Wu T_(11)(CD2)-小鼠抗人绵羊红细胞受体杂交瘤细胞系的建立

本文报道用T细胞系JMN1免疫BALB/c小鼠,然后取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系X 63Ag8.653融合。用扁桃腺冰冻切片免疫酶染色法,筛选出一株稳定分泌IgG1亚类的抗绵羊红细胞受体(ER)单扰(McAb)的杂交瘤—WuT11。通过E玫瑰花结形成抑制试验,膜抗原抽提物对WuT11的间接免疫荧光阻断试验,对外周血单个核细胞(PBMC)及其E~ 、E~-层细胞,T、B和非T非B细胞系的反应特征以及FACS的反应曲线等,证明WuT11与OKT11和anti-CCT3相类似,竞争抑制试验证明WuT11与anti-CCT3识别同一表位。用WuT11进行亲和层析,提取的相应抗原经SDS-PAGE,测得分子量为50KDa的糖蛋白,证明WuT11属CD_2,为识别人ER的单抗。     

WuTσ-抗人共同性胸腺细胞分化抗原杂交瘤细胞系的建立

本文报道了用人胎儿朐腺细胞免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系NS-1融合，获得一株能稳定分泌抗人共同性胸腺细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株，WuTBσ。它与72％胸腺细胞、皮肤Langerhan’s细胞及部分T细胞系呈阳性反应；外周血T、B细胞、粒细胞、红细胞、血小板及B细胞系、Null细胞系均阴性。FACS检测结果及WuTσ阳性细胞的组织分布特点均同HIT。相似。在胸腺，皮质细胞及髓质中少数胞体较大呈树炙状的细饱呈阳性反应。在扁桃体实质中少数散在细胞阳性。上皮基底层中的Langerhan’s细胞则呈强阳性反应。用WuTBσ亲和层析柱提取胸腺细胞膜上相应的靶抗原分子，证明WuTσ识别分子量为51KDa的抗原。免疫竞争抑制试验表明，WuTeσ同抗原的结合可被HITσ完全阻断。说明WuTσ与HITσ识别HITσ同的抗原决定簇。     

武汉(Wu)系列抗入T细胞及其亚群单抗

本文报告了Wu系列抗人T及其亚群单抗按国际第三次人白细胞分化抗原专题讨论会要求进行检定的结果。这是国内第一套较全的OKT样系列单抗,即WuT1(OKT1,CD5);WuT3(OKT3,CD3);WuT4(OKT4,CD4);WuT6(OKT6,CD1a):WuT8(OKT8,CD8);WuT9(OKT9,抗转铁蛋白受体,抗TfR);WuT10(OKT10,CD38);WuT11(OKT11,CD2)及Wu-Tac(Tac,CD25)。     

武汉(Wu)系列抗人T细胞及其亚群单抗

本文报告了Wu系列抗人T及其亚群单抗按国际第三次人白细胞分化抗原专题讨论会要求进行检定的结果。这是国内第一套较全的OKT样系列单抗,即WuTl(OKTl,CD5);WuT3(OKT3,CD3);WuT4(OKT4,CD4);WuT6(OKT6,CDla);WuT8(OKT2,CD8);WuT9(OKT9,抗转铁蛋白受体,抗TfR;WuT10(OKT10,CD38);WuT11(OKTkk,CD2)及WuTac(Tac,CD25)。     

抗人B因子单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

本文以人B因子免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得六株(A_2、B_2、B_7、C_9、F_9、F_(10))分泌抗人B因子单克隆抗体(单抗)的杂交瘤细胞系。用ELISA检测细胞培养上清和小鼠腹水的特异性抗体效价,分别为10~(-2)—10~(-3)和10~(-4)—10~(-5)。抗原阻断试验结果,说明这些单抗是B因子特异的。经取代试验和ACH_(50)抑制试验,提示B因子具有耐热和不耐热二组抗原决定基。A_2和B_2针对不耐热抗原决定基,能抑制补体旁路途径活化;B_7和C_9针对耐热抗原决定基,不影响补体旁路途径活化;F_9和F_(10)则既能与耐热决定基发生反应,也具有抑制补体旁路活化的功能。用固相抗原竞争抑制试验,分析B因子的抗原表位,发现6株单抗可识别4个抗原决定基。这些单抗对B因子结构与功能的研究,B因子在补体旁路活化过程中与有关补体成分之间的相互关系的研究,都是很有意义的。     

WuT_6-抗人共同性胸腺细胞分化抗原杂交瘤细胞系的建立

本文报道了用人胎儿朐腺细胞免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系NS—1融合,获得一株能稳定分泌抗人共同性胸腺细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株,WuT_6。它与72％胸腺细胞、皮肤Langerhan′s细胞及部分T细胞系呈阳性反应;外周血T、B细胞、粒细胞、红细胞、血小板及B细胞系、Null细胞系均阴性。FACS检测结果及WuT_6阳性细胞的组织分布特点均同HIT_6相似。在胸腺,皮质细胞及髓质中少数胞体较大呈树突状的细胞呈阳性反应。在扁桃体实质中少数散在细胞阳性。上皮基底层中的Langerhan′s细胞则呈强阳性反应。用WuT_6亲和层析柱提取胸腺细胞膜上相应的靶抗原分子,证明WuT_6识别分子量为51KDa的抗原。免疫竞争抑制试验表明,WuT_6同抗原的结合可被HIT_6完全阻断。说明WuT_6与HIT_8识别相同的抗原决定簇。     

单克隆抗体(抗单)的荧光标记及其在竞争抑制试验中的应用

本文报告了一种用于直接免疫荧光试验、改进的单克隆抗体(单抗)荧光标记条件与方法 及其在单抗之间的竞争抑制试验中的应用,该法在标记条件上与用于间接免疫荧光的多克隆抗体(第二抗体)的标记有较大不同。最主要的是要求较高的F/P值。作者按此法标记了六种单克隆抗体Wu T_3,Wu T_4,Wu T_6,WuT_8,Wu T_(10)和Wu T(11)。并且将它们与已知的单抗进行了竞争抑制试验。结果表期:Wu T_3与OKT3,Wu T_4与OKT_4,Wu T_8与OKT_8,Wu T_6与H1T_(6-1),H1T(6-2)以及Wu T_(11)与抗CCT_3具有相互抑制结合抗原的再用。证明它们均能相应识别CD_3,CD_4,CD_8,CD_(1a)和CD_2靶抗原分子。此法对检定、比较抗细胞性抗原的单抗,具有很大价值。     

通过HIT_(8a)和HIT_(8b)两个单克隆抗体鉴定发现CD_8抗原有不同的表位

用间接免疫荧光法、免疫组化技术鉴定了HIT_(8a)和HIT_(8b)两个单克隆抗体(单抗)对各种正常组织、细胞系和各种白血病患者细胞的反应性,证明其反应模式与CD8单抗相似。HIT_(8a)、HIT_(8b)识别的胸腺细胞上抗原分子量分别为 59和60KD(未还原),也与CD8近似。然而,竞争抑制试验显示,9个国际命名的 CD8单抗中只有5个可以完全抑制 HIT_(8a)、HIT_(8b)-FITC与靶细胞结合,4个无作用。证实HIT_(8a)和 HIT_(8b)是 CD8样抗体,识别同一抗原位点。但也揭示 CD8抗原有不同表位。本文对此进行了讨论。     

小鼠内源性逆转录病毒Gag抗原在胰岛的表达及单克隆抗体的制备

目的 探究一种新发现的与1型糖尿病(T1D)相关的T细胞抗原[内源性逆转录病毒(ERV)的组特异性抗原(Gag)]与T1D发病的关系。方法 首先对一个从非肥胖糖尿病(NOD)模型小鼠胰岛获得的Gag抗原(Gag 194)的氨基酸序列进行分析[多肽位置：193-210(VSRLRGRRDPPAVDSTTS)],确定Gag 194多肽作为靶点，制备单抗；然后，再利用ELISA和Western blot检测单抗的特异性；最后，在免疫组织化学实验中检测不同年龄的T1D敏感的NOD小鼠与抗性的C57BL/6小鼠胰腺Gag抗原表达的差异性。结果 成功制备了5株(1F4C8、2D4C6、3C3B9、4D6B3、5F9E4)IgG2b亚型的小鼠ERV Gag单抗；5株单抗的敏感性及特异性具有差异；其中，生物素化后的3株单抗(1F4C8、2D4C6、5F9E4)能特异识别NOD小鼠胰腺中表达的ERV Gag抗原且该抗原的表达可在3周龄的NOD小鼠检测到，Gag抗原多表达在NOD小鼠胰岛β细胞区域内，而非淋巴细胞浸润的区域。此外，C57BL/6小鼠的胰腺Gag抗原的表达为阴性。结论 在NOD小鼠幼年时期E...     

武汉（Wu）系列抗入T细胞及其亚群单抗

本文报告了Wu系列抗人T及其亚群单抗按国际第三次人白细胞分化抗原专题讨论会要求进行检定的结果。这是国内第一套较全的OKT样系列单抗，即WuT1(OKT1，CD5)：WuT3(OKT3，CD3)；WuT4(OKT4，CD4)：WuT6(OKT6，CD1a)；WuT8（OKT8，CD8)：WuT9(OKT9，抗转铁蛋白受体，抗TfR)；WuT10(OKT10，CD38)：WuT11(OKT11，CD2)及Wu-Tac(Tac，CD25)。     

同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究——Ⅰ.同种特异T细胞疫苗诱导的细胞免疫水平低下

在体外实验中观察了同种特异T细胞疫苗（TCV）免疫鼠T淋巴细胞对同种抗原和有丝分裂原（ConA）的反应能力。B6同种抗原特异TCV免疫的BALB/c小鼠对B6同种抗原的反应（MLR）能力明显变抑制,对无关第三者同种抗原AKR的反应能力也显著下降,表明存在抗原非特异性的抑制作用。在BALB/c同种抗原特异TCV免疫的B6小鼠中,获得一致的结果。在观察两组TCV免疫动物T细胞对Cond诱导的淋巴细胞增殖实验中,与正常小鼠 T细胞反应性比较,TCV免疫动物 T细胞的增殖能力显著下降,表现为抗原非特异作用。此与MLR中ConA-T细胞免疫动物的结果相一致。在CML实验里,同种抗原特异TCV免疫小鼠的脾细胞体外诱导同种CTL活性明显受到抑制,CTL 活性十分低下。体外实验结果表明:同种特异TCV免疫小鼠可诱发同种抗原反应和对ConA诱发的增殖反应能力显著低下,表现为抗原非特异性作用。     

识别HIV-1 P_(24)蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

以细胞培养的HIV-1全病毒抗原免疫,通过鼠-鼠杂交瘤技术获得3株分泌单克隆抗体(以下简称单抗)的杂交瘤细胞系(21A、51G、47B)。免疫印迹结果显示3株单抗均能识别病毒的核心元原-P_(24)蛋白。ELISA阻断抑制试验提示,3株单抗分别识别两个不同的抗原决定簇。进而为HIV-1病毒抗原的研究和制备以双抗体夹心法检测P_(24)抗原的试剂打下基础。     

WUT6-抗人胸腺细胞共同性分化抗原来交瘤细胞系的建立

本文报导了用人胎儿胸腺细胞免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系NS-1融合,获得一株能稳定分泌抗人共同性胸腺细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株,W_(?)T_(?)。它与72％胸腺细胞、皮肤Langerhan's细胞及部分T细胞系呈阳性反应;外周血T、D细胞、粒细胞、红细胞、血小板及B细胞系、Null细胞系均阴性。FACS检测结果及W_(?)T_(?)阳性细胞的组织分布特点均同HIT_6相似。在胸腺、皮质细胞及髓质中少数胞体较大呈树突状的细胞呈阳性反应。在扁桃体实质中少数散在细胞阳性。上皮基底层中的Langerhan's细胞则呈强阳性反应。用W_(?)T_(?)亲和层析柱提取胸腺细胞膜上相应的靶抗原分子,证明W_(?)T_(?)识别分子量为51KDa的抗原。免疫竞争抑制试验表明,W_(?)T_(?)同抗原的结合可被HIT_6完全阻断。说明W_(?)T_(?)与HIT_6识别相同的抗原决定簇。     

编码人P250T细胞活化抗原的基因定位于人11号染色体

用单克隆抗体识别出的分化抗原日益增多,已达CD45。先前的研究已将编码CD6、CD7、CD18和CD45的基因分别定位于人11、17、21和1号染色体。人类p250T细胞活化抗原被B1.19.2单克隆抗体识别,是分子量为250KDa的一条单链多肽抗原,第三次国际人白细胞分化抗原讨论会将其归于CDw26。本文作者用TPA或ConA刺激人外周血淋巴细胞或慢性T淋巴细胞性白血病细胞(T-CLL)与HGPRT缺陷的BE5147细胞(小鼠白血病细胞),用PEG融合,经HAT选择,然后用B 1.19.2抗体借助混合红细胞吸附试验(MHA)筛选抗原表达的阳性孔,最后用有限稀释法克隆阳性孔。结果表明,与B 1.19.2反应的阳性     

立克次体免疫学研究的新进展

一、免疫机理用遗传性缺乏T细胞小白鼠N:NIH(s)Nu系,B细胞缺乏小白鼠NIHⅡ系,及二者都缺乏的N:NIH(s)Ⅱ系小白鼠感染康氏立克次体,结果证明T细胞在清除立克次体及降低死亡率比体液抗体更为重要。相反地裸小鼠在感染早期可产生对不依赖胸腺抗原     

B细胞受体(BCR)抗原特异性的研究进展

B细胞受体(BCR)是B细胞特异性识别和结合抗原产生适应性体液免疫应答的关键分子。B细胞分化过程中的基因重排和体细胞高频突变是形成BCR多样化的主要机制。BCR极大的多样性和独特的分子结构决定了抗原识别的多样性和特异性，形成了具有广泛抗原特异性的复杂B细胞库。因此，BCR抗原特异性信息是理解不同疾病适应性免疫特征的关键。随着B细胞相关研究技术的发展，如单细胞分选技术、高通量测序(HTS)技术、 B细胞受体与抗原特异性结合测序(LIBRA-seq)等，提高了将BCR序列与抗原特异性联系起来的能力。这有助于更好地理解体液免疫反应、探索疾病发病机制、监测疾病进展、设计疫苗、研发治疗性抗体和药物。我们主要总结了感染、疫苗接种、自身免疫性疾病及肿瘤的抗原特异性BCR相关研究，并以SLE为例对其自身抗体序列进行分析，其序列特征使自身抗原的识别成为可能。     

IgE结合因子对IgE反应的同型特异性调节

IgE对T细胞依赖性抗原的反应机理与gG相似。B细胞前体向IgE形成细胞分化需要抗原特异的辅助性T细胞,其过程也受抑制性T细胞的调节。但是,IgE反应还具有在IgG反应中不易被证明的一些特点。用一系列啮齿动物实验证明,IgE反应较强地依赖于免疫原的剂量和所用佐剂的性质。Levine和Vaz(1970)业已证明,某些品系的小鼠,例如SJL,对蛋白类抗原能产生IgG反应,而不能产生IgE反应。一些动物经低剂量X射线照射后,或在免疫前注射环磷酰胺,能选择性地增强IgE反应;若给被照射动物输入正常动物的T淋巴细胞,则能抑制这种增强作用。Katz等人发现,照射     

IgG 型抗登革病毒NS1 抗体介导被动系统性过敏反应的研究

目的:明确登革病毒玉型(Dengue virus serotype 1,DENV1)非结构蛋白1(Non-structure protein 1, NS1)与其IgG 型抗体的免疫复合物(Immune complexes,ICs)能否诱导机体产生被动系统性过敏反应(Passive systmic anaphylaxis,PSA),为阐明登革出血热与登革休克综合征(DHF/ DSS)的发病机制提供依据。方法:从本课题组现有的多株抗NS1 单克隆抗体中,筛选能够与纯化NS1 结合并形成免疫复合物进而诱导小鼠产生被动系统性过敏反应(PSA)和被动皮肤过敏反应(Passive cu-taneous anaphylaxis,PCA)的单抗或单抗组合;并观察体内氯化钆(GdCl3 )和血小板活化因子受体(PAFR)拮抗剂CV-3988 处理对PSA 的影响。结果:用亲和层析纯化的DENV1 NS1,从本室制备的20 株IgG 型抗DENV1 NS1 单抗中仅筛选出2 组单抗组合制备免疫复合物(NS1-IgG ICs)能成功诱导小鼠的PCA 和PSA 反应,而其他抗体或抗体组合并无此反应;用GdCl3 抑制单核巨噬细胞或CV-3988 阻断PAFR 处理可抑制或减轻小鼠PSA 反应。结论:DENV1 NS1 结合两个IgG 型单抗组合的免疫复合物可诱发PSA 与PCA,但并非所有的抗NS1 单抗或抗体组合与NS1 结合都能诱发PSA,推测与识别表位不同有关;初步证明DENV1 NS1-IgG ICs 诱发PSA 的主要效应细胞是巨噬细胞,主要效应分子是PAF。     

利用基因重组抗原研制人CD20单克隆抗体及其功能的研究

目的　利用基因重组抗原免疫小鼠 ,制备人CD2 0单克隆抗体 ,研究其特异性和功能。方法　用表达重组人CD2 0基因的细胞NIH 3T3免疫BALB c小鼠 ,取其脾细胞与Sp2 0细胞融合 ,以间接免疫荧光法筛选杂交瘤上清。免疫沉淀法及流式细胞术鉴定其识别抗原的相对分子质量 (Mr)和特异性 ;以MTT法、流式细胞术及形态学方法检测诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖的功能。结果　利用杂交瘤技术获得了 1株抗人CD2 0的单克隆抗体 1 2 8,它具有CD2 0抗体特异的细胞反应谱 ,其识别的抗原Mr 为 33× 10 3 。MTT实验证实 1 2 8能显著抑制Daudi和Raji细胞生长。结论　利用基因重组抗原制备了 1株能够稳定分泌抗人CD2 0的单克隆抗体的杂交瘤细胞株 1 2 8,此单抗具有抑制CD2 0阳性细胞增殖和诱导其凋亡的功能。     

人外周血T细胞系间接识别SLAⅠ类分子引起的异种细胞增殖反应

目的 确认猪→人异种移植中存在针对猪白细胞抗原(swine leukocyte antigen，SLA)Ⅰ类分子的间接识别而引起的急性细胞性排斥。方法 用纯化的中国版纳猪SLA Ⅰ类P1基因工程蛋白为抗原，体外反复刺激健康人外周血T细胞，建立P1特异性T细胞系。观察抗原特异性CD4 T细胞系在自身APC存在下对版纳猪外周血单个核细胞与软骨细胞的反应性，以及HLA-DR单抗与氯喹的阻断作用。结果 建立10株SLA Ⅰ类P1抗原特异性T细胞系，其中8株以TCRαβ CD4 为主要表型，将其合并使用。该CD4 P1特异性T细胞系在自身APC存在下对相同品系版纳猪PBMC与软骨细胞均产生显著增殖反应。经抗人HLA-DR单抗与氯喹处理均能明显阻断其增殖反应。结论 健康人外周血T细胞可通过间接识别SLAⅠ类抗原对版纳猪细胞产生明显应答。