PCR—SSCP—银染法在基因突变分析中的应用

探讨ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法在基因突变检测中的应用。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法分析了苯丙酮尿症患者的ＰＡＨ基因外显子４,７,１０,１１和１２,并对部分样中进行ＤＮＡ测序,结果：检出部分已知突变如Ｒ２４３Ｑ,Ｒ４１３Ｐ等,并发现当ＳＳＣＰ带型不同于阳性,阴性对照时,或是外显子其它突变,或内内含子碱基变化引起,也可见于碱基序列正常的样品中,结论：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－银染法在有较好对照,严格控制曩因素条     

PCR技术在基因突变分析和定型中的应用

聚合酶链反应 (PCR)技术的应用在基因突变分析和定型领域引起了翻天覆地的变化 ,作者对近年来在此领域应用较广的一些以PCR为基础的方法作一简要综述     

Ras基因突变在胰腺癌诊断中的应用及展望

近年研究表明,Ras基因突变在胰腺癌的发生中起重要作用,在胰腺癌其发生率为77~100%,这一点是任何人体肿瘤所不可相比的,这就为检测胰腺癌Ras基因作为其诊断及鉴别诊断的方法提供了理论根据。本文就近年国际上的研究成果作一简要     

TaqMan PCR反应在EGFR基因突变检测中的应用

目的 研究一种快速、敏感、高通量的方法来检测非小细胞肺癌患者是否存在EGFR基因突变,以指导吉非替尼的分子靶向治疗.方法 收集94例非小细胞肺癌标本,先做EGFR基因测序,序列比对,然后用TaqMan PCR反应检测EGFR基因突变.比较两种检测结果的一致性.结果 94例患者中93例应用TaqMan PCR反应的检测结果和直接基因测序的结果完全一致,1例患者经直接测序,没有探测到EGFR基因突变,而利用TaqMan PCR反应却检测到了一种突变.该患者对吉非替尼化疗敏感.结论 应用TaqMan PCR反应检测EGFR基因突变是一种快速、敏感、高效的方法,对于判断非小细胞肺癌的患者是否要用吉非替尼有重要的指导价值.     

长链RT-PCR在若干遗传病基因突变分析中的应用

目的 以3个遗传病为例，探讨长链RT-PCR在基因突变分析中的应用。方法 采用长链RT-PCR扩增ALD、ATP7B和FV的mRNA编码区。从凝胶中回收预期扩增产物，再以分段或全长方式进行二次PCR。对二次PCR产物进行直接序列测定，查找序列突变。结果 在长链RT-PCR中，三种mRNA的编码区全长均得到扩增，预期扩增产物分别为2440，4480，6789bp。在二次PCR中，分段扩增策略和全长扩增策略均可获得大量的特异性产物，后者均可直接用于序列测定。结论 长链RT-PCR对于长链mRNA的序列分析是一个简便可靠的方法。     

庚型肝炎病毒RT—PCR检测

目的：调查石家庄地区庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的感染状况。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法对５８例病毒性肝炎进行了ＨＧＶ－ＲＮＡ检测。结果：证实了石家庄地区有ＨＧＶ感染存在，在非甲型￣戊型肝炎中，ＨＧＶ－ＲＮＡ的阳性率为２０％。在乙型、丙型肝炎病毒所致的慢性肝炎、肝炎肝硬化中，分别有１６．６７％、１４．２９％的病例重叠有ＨＧＶ感染。结论：严格掌握输血指征，筛查献血员，杜绝医源性感染，将对控制ＨＧＶ感染     

基因突变动物模型在《医学遗传学》实验教学中的应用

目的在《医学遗传学》实验教学中引入基因突变动物模型,并调查其在分子遗传诊断课程中的应用价值,以期促进医学生对基因突变检测原理与技术的理解,并有效提高医学生解决实际遗传诊断问题的能力。方法对首都医科大学2011级和2012级基础医学专业80名本科生开设分子遗传诊断实验,以无毛突变小鼠为实验对象,通过动物组织提取基因组DNA,并以提取的DNA作为模板,采用PCR方法对目的片段进行扩增,电泳鉴定PCR产物及应用凝胶成像系统对结果进行分析,观察基因突变动物模型—无毛小鼠表型特征与其基因型的内在联系。针对实验效果,设计调查问卷,分析学生反馈。结果问卷调查各项指标满意率均达到90%以上,98.7%的学生认为新的实验教学模式有助于对专业实验技能的掌握,96%的学生认为该实验课程有效提高了他们解决问题的能力。结论应用基因突变动物模型开展分子遗传诊断实验能够切实提高学生的学习效果,培养学生的综合素质。同时也为医学院校在教学中如何充分利用实验动物模型拓展教学内容和教学手段提供了借鉴。     

套式RT—PCR在丙型肝炎诊断中的应用

目的：探讨逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）在丙型肝炎诊断中的应用。方法：应用套式RT－PCR检测肝炎病人血清中HCVRNA,并同时用固相放射免疫法（RLA）检测病人血清中抗HCVRNA抗体。结果：193份肝炎病人血清中11．9％（23／193）可检出HCVRNA,10．9％（21／193）可检出抗HCVRNA抗体,两种检测结果相符率达98．4％,结论：套式RT－PCR对诊断丙型肝炎快速、特异性高,同时该检测法可避免放射性损伤和污染,在临床上对丙型肝炎的诊断有很大的应用价值。     

长链PCR在中国汉族人多囊肾病1型致病基因突变检测中的应用

目的:研究特异性分离中国汉族人多囊肾病1型致病基因(polycystic kidney disease gene 1,PKD1)多拷贝区的方法,以排除同源序列对该基因突变检测的干扰.方法:利用与同源序列间的个别碱基差异设计8对能涵盖PKD1多拷贝区的长链PCR引物,分别对两例健康汉族人基因组DNA进行PCR,其扩增产物通过巢式PCR进行序列测定.结果:通过优化PCR体系,尤其是以高质量基因组DNA为模板,适当提高退火温度,经巢式PCR测序证实扩增产物序列与PKD1多拷贝区一致.结论:该研究采用的长链PCR体系可克服同源序列的影响,适用于中国汉族人PKD1多拷贝区的特异性扩增,为进一步通过单链构象多态性分析检测汉族人PKD1突变位点奠定基础.     

RT—PCR方法在小鼠肝炎病毒检测中的应用

用４株小鼠肝炎病毒（ＭＨＶ１、ＭＨＶ３、Ａ５９和ＪＨＭ）的混合液定量人工感染ＳＣＩＤ小鼠、ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠、ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,接种病毒后１、２、５、８ｄ分别取小鼠的全血、肝,用组织总ＲＮＡ抽提试剂盒提取总ＲＮＡ,用一步法ＲＴ－ＰＣＲ方法检测小鼠肝炎病毒。结果显示：接种后１ｄ,ＳＣＩＤ小鼠和ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠即保检测到小鼠肝炎病毒,而ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠即可检测到小鼠肝炎病毒,而ＢＡＬＢ／ｃ小鼠至接     

RT—PCR法与血凝抑制法鉴定流感病毒的比较

目的比较逆转录聚合酶链反应法(RT—PCR)与血凝抑制法在流感病毒鉴定中的优劣，以期建立能快速、特异地从临床标本中检测并鉴定流感病毒的新方法。方法用常规细胞培养法增殖病毒后，分别用RT—PCR反应法和常规血凝抑制法进行流感病毒鉴定。结果在13份发生细胞病理变化的标本中RT—PCR阳性标本为9份，其中甲型7份(6份甲3亚型、1份甲1亚型)，乙型2份；而用血凝抑制法鉴定阳性标本仅6份。结论RT—PCR法快速、特异、灵敏，在流感病毒鉴定中具有较大的应用价值。     

一个先天性视网膜劈裂症家系XLRS1基因突变分析

先天性视网膜劈裂症(X-linked juvenile retinoschisis,RS or XLRS)是一种X连锁隐性遗传病,近年来已将该视网膜劈裂症基因XLRS1定位和克隆于Xp22.2[1-4].该基因长约15kb,有6个外显子,编码一段有224个氨基酸的蛋白质.XLRS1基因表达具有组织特异性,其产物仅分布在视网膜.可能参与视网膜细胞的粘着及细胞间信号的传递[4].     

轮状病毒RT—PCR快速诊断方法研究

采用自制逆转录套式－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测婴幼儿病毒性肠炎粪便中的轮状病毒，结果阳性率为５６．５％（６１／１０８），显著高于采用ＰＡＧＥ，ＥＬＩＳＡ，ＬＡ检测的阳性率（Ｐ〈０．０１），而检测时间短，敏感性高，采用磷灰石抽提病毒ＲＮＡ的方法也优于其它三法试验盒的效果，国内尚未报道。     

基因突变小鼠在生物学研究中的应用

基因突变小鼠在生物学研究中的应用刘德惠（中国医学科学院实验动物研究所，北京）由于小鼠分类属于哺乳纲，又具有易患多种与人相类似的疾病，遗传背景清楚，繁殖快易饲养，个体小、费用低等特点，因而被广泛应用于各种生物学研究之中。为了探求小鼠对实验反应的均一性，...     

半定量RT—PCR方法在基因表达研究中的应用

目的：定量检测Ｂ型内皮素受体（ＥＴＢ－Ｒ）基因在大鼠心、肝、肺、肾等器官及培养的肾小球系膜细胞（ＭＣ）的表达。方法：半定量逆转录－多聚酶链反应技术（ＳｑＲＴ－ＰＣＲ），并以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ＥＰ印迹法作对照。结果：ＥＴＢ－Ｒ基因在上述器官及ＭＣ均有表达，而表达水平依次为肺、心、肾和肝。结论：ＥＴＢ－Ｒ在不同器官有不同水平的基因表达，说明内皮素对不同器官的效应不同；ＭＣ是内皮素在肾内发挥作用的靶细胞     

RT—PCR方法在小鼠肝炎病毒检测中的初步应用

采用4株小鼠肝炎病毒,MHV1、MHV3、A59和JHM的混合液人工感染SCID小鼠,接种病毒后1、2、5d分别取小鼠的全血、肝、肺、脑、脾和血清,用组织总RNA抽提试剂盒提取各组织的总RNA,然后用RTPCR方法检测小鼠肝炎病毒,并对各反应产物进行平均光密度测定。结果显示,接种后24h即可检测出血液中的小鼠肝炎病毒,病毒在小鼠体内各脏器出现的先后顺序为血、肝、脾、肺、脑,主要在肝脏进行复制。     

PCR—SSCP法检测CETP第15外显子基因突变

目的：检测胆固醇脂转移蛋白第15外显子基因突变及其性质。方法：利用PCR－SSCP方法检测CETP第15外显子的基因突变。根据双脱氧DNA链合成终止法对PCR产物直接测序,确定基因突变的性质。结果：16例高HDL－C个体中发现了2例杂合子突变,经测序证实为第1506位核苷酸A→G突变。结论：在高HDL－C个体中存在较高的CETP第15外显子基因突变,PCR－SSCP和DNA测序技术是确定基因突变存在和性质的简便易行的技术和方法。