人脑胶质瘤EGFR-AKT通路活性的研究

目的研究胶质瘤中细胞EGFR和磷酸化AKT(p-AKT)的表达以及EGFR与AKT活性的相互关系.方法用免疫组化方法观察6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2个恶性胶质瘤体外细胞系的EGFR表达,并应用Western blot分析p-AKT的表达.结果EGFR在胶质瘤中的表达阳性率随肿瘤恶性程度增加而增加;其蛋白表达水平与病理分级呈正相关.Western blot分析发现在正常脑组织中p-AKT蛋白水平表达极低,胶质瘤中p-AKT的表达水平均随肿瘤恶性程度增加而明显上升,且与胶质瘤病理级别正相关;低恶度肿瘤与高恶度肿瘤有明显差异.EGFR的阳性表达率与AKT磷酸化水平显著相关.结论EGFR-AKT通路的活性状态在胶质瘤的恶性进展具有重要作用,该通路可能是胶质瘤恶性表型的责任通路.     

NF-κB在胶质瘤细胞凋亡中的作用

NF-κB蛋白家族作为转录调控因子,参与细胞的增殖、抑制细胞的凋亡,并被证实和许多肿瘤的形成有关,在肿瘤发生发展过程中具有重要作用.近年来研究发现NF-κB与胶质瘤的恶性程度、侵袭性、血管生成密切相关,NF-κB通路介导了肿瘤相关基因的异常表达,从而抑制胶质瘤细胞凋亡,促进胶质瘤血管形成和转移等,直接影响胶质瘤的发生和发展,而降低胶质瘤中NF-κB的活性有可能成为治疗胶质瘤的新方向.     

PTTG-bFGF通路在人脑星形细胞肿瘤中的表达及相关性研究

目的 探讨垂体瘤转化基因(PTTG)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在人脑星形细胞肿瘤中的表达及其意义.方法 免疫组化SP法检测55例人脑星形细胞肿瘤中PTTG、bFGF的表达.结果 各级别肿瘤中均不同程度发现PTTG、bFGF阳性表达,二者表达强度有随肿瘤恶性程度增高而增强的趋势(rS分别为0.8757、0.7557,P＜0.01),PTTG、bFGF的表达呈正相关(rS=0.7520,P＜0.01).结论 PTTG-bFGF通路存在于人脑星形细胞肿瘤中,与肿瘤恶性程度密切相关,二者在胶质瘤的发生及恶性转化中具有重要作用.     

尿激酶,尿激酶受体在人脑胶质瘤中的免疫组织化学研究

研究尿激酶(uPA)、尿激酶受体(uPAR)在人脑胶质瘤中的表达特征,评估其在胶质瘤恶性生长方式中的作用。选取57例不同恶性程度的星形细胞瘤、13例良性脑膜瘤和10例正常脑组织,分别以抗uPA单克隆抗体和抗uPAR多克隆抗体用ABC法进行免疫组织化学染色和半定量分析。结果表明:uPA、uPAR的表达程度与胶质瘤的恶性程度有关,胶质瘤恶性程度越高,表达程度越高。良性脑膜瘤的表达程度较低。正常脑组织则未见uPA、uPAR的表达。uPA染色除见于肿瘤细胞、血管内皮细胞外,还见于少数胶质增生带中的正常胶质细胞和神经元。在肿瘤细胞增殖密集区域,uPA阳性的肿瘤细胞比例较低,而在肿瘤细胞生长较稀疏、肿瘤血管增殖旺盛的区域阳性细胞比例较高。uPAR的染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞。uPA和uPAR的共同表达是浸润性生长的胶质瘤的特征之一。其表达程度可作为判断星形细胞瘤浸润性的重要参考指标。在人体内,表达uPA的细胞种类是较多的。uPA、uPAR的表达对胶质瘤的浸润和血管发生起着重要作用。     

金属蛋白酶2、血管内皮生长因子和肿瘤抑制因子在人脑胶质瘤中的表达和临床意义

目的:探讨人脑胶质瘤中的金属蛋白酶2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤抑制因子(P16)的表达。方法:应用免疫组化法检测55例胶质瘤组织中的MMP-2、VEGF和P16蛋白的表达,通过原位杂交检测MMP-2 mRNA的表达。结果:胶质瘤的恶性程度与MMP-2、VEGF表达和P16的缺失表达呈正相关,随着胶质瘤的恶性程度的增高而增加。结论:胶质瘤的恶性程度由多种因素决定。胶质瘤中MMP-2含量越高,肿瘤细胞在浸润的过程中突破血脑屏障的能力越强;VEGF的表达增加,肿瘤的血液供应越丰富,恶性程度越高。P16蛋白缺失率高,组织学分化程度低,在一定程度上反映了胶质瘤细胞的恶性生物学行为。     

尼克酰胺腺嘌呤氧化酶4在神经胶质瘤的表达

目的探讨尼克酰胺腺嘌呤氧化酶4(NOX4)在胶质瘤的可能作用。方法分析85例行手术切除并经病理证实的胶质瘤标本,WHOⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级和Ⅳ级分别12例、29例、10例和34例。应用免疫组化方法评估NOX4在各级别神经胶质瘤的表达,分析NOX4在胶质瘤组织的表达部位及表达量变化。结果 NOX4在胶质瘤的表达量较瘤旁组织明显增高。NOX4在低级别胶质瘤中主要表达于细胞质,在高级别胶质瘤的细胞质及细胞核均有表达。NOX4在肿瘤新生血管呈强阳性表达;NOX4在胶质瘤的表达量与胶质瘤恶性程度有关,恶性程度越高,NOX4表达量越高。结论 NOX4在胶质瘤过表达可能在胶质瘤发生和发展过程中起到重要作用。     

PDGF在骨髓问充质干细胞向胶质瘤趋化迁移过程中的作用

目的 观察血小板衍生生长因子(PDGF)和胶质瘤细胞条件培养基对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)体外迁移能力的影响,探讨PDGF在hMSCs向胶质瘤趋化迁移过程中的作用. 方法 全骨髓贴壁细胞法分离培养hMSCs,应用RT-PCR检测hMSCs中PDGF受体α(PDGFR-α)和β(PDGFR-β)的表达;利用聚碳酸酯膜小室建立体外趋化迁移模型,观察5、50、125 ng/mL PDGF和胶质瘤细胞条件培养基对hMSCs的体外趋化作用以及加入PDGF抗体后对hMSCs趋化迁移的影响. 结果 RT-PCR检测到hMSCs表达PDGFR-α和PDGFR-β;PDGF可以浓度依赖性促进hMSCs的趋化迁移.胶质瘤细胞条件培养基也可趋化hMSCs的迁移.与空白对照组相比迁移细胞数差异均有统计学意义(JP<0.05);PDGF抗体可消除50 ng/mL PDGF、减弱胶质瘤细胞条件培养基对hMSCs趋化迁移的作用. 结论 PDGF促进hMSCs的趋化迁移.在hMSCs向胶质瘤选择性迁移过程中发挥"趋化因子"样作用.     

miR-936通过靶向CKS1诱导细胞周期停滞并抑制神经胶质瘤细胞增殖

目的探讨微小RNA-936(miR-936)通过靶向细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1(CKS1)诱导细胞周期停滞并抑制神经胶质瘤细胞增殖行为及其作用机制。方法流式细胞术检测miR-936对胶质瘤细胞细胞周期的影响;细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测miR-936对胶质瘤细胞的增殖行为的影响,miR-936对细胞周期蛋白和通路蛋白的影响情况,双荧光素酶实验检测miR-936和CKS1在神经胶质瘤细胞中的相互作用,miR-936对裸鼠体中的肿瘤生长及肿瘤中的Ki67蛋白水平的影响。结果 miR-936的表达下调可以调控胶质瘤细胞细胞周期抑制胶质瘤细胞增殖行为,抑制miR-936的表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖行为,miR-936的异位表达显着抑制U87细胞中的细胞分裂周期蛋白2(CDC2),细胞分裂蛋白激酶2(CDk2),细胞分裂蛋白激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)的表达,miR-936能与CKS1的3'UTR特异性结合,调控CKS1的表达活性;miR-936的表达下调可以抑制裸鼠体内胶质瘤细胞的生长,并降低Ki67的表达水平。结论 miR-936在胶质瘤的发生发展过程中起重要作用,通过靶向调节CKS1的表达影响胶质瘤细胞的增殖和迁移。     

BTBD10基因的研究现状与进展

BTBD10基因属于BTB/POZ家族,在多种正常组织中都有表达。其主要通过调节Akt磷酸化水平来改变后续信号通路,产生一系列生物学效应,包括可能参与基因的表达调控,生物体增殖、分化、凋亡等重要过程。目前发现:BTBD10在脑胶质瘤中的表达与肿瘤恶性程度有关,视为潜在的抑癌基因。同时,其在调节胰岛β细胞增殖和凋亡,颅内出血后脑损伤进程及家族性肌萎缩脊髓侧索硬化(ALS)的发病机制中均有作用。随着研究深入,将更加详细了解其多样化的生物学功能和具体作用机制。     

胶质瘤及肿瘤干细胞抑制剂—MicroRNA-34a

微小RNA(MicroRNA,miRNA)是一类内源性、保守、稳定的非编码短单链RNA,在转录后水平调节靶基因表达。miR-34a作为微小RNA家族一员,具有抑制多种肿瘤生长的特性,并在胶质瘤中表达下调。miR-34a能够通过多种机制抑制脑胶质瘤细胞的生长,包括抑制肿瘤细胞c-Met、Bcl-2原癌基因的表达、抑制Notch信号转导、与抑癌基因p53形成正反馈环路,达到诱导肿瘤细胞凋亡的作用。另外,miR-34a在诱导胶质瘤肿瘤干细胞分化为正常的神经细胞过程中起重要作用,因此miR-34a有可能成为恶性胶质瘤基因治疗的潜在靶点。     

人脑胶质瘤病理分级与Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制物关系的研究

目的观察I型纤溶酶原激活物抑制物（PAI－1）在人脑胶质瘤中的表达特征，研究其与胶质瘤病理分级的关系及其对胶质瘤恶性生长的调控作用，方法用抗PAI－1单克隆抗体对57例不同恶性程度的星形细胞瘤、13例良性脑膜瘤和10例正常脑组织进行免疫组织化学染色和半定量分析。结果胶质瘤恶性程度越高，PAI－1的表达程度越高。良性脑膜瘤与低度恶性胶质瘤表达程度均较低，正常脑组织未见表达、PAI－1的阳性染色主要集中于血管，坏死灶周围的PAI－1阳性血管更为集中，结论PAI－1在对抗肿瘤尿激酶所引起的肿瘤血管组织和肿瘤基质的自身降解及胶质瘤新生血管形成起重要作用。在肿瘤坏死灶周围PAI－1表达增强可能是机体防止肿瘤无限制迅速生长的防御机制．     

PDGF-B链基因三链形成寡核苷酸对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的观察PDGF—B链基因三链形成寡核苷酸(triplex—forming oligonucleotide，TFO)对C6胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法应用流式细胞技术观察TFO对C6胶质瘤细胞PDGF—B、PCNA表达的影响，应用流式细胞技术观察TFO对C6胶质瘤细胞凋亡的影响。结果TFO对C6胶质瘤细胞PDGF—B、PCNA的表达有明显抑制作用，而且抑制作用存在浓度依赖性。TFO有明显诱导C6胶质瘤细胞细胞凋亡作用，而且诱导作用存在浓度依赖性。结论TFO抑制C6胶质瘤细胞细胞增殖，同时诱导C6胶质瘤细胞细胞凋亡。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-2与胶质瘤的研究进展

IGFBP-2是IGF结合蛋白家族中的一员,也是在神经系统中含量最多的一员。近年来的研究发现,IGFBP-2在胶质瘤的发生发展及预后中有着重要的作用。IGFBP-2可以通过IGF依赖/非依赖通路、β-catenin通路等多种通路参与调节胶质瘤的增殖、侵袭、转移及血管生成等多种生理过程。同时,胶质瘤患者瘤体及瘤周脑组织和患者血浆中IGFBP-2的表达量均明显高于正常人,其表达水平与胶质瘤的恶性程度分级、复发及预后密切相关。干预瘤体中IGFBP-2的活性和表达,可以抑制胶质瘤细胞的增殖和转移并促进其凋亡。因此,IGFBP-2的靶向治疗可能为胶质瘤药物研发治疗提供一个潜在的新的作用靶点。     

PDGF-B及其受体蛋白在缺血大鼠脑组织中的表达

目的 探讨血小板源性生长因子B链(PDGF—B)及其受体PDGFR—β在缺血性脑损伤后濒危神经元存活和损伤修复中的作用。方法 采用线栓法制备大鼠大脑中动脉局灶性缺血模型，分别于缺血2h再灌注6h、24h、3d、7d、14d和21d处死，用免疫组化分别检测PDGF—B和PDGFR—β蛋白在脑缺血区及其周围的表达。结果 缺血再灌注后24h，PDGF—B和PDGFR—β在缺血区及其周围的神经元的表达开始增强，并分别于3d和7d出现第一个高峰，其中PDGFR—β的表达还可见于反应性胶质细胞；两者的第二个表达高峰出现在再灌注后14d，主要表达于梗死区增生的胶质细胞、新生血管和胶质疤痕周围的神经元。结论局灶性脑缺血后，PDGF—B及其受体蛋白在时间和空间上的一致性表达，说明它们对濒危神经元的存活、胶质疤痕形成和血管发生均有重要的作用。     

HAUSP与NANOG在胶质瘤中的表达及意义

目的 探讨HAUSP、NANOG在胶质瘤细胞中的定位及在人脑胶质瘤组织中的表达,了解二者在胶质瘤进展中的作用. 方法 取安徽医科大学附属省立医院神经外科自2010年1月至2010年11月间手术切除的胶质瘤标本72例,其中WHOⅡ级19例、WHOⅢ级25例、WHOⅣ级28例,采用免疫组织化学染色检测HAUSP、NANOG蛋白在胶质瘤中的表达;常规培养U87胶质瘤细胞株,双重免疫荧光细胞化学染色检测U87细胞HAUSP/NANOG的亚细胞定位.结果 不同级别胶质瘤中HAUSP蛋白阳性细胞率比较差异有统计学意义(F=15.926,P=0.000),且胶质瘤的病理级别越高,HAUSP蛋白阳性细胞率越高,差异有统计学意义(P＜0.05)；胶质瘤的病理级别和HAUSP蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.726,P=0.000)；不同级别胶质瘤中NANOG蛋白阳性细胞率比较差异有统计学意义(F=14.768,P=-0.000),且胶质瘤的病理级别越高,NANOG蛋白阳性细胞率越高,差异有统计学意义(P＜0.05)；胶质瘤的病理级别和NANOG蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.685,P=0.000)；胶质瘤细胞U87中,两者均有表达,且两者共定位于细胞核. 结论 HAUSP与NANOG两者在胶质瘤发病中起重要作用,且与肿瘤恶性度相关;NANOG作为维持胶质瘤细胞未分化或低分化状态的标记物,HAUSP的去泛素化作用可能对于NANOG维持胶质瘤细胞的未分化状态有重要作用.     

Fibulin-3在胶质瘤中的研究进展

神经胶质瘤是最常见的原发性颅内肿瘤,其中胶质母细胞瘤(GBM)是最具侵袭性的恶性脑瘤。它生长速度快,侵袭性强、对放化疗不敏感,预后极差。越来越多的研究发现,胶质母细胞瘤这些特性与细胞内多种信号通路异常、肿瘤细胞与肿瘤微环境的相互作用等因素相关,而作为原纤维蛋白家族中的Fibulin-3参与胶质瘤细胞的黏附、迁移、侵袭和新生血管的生成,在胶质瘤发生发展的病理生理中发挥重要的作用,并影响病人的预后。因此研究Fibulin-3在胶质瘤发生发展中的调节规律和作用机制,可能发掘到潜在的治疗靶点,并为临床治疗提供依据和参考。     

B7-H4在人脑胶质瘤中的表达及其意义

B7-H4是2003年被发现的B7家族成员,其作用是负性调节T细胞介导的免疫反应.目前已发现B7-H4在多种肿瘤组织中高表达,如卵巢癌[1]、肺癌[2]、肾细胞癌[3]、乳腺癌[4]、子宫内膜癌[5]、前列腺癌[6]、胃癌[7]、食管癌[8]和黑色素瘤[9]等,因此被认为与肿瘤的免疫逃逸有关,但其与脑胶质瘤关系的研究报道较少.我们主要通过荧光定量PCR和蛋白质印迹方法检测B7-H4在正常脑组织和脑胶质瘤中的表达情况,并探讨其表达与肿瘤恶性程度的关系,以明确B7-H4与人神经胶质细胞瘤发生、发展的关系,进一步为以B7-H4为靶点进行基因治疗提供试验依据,试图为胶质瘤的诊断、治疗及预后提供依据.     

胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的研究进展

胰岛素样生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)是IGF/IGFBP系统中的一个重要成员,在多种疾病尤其是肿瘤中其表达明显增高,可能参与调节IGFs的活性,而促使IGFBP-2基因表达升高的因素尚不清楚。近几年在中枢神经系统疾病中也有与IGFBP-2相关的报道,尤其是在胶质瘤的研究方面,已发现胶质瘤的恶性程度越高,IGFBP-2表达水平也越高,提示该因子可能作为胶质瘤的诊断指标。     

脑胶质瘤中的MET基因变异及其作为治疗靶点的临床实践

脑胶质瘤是一种难治性的颅内原发恶性肿瘤,肝细胞生长因子(HGF)的过表达、MET基因扩增或突变均会导致MET通路的异常激活.作为经典癌症通路,MET通路的高度激活会促进胶质瘤细胞的增殖、迁移及血管生成和其他肿瘤微环境因素的变化,最终导致肿瘤恶性进展或治疗抵抗.基于对MET基因变异及MET通路在脑胶质瘤发生及进展中重要作...     

神经胶质瘤Wnt信号通路抑制基因高甲基化改变及其意义

目的研究表明神经胶质瘤中存在Wnt信号通路的异常活化。本研究探讨神经胶质瘤中Wnt信号通路抑制基因启动子区甲基化的改变以及去甲基化药物对其影响。方法对53例恶性胶质瘤组织样本和人胶质瘤细胞系U251、A172检测5个Wnt通路胞外抑制基因:SFRP1、SFRP2、SRFP5、DKK1和WIF1启动子区甲基化状况。去甲基化药物处理胶质瘤细胞后,检测上述5个基因表达水平;采用MTT法和软琼脂细胞集落实验检测胶质瘤细胞生长行为。结果神经胶质瘤组织和细胞系中上述五个基因启动子区存在明显高甲基化修饰。去甲基化药物处理胶质瘤细胞后,RT-PCR分析显示SFRP1、SFRP2、SFRP5和WIF1的表达明显增加,DKK1表达无明显变化;Wnt/β-catenin靶基因CCND1表达明显降低(P0.05);靶基因LRP6表达显著增加(P0.01)。MTT实验和软琼脂细胞集落实验显示去甲基化药物可明显抑制胶质瘤细胞增殖。结论在胶质瘤中Wnt信号通路胞外抑制基因的表达受甲基化调控,去甲基化药物可通过逆转基因的甲基化抑制神经胶质瘤细胞增殖,这为将来去甲基化药物用于恶性胶质瘤治疗提供研究依据。