染色及透射电镜观察等方法,研究OPCs移植治疗对大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化的影响.结果 移植术后8周时大鼠损伤脊髓内检测到移植细胞分布,HE染色显示OPCs移植组大鼠脊髓组织结构较对照组改善,勒克司坚牢蓝(LFB)髓鞘染色表明OPCs移植组大鼠脊髓内髓鞘含量(7 802.42±1 085.58)明显高于对照组(5 055.98±916.74)(P＜0.01),OPCs移植组大鼠脊髓组织内髓鞘碱性蛋白(MBP)表达水平(8 544.44±812.78)较对照组(5 243.83±808.27)显著增高(P＜0.01),透射电镜示OPCs移植组大鼠脊髓组织髓鞘化超微结构改善也较对照组明显.结论 OPCs移植治疗有助于改善大鼠脊髓损伤轴突髓鞘化情况.     

脑源性神经营养因子基因转染嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤的观察

目的观察BDNF基因转染的嗅鞘细胞（OECs）对脊髓损伤的修复作用。方法制作大鼠脊髓损伤模型,随机分为无OFCs移植组（6只）、非转染OECs移植组（6只）和转染OECs移植组（8只）,利用免疫组化、逆行示踪及顺行示踪技术对脊髓横断损伤区及其上位、下位脊髓不同平面进行观察。结果移植后12周在局部注射区仍可以见到预标记的OECs,免疫组化观察到脊髓损伤区有BDNF的表达。逆行示踪法在损伤平面头侧的脊髓、脑干和皮质中观察到示踪剂。顺行示踪法在脊髓损伤区可以见到再生的神经纤维通过。无嗅鞘细胞移植组及非转染嗅鞘细胞移植组损伤平面头侧的脊髓、脑干和皮质中未观察到示踪剂,脊髓损伤区内亦未见有再生神经纤维长入。结论移植BDNF转染的OECs可促进损伤的中枢神经轴突存活和再生,较单纯应用OECs能更好地促进脊髓损伤修复。     

内源性神经干细胞与脊髓损伤

1992年Reynodl与Wesis首次报告体外成功培养神经干细胞（neural stemcell，NSC），NSC的应用研究逐渐成为生命科学研究的热点。脊髓损伤（spinalcord injury，SCI）是一类中枢神经系统严重的致残性疾病。据报道，发展中国家每年大约有35000人因脊髓损伤而高位截瘫或终身坐在轮椅上，其中82％是16—32岁的男性，给社会和家庭带来了不可估量的损失。NSC以其自我更新和多向分化的特点，对脊髓损伤的治疗显示出巨大的潜力。NSC经体外培养扩增后移植治疗脊髓损伤是目前主要的研究方法，这种外源性NSC移植的方法虽然取得了许多进展，但随着研究的深入，其存在的一些问题逐渐显露出来，这些问题迫使人们去寻找解决的办法。     

真皮多能干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的：观察真皮多能干细胞（dMSCs）移植对脊髓损伤大鼠运动功能的修复作用。方法：32只SD大鼠在L4水平制成脊髓全横断损伤模型，并随机分为真皮多能干细胞移植组（A组）及损伤对照组（B组），每组10只大鼠。伤后1w，移植组于伤处移植大鼠真皮多能干细胞（dMSCs），而对照组仅注射等量PBS。分别于移植后1d、1w、8w、12w对两组大鼠进行动物行为学（BBB）评分和脊髓诱发电位（SEP和MEP）检测，并于移植后12w进行损伤脊髓的大体观察和组织学检测。结果：BBB评分4w以后组间比较差异有统计学意义（P〈0．05），移植组明显高于对照组（P〈0．05）；SEP和MEP潜伏期和波幅值在8、12w后组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；移植后12w，移植组损伤脊髓结构的修复明显优于对照组。结论：移植治疗脊髓损伤，能明显改善其运动功能和神经形态，dMSC对脊髓损伤大鼠有治疗作用。     

胚胎干细胞在脊髓损伤中的应用

神经干细胞具有自我增殖、分化、迁移及建立突触联系的特征,并可促进损伤神经组织的修复与再生。最近发现,经胚胎干细胞诱导的神经前体细胞植入受损伤的脊髓中,可分化为神经元和神经胶质细胞,并能促进脊髓功能的恢复,提示胚胎干细胞在中枢神经系统的治疗中具有广阔的应用前景。     

脊髓神经干细胞在Sapeptide材料上增殖与分化的研究

目的观察脊髓神经干细胞在Sapeptide材料上的增殖和分化情况，并对分化的细胞进行一定功能检测，探讨其细胞假体在脊髓损伤中应用的可能性。方法观察塑形的Sapeptide材料，将培养的脊髓神经干细胞接种其上，然后鉴定干细胞并通过体积分数5％胎牛血清诱导分化，鉴定分化细胞的类型及比例，并与无材料的干细胞的分化情况相比较，最后对材料上的分化细胞进行缝隙连接蛋白32（CX32）和生长相关蛋白43（GAP-43）染色评价。结果Sapeptide材料在等渗盐水中可塑形，扫描电镜示具有规则的网状排列，脊髓神经干细胞在其上可增殖和分化，分化的细胞较无材料的差异无统计学意义（P〉0．05），并且具有大量的CX32和GAP-43阳性细胞。结论脊髓神经干细胞在Sapeptide材料上增殖和分化良好，假体在脊髓损伤的修复中可能具有潜在的应用前景。     

脊髓损伤干细胞治疗的研究现状与未来

脊髓损伤是一种严重的中枢神经系统损伤,致残率高、并发症多、预后差。近二十年,尽管脊髓损伤的外科治疗取得一定进展,但仍无法从根本上改善脊髓损伤患者的临床预后。干细胞治疗被视为再生医学中最具应用前景的治疗手段之一。近年来,干细胞移植、刺激自体潜在的干细胞分化等干细胞治疗脊髓损伤已取得一定成果,但其临床转化仍存在诸多瓶颈。笔者回顾近年来脊髓损伤干细胞治疗的研究现状并对其未来进行展望,为脊髓损伤干细胞治疗相关研究提供参考。     

聚乙醇酸支架组织工程神经复合物修复大鼠脊髓损伤

目的 利用组织工程技术体外初步构建组织工程神经复合物，对成年大鼠损伤脊髓进行修复并观察其效果。方法 （1）分离培养大鼠神经干细胞（neural stem cells, NSCs），体外构建NSCs／聚乙醇酸（PGA）支架复合物，以胚胎脊髓提取液对NSCs进行诱导分化，通过组织化学检测和扫描电镜观察该复合物结构。（2）制作大鼠脊髓半横断损伤模型，植入组织工程神经复合物，术后6周通过功能学和组织学检查评估修复脊髓损伤的效果。结果 （1）体外构建的NSCs／PGA支架组织工程神经复合物含有神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞等成分，有独特的组织结构。（2）组织工程神经复合物移植后，其内的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞可以存活并继续成熟，成年大鼠损伤脊髓平面以下运动功能获得了较明显的恢复。结论 体外构建的组织工程神经复合物对成年大鼠损伤脊髓的结构重建和功能恢复都有一定的作用。     

神经干细胞移植联合神经节苷脂治疗大鼠脊髓损伤

目的 观察神经干细胞(neural stem cells,NSCs)联合单唾液酸四己糖神经节苷脂(monosialotetrahexosyl ganglioside,GM1)治疗大鼠急性脊髓损伤的作用。 方法 采用成年SD大鼠,制作T8节段脊髓压迫损伤模型。动物按随机数字表法分为三组：对照组、NSCs组、NSCs+GM1组。连续观察1,2,4,8周,应用运动功能评分、病理组织学、透射电镜、体感诱发电位(SEP)等检查,比较大鼠脊髓神经功能的恢复情况。 结果 伤后动物后肢运动功能均有不同程度恢复,4,8周时NSCs+ GM1组显著高于其他组(P＜0.01),降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)染色阳性细胞较其他各组增多。与对照组和NSCs组比较,8周时NSCs+ GM1组只在损伤中心处出现灶性坏死,小血管增生明显。电镜扫描结果显示,8周时对照组仍可见大的神经髓鞘轴膜下水肿,而NSCs+ GM1组可见大量完整的神经髓鞘和分化正常的神经细胞,轴突末端还可见多种突触小泡。SEP结果显示,移植后2周NSCs+ GM1组SEP的潜伏期即明显缩短(P＜0.05),4,8周SEP缩短以NSCs组为显著,但仍高于实验正常鼠潜伏期。 结论 脊髓损伤大鼠移植NSCs联合应用GM1能够保护受伤的神经组织。GM1可促进植入的NSCs分化,并与宿主形成突触连接,重建脊髓功能。     

经骨髓间充质干细胞诱导分化的神经样细胞对大鼠脊髓损伤的修复作用

 目的 探讨经骨髓间充质干细胞诱导分化的神经样细胞对大鼠脊髓损伤的修复作用。方法 提取、培养和扩增骨髓间充质干细胞后,在体外诱导分化为神经样细胞。大鼠脊髓损伤造模后,分别进行神经样细胞、骨髓间充质干细胞及无细胞悬液移植,每组18只。术后采用BBB评分及斜板实验观察3组大鼠的运动功能恢复情况。结果 体外诱导骨髓间充质干细胞后,经免疫组化染色发现具备神经细胞特征。术后6周,BBB评分方面,实验组(16.56±2.42)优于阳性对照组(13.70±2.66),后者又优于阴性对照组(8.37±2.35)。Rivlin斜板实验评分方面,实验组术后2、4、6周,均优于阳性对照组,后者又均优于阴性对照组。实验组术后可见较多的神经纤维,结构完整,优于阳性对照组及阴性对照组。结论 体外诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化后,移植治疗大鼠脊髓损伤具有良好效果。
     

K506促进神经干细胞移植后损伤脊髓神经传导通路的修复

目的 观察他克莫司(FK506)促进神经干细胞(neural stem cels,NSCs)移植后损伤脊髓神经传导通路修复的作用.方法 显微镜下动脉瘤夹压迫SD大鼠T8脊髓,建立压迫型脊髓损伤动物模型.损伤后7 d按随机数字表法分为三组:对照组,于损伤中心定向注射等渗盐水;细胞移植组,于损伤中心定向注射NSCs;FK506组,于损伤中心定向注射NSCs,同时按1 mg·kg-1·d-1连续7 d腹腔注射FKS06.连续观察1,2,4,8周,通过BBB评分、BDA顺行示踪、体感诱发电位(SEP)与运动诱发电位(MEP)监测,比较观察大鼠脊髓神经传导功能的恢复情况.结果 伤后后肢运动功能均有不同程度的恢复,4周时恢复速度最明显,8周时BBB最高评分可达6分;BDA顺行示踪,FK506组和细胞移植组在1周后有部分神经纤维通过,8周时各组均有部分BDA阳性标记的皮质脊髓束再生通过脊髓损伤部位,特别是FK506组可延续至距损伤中心1.7 cm.诱发电位结果显示,FKS06组在2周时SEP的潜伏期即明显缩短(P<0.05).4周后,FK506组MEP潜伏期与各组比较明显缩短(P<0.05),表明应用免疫抑制剂能促进NSCs对损伤脊髓的恢复,缩短SEP和MEP的潜伏期,早期对SEP改善明显,后期对MEP改善明显.结论 脊髓损伤大鼠移植NSCs后,系统应用FK506后具有神经保护和神经营养作用,可加快神经传导功能的恢复.

Abstract：

Objective To observe the effect of tacrolimus(FK506)in promoting repair of the injured spinal cord pathway after neural stem cell transplantation in rats. Methods A neurysm clip was used to compress the T8 spinal cord segment of SD rats under microscope to establish model of spinal cord injury.The rats were randomly divided into three groups seven days after injury,ie,control group (injection of normal saline at the injury center),transplantation group(injection of neural stem cells,NSCs,at the injury center),FK506 group(injection of NSCs at the injury center plus 7 days of intrapernerve conduction was compared by using the Basso-Beatfle-Bresnahan (BBB) scale,BDA tracing,somatosensory evoked potential(SEP)and motor evoked potentials(MEP)monitoring at 1,2,4 and 8weeks. Results The motor function of the hind limb after injury was recovered in various degrees with time,with the most significant recovery at 4 weeks.The BBB score reached 6,the maximum at 8 weeks.BDA tracing showed that some nerve fibers were found crossing the injured center of the spinal cord one week later in FK506 group and cell transplantation group,that BDA-positive labeled corticospinal tract fibets were seen across the injury site in all groups by the end ofthe eight weeks.In the FKS06 group,the regeneration could be observed even as 1.7 cm away from tlle injury center.SEP latency was significantly shorter in the FK506 group after two weeks(P<0.05)and the MEP latency in the FK506 group was shortened significantly at four weeks compared with the other groups(P<0.05),indicating that the immunosuppressants could promote the recovery of the injured spihal cord,shorten the latency of SEP and MEP,improve SEP at early stage and MEP at late stage．Conclusions Systemic application immuno suppressive agents FK506 plays an important role in neuroprotection and neurotrophy,which promotes the repair of the injured spinal cord after neural stem cell transplantation．     

神经干细胞、丙戊酸联合应用对成鼠脊髓损伤的修复作用

目的观察神经干细胞（NSCs）和丙戊酸（VPA）联合应用对成年大鼠脊髓损伤后的修复作用。方法SD大鼠随机分为单纯损伤组、NSCs移植组和NSCs＋VPA治疗组。采用半切脊髓损伤模型,损伤后进行病理染色和神经诱发电位检测。结果NSCs＋VPA治疗组损伤处空洞闭合情况优于其余两组,移植物和宿主脊髓建立的纤维联系较其余两组多,排列有序。NSCs＋VPA治疗组诱发电位各项指标匀优于其余两组,8周时最显著,其中以运动诱发电位（MEP）的优化最明显。结论NSCs和VPA联合应用对成鼠脊髓损伤具有良好的修复作用。     

间充质干细胞外泌体治疗脊髓损伤作用机制的研究进展

脊髓损伤后继发性损伤及胶质瘢痕,使神经细胞在微环境中出现再生障碍,导致治疗困难.间充质干细胞(MSCs)具有多向分化、自我更新能力、参与免疫调节等功能,可用于治疗脊髓损伤,但存在不易通过血脊屏障、高致瘤性等缺点.MSCs外泌体是由MSCs分泌的纳米级外囊泡,包裹多种活性物质,在脊髓损伤研究中具有极强的神经修复作用,且具...     

骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤是中枢神经系统的一类严重创伤,其所造成的运动及感觉功能障碍,显著降低了患者的生存和生活质量。现行的修复方法和药物治疗效果欠佳,以致于给个人、家庭和社会造成了沉重的负担。随着生物学及分子生物学研究的不断深入,以骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植为代表的生物治疗为脊髓损伤的修复带来了曙光。本文将就脊髓损伤修复的现状、BMSCs的生物学特性和作用机制、以及其应用于脊髓损伤修复的潜在价值等方面进行综述。